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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：孙桂芹李蒙王蕾陈力复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室

目的阐述脑膜脓毒黄杆菌对免疫功能低下患者的1例肺部感染,以期临床能够重视该菌的分离、鉴定,在治疗时应根据药敏结果,合理选用抗生素。方法以一个非霍奇金淋巴瘤患者的肺部感染脑膜脓毒黄杆菌的病例分析为出发点,讨论脑膜脓毒黄杆菌... 详细信息

目的阐述脑膜脓毒黄杆菌对免疫功能低下患者的1例肺部感染,以期临床能够重视该菌的分离、鉴定,在治疗时应根据药敏结果,合理选用抗生素。方法以一个非霍奇金淋巴瘤患者的肺部感染脑膜脓毒黄杆菌的病例分析为出发点,讨论脑膜脓毒黄杆菌临床分离率增加、治疗困难的现状。结果脑膜脓毒黄杆菌感染因其多重耐药给临床治疗带来困难,使得该菌感染的死亡率升高,不合理使用抗生素和免疫抑制剂的使用给脑膜脓毒黄杆菌感染创造了条件,静脉导管、气管插管、呼吸机的广泛应用增加了脑膜脓毒黄杆菌接触感染的机率。结论脑膜脓毒性黄杆菌广泛存在,并引起人不同部位的感染,尤其随着广谱抗生素的广泛应用及导管在治疗时应根据药敏结果,合理选用抗生素。临床医务工作者应对脑膜炎脓毒黄杆菌有较全面的、新的认识,重视该菌的分离、鉴定及药敏实验,从而采取合理措施,控制该菌的感染,提高治疗效果。

关键词：脑膜脓毒黄杆菌非霍奇金淋巴瘤感染多重耐药

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鸭膜联蛋白2cDNA的克隆表达及抗体制备

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中华生物医学工程杂志 2012年第6期18卷 456-459页

作者：赵艳丰闫梁许斌贲海静杨金华周双宬瞿涤南京医科大学第二附属医院检验科 210011 复旦大学上海医学院教育部卫生部医学分子病毒学重点实验室

目的克隆樱桃谷鸭膜联蛋白2（AnnexinA2）并制备抗体，用于鸭AnnexinA2蛋白的表达分析。方法采用RT-PCR方法从鸭肝脏组织中克隆鸭AnnexinA2eDNA序列，将该cDNA序列亚克隆到原核表达载体pET-28a（＋），构建重组原核表达载体pET-28a（＋... 详细信息

目的克隆樱桃谷鸭膜联蛋白2（AnnexinA2）并制备抗体，用于鸭AnnexinA2蛋白的表达分析。方法采用RT-PCR方法从鸭肝脏组织中克隆鸭AnnexinA2eDNA序列，将该cDNA序列亚克隆到原核表达载体pET-28a（＋），构建重组原核表达载体pET-28a（＋）．AnnexinA2。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导AnnexinA2重组质粒原核表达，应用镍柱纯化AnnexinA2融合蛋白。腹腔注射AnnexinA2融合蛋白免疫小鼠，采用免疫印迹鉴定小鼠抗鸭AnnexinA2多克隆抗体并检测鸭原代肝细胞在培养12、24、72h以及120hAnnexinA2蛋白表达情况。结果成功构建了原核表达载体pET-28a（＋）．AnnexinA2，经NcoI和XhoI双酶切，琼脂糖凝胶电泳显示5369bp和1020bp条带，重组质粒测序结果显示重组序列正确。IPTG诱导重组质粒表达产生相对分子质量为36000的可溶性融合蛋白。AnnexinA2融合蛋白免疫小鼠，获得的抗血清1：2000稀释经免疫印迹仍能检测到靶蛋白，获得的小鼠抗鸭AnnexinA2多克隆抗体可应用于鸭原代肝细胞表达检测，AnnexinA2蛋白在鸭原代肝细胞培养12、24、72h以及120h均有表达。结论制备了小鼠抗鸭AnnexinA2多克隆抗体，可为探讨AnnexinA2影响鸭乙型肝炎病毒感染分子机制提供实验依据。

关键词：膜联蛋白2 多克隆抗体肝炎病毒乙型鸭

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系统性红斑狼疮儿童特异性全长抗体基因库的构建与分析

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南方医科大学学报 2012年第8期32卷 1082-1087页

