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复旦学报（医学版） 2002年第5期29卷 410-413页

作者：严英钱利生王文风复旦大学医学院微生物学教研室上海200032

目的　比较几种诊断幽门螺杆菌 (H .pylori)感染的快速检测方法 ,并探讨其临床应用价值。方法　131份胃黏膜活检标本 ,依次应用快速尿素酶试验、直接涂片镜检、聚合酶链反应 (PCR)扩增ureA基因片段等 4种方法检测H .pylori。用配对资料... 详细信息

目的　比较几种诊断幽门螺杆菌 (H .pylori)感染的快速检测方法 ,并探讨其临床应用价值。方法　131份胃黏膜活检标本 ,依次应用快速尿素酶试验、直接涂片镜检、聚合酶链反应 (PCR)扩增ureA基因片段等 4种方法检测H .pylori。用配对资料的 χ2 检验对各方法的检出阳性率进行两两比较。结果　 4种方法的检出阳性率分别为 :快速尿素酶试验 76 .6 % ,分离培养 71% ,直接涂片 4 8.1% ,PCR 78.5 %。相关 χ2 检验结果表明PCR的阳性率高于分离培养 ,但其与尿素酶试验无差别。结论　PCR的敏感性和特异性均高于其他检测方法 ;可作为H .pylori感染的可靠分子诊断方法 :快速尿素酶试验虽特异性较差 ,但其具有简便和敏感的特点 ,仍可作为常规检查H .pylori感染的初筛试验 ;直接涂片染色阳性率过低 ,一般不适合单独作为H .

关键词：幽门螺杆菌快速尿素酶试验聚合酶链反应感染诊断

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葡萄球菌肠毒素B突变体的纯化及其活性

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复旦学报（医学版） 2001年第3期28卷 187-190页

作者：俞红钱利生熊思东复旦大学基础医学院微生物学教研室上海200032 复旦大学基础医学院免疫学教研室上海200032

目的　从基因重组菌中纯化葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体及其野生型蛋白 ,研究其毒力及抗原性。方法　表达野生型SEB蛋白 (SEB N)和SEB突变体 (SEB M2 3、SEB 1 50 )的 3株重组菌经IPTG诱导 ,反复冻融后 ,制备细菌裂解液。将初步纯化的... 详细信息

目的　从基因重组菌中纯化葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体及其野生型蛋白 ,研究其毒力及抗原性。方法　表达野生型SEB蛋白 (SEB N)和SEB突变体 (SEB M2 3、SEB 1 50 )的 3株重组菌经IPTG诱导 ,反复冻融后 ,制备细菌裂解液。将初步纯化的抗SEB抗血清与CNBr活化的Sepharose 4B作共价偶联 ,制成亲和层析柱。分柱纯化SEB N、SEB M2 3和SEB M1 50蛋白。用SDS PAGE和酚试剂改良法对纯化蛋白作纯度鉴定和定量 ;用双向免疫扩散试验和ELISA法作抗原性鉴定 ;用小鼠致死性试验作毒力鉴定。结果　SDS PAGE和双向免疫扩散试验表明 ,3种纯化蛋白均为单一条带 ,且都能与抗SEB抗体形成明显的沉淀线。ELISA表明SEB N、SEB M2 3、SEB M 1 50与抗SEB抗体有相似的结合力 ,提示 2 3位突变和 1 50位突变并未改变SEB的抗原表位。小鼠致死性试验表明 ,LPS激发的 3组小鼠 ( 6只 /组 ) ,分别用上述纯化蛋白攻击 ( 1 0 μg/只 ) ,SEB N组死亡率为 5/6;SEB M1 50组死亡率为 4 /6;SEB M2 3组死亡率为 0 /6;即使SEB M 2 3剂量增至 2 0 0 μg ,小鼠仍无死亡。结论　获得了SEB N、SEB M2 3和SEB M1 50 3种纯化蛋白 ,其中SEB突变体都保留了抗原性 ;SEB M 2 3与野生型SEB相比 ,毒力明显下降。为进一步研究其作为新型淋巴细胞激?

