检索结果-内蒙古大学图书馆

复旦学报（医学版） 2014年第3期41卷 384-388页

作者：乔可王晴岚李紫煜牛辰复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032 北京东胜创新生物科技有限公司分子影像部北京100085

目的利用绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记和活细胞显微成像的方法,实时追踪分枝杆菌在巨噬细胞内的增殖过程。方法用经GFP标记的野生型海分枝杆菌（Mycobacterium marinum,Mm）分别侵染未激活和γ-干扰素激活的巨... 详细信息

目的利用绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记和活细胞显微成像的方法,实时追踪分枝杆菌在巨噬细胞内的增殖过程。方法用经GFP标记的野生型海分枝杆菌（Mycobacterium marinum,Mm）分别侵染未激活和γ-干扰素激活的巨噬细胞,使用活细胞显微成像系统连续记录胞内分枝杆菌的增殖动态,同时优化不同细胞接种浓度和感染复数（multiplicity of infection,MOI）对胞内菌增殖动态的追踪效果。结果使用GFP标记和活细胞成像的方法可以实时追踪胞内分枝杆菌的增殖过程和形态学变化。γ干扰素对Mm在巨噬细胞中的增殖有抑制作用。当接种巨噬细胞浓度为1×105/孔,MOI为1时,可直观清晰地分析实时追踪图像中胞内菌的增殖过程。结论通过活细胞成像技术分析荧光蛋白标记的分枝杆菌,可实时追踪巨噬细胞内分枝杆菌增殖过程和形态学变化,是一种体外分析胞内分枝杆菌增殖的理想方法,可应用于其他相关病原菌和宿主相互作用及影响因素的研究。

关键词：海分枝杆菌(Mm) 巨噬细胞活细胞成像细菌增殖感染复数(MOI)

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一种新乙型肝炎病毒表型耐药分析方法的建立

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中华传染病杂志 2014年第5期32卷 257-262页

作者：李新艳陈良马张妹毛日成黄玉仙张继明上海市公共卫生临床中心肝病科 201508 复旦大学上海医学院教育部、卫生部医学分子病毒学重点实验室复旦大学附属华山医院感染科

目的建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）... 详细信息

目的建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）,继而在RT区上、下游设计限制酶切位点,改造后的质粒分别命名为mPHY536207及mPHY97.以CHB患者血清中分离到的拉米夫定（LAM）耐药变异株和阿德福韦酯（ADV）耐药变异株为骨架,分别构建LAM耐药株质粒PHY634和ADV耐药株质粒PHY6923,再用耐药株的RT区段取代mPHY536207中的RT区构建重组质粒,命名为RT634（LAM耐药）及RT6923（ADV耐药）.分别用RT区置换前、后的质粒转染Huh7细胞,用ELISA法检测分泌到细胞上清液中的HBsAg水平,用实时PCR和Southern印迹法检测细胞内HBVDNA水平.结果成功构建B型和C型野毒株表达质粒PHY536207和PHY97,经转染Huh7细胞证实有HBV复制能力,6孔细胞培养板中每孔细胞所抽提的HBV DNA均＞1＆#215;107拷贝/mL;在RT区上游设计的Pst Ⅰ酶切位点不影响HBV的表型（HBsAg的表达及HBV DNA的复制）.在PHY634及RT634转染实验中,HBV DNA水平却并未随LAM浓度的升高而明显下降,50％抑制浓度（IC50）＞100 μmol/L,mPHY536207仅为0.18 μmol/L;PHY6923及RT6923转染实验中,HBV DNA对外加的ADV不敏感,IC50＞100 μmol/L,明显高于mPHY536207（1.2 μmol/L）.结论本研究建立了一种新的HBV表型耐药分析方法,可通过RT区置换来研究RT区变异对药物敏感性的影响.

关键词：肝炎病毒,乙型 RNA指导的DNA聚合酶抗药性表型

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Ⅱ型成簇恒间隔短回文序列及相关蛋白系统（CRISPR／Cas）研究近况

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第10期34卷 798-802页

作者：王蕾马丽俐孙桂芹李蒙策力木格陈力复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室 200032 浙江中医药大学附属第一医院杭州340006

1987年在大肠杆菌K12的碱性磷酸酶（ iap）基因的3′侧翼区首先发现了一类具有短回文特质的DNA重复序列［1］。2002年，这类结构被正式命名为成簇恒间隔短回文重复序列（CRISPR），CRISPR关联蛋白也同时得以命名［2］。2005年，3个研究... 详细信息

