检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理学报 2002年第3期34卷 338-340页

作者：刘北域宋后燕复旦大学医学院分子遗传学研究室复旦大学医学院分子遗传学研究室上海200032

为研究纳豆激酶 (nattokinase,NK)的生物化学性质 ,以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板 ,PCR扩增包含启动子及 3′端非翻译区的纳豆激酶全长基因序列 ,经鉴定后构建大肠杆菌枯草杆菌穿梭表达质粒 pBLNK ,转化蛋白酶缺陷型枯草杆菌 ,筛选表... 详细信息

为研究纳豆激酶 (nattokinase,NK)的生物化学性质 ,以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板 ,PCR扩增包含启动子及 3′端非翻译区的纳豆激酶全长基因序列 ,经鉴定后构建大肠杆菌枯草杆菌穿梭表达质粒 pBLNK ,转化蛋白酶缺陷型枯草杆菌 ,筛选表达菌株。表达株培养 15h后收集培养上清液 ,SDS PAGE分析证实表达产物后 ,用超滤浓缩、分子筛、离子交换等步骤分离纯化重组NK ,每升发酵液得纯度达 95 %的重组NK约 10 0mg ,比活性达 12 0 0 0u/mg。

关键词：纳豆激酶克隆和表达纯化枯草杆菌

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胰岛素、地塞米松、甲基异丁基黄嘌呤对脂肪细胞分化过程及PAI-1基因表达的影响

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复旦学报（医学版） 2002年第5期29卷 333-337页

作者：陈可洋马春姑陈幼妹汤其群宋后燕复旦大学医学院分子遗传学研究室上海200032

目的　通过体外培养的 3T3 L1细胞分化模型 ,研究胰岛素 (Ins)、地塞米松 (Dex)和甲基异丁基黄嘌呤(Mix)对脂肪细胞分化过程及纤溶酶原激活剂抑制剂 1(PAI 1)基因表达的影响。方法　观察Ins与Dex及Mix加入前后脂肪细胞形态的变化 ,并应... 详细信息

目的　通过体外培养的 3T3 L1细胞分化模型 ,研究胰岛素 (Ins)、地塞米松 (Dex)和甲基异丁基黄嘌呤(Mix)对脂肪细胞分化过程及纤溶酶原激活剂抑制剂 1(PAI 1)基因表达的影响。方法　观察Ins与Dex及Mix加入前后脂肪细胞形态的变化 ,并应用RT PCR方法 ,在不同浓度的Ins、Dex和Mix及其不同组合的条件下 ,对3T3 L1细胞分化为脂肪细胞过程中PAI 1mRNA表达水平进行相对定量分析。结果　Ins与Dex及Mix显著促进了 3T3 L1细胞向脂肪细胞分化 ,Ins、Dex及其组合Ins加Dex对PAI 1基因的表达有促进作用 ,其中尤以0 .15 μmol/LIns加 0 .1μmol/LDex的作用最为显著 ,且有叠加效应。结论　Ins与Dex加Mix对 3T3 L1细胞分化为脂肪细胞起重要作用 ,同时Ins、Dex对PAI 1基因表达也有显著影响。

关键词：脂肪细胞胰岛素地塞米松甲基异丁基黄嘌呤纤溶酶原激活剂抑制剂-1

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尿激酶受体反义核糖核酸抑制肺癌细胞的侵袭转移

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中华病理学杂志 2001年第5期30卷 357-360页

作者：廖劲晖徐韶华唐辉滨连福治朱运松复旦大学医学院分子遗传学研究室上海200032

目的　用反义核糖核酸 (ＲＮＡ)封闭尿激酶受体的表达 ,抑制人肺癌细胞株 95Ｄ的侵袭转移能力 ,验证反义ＲＮＡ技术在抗肿瘤中的作用。方法　将尿激酶受体 (ｕＰＡＲ)反义核糖核酸表达质粒转染具有高度侵袭转移能力的人肺癌细胞株 95Ｄ ... 详细信息