关键词：葡萄球菌肠毒素B 突变性纯化毒力抗原性

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伤寒杆菌耐药质粒pRST98介导细菌毒力的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第3期21卷 302-306页

作者：黄瑞吴淑燕闻玉梅复旦大学医学院苏州大学医学院微生物学教研室 215007

目的　研究伤寒杆菌耐药质粒pRST98能否介导细菌毒力。方法　将pRST98导入鼠伤寒杆菌低毒株RIA ,经口和腹腔感染小鼠 ,测定半数致死量 (LD50 ) ;口饲细菌后检测在体内播散、繁殖及引起脏器的组织学改变 ;在体外对其进行细胞的粘附和侵... 详细信息

目的　研究伤寒杆菌耐药质粒pRST98能否介导细菌毒力。方法　将pRST98导入鼠伤寒杆菌低毒株RIA ,经口和腹腔感染小鼠 ,测定半数致死量 (LD50 ) ;口饲细菌后检测在体内播散、繁殖及引起脏器的组织学改变 ;在体外对其进行细胞的粘附和侵袭试验。分别用含pRST98的野生伤寒杆菌、消除pRST98的突变体菌株及pRST98再重新导入突变体的菌株 ,研究对人、兔及豚鼠血清杀菌的抵抗力。结果　导入pRST98的鼠伤寒杆菌口服和腹腔注射组LD50 比阴性对照分别降低约 70 0倍和75倍 ;在小鼠肠系膜淋巴结、脾和肝脏内增殖 (P <0 .0 5 )并引起脏器严重病变 ;但在体外不影响鼠伤寒杆菌对HEp 2、CHO和HeLa细胞的粘附和侵袭。携带pRST98的伤寒杆菌在血清中的抵抗力显著高于无此质粒的菌株 (P <0 .0 5 )。结论　伤寒杆菌耐药质粒pRST98不但介导对药物的抗性 ,同时还能使宿主菌的毒力增强。

关键词：伤寒杆菌耐药质粒细菌毒力 pRST98 抗生素

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小鼠CTL体外非特异性扩增对其杀瘤活性的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第2期21卷 143-145页

作者：黄辉俞红熊思东林云璐复旦大学医学院免疫学教研室上海200032 复旦大学医学院微生物学教研室上海200032

目的　在体外用抗CD3单抗、抗CD2 8单抗和白细胞介素 2 (IL 2 )扩增肿瘤特异性CTL ,为肿瘤过继治疗提供足够数量的、具有高度杀瘤活性的效应细胞。方法　采用两种方案培养肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞。 (1)抗CD3单抗刺激 48h后 ,加入抗CD... 详细信息

目的　在体外用抗CD3单抗、抗CD2 8单抗和白细胞介素 2 (IL 2 )扩增肿瘤特异性CTL ,为肿瘤过继治疗提供足够数量的、具有高度杀瘤活性的效应细胞。方法　采用两种方案培养肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞。 (1)抗CD3单抗刺激 48h后 ,加入抗CD3单抗和 2 0U mlrIL 2 (抗 CD3+IL 2组 ) ;(2 )抗CD3单抗和抗CD2 8单抗同时刺激 48h后 ,加入抗CD3单抗、抗CD2 8单抗和 2 0U mlrIL 2 (抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组 )。分别检测 2组效应细胞的增殖水平、杀瘤活性及表型。结果　抗 CD3+IL 2组细胞的3H TdR掺入量在第 6天、12天、2 0天分别为 2 2 12 6、5 42 6、2 0 72 ,抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组细胞的3H TdR掺入量在第 6天、12天、2 0天分别为 32 16 8、12 92 2、32 6 5 ,后者明显高于前者。在培养 12d时 ,抗 CD3+IL 2组细胞对FBL 3的最大杀伤活性为 6 6 .4% ,抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组细胞对FBL 3的最大杀伤活性为 77.8%。细胞表型FACS分析结果表明 ,抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组培养 12d后的细胞 90 %以上为Thy1.2 + 细胞 ,且CD2 5 + 细胞在抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组、抗 CD3+IL 2组分别为 2 3.0 0 %、8.15 %。结论　抗CD3单抗、抗CD2 8单抗和低剂量IL 2同时非特异性刺激 ,可获得大量扩增的、具有高度杀瘤活性的肿瘤特异性CTL。

关键词：抗CD28单抗抗CD3单抗肿瘤特异性T细胞肿瘤过继疗法

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SOCS-3基因在Balb/c小鼠脑组织中的表达与脑不对称性

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生物化学与生物物理进展 2004年第8期31卷 727-730页

作者：赵丽纯苏芸李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室汕头515031

为探讨细胞因子信号传导抑制因子 3(suppressoofcytokinesignaling 3,SOCS 3)在Balb/c小鼠皮层、海马、下丘脑中的表达及其与脑不对称性的关系 .通过伸爪取食法将Balb/c小鼠分为左利组和右利组 ,取左、右侧皮层 ,左、右侧海马及下丘脑 ,... 详细信息