1987年在大肠杆菌K12的碱性磷酸酶（ iap）基因的3′侧翼区首先发现了一类具有短回文特质的DNA重复序列［1］。2002年，这类结构被正式命名为成簇恒间隔短回文重复序列（CRISPR），CRISPR关联蛋白也同时得以命名［2］。2005年，3个研究课题组同时发现间隔序列可能源自于细菌染色体外的其他遗传物质，如噬菌体和接合质粒，并推论CRISPR／Cas系统可以抵制入侵的外源 DNA［3-5］。2007年，来源于侵染噬菌体的新的整合间隔序列得到实验验证；研究同时建立了新获得的间隔序列与细菌抵抗该噬菌体侵袭的直接关联关系，证明了CRISPR／Cas系统是抵抗噬菌体的获得性免疫系统［6］。 Marraffini和Sontheimer［7］证实CRISPR／Cas系统对于接合现象和质粒转化的干扰作用。最近基于CRISPR／Cas作用机制的研究，发现了其在细菌毒力、致病性以及如何逃避宿主免疫系统等方面的相关作用［8］。

关键词： Cas系统回文序列蛋白系统成簇 DNA重复序列大肠杆菌K12 Ⅱ型细菌染色

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导读与评论

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微生物与感染 2015年第3期10卷 133-133页

作者：闻玉梅复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

本期特约专稿刊登了由廖万清院士团队撰写的人类免疫缺陷病毒患者真菌的机会感染。真菌机会感染也常见于其他终末期患者，文中介绍的多种真菌感染值得临床医师参阅。本期论著在病毒方面有3篇，均对RNA病毒的致病机制进行了研究。通过用... 详细信息

本期特约专稿刊登了由廖万清院士团队撰写的人类免疫缺陷病毒患者真菌的机会感染。真菌机会感染也常见于其他终末期患者，文中介绍的多种真菌感染值得临床医师参阅。本期论著在病毒方面有3篇，均对RNA病毒的致病机制进行了研究。通过用柯萨奇病毒A16感染猴体，发现病毒只在部分CDl4＋细胞中有增殖表现；利用树突细胞研究，发现感染后12～36h病毒在其中增殖。这一现象是否在患者中也出现？

关键词：人类免疫缺陷病毒真菌感染评论导读树突细胞 RNA病毒柯萨奇病毒致病机制

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导读与评议(2015年第4期)

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微生物与感染 2015年第4期10卷 199-199页

作者：闻玉梅复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

根据本刊基础研究与临床医学、预防医学、实验诊断医学密切结合的特点，本期特别邀请了各路专家对中东呼吸综合征（Middle East respiratory syndrome，MERS）病毒学、临床表现和治疗原则、

关键词：导读临床医学呼吸综合征基础研究预防医学实验诊断 East 治疗原则

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导读与评议(2015年第6期)

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微生物与感染 2015年第6期10卷 329-329页

作者：闻玉梅复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

本期特约专稿均为中东呼吸综合征（Middle East respiratory syndrome,MERS）方面的内容。一篇是有关MERS的流行病学及防控;另一篇是针对MERS的全人源单克隆抗体的研究进展,介绍了有关人源单克隆抗体的制备与应用。虽然MERS似乎主要局... 详细信息

本期特约专稿均为中东呼吸综合征（Middle East respiratory syndrome,MERS）方面的内容。一篇是有关MERS的流行病学及防控;另一篇是针对MERS的全人源单克隆抗体的研究进展,介绍了有关人源单克隆抗体的制备与应用。虽然MERS似乎主要局限在中东地区,但鉴于反恐的需要、一带一路建设以及我国有不少人员在中东从事多项工作,对MERS的了解与警惕不可懈怠。

关键词：人源单克隆抗体中东地区路建设特约专稿乙型肝炎病毒 Middle 肠道病毒医学微生物学非溶血性链球菌感染病学

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导读与评议(2015年第5期)

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微生物与感染 2015年第5期10卷 263-263页

作者：闻玉梅复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

本期特约专稿对治愈艾滋病（acquiredimmu-nodeficiencysyndrome，AIDS）的分析与预测进行了全面综述。鉴于人类免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus，HIV）感染者体内HIV潜伏库细胞是造成病毒反弹的主要因素，近年来围绕该潜伏... 详细信息

本期特约专稿对治愈艾滋病（acquiredimmu-nodeficiencysyndrome，AIDS）的分析与预测进行了全面综述。鉴于人类免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus，HIV）感染者体内HIV潜伏库细胞是造成病毒反弹的主要因素，近年来围绕该潜伏库发展出多种AIDS治愈的概念和策略。

关键词：人类免疫缺陷病毒导读 AIDS 艾滋病 HIV 治愈细胞

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CXCR4 HIV-1抑制剂的设计合成及活性研究

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军事医学 2014年第8期38卷 602-607页

作者：叶建涵周尚民王茜陆路董铭心陈红飙姜世勃戴秋云湘潭大学化学学院湖南湘潭411105 军事医学科学院生物工程研究所北京100071 复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

