检索结果-内蒙古大学图书馆

复旦学报(自然科学版) 2025年第2期64卷 148-159页

作者：吴若男尹安琪余垚周峻岗吕红复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

马克斯克鲁维酵母是一种生长速度快、蛋白质合成能力强的食品级酵母,具有研究价值与工业应用潜力。本研究以豆血红蛋白A(Leghemoglobin A,Lba)为靶蛋白,通过H 2O 2和UV联合诱变筛选获得马克斯克鲁维酵母重组蛋白高产突变株F6-30,其Lba... 详细信息

马克斯克鲁维酵母是一种生长速度快、蛋白质合成能力强的食品级酵母,具有研究价值与工业应用潜力。本研究以豆血红蛋白A(Leghemoglobin A,Lba)为靶蛋白,通过H 2O 2和UV联合诱变筛选获得马克斯克鲁维酵母重组蛋白高产突变株F6-30,其Lba产量提高67%。F6-30表现出高产通用性,表达其他异源蛋白如阿魏酸酯酶、甘露聚糖酶和木聚糖酶时产量分别提升111%、119%和39.4%。转录组测序分析显示在表达Lba的情况下F6-30与出发菌株相比在发酵24 h和60 h分别有1629个和1841个基因有显著差异,上调基因分别有604个和540个,下调基因分别有1025个和1301个。GO富集分析显示显著差异基因富集在翻译过程、RNA加工以及溶酶体和自噬相关GO条目;KEGG富集分析显示富集通路主要为核糖体生物发生、氨基酸合成代谢、核苷酸代谢等,表明突变株中蛋白质翻译途径显著加强,自噬途径及蛋白酶体途径以及氨基酸合成代谢被削弱。

关键词：马克斯克鲁维酵母转录组重组蛋白表达豆血红蛋白A

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猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达及其对伪狂犬病病毒的抑制

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中国生物工程杂志 2015年第3期35卷 1-7页

作者：王鹏郑兆鑫刘明秋复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200433

目的:研究猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达并检测其是否对伪狂犬病病毒(PRV)具有抑制作用。方法:从IBRS-2细胞和MDBK细胞中分别调取猪Mx1和牛Mx1基因,并克隆到pc DNA3.1/myc-His(-)B,构建得到真核重组表达质粒,以脂质体转染的方法... 详细信息

目的:研究猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达并检测其是否对伪狂犬病病毒(PRV)具有抑制作用。方法:从IBRS-2细胞和MDBK细胞中分别调取猪Mx1和牛Mx1基因,并克隆到pc DNA3.1/myc-His(-)B,构建得到真核重组表达质粒,以脂质体转染的方法将其分别导入到PK-15细胞,从mRNA水平和蛋白质水平鉴定重组质粒在细胞内的表达情况,然后用细胞毒性试剂盒检测这两种蛋白是否对PK-15细胞具有毒性。之后,通过荧光定量PCR检测猪Mx1和牛Mx1在攻毒后不同时间、不同攻毒剂量的条件下对PRV的抑制情况,并观察100TCID50病毒攻击细胞72h后的病变程度。结果:成功克隆了猪Mx1和牛Mx1基因,经mRNA水平和蛋白质水平证实,两种重组质粒在PK-15细胞内能够正常表达。从荧光定量PCR和细胞病变的角度来看,细胞内表达的Mx1蛋白对PRV具有显著性的抑制(P<0.001)。结论:猪Mx1和牛Mx1基因在PK-15细胞中表达的Mx1蛋白能够抑制PRV在胞内的复制。

关键词：猪Mx1 牛Mx1 PK-15细胞伪狂犬病病毒

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马克斯克鲁维酵母发酵苹果酒的化学成分与抗氧化活性

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食品与发酵工业 2023年第7期49卷 80-89页

作者：兰青张志勇余垚周峻岗吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

近年来,由于非酿酒酵母属酵母发酵能够产生更多的风味物质,备受酿酒师的青睐。马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种食品安全级的非常规酵母,可用于生产生物酶、木糖醇和芳香化合物等。该研究以Saccharomyces bayanus SAF... 详细信息