为探讨细胞因子信号传导抑制因子 3(suppressoofcytokinesignaling 3,SOCS 3)在Balb/c小鼠皮层、海马、下丘脑中的表达及其与脑不对称性的关系 .通过伸爪取食法将Balb/c小鼠分为左利组和右利组 ,取左、右侧皮层 ,左、右侧海马及下丘脑 ,以RT PCR法间接测定SOCS 3mRNA水平 .结果表明 :a 在左利鼠右侧皮层中 ,SOCS 3基因表达水平显著高于左侧皮层 (P <0 0 5 ) ;右利鼠左侧皮层SOCS 3表达显著高于左利鼠左侧皮层 (P <0 0 5 ) .b 海马中SOCS 3表达 :左利鼠右侧海马SOCS 3表达显著高于左侧海马 (P <0 0 5 ) ;右利鼠左侧海马SOCS 3表达显著高于左利鼠左侧海马 (P <0 0 5 ) .c 右利鼠下丘脑中SOCS 3显著高于左利鼠 (P<0 0 5 ) .上述研究结果提示 ,Balb/c小鼠脑中SOCS

关键词： SOCS-3基因小鼠脑组织表达脑不对称神经免疫内分泌细胞因子信号传导抑制因子

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天敌应激下小鼠血浆皮质酮、巨噬细胞产生NO、IL-1β水平与脑不对称性

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生物化学与生物物理进展 2004年第9期31卷 824-828页

作者：赵丽纯苏芸李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室汕头515031

为探讨天敌应激下脑不对称性对小鼠HPA轴活性及巨噬细胞功能的影响,通过伸爪取食法将Balb/c小鼠分为左利、右利、双利组,分别暴露在鼠类天敌———猫急性应激(4 5min,1次)、慢性应激(4 5min/次,每天 1次,连续 14天)刺激后,分别用EIA法... 详细信息

为探讨天敌应激下脑不对称性对小鼠HPA轴活性及巨噬细胞功能的影响,通过伸爪取食法将Balb/c小鼠分为左利、右利、双利组,分别暴露在鼠类天敌———猫急性应激(4 5min,1次)、慢性应激(4 5min/次,每天 1次,连续 14天)刺激后,分别用EIA法、硝酸还原酶法、ELISA法测定了血浆皮质酮、腹腔巨噬细胞培养上清中一氧化氮(nitricoxide,NO)、IL 1β水平.a 血浆皮质酮水平:急性应激下,右利、双利组小鼠血浆皮质酮升高,右利组更为显著,左利组呈下降趋势,右利、双利组显著高于左利组及相应正常对照组(P <0 0 5 );慢性应激下,右利、双利组显著高于相应正常对照组,左利、双利组也显著高于急性应激下相应组(P <0 0 5 ).b NO水平:急性应激下,左利组腹腔巨噬细胞培养上清中NO无显著变化,右利、双利组呈升高趋势,右利显著高于左利(P <0 0 5);慢性应激中,三组NO水平均显著高于相应正常对照组(P <0 0 5 ).c IL 1β水平:急性应激下,左利组IL 1β水平显著低于相应正常对照组,P<0 0 5;慢性应激下,左利、双利组与正常对照组相比均有所降低,但无统计学意义(P >0 0 5),右利组则显著高于相应正常对照组(P <0 0 5 ).上述研究结果提示,小鼠在暴露于天敌———猫应激下。

关键词：天敌应激,脑不对称皮质酮一氧化氮 IL-1β

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幽门螺杆菌感染BALB/c小鼠模型的研究

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中国人兽共患病杂志 2002年第5期18卷 9-11,F004页

作者：严英钱利生王文风李雪萍复旦大学医学院微生物学教研室上海200032

目的　建立稳定的Hp感染BALB/c小鼠模型 ,用于Hp致病、免疫和防治的研究。方法　选用临床分离株 ,应用外科手术法向小鼠胃内直接接种Hp菌液 0 2ml(10 9CFU/ml) ;接种后不同时间取小鼠胃粘膜组织进行细菌学和病理学检查。结果　接种后 ... 详细信息

目的　建立稳定的Hp感染BALB/c小鼠模型 ,用于Hp致病、免疫和防治的研究。方法　选用临床分离株 ,应用外科手术法向小鼠胃内直接接种Hp菌液 0 2ml(10 9CFU/ml) ;接种后不同时间取小鼠胃粘膜组织进行细菌学和病理学检查。结果　接种后 2～ 8周 ,小鼠胃内均可分离到Hp ,Hp分离阳性率为 95 %。病理学检查显示鼠胃粘膜明显炎症。感染鼠用阿莫西林治疗后 ,鼠胃组织Hp培养均转阴性。结论　使用Hp鼠胃接种法。

关键词：幽门螺杆菌感染阿莫西林动物模型细菌学病理学胃内直接接种法

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不同T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异

