检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2016年第9期56卷 1496-1503页

作者：施旭骏赵超牛辰高谦复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

【目的】通过分离海分枝杆菌野生株和mkl突变株的全菌蛋白,并进行差异蛋白质组分析,以期为探索分枝杆菌重要毒力基因mkl的功能提供新思路。【方法】以海分枝杆菌野生株和mkl突变株为研究材料,提取全菌蛋白,i TRAQ试剂标记后进行质谱鉴... 详细信息

【目的】通过分离海分枝杆菌野生株和mkl突变株的全菌蛋白,并进行差异蛋白质组分析,以期为探索分枝杆菌重要毒力基因mkl的功能提供新思路。【方法】以海分枝杆菌野生株和mkl突变株为研究材料,提取全菌蛋白,i TRAQ试剂标记后进行质谱鉴定和定量分析,并利用Uni Prot数据库对差异蛋白进行生物信息学分析。【结果】共鉴定出在野生株和mkl突变株中差异表达蛋白566个,其中在突变株中上调表达蛋白232个(比值≥1.4),下调表达蛋白334个(比值≤0.7)。生物信息学预测这些蛋白主要参与细菌脂质代谢、细胞壁和细胞进程、中间代谢、呼吸作用等生物学功能。其中Des A3下调最显著,其功能为脂肪酸去饱和酶,与油酸合成相关,进一步验证发现mkl突变株在不含油酸的固体培养基中生长受限,提示mkl可能在油酸的生物合成通路中发挥功能。【结论】通过i TRAQ分析了海分枝杆菌mkl突变株和野生株的差异表达蛋白谱,发现可能影响分枝杆菌油酸、脂质等合成代谢通路,为进一步研究mkl基因在分枝杆菌致病中发挥作用的相关机制奠定了基础。

关键词：分枝杆菌定量蛋白质组学 iTRAQ mkl基因

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海分枝杆菌ppk基因的生物学功能研究

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复旦学报（医学版） 2016年第6期43卷 649-656页

作者：祝琳施旭骏高谦复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

目的构建海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)ppk基因敲除株,对其生物学功能进行研究。方法利用基因同源重组技术,构建了海分枝杆菌ppk基因敲除株;使用DAPI染色法检测细菌胞内多聚无机磷酸盐(poly inorganic phosphate,poly-Pi)浓度;比... 详细信息

目的构建海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)ppk基因敲除株,对其生物学功能进行研究。方法利用基因同源重组技术,构建了海分枝杆菌ppk基因敲除株;使用DAPI染色法检测细菌胞内多聚无机磷酸盐(poly inorganic phosphate,poly-Pi)浓度;比较野生株及突变株在不同环境压力下的生存能力;用野生株和突变株分别感染斑马鱼成鱼,通过观察斑马鱼的存活情况,研究ppk基因对海分枝杆菌毒力的影响。将野生株和突变株分别感染小鼠来源的巨噬细胞系RAW267.4,检测其在巨噬细胞内的增殖。结果 ppk突变株胞内polyPi浓度明显下降;在斑马鱼成鱼感染模型中出现显著减毒表型;其在小鼠来源的巨噬细胞感染模型中的增殖较野生型菌株明显减弱;在营养缺陷、抗生素(利福平、左氧氟沙星)等环境压力下,其生存能力下降。结论 ppk基因影响分枝杆菌在环境压力下的生存,并且在其致病中发挥重要作用。

关键词：分枝杆菌多聚磷酸盐激酶多聚无机磷酸盐

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分枝杆菌glpX基因的功能

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微生物学报 2014年第3期54卷 285-291页

作者：王歆玮任道元高谦牛辰复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

【目的】构建耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)glpX基因敲除株,研究其在生理代谢中的功能。【方法】利用分枝杆菌噬菌体Che9c重组系统构建耻垢分枝杆菌glpX基因敲除株;比较野生株及突变株在不同碳源培养条件下的生长差异;通过荧... 详细信息