目的　用反义核糖核酸 (ＲＮＡ)封闭尿激酶受体的表达 ,抑制人肺癌细胞株 95Ｄ的侵袭转移能力 ,验证反义ＲＮＡ技术在抗肿瘤中的作用。方法　将尿激酶受体 (ｕＰＡＲ)反义核糖核酸表达质粒转染具有高度侵袭转移能力的人肺癌细胞株 95Ｄ ,利用改良Ｂｏｙｄｅｎ小室分析转染细胞的体外侵袭能力 ,并将转染细胞接种裸小鼠以观察其体内转移能力。结果　Ｇ41 8筛选后 ,鉴定出 2个表达ｕＰＡＲ反义ＲＮＡ细胞克隆 ,ｕＰＡＲ蛋白质水平相应降低。表达ｕＰＡＲ反义ＲＮＡ的细胞克隆的体外侵袭能力及在裸小鼠体内的肺转移能力较亲本细胞和空载体对照细胞均有显著性降低 (Ｐ < 0 .0 5)。结论　抑制尿激酶受体的表达 ,能够有效抑制肺癌的侵袭转移 ,反义ＲＮＡ技术在抗肿瘤治疗中有良好的应用前景。

关键词：受体细胞表面 RNA 反义肿瘤浸润肿瘤转移肺肿瘤

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重组葡激酶在大鼠静脉注射给药后的药代动力学

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复旦学报（医学版） 2002年第4期29卷 308-310页

作者：许长江刘骁李端黄阳滨于敏莫炜复旦大学药学院药理学教研室上海200032 复旦大学医学院分子遗传学研究室上海200032

目的　研究重组葡激酶 (r Sak)在大鼠静脉注射后的药代动力学。方法　大鼠静注r Sak 10 0、30 0与90 0 μg·kg-1,采用生物免疫发色底物法和牛奶板溶圈法测定活性 ,以单抗测定含量。结果　r Sak静注后 ,在大鼠体内过程符合二室模型... 详细信息

目的　研究重组葡激酶 (r Sak)在大鼠静脉注射后的药代动力学。方法　大鼠静注r Sak 10 0、30 0与90 0 μg·kg-1,采用生物免疫发色底物法和牛奶板溶圈法测定活性 ,以单抗测定含量。结果　r Sak静注后 ,在大鼠体内过程符合二室模型。测定活性表明 ,3种剂量r Sak的T1/2α分别为 (1.79± 0 .76 )、(1.99± 0 .6 0 )及(2 .2 2± 1.0 1)min ;T1/2 β分别为 (2 0 .2 4± 11.15 )、(2 5 .32± 9.2 6 )及 (2 6 .45± 11.6 4)min ;AUC0 T 分别为(182 .88± 6 4.0 7)、(376 .2 6± 71.14)及 (1311.4± 36 9.4)HI·min·mL-1;测定含量表明 ,3种剂量r Sak的T1/2α分别为 (1.5 8± 0 .86 )、(1.2 2± 0 .5 7)及 (1.49± 0 .47)min ;T1/2 β分别为 (16 .5 8± 6 .75 )、(12 .94± 3.13)及 (15 .5 4± 3.88)min ;AUC0 T分别为 (2 .0 5± 0 .75 )、(5 .6 5± 2 .5 3)及 (13.18± 5 .43) μg·min·mL-1。结论　r Sak在大鼠体内过程符合二室模型 ,经方差检验 ,各剂量间药代动力学参数均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。

关键词：重组葡激酶大鼠静脉注射药代动力学

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血管生成抑制因子K4K5 cDNA基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

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生物工程学报 2001年第2期17卷 126-130页

作者：官孝群王跃祥吴良成宋后燕复旦大学医学院基础医学院分子遗传学研究室上海200032

应用PCR方法 ,扩增人纤溶酶原cDNA基因中K4K5cDNA片段 ,与酵母表达载体 pPIC9K重组 ,获得表达质粒p9kkk 18。该质粒转化毕赤酵母菌GS115 ,用G418 YPD筛选高拷贝表型 ,PCR筛选K4K5cDNA与酵母染色体整合形成的阳性克隆 ,阳性克隆用甲醇诱... 详细信息

应用PCR方法 ,扩增人纤溶酶原cDNA基因中K4K5cDNA片段 ,与酵母表达载体 pPIC9K重组 ,获得表达质粒p9kkk 18。该质粒转化毕赤酵母菌GS115 ,用G418 YPD筛选高拷贝表型 ,PCR筛选K4K5cDNA与酵母染色体整合形成的阳性克隆 ,阳性克隆用甲醇诱导表达。表达产物r K4K5分子量约 2 1 5kD ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 15 0～ 2 5 0mg/L。初步纯化产物抑制牛毛细血管内皮 (BCE)细胞增殖与鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )新生血管生成。