目的设计、合成一系列新型四氢喹啉-苄基或苯并咪唑多胺类化合物,作为潜在的靶向CXCR4辅助受体的新型抑制剂,并测定其抗HIV-1活性。方法组合HIV-1辅助受体CXCR4抑制剂三氮构效团与CCR5部分药效团,设计并合成一系列新化合物并经1H-NMR、M... 详细信息

目的设计、合成一系列新型四氢喹啉-苄基或苯并咪唑多胺类化合物,作为潜在的靶向CXCR4辅助受体的新型抑制剂,并测定其抗HIV-1活性。方法组合HIV-1辅助受体CXCR4抑制剂三氮构效团与CCR5部分药效团,设计并合成一系列新化合物并经1H-NMR、MS表征,用HIV-1ⅢB病毒测定化合物抑制活性。结果与结论设计合成的10个目标化合物未见文献报道。活性测试结果显示,四氢喹啉-苯并咪唑多胺类化合物具有较好的抗HIV活性(IC50<1μmol/L),四氢喹啉-苄基多胺类化合物活性较差(IC50>8μmol/L)。

关键词： CXCR4 HIV-1 抑制剂合成活性

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N-糖苷酶基因在脑膜炎败血伊丽莎白金菌临床分离株中的分布

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微生物与感染 2014年第4期9卷 224-229页

作者：李蒙孙桂芹陈菁李天胜王蕾策力木格陈力复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

N‐糖苷酶（PNGase）是真核生物中的常见酶，但在原核生物中极为罕见，目前仅报道在脑膜炎败血伊丽莎白金菌（EM）中存在。本文旨在检测 PNGase基因在EM临床分离株中的分布，为该菌的亚型分类及快速核酸分子检测提供依据，为研究PNGase... 详细信息

N‐糖苷酶（PNGase）是真核生物中的常见酶，但在原核生物中极为罕见，目前仅报道在脑膜炎败血伊丽莎白金菌（EM）中存在。本文旨在检测 PNGase基因在EM临床分离株中的分布，为该菌的亚型分类及快速核酸分子检测提供依据，为研究PNGase在原核生物中的生物学功能奠定基础。于2010年7月～2012年12月收集浙江省3家三级甲等医院的65株EM临床分离株，提取细菌基因组 DNA ，利用16 S rRNA细菌通用引物、PNGase F和PNGase F‐Ⅱ特异性引物，进行组合聚合酶链反应（PCR）。阳性扩增产物测序后与美国国立生物技术信息中心（NCBI）数据库中已知EM序列比对确认。结果显示，PNGase阳性菌64株，总阳性率为98．5％；PNGase F和PNGase F‐Ⅱ共阳性菌39株，共阳性率为60．0％。 PNGase F阳性菌41株，阳性率为63．1％；PNGase F‐Ⅱ阳性菌62株，阳性率为95．4％，PNGase F‐Ⅱ阳性率高于 PNGase F （配对χ^2检验， P＜0．01），提示 PNGase可能对EM具有重要的生物学意义。结果还表明，本研究建立的组合PCR可应用于E M菌株中 PN G ase基因分型。

关键词：脑膜炎败血伊丽莎白金菌聚合酶链反应 N-糖苷酶F-Ⅱ Peptide:N-glycanase F-Ⅱ

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肠-肝轴与非酒精性脂肪性肝病

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微生物与感染 2014年第2期9卷 65-70页

作者：丁佳吴健复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

肠道菌群组成和数量的改变影响宿主的能量代谢、免疫应答和炎症反应状态。非酒精性脂肪性肝病患者常伴有小肠细菌过度生长或某些菌群种类和数量的改变,以及肠道黏膜通透性增加。肠道细菌通过增强肝脏脂肪合成、诱导机体胰岛素抵抗、激... 详细信息

肠道菌群组成和数量的改变影响宿主的能量代谢、免疫应答和炎症反应状态。非酒精性脂肪性肝病患者常伴有小肠细菌过度生长或某些菌群种类和数量的改变,以及肠道黏膜通透性增加。肠道细菌通过增强肝脏脂肪合成、诱导机体胰岛素抵抗、激活天然免疫系统相关分子模式等机制,诱发肝脏炎症反应,启动纤维化进程,促进单纯性脂肪变向脂肪性肝炎发展。鉴定影响机体能量代谢和炎症反应的肠道菌群及其产物将为阐明肠-肝轴对肝脏炎症发生、发展所起的作用奠定基础,为揭示非酒精性脂肪性肝病发生、发展的机制开辟新思路,为该病的防治探索新策略。

关键词：肠-肝轴非酒精性脂肪性肝病肠道菌群

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