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丙型肝炎病毒感染过程中其NS3/4A蛋白酶切割线粒体抗病毒信号蛋白的动态过程

微生物与感染 2017年第5期12卷 270-278页

作者：许军杜晓婷张扬袁正宏易志刚复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

已知丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)可通过其蛋白酶NS3/4A切割线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)来逃逸天然免疫识别,但尚不清楚其切割动力学及切割在抑制干扰素中的作用。本研究旨在细胞模... 详细信息

已知丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)可通过其蛋白酶NS3/4A切割线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)来逃逸天然免疫识别,但尚不清楚其切割动力学及切割在抑制干扰素中的作用。本研究旨在细胞模型中探讨HCV感染过程中病毒复制建立及病毒NS3/4A切割MAVS的动态过程,探究NS3/4A切割MAVS对病毒逃逸宿主天然免疫建立感染的贡献。首先构建基于绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的MAVS切割报告系统(GFP-NLS-MAVS-TM462),用HCV Jc1-Gluc感染Huh7.5/GFP-NLS-MAVS-TM462细胞。结果显示,病毒复制早期MAVS切割效率较低;NS3/4A高效切割MAVS发生于HCV复制晚期,且其切割效率与NS3蛋白水平相关。利用带有GFP ypet的HCV报告病毒Jc1-378-1感染Huh7.5/RFP-NLS-MAVS-TM462细胞,在单细胞水平观察HCV感染阳性细胞中MAVS被切割情况,发现HCV复制细胞中仅部分细胞MAVS被切割。进一步研究发现,不同基因型NS3/4A切割MAVS的效率仅与NS3表达水平相关。以上结果提示,HCV蛋白酶NS3/4A切割MAVS依赖NS3/4A蛋白在病毒复制过程中的累积,对在病毒复制早期逃逸宿主天然免疫建立感染可能无显著贡献。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白3/4A 线粒体抗病毒信号蛋白干扰素

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实验准备及技术人员在提高医学微生物学教学质量中的作用

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微生物与感染 2017年第6期12卷 355-361页

作者：李雪萍潘婷婷钱利生袁正宏瞿涤复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

实验课是现代医学微生物学课程中不可或缺的部分。然而,在考虑医学微生物学实验教学改革时,我们往往忽略了实验课教学准备工作及实验技术人员在高质量完成教学任务中的重要性。本文结合复旦大学2000年前、2000—2010年及现阶段医学微生... 详细信息

实验课是现代医学微生物学课程中不可或缺的部分。然而,在考虑医学微生物学实验教学改革时,我们往往忽略了实验课教学准备工作及实验技术人员在高质量完成教学任务中的重要性。本文结合复旦大学2000年前、2000—2010年及现阶段医学微生物学实验教学改革情况,分析并讨论实验课教学准备工作必须考虑的问题及所需实验条件,提出实验技术人员素质及实验课教学准备在保证医学微生物学实验教学质量中的重要性,为医学微生物学实验教学改革提供借鉴。

关键词：医学微生物学医学微生物学实验课实验准备实验室生物安全实验技术人员

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葡萄球菌CRISPR/Cas系统

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微生物与感染 2017年第4期12卷 254-262页

作者：叶立娜陈力瞿涤复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白[clustered regularly interspaced short palindromic repeat(CRISPR)/CRISPR-associated protein,CRISPR/Cas]是原核生物在进化过程中形成的获得性免疫系统,能抵抗噬菌体、质粒及可移动遗传因子等外源性DNA或RNA的入侵。目前,在多种葡萄球菌基因组中均发现CRISPR序列存在,其间隔序列通常与葡萄球菌的噬菌体或接合性质粒具有同源性,可能对葡萄球菌的毒力、耐药性传递和生物膜形成等生理学特性有影响。本文在简单介绍细菌CRISPR/Cas系统的基础上,对葡萄球菌CRISPR/Cas系统的构成、防御机制等进行综述。

关键词：成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白葡萄球菌外源性核酸噬菌体

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应用iTRAQ定量蛋白质组学研究海分枝杆菌mkl的基因功能

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微生物学报 2016年第9期56卷 1496-1503页