关键词： K4K5cDNA 克隆表达毕赤酵母新生血管生成血管生成抑制因子

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Miyabenol C和Kobophenol A促MCF-7细胞生长作用途径

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复旦学报（医学版） 2002年第6期29卷 454-457页

作者：田春艳徐光胡昌奇宋后燕复旦大学医学院分子遗传学研究室复旦大学药学院天然药物化学教研室上海200032

目的　检测miyabenolC(MiyC)和kobophenolA(KobA)是否通过依赖雌激素受体 (ER)发挥促雌激素受体阳性细胞MCF 7生长的作用。方法　构建雌激素受体反义表达质粒 (pCASER) ,转染MCF 7细胞株 ,经G418筛选 ,PCR、Westernblot鉴定筛选出阳性... 详细信息

目的　检测miyabenolC(MiyC)和kobophenolA(KobA)是否通过依赖雌激素受体 (ER)发挥促雌激素受体阳性细胞MCF 7生长的作用。方法　构建雌激素受体反义表达质粒 (pCASER) ,转染MCF 7细胞株 ,经G418筛选 ,PCR、Westernblot鉴定筛选出阳性表达克隆 (MTASER)。运用MTT法检测药物对细胞生长状况的影响。运用放射竞争结合实验检测药物与ER的结合。结果　MiyC和KobA对MCF 7细胞的促生长作用大于对MTASER细胞的作用 ;MiyC和KobA均可竞争性抑制ER与 17β 雌二醇的结合。结论　在一定浓度范围内 ,MiyC和KobA依赖ER发挥促细胞生长的作用。

关键词： MiyabenolC KobophenolA 雌激素受体雌激素细胞生长

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重组血管生成抑制因子r-K4K5的分离纯化与功能鉴定

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复旦学报（医学版） 2001年第1期28卷 1-4页

作者：官孝群王跃祥莫炜吴良成宋后燕复旦大学基础医学院分子遗传学研究室上海200032 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科上海200031

目的　分离纯化r K4K5 ,探讨r K4K5对牛毛细血管内皮 (BCE)细胞、鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )新生血管生成及实验性人肺腺癌SPC Al生长的抑制作用。方法　通过盐析、凝胶过滤提纯r K4K5 ,BCE细胞在含r K4K5的DMEM中培养 2 4、48、72h后分别计... 详细信息

目的　分离纯化r K4K5 ,探讨r K4K5对牛毛细血管内皮 (BCE)细胞、鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )新生血管生成及实验性人肺腺癌SPC Al生长的抑制作用。方法　通过盐析、凝胶过滤提纯r K4K5 ,BCE细胞在含r K4K5的DMEM中培养 2 4、48、72h后分别计数 ;孵化 7d的鸡胚加r K4K5后继续孵育 72h ,观察新生血管生成 ;已经接种人SPC Al肺腺癌组织的荷瘤裸小鼠 (Balb/c ,nu/nu) ,瘤旁注射r K4K5继续饲养 ,观察肿瘤生长变化。结果　r K4K5抑制BCE细胞增殖 ,48～ 72h作用明显 ;r K4K5处理的CAM组中直径小于 5 0 μm的小血管明显减少 ;高剂量r K4K5治疗的荷瘤裸小鼠组 ,平均瘤重与对照组比较有统计学意义。结论　r K4K5能够抑制BCE细胞增殖 ,抑制鸡胚CAM新生血管生成 ,抑制实验性人SPC Al肺腺癌生长。

关键词：重组血管生成抑制因子 r-K4K5 分离纯化鉴定肺腺癌

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变性梯度凝胶电泳和单链构象多态性分析检测皮肤癌p53基因突变的比较

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复旦学报（医学版） 2001年第3期28卷 209-212页

作者：于波阎春林朱运松廖康煌复旦大学附属华山医院皮肤科上海200040 复旦大学基础医学院分子遗传学研究室上海200032

目的　检测皮肤癌 p5 3基因 5～ 8外显子的突变频率 ,比较变性梯度凝胶电泳 (DGGE)和单链构象多态性分析 (SSCP)检测p5 3基因突变的敏感性。方法　分别采用DGGE和SSCP ,对 40例皮肤癌患者手术切除组织的 p5 3基因 5～ 8外显子进行突变... 详细信息