作者：周志刚朱美华梁中锟陈振瑞贺微李长征谭万龙姜世勃刘叔文周烨周辰广州医学院第二附属医院儿科广东广州510260 南方医科大学南方医院南方医科大学药学院南方医科大学中医药学院复旦大学上海医学院分子病毒学教育部//卫生部重点实验室上海200032 南方医科大学基因工程研究所广东广州510515 香港Dgen生物技术有限公司香港999077

目的构建系统性红斑狼疮(SLE)儿童个体特异性哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库。方法采集SLE确诊患儿外周血,分离外周血淋巴细胞,提取外周血淋巴细胞总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因、构建抗体轻链... 详细信息

目的构建系统性红斑狼疮(SLE)儿童个体特异性哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库。方法采集SLE确诊患儿外周血,分离外周血淋巴细胞,提取外周血淋巴细胞总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因、构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,将抗体基因库转染293T细胞,流式细胞仪分析抗体在293T细胞表面的表达。结果以0.8μg总RNA为模板,用6套引物成功扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,构建获得的重链基因库容量为9.4×104,轻链基因库容量为8.4×104。随机挑选的10个重链克隆有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序列,10个轻链克隆7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列。流式细胞仪分析挑选的单克隆和抗体基因库,均检测到全长抗体在293T细胞表面的表达,理论上抗体库中可表达的抗体多样性可以达到109。结论以0.8μg总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,成功构建SLE儿童特异性全长人抗体基因库,并在293T细胞表面成功展示SLE儿童个体抗体库中的全长抗体,为进一步研究SLE儿童自身抗体的特点及自身抗体在SLE发病机制中的作用及临床应用打下良好基础。

关键词：系统性红斑狼疮儿童哺乳动物细胞表面展示全长人源抗体库

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表皮葡萄球菌双组分系统SrrAB调控生长代谢及生物膜作用的研究

表皮葡萄球菌双组分系统SrrAB调控生长代谢及生物膜作用的研究

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中国微生物学会2012感染与免疫学术研讨会

作者：武有聪朱涛刘华勇许涛韩海燕吴旸 Friedrich G(o)tz 瞿涤复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室 200032中国上海大理学院基础医学院医学微生物学及免疫学教研室 671000中国大理复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室 200032中国上海德国图宾根大学微生物遗传学系 72076德国

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YycG小分子抑制剂衍生物的抗菌及抗生物膜活性的研究

YycG小分子抑制剂衍生物的抗菌及抗生物膜活性的研究

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：刘华勇郑礼康张杰龚婷韩海燕韩世清瞿涤复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室南京工业大学生物与制药工程学院

目的在课题组前期研究发现YycG抑制剂先导化合物具有抑菌抗表皮葡萄球菌生物膜活性的基础之上,根据YycG抑制剂先导化合物Compound 2的母核设计并合成系列结构新颖的衍生化合物,以提高其生物活性并降低毒性。方法在保留YycG抑制剂先导化... 详细信息

目的在课题组前期研究发现YycG抑制剂先导化合物具有抑菌抗表皮葡萄球菌生物膜活性的基础之上,根据YycG抑制剂先导化合物Compound 2的母核设计并合成系列结构新颖的衍生化合物,以提高其生物活性并降低毒性。方法在保留YycG抑制剂先导化合物Compound 2的噻唑烷酮母核的基础上,进行结构改造,检测衍生物抗菌杀菌活性及其对早期生物膜形成的抑制活性及对成熟生物膜内细菌的杀伤作用:并研究了衍生物对表皮葡萄球菌组氨酸激酶活性抑制作用和细胞毒性和溶血性;利用建立的新西兰白兔动物模型检测了衍生物在体内对生物膜的作用效果。结果通过改变相关活性基团共合成了Compound 2的衍生物56个,根据抗菌试验结果从中选取6个具有良好抑菌杀菌活性的衍生物:H2-38,H2-39,H2-57,H2-60,H2-74和H2-81,其中H2-74和H2-81的MIC浓度达到1.5μmol/L,优于原型Compound 2;抑制生物膜活性较好的为H2-39,H2-57,H2-60和H2-81,在12.5μmol/L浓度能完全抑制生物膜形成,抑制生物膜活性优于先导化合物(100μmol/L),对成熟生物膜内的细菌的杀伤效果明显优于万古霉素,并能显著抑制新西兰白兔动物模型中生物膜的形成,对生物膜内的细菌具有杀伤作用。筛选出的衍生物能不同程度的抑制靶蛋白的磷酸化活性(半数抑制率浓度IC50值范围在24.2～71.2μmol/L)。结论通过对YycG小分子抑制剂的活性基因进行优化改造后,筛选出的衍生物抑菌杀菌活性、抑制生物膜形成和杀伤生物膜内细菌能力明显增强,同时毒性下降,为新型抗表皮葡萄球菌生物膜感染药物的研发打下一定基础。