近年来,由于非酿酒酵母属酵母发酵能够产生更多的风味物质,备受酿酒师的青睐。马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种食品安全级的非常规酵母,可用于生产生物酶、木糖醇和芳香化合物等。该研究以Saccharomyces bayanus SAF作为对照,通过发酵苹果酒的化学成分和抗氧化活性对比分析,研究了***酿造苹果酒的特征。在25~35℃条件下,***能够在96 h内完成乙醇发酵,产量约56.8 g/L。顶空固相微萃取-气相色谱-质谱(head space-solid phase micro-extraction gas chromatography-mass spectrometry,HS-SPME-GC-MS)分析结果表明,***发酵产生的乙酸-3-甲基-1-丁酯、辛酸乙酯、己酸乙酯等酯类物质的均高于***。2种苹果酒液相色谱-质谱联用仪(liquid chromatograph mass spectrometer,LC-MS)分析鉴定出41种抗氧化成分,其中***苹果酒的总多酚含量比SAF苹果酒高出约17.5%。

关键词：马克斯克鲁维酵母苹果酒挥发性成分抗氧化性

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一种改良的分枝菌酸提取及其非放射性TLC检测方法

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生物工程学报 2023年第9期39卷 3827-3837页

作者：徐思悦狄玉昌迟明哲胡酉炜张潇张雪莲复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200433 复旦大学上海工业菌株工程技术研究中心上海200433

分枝菌酸(mycolic acid,MA)是存在于分枝杆菌细胞壁中的独特长链脂肪酸,与分枝杆菌(mycobacterium)抵御不利环境、耐受抗生素和逃避宿主免疫密切相关,是较热门的抗结核药物筛选的靶点。MA的检测方法主要有放射性薄层层析(thin-layer chr... 详细信息

分枝菌酸(mycolic acid,MA)是存在于分枝杆菌细胞壁中的独特长链脂肪酸,与分枝杆菌(mycobacterium)抵御不利环境、耐受抗生素和逃避宿主免疫密切相关,是较热门的抗结核药物筛选的靶点。MA的检测方法主要有放射性薄层层析(thin-layer chromatography,TLC)和液相色谱-质谱(liquid chromatograph mass spectrometer,LC-MS),受放射性元素使用资质和标准品等的限制,MA分析是分枝杆菌相关研究的一个难点。本研究采用一种普通薄层层析技术,并对使用四丁基氢氧化铵溶液水解酯化的分枝菌酸,将其甲酯化后再用无水乙醚萃取分枝菌酸甲酯的操作步骤进行改良,使分枝杆菌的MA提取及分析可在常规生物实验室中开展。研究通过比较不同分枝杆菌及不同生长时期的MA成分与亚型特征、检测靶向分枝菌酸合成通路的抗结核药物对细菌MA合成影响以及分枝杆菌突变株对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)H37Ra分枝菌酸合成影响等基础和应用研究的3个方面,进一步验证该方法在分枝杆菌MA分析中的实用性。结果表明该方法在不使用放射性元素和缺少标准品情况下可简便快速地分析MA及亚型特征,可广泛用于新型抗分枝杆菌药物筛选靶向分枝菌酸合成通路机制及基础研究中MA相关的分析和应用。

关键词：分枝杆菌分枝菌酸薄层层析

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微生物与发酵工艺对苹果酒品质影响的研究概述

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食品与发酵工业 2022年第19期48卷 287-294页

作者：张志勇刘震周峻岗吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

苹果酒是世界第二大发酵果酒品类。中国作为世界第一大苹果生产国,苹果酒市场潜力巨大,但苹果原料、发酵菌种和生产工艺的标准体系还有待完善。文章综述了苹果品种、成熟度、发酵菌种和发酵工艺对苹果酒品质的影响。挥发性香气物质和非... 详细信息

苹果酒是世界第二大发酵果酒品类。中国作为世界第一大苹果生产国,苹果酒市场潜力巨大,但苹果原料、发酵菌种和生产工艺的标准体系还有待完善。文章综述了苹果品种、成熟度、发酵菌种和发酵工艺对苹果酒品质的影响。挥发性香气物质和非挥发性的糖、有机酸和多酚类物质是苹果酒的主要成分。酯类是苹果酒的主要香气成分,多酚对苹果酒的口感起重要作用。苹果原料、酵母菌种、发酵温度等对苹果酒的品质有显著影响。通过酿酒苹果品种的筛选、非酿酒酵母属酵母的开发和多菌种的混合发酵来提升苹果酒的风味多样性,将是苹果酒的研究热点。

关键词：苹果酒成分香气酵母发酵工艺

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保留型与反转型β-木糖苷酶活性位点的分子动力学模拟

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物理化学学报 2015年第6期31卷 1169-1178页

作者：张俊威周峻岗吕红黄强复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海工业菌株工程技术研究中心上海200433 上海生物制造技术协同创新中心上海200237