目的　检测皮肤癌 p5 3基因 5～ 8外显子的突变频率 ,比较变性梯度凝胶电泳 (DGGE)和单链构象多态性分析 (SSCP)检测p5 3基因突变的敏感性。方法　分别采用DGGE和SSCP ,对 40例皮肤癌患者手术切除组织的 p5 3基因 5～ 8外显子进行突变检测。结果　皮肤癌 p5 3基因 5～ 8外显子的总突变率为 35 % ,其中鳞状细胞癌 (SCC)的突变率为 36 % ,基底细胞癌 (BCC)为 33%。采用DGGE和SSCP检测的突变率分别为 33%和 2 5 %。结论　 35 %的皮肤癌组织存在 p5 3基因 5～ 8外显子突变。DGGE检测p5 3基因突变的敏感性高于SSCP。

关键词：皮肤癌 p53基因变性梯度凝胶电泳单链构象多态性分析

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尿激酶受体反义RNA抑制人乳腺癌细胞的侵袭作用

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中国生物化学与分子生物学报 2000年第6期16卷 814-819页

作者：徐韶华廖劲晖朱运松复旦大学医学院分子遗传学研究室上海200032

将尿激酶受体 u PAR反义 RNA表达质粒 p URAS以脂质体法转染高侵袭性人乳腺癌细胞株 MDA- MB- 2 31 ,G41 8筛选抗性克隆 .Northern印迹法检测 u PAR反义 RNA的表达 ,RT- PCR法检测 u PAR的表达 ,牛奶板法测定细胞培养上清中纤溶活性 .改... 详细信息

将尿激酶受体 u PAR反义 RNA表达质粒 p URAS以脂质体法转染高侵袭性人乳腺癌细胞株 MDA- MB- 2 31 ,G41 8筛选抗性克隆 .Northern印迹法检测 u PAR反义 RNA的表达 ,RT- PCR法检测 u PAR的表达 ,牛奶板法测定细胞培养上清中纤溶活性 .改良 Boyden小室模型和裸小鼠乳房脂肪垫接种试验分别检测肿瘤细胞体外和体内侵袭能力 .反义克隆细胞能表达 u PAR反义RNA,其 u PAR表达水平及培养上清中纤溶活性明显降低 .反义细胞克隆体外侵袭能力比原代细胞 MDA- MB- 2 31和转染载体细胞克隆显著降低 .裸小鼠体内侵袭实验表明 ,反义细胞克隆的成瘤性、生长性和侵袭性均显著受到抑制 .u PAR至少在一部分恶性乳腺癌侵袭行为中发挥重要作用 ,反义 RNA可望成为抗肿瘤侵袭治疗的一种有效手段 .

关键词：尿激酶型纤溶酶原激活剂受体乳腺癌肿瘤侵袭

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大鼠局灶性脑缺血早期脑内HO-1蛋白的表达

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复旦学报（医学版） 2002年第1期29卷 53-56,F003页

作者：符荣陈衔城任惠民宋后燕金复生季耀东复旦大学附属华山医院神经外科复旦大学神经病学研究所上海200040 复旦大学医学院分子遗传学研究室上海200032 复旦大学附属金山医院中心实验室上海200540

目的　研究局灶性脑缺血血红素氧合酶 (HO)在脑内的表达。方法　采用大鼠大脑中动脉栓塞致脑缺血 ,对缺血早期不同时间点进行HO 1免疫组化及病理学研究 ,并应用计算机图像分析技术计算HO 1表达的强弱。结果　栓塞后 3 0min皮质及海马即... 详细信息

目的　研究局灶性脑缺血血红素氧合酶 (HO)在脑内的表达。方法　采用大鼠大脑中动脉栓塞致脑缺血 ,对缺血早期不同时间点进行HO 1免疫组化及病理学研究 ,并应用计算机图像分析技术计算HO 1表达的强弱。结果　栓塞后 3 0min皮质及海马即有HO 1阳性神经元和胶质细胞 ,且随着时间推移 ,HO 1的表达逐渐增强 ,HO 1主要分布在灶周皮质、梗死皮质区、梨状皮质内的神经元及胶质细胞 ,丘脑、下丘脑、海马齿状回的神经元及对测海马也出现HO 1的表达。结论　脑缺血时脑内HO

关键词：局灶性脑缺血一氧化碳血红素氧合酶-1 免疫组织化学大鼠

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