【目的】构建耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)glpX基因敲除株,研究其在生理代谢中的功能。【方法】利用分枝杆菌噬菌体Che9c重组系统构建耻垢分枝杆菌glpX基因敲除株;比较野生株及突变株在不同碳源培养条件下的生长差异;通过荧光实时定量PCR,比较野生株在以葡萄糖或油酸为唯一碳源培养下,glpX基因的表达水平。【结果】glpX突变株在以甘油或油酸为唯一碳源的培养基中无法生长;野生株在以油酸为唯一碳源培养下,glpX基因表达上调。【结论】glpX基因编码了分枝杆菌糖异生途径必需的和非冗余的果糖1,6-二磷酸酶(fructose 1,6-bisphosphatase,FBPase)。

关键词：分枝杆菌基因glpX 果糖1 6-二磷酸酶碳源代谢糖异生

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从海分枝杆菌菌落形态变化筛选与毒力相关基因的方法

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复旦学报（医学版） 2009年第5期36卷 596-600,604页

作者：张玮祥于佳高谦复旦大学医学院-医学分子病毒教育部/卫生部重点实验室上海200032

目的通过菌落表型的变化筛选并鉴定与毒力相关基因。方法利用转座子随机插入突变技术建立海分枝杆菌随机插入突变库;通过菌落形态变化表型筛选细菌表面结构发生变化的突变菌株;运用抗性标记挽救法鉴定突变基因并运用生物信息学方法预测... 详细信息

目的通过菌落表型的变化筛选并鉴定与毒力相关基因。方法利用转座子随机插入突变技术建立海分枝杆菌随机插入突变库;通过菌落形态变化表型筛选细菌表面结构发生变化的突变菌株;运用抗性标记挽救法鉴定突变基因并运用生物信息学方法预测基因的功能。结果通过菌落形态改变筛选出66个突变菌株,并成功鉴定其中的53个突变菌株的转座子插入位点,涉及48个基因;其中已有研究报道的、直接跟毒力相关的基因15个(占筛选基因的31.25%)。结论本研究从海分枝杆菌菌落表型变化筛选与毒力可能相关的基因,为海分枝杆菌致病基因的筛选提供了新策略;同时为研究其致病机制提供了候选基因。

关键词：海分枝杆菌 MycoMar T7 转座子菌落形态致病基因

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高内涵筛选结合活细胞实时成像技术分析谷氨酸诱导的小鼠神经瘤母细胞N2a凋亡

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复旦学报（医学版） 2015年第4期42卷 538-542页

作者：乔可崔士超胡捷先陈献华复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032 复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部医学神经生物学国家重点实验室上海200032

目的利用高内涵筛选(high-content screening,HCS)技术结合活细胞实时成像技术研究谷氨酸诱导的小鼠神经瘤母细胞N2a凋亡的形态学变化特征。方法用HCS技术分析摸索不同浓度谷氨酸诱导的N2a细胞早期凋亡百分比的变化,同时结合活细胞实时... 详细信息

目的利用高内涵筛选(high-content screening,HCS)技术结合活细胞实时成像技术研究谷氨酸诱导的小鼠神经瘤母细胞N2a凋亡的形态学变化特征。方法用HCS技术分析摸索不同浓度谷氨酸诱导的N2a细胞早期凋亡百分比的变化,同时结合活细胞实时成像技术追踪谷氨酸诱导的N2a凋亡的形态学变化特征。结果当谷氨酸浓度为750μg/mL时,发生早期凋亡的N2a细胞比例达到峰值(42.07%)。对同一谷氨酸浓度,随着拍摄追踪时间的增加,凋亡细胞数目逐渐增多,胞核荧光强度的变异系数逐渐增大,胞核面积逐渐缩小,胞核逐渐出现碎片化。结论使用HCS结合活细胞实时成像技术能直观清晰地捕捉谷氨酸诱导N2a细胞凋亡的形态学变化特征,是一种体外追踪单一细胞凋亡形态学变化的可靠方法。该方法也可应用于药物对细胞凋亡的促进或抑制作用的形态学变化特征的研究。