作者：施旭骏赵超牛辰高谦复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

【目的】通过分离海分枝杆菌野生株和mkl突变株的全菌蛋白,并进行差异蛋白质组分析,以期为探索分枝杆菌重要毒力基因mkl的功能提供新思路。【方法】以海分枝杆菌野生株和mkl突变株为研究材料,提取全菌蛋白,i TRAQ试剂标记后进行质谱鉴... 详细信息

【目的】通过分离海分枝杆菌野生株和mkl突变株的全菌蛋白,并进行差异蛋白质组分析,以期为探索分枝杆菌重要毒力基因mkl的功能提供新思路。【方法】以海分枝杆菌野生株和mkl突变株为研究材料,提取全菌蛋白,i TRAQ试剂标记后进行质谱鉴定和定量分析,并利用Uni Prot数据库对差异蛋白进行生物信息学分析。【结果】共鉴定出在野生株和mkl突变株中差异表达蛋白566个,其中在突变株中上调表达蛋白232个(比值≥1.4),下调表达蛋白334个(比值≤0.7)。生物信息学预测这些蛋白主要参与细菌脂质代谢、细胞壁和细胞进程、中间代谢、呼吸作用等生物学功能。其中Des A3下调最显著,其功能为脂肪酸去饱和酶,与油酸合成相关,进一步验证发现mkl突变株在不含油酸的固体培养基中生长受限,提示mkl可能在油酸的生物合成通路中发挥功能。【结论】通过i TRAQ分析了海分枝杆菌mkl突变株和野生株的差异表达蛋白谱,发现可能影响分枝杆菌油酸、脂质等合成代谢通路,为进一步研究mkl基因在分枝杆菌致病中发挥作用的相关机制奠定了基础。

关键词：分枝杆菌定量蛋白质组学 iTRAQ mkl基因

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海分枝杆菌ppk基因的生物学功能研究

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复旦学报（医学版） 2016年第6期43卷 649-656页

作者：祝琳施旭骏高谦复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

目的构建海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)ppk基因敲除株,对其生物学功能进行研究。方法利用基因同源重组技术,构建了海分枝杆菌ppk基因敲除株;使用DAPI染色法检测细菌胞内多聚无机磷酸盐(poly inorganic phosphate,poly-Pi)浓度;比... 详细信息

目的构建海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)ppk基因敲除株,对其生物学功能进行研究。方法利用基因同源重组技术,构建了海分枝杆菌ppk基因敲除株;使用DAPI染色法检测细菌胞内多聚无机磷酸盐(poly inorganic phosphate,poly-Pi)浓度;比较野生株及突变株在不同环境压力下的生存能力;用野生株和突变株分别感染斑马鱼成鱼,通过观察斑马鱼的存活情况,研究ppk基因对海分枝杆菌毒力的影响。将野生株和突变株分别感染小鼠来源的巨噬细胞系RAW267.4,检测其在巨噬细胞内的增殖。结果 ppk突变株胞内polyPi浓度明显下降;在斑马鱼成鱼感染模型中出现显著减毒表型;其在小鼠来源的巨噬细胞感染模型中的增殖较野生型菌株明显减弱;在营养缺陷、抗生素(利福平、左氧氟沙星)等环境压力下,其生存能力下降。结论 ppk基因影响分枝杆菌在环境压力下的生存,并且在其致病中发挥重要作用。

关键词：分枝杆菌多聚磷酸盐激酶多聚无机磷酸盐

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寨卡病毒引发小头症?关系越确定,防治越迫切!

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微生物与感染 2017年第2期12卷 70-78页

作者：汪小欢邹鹏黎媛陆路上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心上海201508 复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

自2015年初至今,寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)以巴西为首先后在数十个国家和地区暴发流行。几乎同时,与日俱增的小头症患儿使全球对此陷入警惕状态。目前,全球正在积极探索ZIKV感染所引发的各种神经系统疾病。在越来越多证据表明在细胞水... 详细信息