关键词：表皮葡萄球菌生物膜组氨酸激酶衍生物

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干扰素治疗慢性乙肝患者外周血调节性T细胞动态变化和临床意义

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实用临床医药杂志 2012年第7期16卷 13-17页

作者：施敏成玉明李柏胜沈思兰刘岩红钱方兴上海市长宁区中心医院消化科上海200335 复旦大学上海医学院分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海201058

目的探讨干扰素抗病毒治疗过程中慢性乙肝患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)的变化及其临床意义。方法采集干扰素抗病毒治疗的CHB患者46例外周血,在治疗前及治疗后12、24、36、48周,停药后24周时,分别以流式细胞仪检测外周... 详细信息

目的探讨干扰素抗病毒治疗过程中慢性乙肝患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)的变化及其临床意义。方法采集干扰素抗病毒治疗的CHB患者46例外周血,在治疗前及治疗后12、24、36、48周,停药后24周时,分别以流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Treg比例,实时荧光定量RT-PCR检测血清HBV-DNA载量,酶联免疫吸附法检测HBV标志物,全自动生化分析仪检测ALT水平。结果在46例CHB患者中,完全应答的13例患者CD4+CD25+Treg频率在12、24、36、48周及停药后24周时分别为(4.16±0.64)%、(3.98±0.75)%、(3.70±0.55)%、(3.44±0.48)%、(3.07±0.48)%,呈逐步下降趋势,明显低于治疗前(5.73±0.62)%(P<0.01)。部分应答的18例患者CD4+CD25+Treg频率在12、24、36、48周及停药后24周时分别为(4.98±0.62)%(、4.50±0.54)%、(4.10±0.64)%、(4.02±0.64)%(、3.82±0.47)%,呈逐步下降趋势,明显低于治疗前(5.84±0.68)%(P<0.01)。无应答的15例患者CD4+CD25+Treg频率较治疗前无明显变化。完全应答、部分应答组患者Treg频率在12、24、36、48周及停药后24周时与无应答组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗24、48周,停药后24周时,HBeAg阴转率分别为10.8%、26.1%、28.3%,发生HBeAg血清学转换者在治疗12周时CD4+CD25+Treg比例明显下降。结论本实验初步认为,干扰素抗病毒治疗过程中及治疗后,有应答的CHB患者的外周血CD4+CD25+Treg频率下降。治疗早期CD4+CD25+Treg比例下降的患者HBeAg血清学转换率可能更高。

关键词：乙型肝炎 CD4+CD25+调节性T细胞干扰素

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人工合成香菇六糖(β-glu6)促进小鼠腹腔巨噬细胞固有免疫应答信号通路的研究

人工合成香菇六糖(β-glu6)促进小鼠腹腔巨噬细胞固有免疫应答信...

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：李晓菲王静瞿涤复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海市疾病预防控制中心免疫规划科

目的植物和真菌中提取的天然β-葡聚糖在临床中运用已久,但其结构,分子量,分支数量以及溶解度上的异质性限制了它在临床中的广泛应用。从香菇中提取的香菇多糖具有显著的免疫增强作用,但其结构,分子量亦具有不均一性。因此,合成了一种... 详细信息