木聚糖是潜在的重要可再生能源,如何提高其降解效率已成为近年来的研究热点.β-木糖苷酶是木聚糖降解过程中的关键酶之一,按其水解机制可分为保留型与反转型酶.目前虽然对于这两种催化机制的研究不断深入,但很少有工作从溶液环境的角度... 详细信息

木聚糖是潜在的重要可再生能源,如何提高其降解效率已成为近年来的研究热点.β-木糖苷酶是木聚糖降解过程中的关键酶之一,按其水解机制可分为保留型与反转型酶.目前虽然对于这两种催化机制的研究不断深入,但很少有工作从溶液环境的角度出发探究它们的差异.本文采用分子动力学模拟方法,对4个典型的β-木糖苷酶进行了显式溶剂模拟研究,详细分析了酶的催化氨基酸间的距离和质子供体氨基酸p Ka值的动态变化.结果显示,反转型酶催化氨基酸间的距离约为0.8-1.0 nm,大于保留型的0.5-0.6 nm,与先前对糖苷酶晶体结构的统计分析结果一致.令人意外的是,保留型酶的质子供体通过与其附近组氨酸的相互作用,其p Ka在两个不同的高、低值之间交替变换,使保留型酶的双取代反应得以发生;而反转型酶的质子供体则由附近的天冬氨酸调节,其p Ka稳定在某个较高值,这可能有利于其在反应p H值下获得水溶液中的氢离子,进行反转型酶特有的单取代反应.因此,本工作加深了人们对β-木糖苷酶保留型与反转型水解机制的认识,并为后续酶的理性改造与高效利用提供具有指导价值的结构与机理信息.

关键词： β-木糖苷酶催化机制分子建模质子供体 p Ka值

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基因组整合与游离质粒联合应用介导阿魏酸酯酶A在马克斯克鲁维酵母中高效分泌表达

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复旦学报（自然科学版） 2020年第5期59卷 608-617页

作者：李雪莹段懿桐吴丽莫文娟周峻岗余垚吕红复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

阿魏酸是植物中广泛存在的酚类化学物质,具有抗氧化活性.阿魏酸酯酶能够水解植物细胞壁半纤维素和阿魏酸之间的酯键,释放阿魏酸,在食品、医药、饲料加工等领域具有广泛的应用价值.马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种生长... 详细信息

阿魏酸是植物中广泛存在的酚类化学物质,具有抗氧化活性.阿魏酸酯酶能够水解植物细胞壁半纤维素和阿魏酸之间的酯键,释放阿魏酸,在食品、医药、饲料加工等领域具有广泛的应用价值.马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种生长迅速、蛋白分泌能力强的新型食品安全级酵母,具有高效分泌表达菊粉酶的能力,本研究利用基因组菊粉酶位点INU1整合与游离质粒联合应用的方式,在马克斯克鲁维酵母中实现了黑曲霉(Aspergillus niger)阿魏酸酯酶AnFaeA的高效表达,发酵液上清中的酶活达到164.4U/mL.利用马克斯克鲁维酵母重组表达的阿魏酸酯酶能够高效降解玉米芯释放阿魏酸,释放量可达1.81mg/g,并且在β-木聚糖酶的协助下可进一步提高阿魏酸的释放量,达到2.8mg/g.

关键词：质粒表达基因组整合阿魏酸酯酶马克斯克鲁维酵母

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GH43家族β-D-木糖苷酶RuXyn1在马克斯克鲁维酵母中的表达及其应用

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复旦学报（自然科学版） 2020年第5期59卷 599-607页

作者：段懿桐李雪莹周峻岗余垚吕红复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

木聚糖的降解需要内切β-木聚糖酶和β-D-木糖苷酶的协同作用,β-D-木糖苷酶能将β-木聚糖酶的水解产物木寡糖降解为木糖,因此在半纤维素的利用中具有重要的意义.本研究将中国牦牛瘤胃微生物来源的糖基水解酶GH43家族β-D-木糖苷酶基因R... 详细信息