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复旦学报（医学版） 2002年第6期29卷 437-439页

作者：张瑞华陈露秋储以微刘瑞梓王缨熊思东复旦大学医学院免疫学系上海200032 东京女子医科大学微生物学与免疫学教研室

目的　在体内和体外研究SEA再次刺激后Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群的免疫反应 ,探讨CD4+ 和CD8+ T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异。方法　分离小鼠超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)应答性Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ 两个T细胞亚... 详细信息

目的　在体内和体外研究SEA再次刺激后Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群的免疫反应 ,探讨CD4+ 和CD8+ T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异。方法　分离小鼠超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)应答性Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ 两个T细胞亚群 ,检测其对SEA再次刺激的增殖反应及产生IL 2活性。结果　Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群对SEA再次刺激所诱导的增殖反应以及产生IL 2活性的能力有显著差异 (P <0 .0 1)。结论　SEA单次刺激时Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群反应性相似 ,再次刺激时Vβ3+ CD8+ 呈显著低反应性。

关键词： T细胞亚群超抗原SEA 反应性差异

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登革2型病毒调控血管内皮细胞纤溶系统相关蛋白的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第7期25卷 523-528页

作者：江振友肖瑞唐小龙江丽芳暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室安徽理工大学医学院中山大学医学院微生物学教研室

目的观察登革2型病毒(DV2)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)表达组织纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的影响. 方法应用胰酶消化分离HUVEC并进行传代培养,用生长良好的第2、3代细胞进行试验.用cell counting kit-8(CCK... 详细信息

目的观察登革2型病毒(DV2)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)表达组织纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的影响. 方法应用胰酶消化分离HUVEC并进行传代培养,用生长良好的第2、3代细胞进行试验.用cell counting kit-8(CCK-8)测定DV2感染后细胞活性变化;发色底物法测定感染DV2组和对照组培养液中tPA、PAI-1活性;RT-PCR检测细胞内tPA和PAI-1 mRNA水平. 结果 DV2感染对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义.感染DV2组培养液中tPA活性在12～72 h显著升高(P＜0.05);DV2诱导HUVEC表达tPA mRNA的水平显著上调,12 h达到峰值,以后渐降,72 h mRNA表达水平仍高于对照组(P＜0.01).而DV2感染组培养液中PAI-1活性和PAI-1 mRNA的表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 DV2感染可显著上调HUVEC的tPA mRNA转录,增强内皮细胞tPA蛋白的分泌,而不影响PAI-1 mRNA的转录或改变内皮细胞PAI-1的分泌.结果提示DV2可活化但并不损伤内皮细胞,诱发内皮细胞增强表达纤溶酶原激活物而致使纤溶系统失衡,引起纤溶亢进,这可能是诱发DHF/DSS患者急性期出血、低血容量性休克等体征的主要因素之一.

关键词：登革病毒血管内皮细胞组织纤溶酶原激活物纤溶酶原激活物抑制物1 人脐静脉血管内皮细胞登革2型病毒纤溶系统纤溶酶原激活物抑制物相关蛋白 PAI-1活性

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人疱疹病毒7型被膜蛋白pp85的原核表达及应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第1期26卷 10-13页

作者：王笑峰孙坚萍罗兵王云青岛大学医学院微生物学教研室 266021

目的构建人疱疹病毒7型（HHV7）被膜蛋白pp85编码基因（ORF U14）的原核表达载体，并进行原核表达。方法应用HHV7标准株Glasgow感染SupT1细胞，PCR技术扩增HHV7 ORF U14基因的主要抗原决定簇编码区（328～533AA），目的基因与原核表... 详细信息

目的构建人疱疹病毒7型（HHV7）被膜蛋白pp85编码基因（ORF U14）的原核表达载体，并进行原核表达。方法应用HHV7标准株Glasgow感染SupT1细胞，PCR技术扩增HHV7 ORF U14基因的主要抗原决定簇编码区（328～533AA），目的基因与原核表达载体pThioHis A连接后，转化宿主菌*** BL21，IPTG诱导融合蛋白表达，经镍-螯合物琼脂糖树脂柱亲和层析纯化获得重组抗原。重组蛋白电泳后转至PVDF膜，与HHV7阳性血清进行免疫印迹反应。结果 DNA序列分析表明，目的基因序列与HHV7标准毒株Glasgow相应序列完全一致，SDS-PAGE可观察到相对分子质量（Mr）为35．7×10^3融合蛋白的表达，免疫印迹反应显示重组抗原具有较高的特异性。结论 HHV7重组抗原具有较好的抗原性，进一步完善后可用于HHV7抗体的检测。

关键词：人疱疹病毒7型 Western blot 被膜蛋白pp85 原核表达

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