关键词：谷氨酸神经瘤母细胞N2a 高内涵筛选变异系数

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疯牛病及其病原体——朊病毒

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上海医学 2002年第3期25卷 135-137页

作者：闻玉梅复旦大学医学院教育部卫生部医学分子病毒学重点实验室200032

通常被称为疯牛病的学名为牛海绵状脑病(bovine spongiform encephalopathy,BSE).属慢性进行性致死性神经系统疾病.目前对其病因尚有争论,但大多数学者倾向认为其病因为一种有传染性的蛋白颗粒.这一致病因子与已知的所有其他病原体(如... 详细信息

通常被称为疯牛病的学名为牛海绵状脑病(bovine spongiform encephalopathy,BSE).属慢性进行性致死性神经系统疾病.目前对其病因尚有争论,但大多数学者倾向认为其病因为一种有传染性的蛋白颗粒.这一致病因子与已知的所有其他病原体(如细菌、病毒、真菌或寄生虫)不同,主要特点为迄今未能从病原因子中发现核酸.因此国外统一称为Prion,而国内译名甚多(包括非寻常病毒、慢病毒、传染性大脑淀粉样变因子等).鉴于研究者原以为本病原体为一种特殊的病毒,但又不是真正的病毒,故本文暂译作朊病毒.此外,仍有部分学者认为该病的病因为代谢异常导致淀粉样斑块沉积在神经系统而致死.

关键词：疯牛病朊病毒致病性预防特性

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新型冠状病毒(SARS)的主要特性及其防治

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上海医学 2003年第5期26卷 297-298页

作者：闻玉梅复旦大学医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

2002年11月左右在我国广州省境内发现了一些病因不明，有严重呼吸系统症状的疾病。香港、越南等地也先后发现该疾病，并向世界多国传播。2003年该疾病由意大利医师沃比钠在越南发现后建议命名为SARS(se-vere acute respiratory syndrom... 详细信息

2002年11月左右在我国广州省境内发现了一些病因不明，有严重呼吸系统症状的疾病。香港、越南等地也先后发现该疾病，并向世界多国传播。2003年该疾病由意大利医师沃比钠在越南发现后建议命名为SARS(se-vere acute respiratory syndrome),并向世界卫生组织发出“警报”，而沃比钠医师却因感染SARS不治而亡。经过全世界十个国家(包括我国)的科学家们集体研究，至2003年4月16日世界卫生组织已公布SARS的病原体为一种新型冠状病毒。该病毒作为病原符合KocK氏三定律，即自多数患者中分离出该病毒；该病毒可在体外传代培养；该病毒接种猴后，猴现现典型SARS症状，并可自感染动物中分离出同样的病毒。虽然自2003年2～3月以来，已陆续分离出新型冠状病毒，并作全基因组测序，但最终由荷兰实验室进行的猴体实验结果确定这一病毒为SARS的病原体。在确定冠状病毒为SARS的病原体后，科学家们也不排除个别患者合并其他微生物的共同感染。因共同感染的微生物一般均未能显示在感染者的相应抗体效价升高4倍以上，因此不能作为该病的主要病原体。

关键词：新型冠状病毒主要特性防治 SARS 病原体非典型肺炎

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结核分枝杆菌利福平耐药菌株补偿性突变的系统性鉴定

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中华结核和呼吸杂志 2018年第3期41卷 207-212页

作者：左天宇柳清云甘明宇高谦复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

目的系统性鉴定MTB利福平耐药菌株rpoA、rpoB及rpoC基因补偿性突变的类型，评估不同rpoB基因耐药突变类型及MTB遗传背景对补偿性突变发生的影响。方法搜索并下载已发表的MTB全基因组测序数据，根据已知的利福平耐药突变从中鉴定出利福... 详细信息