木聚糖的降解需要内切β-木聚糖酶和β-D-木糖苷酶的协同作用,β-D-木糖苷酶能将β-木聚糖酶的水解产物木寡糖降解为木糖,因此在半纤维素的利用中具有重要的意义.本研究将中国牦牛瘤胃微生物来源的糖基水解酶GH43家族β-D-木糖苷酶基因RuXyn1克隆到含两种不同分泌信号肽(菊粉酶信号肽和α-factor信号肽)的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)分泌表达载体(pUKDN132和pUKDN129)中,转化*** Fim-1 ura3Δ,通过筛选获得两株分泌表达β-D-木糖苷酶基因RuXyn1的重组菌株Fim-1/pUKDN132-RuXyn1和Fim-1/pUKDN129-RuXyn1.重组菌株摇瓶培养72h后,上清液中β-D-木糖苷酶酶活分别为0.304U/mL和0.045U/mL.在5L发酵罐高密度发酵中,Fim-1/pUKDN132-RuXyn1分泌表达的β-D-木糖苷酶酶活为1.75U/mL,而Fim-1/pUKDN129-RuXyn1的酶活为1.6U/mL,表明在表达β-D-木糖苷酶RuXyn1时,菊粉酶信号肽介导的分泌效率优于α-factor信号肽.以玉米芯为底物,我们测试了***重组表达的β-D-木糖苷酶RuXyn1的降解效果,发现在商业化的β-木聚糖酶和纤维素酶CTec2中,添加β-D-木糖苷酶RuXyn1能够显著提升玉米芯的降解效率,还原糖产量提高7%,木糖和葡萄糖的产量分别提高12.4%和6.1%.

关键词：木聚糖 β-D-木糖苷酶表达载体马克斯克鲁维酵母重组表达

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马克斯克鲁维酵母FIM1基因组分析

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复旦学报（自然科学版） 2022年第3期61卷 303-312,316页

作者：罗通宇曾俊源吕奕琳周峻岗余垚吕红复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种富有潜力的新型细胞工厂宿主菌。*** FIM1(CGMCC No.10621)基因组组装与注释已于2019年完成并在NCBI上公布(GCA_001854445.2),但在应用该基因组信息时发现其仍不完善。所以本研究使用... 详细信息

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种富有潜力的新型细胞工厂宿主菌。*** FIM1(CGMCC No.10621)基因组组装与注释已于2019年完成并在NCBI上公布(GCA_001854445.2),但在应用该基因组信息时发现其仍不完善。所以本研究使用重测序的DNA-seq数据校验了*** FIM1的基因组序列,随后补充了*** FIM1的注释,并使用比较基因组学的方法进一步完善了*** FIM1的基因组信息。根据重测序比对结果,删除了测序数据无法覆盖的位点61处,共4910bp。*** FIM1新序列总长为10909543bp,可覆盖酵母目保守基因库中99.5%的基因。同时对*** FIM1的非编码RNA、次级代谢产物基因簇的也进行了补充注释。进一步,我们使用基因组共线性分析的方法分析了*** FIM1在物种分化过程中基因排列顺序保守的区域,并将*** FIM1与NCBI公布的11株***进行了种内基因组比较。发现12株***早在约180万年前分化为两个亚型,它们共有的同源基因家族有4009个,基因组中核心基因平均占比为79.88%,预测***为闭合型泛基因组,核心基因数为3760个,为*** FIM1遗传学的研究与遗传工程的改造提供了数据支持。

关键词：马克斯克鲁维酵母基因组校验基因组注释比较基因组学

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犬细小病毒病毒样颗粒在马克斯克鲁维酵母中的表达及免疫原性研究

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复旦学报（自然科学版） 2018年第6期57卷 732-739页

作者：陈蕾段进坤朱培霞周峻岗余垚吕红复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438 复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438

犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的一种急性、高度接触性传染病,是目前影响犬类健康的最严重的传染病之一.疫苗免疫是预防并控制CPV传播的重要措施.本研究以马克斯克鲁维酵母作为表达宿主进行犬细小病毒VP2蛋白... 详细信息

犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的一种急性、高度接触性传染病,是目前影响犬类健康的最严重的传染病之一.疫苗免疫是预防并控制CPV传播的重要措施.本研究以马克斯克鲁维酵母作为表达宿主进行犬细小病毒VP2蛋白的重组表达.犬细小病毒VP2蛋白经密码子优化后,在马克斯克鲁维酵母中获得高效表达,表达量可达到2.4g/L.重组表达的VP2蛋白自我组装形成大小为20nm的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),经分子筛凝胶层析纯化的VLPs制成疫苗,注射免疫小鼠进49天后抗体滴度可达10 000以上,并诱导小鼠产生血凝抑制抗体,表明利用马克斯克鲁维酵母制备的VLPs疫苗具有较高的免疫原性.

关键词：犬细小病毒病毒样颗粒衣壳蛋白马克斯克鲁维酵母

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