自2015年初至今,寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)以巴西为首先后在数十个国家和地区暴发流行。几乎同时,与日俱增的小头症患儿使全球对此陷入警惕状态。目前,全球正在积极探索ZIKV感染所引发的各种神经系统疾病。在越来越多证据表明在细胞水平和动物模型中ZIKV能直接损伤胚胎脑部发育的同时,ZIKV感染者的防治需求也越来越迫切。本文从ZIKV的流行病学、与小头畸形因果关系的研究进展及其预防疫苗和治疗药物的研究现状等方面进行概述。

关键词：寨卡病毒小头症流行病学预防疫苗治疗药物

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导读与评议(2017年第4期)

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微生物与感染 2017年第4期12卷 197-197,242页

作者：瞿涤复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

由于历史原因和结核病的特殊性,中国是世界上紧随印度之后的22个结核病高负担国家之一。结核分枝杆菌感染严重危害人类健康,影响经济发展。2015年世界卫生组织提出终止结核病流行的目标：2030年结核病死亡率降低90%,发病率降低80%;

关键词：结核病死亡率疫苗研究亚单位疫苗抗原特异性细胞免疫应答树突细胞治疗性疫苗经济发展脓肿分枝杆菌中和抗体

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抑制葡萄球菌组氨酸激酶YycG的噻唑烷酮类衍生物抗菌活性的研究

抑制葡萄球菌组氨酸激酶YycG的噻唑烷酮类衍生物抗菌活性的研究

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第四届临床微生物学与感染病学国际论坛暨首届微生物耐药防控高峰论坛

作者：吕智慧刘华勇吴旸瞿涤复旦大学上海医学院医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海 200030

背景：表皮葡萄球菌是引起医院感染的一种重要机会致病菌。它的主要致病力是在植入性医疗材料上形成生物膜，生物膜一旦形成就很难再被清除，从而给临床治疗带来极大困难。目的：葡萄球菌组氨酸激酶YycG抑制剂噻唑烷酮类衍生物抗菌和抗... 详细信息

背景：表皮葡萄球菌是引起医院感染的一种重要机会致病菌。它的主要致病力是在植入性医疗材料上形成生物膜，生物膜一旦形成就很难再被清除，从而给临床治疗带来极大困难。目的：葡萄球菌组氨酸激酶YycG抑制剂噻唑烷酮类衍生物抗菌和抗生物膜活性的研究。

关键词：表皮葡萄球菌 YycG抑制剂最低抑菌浓度杀生物膜活性

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表皮葡萄球菌磷酸盐转运调控蛋白PhoU的生物学功能的研究

表皮葡萄球菌磷酸盐转运调控蛋白PhoU的生物学功能的研究

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第四届临床微生物学与感染病学国际论坛暨首届微生物耐药防控高峰论坛

作者：王小飞韩海燕吴旸瞿涤复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海 200032

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肿瘤坏死因子α突变型斑马鱼在海分枝杆菌感染中的应用研究

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微生物与感染 2017年第3期12卷 156-163页

作者：谢玲玲王风华王德成赵超彭刚牛辰复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032 复旦大学脑科学研究院上海200032 三峡大学医学院宜昌443002

肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)作为重要的炎性细胞因子,在类风湿关节炎、感染性休克等疾病的发病中起重要作用。为探究TNF-α在宿主抵抗海分枝杆菌感染中的作用,本研究采用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋... 详细信息

肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)作为重要的炎性细胞因子,在类风湿关节炎、感染性休克等疾病的发病中起重要作用。为探究TNF-α在宿主抵抗海分枝杆菌感染中的作用,本研究采用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9[clustered regularly interspaced short palindromic repeat(CRISPR)/CRISPR-associated protein 9(Cas9),CRISPR/Cas9]技术,使野生型斑马鱼TNF-α基因发生突变,成功构建并筛选出含有移码突变的TNF-α突变型(TNF-α-/-)斑马鱼。利用原位杂交技术,发现TNF-α-/-斑马鱼中TNF-αmRNA表达水平显著降低。与野生型斑马鱼相比,海分枝杆菌在TNF-α-/-斑马鱼体内扩散和增殖更显著。结果提示,本研究成功构建TNF-α-/-斑马鱼,有助于深入探究TNF-α在斑马鱼抵抗海分枝杆菌感染中的作用及其免疫调节机制。

关键词：成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9 肿瘤坏死因子α 突变型斑马鱼原位杂交细菌感染

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