目的系统性鉴定MTB利福平耐药菌株rpoA、rpoB及rpoC基因补偿性突变的类型，评估不同rpoB基因耐药突变类型及MTB遗传背景对补偿性突变发生的影响。方法搜索并下载已发表的MTB全基因组测序数据，根据已知的利福平耐药突变从中鉴定出利福平耐药的MTB株，构建系统发育树并利用平行进化的筛选标准鉴定出可能的补偿性突变；统计不同rpoB基因耐药突变类型和不同型的利福平耐药菌株携带补偿性突变的比例，利用卡方检验进行统计学分析。结果从欧洲核酸序列数据库共获得全球8 453株MTB全基因组测序数据（覆盖12个国家），其中1 749株为利福平耐药菌株。通过系统发育分析共鉴定出60种补偿性突变类型（rpoA基因上的突变6种，rpoB基因上的突变16种，rpoC基因上的突变38种）；携带rpoB S450L突变的利福平耐药菌株（41.7%，279/669）比其他利福平耐药突变积累补偿性突变的比例更高[8.0%（31/388），χ2＝378.5，P〈0.000 1]；2型的利福平耐药菌株（34.0%）比其他型的菌株积累补偿性突变的比例更高[1型：4.7%（2/43），3型：12.5%（4/32），4型：15.1%（78/517）；χ2＝238.5，P〈0.000 1]。结论本研究系统性鉴定了MTB利福平耐药相关的补偿性突变类型，并发现携带rpoB基因S450L突变或属于2型的利福平耐药菌株更容易积累补偿性突变。

关键词：分枝杆菌结核抗药性利福平突变

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RNA编辑酶ADAR1对EV71感染及变异的影响

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复旦学报（医学版） 2017年第3期44卷 253-260页

作者：刘晴晴常章梅白金金王艳龙健儿复旦大学基础医学院病原生物学系-卫生部、教育部医学分子病毒学重点实验室上海200032

目的研究RNA编辑酶腺苷酸脱氨酶(adenosine deaminase acting on RNA,ADAR1)对新型肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染及变异的影响。方法运用RNAi技术筛选ADAR1基因沉默稳定细胞株,通过MTT分析病毒感染后细胞活力变化、噬斑形成分... 详细信息

目的研究RNA编辑酶腺苷酸脱氨酶(adenosine deaminase acting on RNA,ADAR1)对新型肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染及变异的影响。方法运用RNAi技术筛选ADAR1基因沉默稳定细胞株,通过MTT分析病毒感染后细胞活力变化、噬斑形成分析病毒滴度及细胞对病毒的敏感性,以及Western blot测定病毒蛋白表达水平等,分析ADAR1对EV71感染的影响。由于ADAR1介导的RNA编辑可使基因形成A-G或T-C突变,为确定ADAR1影响EV71感染是否与其编辑EV71基因组导致病毒变异有关,对EV71流行区EV71的突变特征进行分析;并利用EV71感染ADAR1基因沉默细胞,通过对病毒基因组测序分析,研究ADAR1是否直接编辑EV71基因组。结果 ADAR1基因沉默后,与对照细胞相比,病毒感染细胞的存活率下降更快,并形成更多、更大的噬斑。病毒感染细胞中的VP1蛋白和细胞培养基上清中的病毒滴度均明显增加。EV71突变特征分析表明,虽然A-G和T-C之间的变异是病毒突变的主要类型,但EV71感染实验初步证明,ADAR1并不直接编辑EV71病毒基因组。结论 ADAR1可能具有抗EV71感染的作用,但ADAR1可能并不直接编辑EV71基因组。

关键词： EV71 ADAR1 RNA编辑病毒突变

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“御敌于国门之外”——病毒入侵抑制剂的研究进展

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复旦学报(医学版) 2017年第6期44卷 773-785页

作者：姜世勃苏珊夏帅邹鹏陆路复旦大学基础医学院病原生物系复旦大学医学分子病毒学教育部/卫计委重点实验室

25年前,我们在国际上开辟了研发人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)融合/入侵抑制剂和抗HIV多肽药物的全新领域。近6年来,我们在HIV、中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)、埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)和寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)入侵抑制剂的研发工作中取得了一系列重要研究成果。本文概要性地综述了相关高致病性病毒入侵抑制剂的研究进展。

关键词：高致病性病毒病毒入侵抑制剂病毒灭活剂

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