目的植物和真菌中提取的天然β-葡聚糖在临床中运用已久,但其结构,分子量,分支数量以及溶解度上的异质性限制了它在临床中的广泛应用。从香菇中提取的香菇多糖具有显著的免疫增强作用,但其结构,分子量亦具有不均一性。因此,合成了一种香菇多糖基本功能单位的类似物(β-glu6):具有β-(1-3)连接和β-(1→6)分支,并含有一个α-(1→3)键的6碳糖。前期的研究已经证明其与香菇多糖具有类似的抗肿瘤作用,并在小鼠体内证明其能显著促进HBsAg应答,提高anti-HBs滴度以及促进HBcAg DNA疫苗的CD8+T细胞应答,但其促进固有免疫应答的机制以及所涉及的信号通路还有待进一步阐明。方法采用信号通路中关键蛋白抑制剂(ERK1/2抑制剂PD98059)以及特异性受体(TLR2,TLR4和Dectin-1)抗体,在C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞中研究了β-glu6作用的受体及激活的相关信号通路;通过流式细胞术对β-glu6刺激后腹腔巨噬细胞表面CD40的表达水平进行了检测;利用Real time RT-PCR和ELISA检测β-glu6刺激后腹腔巨噬细胞M1/M2细胞因子的表达和分泌情况,并利用Mouse Cytokine Array assay测定β-glu6诱导的细胞因子及趋化因子的分泌情况。结果β-glu6能显著促进巨噬细胞表面CD40的表达;并发现β-glu6可以通过TLR2,TLR4和Dectin-1受体影响C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞中Ras-Raf-MEK-ERK和PI3K-Akt信号通路从而促进IL-6,IL-12,TNF-α并抑制IL-10的分泌。另外,Mouse CytokineArray assay结果证明β-glu6可以促进大量细胞因子及趋化因子的分泌,包括CD54,IL-1α,IL-1β,IL-16,CCL4,CCL12,CXCL10,TIMP-1,G-CSF和MIP-2等。结论β-glu6是一种潜在的M1型细胞因子及趋化因子的诱导剂,可通过调节巨噬细胞进而调节机体的固有免疫,另提示β-glu6还具有一定的抗感染作用。

关键词：人工合香菇六糖 β-glu6 小鼠腹腔巨噬细胞 ERK Akt

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小鼠腹腔巨噬细胞中人工合成香菇六糖促进乙肝疫苗固有免疫应答机制的研究

小鼠腹腔巨噬细胞中人工合成香菇六糖促进乙肝疫苗固有免疫应答机...

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中国微生物学会2012感染与免疫学术研讨会

作者：李晓菲王静瞿涤复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室 200032 上海市疾病预防控制中心免疫规划科 200336

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表皮葡萄球菌临床菌株生物膜调控基因的研究

表皮葡萄球菌临床菌株生物膜调控基因的研究

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纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会

作者：吴旸刘敬然 Friedrich G(o)tz 瞿涤复旦大学医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海市医学院路138号 200032 德国图宾根大学微生物遗传学系德国图宾根市72076

为了研究15株SE icaA+/BF-临床菌株中PIA合成和Aap表达均显著下降的基因调控机制，通过RT-qPCR检测了细菌生长4小时和10小时生物膜调控基因arIRS, rsbU, sarA, srrA和1uxS的转录水平。结果显示，在对数生长期15株SE icaA+/ BF一临床... 详细信息

为了研究15株SE icaA+/BF-临床菌株中PIA合成和Aap表达均显著下降的基因调控机制，通过RT-qPCR检测了细菌生长4小时和10小时生物膜调控基因arIRS, rsbU, sarA, srrA和1uxS的转录水平。结果显示，在对数生长期15株SE icaA+/ BF一临床菌株的rsbU基因、arlRS基因转录水平皆明显低于RP62A;10小时14株中rsbU基因转录水平均明显低于RP62A,11株(73. 3％)细菌的arlRS基因转录水平低于RP62A。进一步在表皮葡萄球菌标准株1457株(生物膜强阳性)中敲除arlS基因，突变株的生物膜形成能力显著降低。

关键词：表皮葡萄球菌生物膜基因调控

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表皮葡萄球菌icaA+/BF-临床菌株生物膜调控基因的研究

表皮葡萄球菌icaA+/BF-临床菌株生物膜调控基因的研究

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中国微生物学会2012感染与免疫学术研讨会

作者：吴旸刘敬然 Friedrich G(o)tz 瞿涤复旦大学医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海市医学院路138号228信箱200032 德国图宾根大学微生物遗传学系德国图宾根市72076

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