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N‐糖苷酶（PNGase）是真核生物中的常见酶，但在原核生物中极为罕见，目前仅报道在脑膜炎败血伊丽莎白金菌（EM）中存在。本文旨在检测 PNGase基因在EM临床分离株中的分布，为该菌的亚型分类及快速核酸分子检测提供依据，为研究PNGase在原核生物中的生物学功能奠定基础。于2010年7月～2012年12月收集浙江省3家三级甲等医院的65株EM临床分离株，提取细菌基因组 DNA ，利用16 S rRNA细菌通用引物、PNGase F和PNGase F‐Ⅱ特异性引物，进行组合聚合酶链反应（PCR）。阳性扩增产物测序后与美国国立生物技术信息中心（NCBI）数据库中已知EM序列比对确认。结果显示，PNGase阳性菌64株，总阳性率为98．5％；PNGase F和PNGase F‐Ⅱ共阳性菌39株，共阳性率为60．0％。 PNGase F阳性菌41株，阳性率为63．1％；PNGase F‐Ⅱ阳性菌62株，阳性率为95．4％，PNGase F‐Ⅱ阳性率高于 PNGase F （配对χ^2检验， P＜0．01），提示 PNGase可能对EM具有重要的生物学意义。结果还表明，本研究建立的组合PCR可应用于E M菌株中 PN G ase基因分型。

关键词：脑膜炎败血伊丽莎白金菌聚合酶链反应 N-糖苷酶F-Ⅱ Peptide:N-glycanase F-Ⅱ

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重组酪氨酰tRNA合成酶在化疗诱导血小板减少症中的治疗作用的研究

重组酪氨酰tRNA合成酶在化疗诱导血小板减少症中的治疗作用的研究

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第18次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：詹领郎永江张艳玲于敏莫炜复旦大学基础医学院复旦大学分子医学教育部重点实验室 200032

本研究通过建立化疗诱导的血小板减少症模型来验证重组人酪氨酰tRNA合成酶在肿瘤放化疗后的辅助治疗效果。BALB/c小鼠72只，雌雄各半，体重18 g±1.0 g，随机分成6组(n=12):阳性对照组、高剂量实验组、中剂量实验组、低剂量实验组... 详细信息

本研究通过建立化疗诱导的血小板减少症模型来验证重组人酪氨酰tRNA合成酶在肿瘤放化疗后的辅助治疗效果。BALB/c小鼠72只，雌雄各半，体重18 g±1.0 g，随机分成6组(n=12):阳性对照组、高剂量实验组、中剂量实验组、低剂量实验组、阴性对照组和假手术组。每组分别于每日上午腹腔注射TPO(5μg/kg)、rhTyrRS(100μg/kg)、rhTyrRS(10μg/kg)、rhTyrRS(1μg/kg)、PBS和生理盐水一次。七天后，通过给前五组小鼠皮下注射环磷酞胺(150 mg/kg)建立血小板减少症模型。分别于0,4,7,11,13,17天对小鼠尾静脉取血并检测血常规。研究表明rhTyrRS具有促血小板生成的功能，并能够治疗放化疗引起的血小板减少症，但rhTyrRS促进血小板生成的作用机制不同于TPO是通过促进巨核细胞增殖来提升血小板数目，其具体的作用机制和功能，还有待于进一步的研究。

关键词：血小板减少症重组酪氨酰化疗诱导转运核糖核酸合成酶疗效评价

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重组酪氨酰tRNA合成酶在化疗诱导血小板减少症中的治疗作用的研究

重组酪氨酰tRNA合成酶在化疗诱导血小板减少症中的治疗作用的研究

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第八届全国医学生物化学与分子生物学、第五届全国临床应用生物化学与分子生物学、2013华东六省一市生物化学与分子生物学联合学术研讨会

作者：詹领郎永江张艳玲于敏莫炜复旦大学基础医学院复旦大学分子医学教育部重点实验室 200032

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光敏疗法对慢性鼻-鼻窦炎患者耐药葡萄球菌体外杀伤效果的研究

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2016年第3期51卷 164-168页

作者：刘春红杨晨丁国强马英陈小英吴旸郑春泉赵可庆复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻咽喉科上海200031 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院检验科上海200031 复旦大学附属华山医院皮肤科上海200040 上海交通大学医学院附属瑞金医院皮肤科 200025 复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

目的观察光敏疗法（photodynamic therapy,PDT）对慢性鼻-鼻窦炎（CRS）患者鼻腔多重耐药金黄色葡萄球菌（金葡菌）和表皮葡萄球菌（表葡菌）的杀伤作用.方法选取保守治疗无效的CRS患者45例,术中使用拭子自中鼻道处取鼻腔分泌物,分离... 详细信息

目的观察光敏疗法（photodynamic therapy,PDT）对慢性鼻-鼻窦炎（CRS）患者鼻腔多重耐药金黄色葡萄球菌（金葡菌）和表皮葡萄球菌（表葡菌）的杀伤作用.方法选取保守治疗无效的CRS患者45例,术中使用拭子自中鼻道处取鼻腔分泌物,分离金葡菌和表葡菌并进行药敏鉴定,筛选能够形成生物膜的菌株.使用发光二极管（light emitting diode,LED）光动力治疗仪、5-氨基酮戊酸（5-aminolevulinic acid,ALA）光敏剂进行PDT参数测定及细菌杀伤实验.将获得的存活菌落形成单位（colony forming unit,CFU）进行以10为底的对数转换后,以Graph Pad Prism 5软件对数据进行统计分析.结果 45例患者中共收集金葡菌13株、表葡菌16株,皆为多重耐药菌,其中能够形成生物膜的菌株金葡菌4株,表葡菌5株.实验结果以lg（CFU）显示,游离金葡菌对照组为8.32±0.31,实验组为6.47±0.67,差异有统计学意义（=9.01,P＜0.01）;表葡菌对照组为8.34±0.20,实验组为6.97±0.59,差异有统计学意义（t=8.84,P＜0.01）.生物膜金葡菌对照组为8.68±0.05,实验组为6.90±0.96,差异有统计学意义（t=3.68,P＜0.05）;表葡菌对照组为8.67±0.05,实验组为7.29±0.61,差异有统计学意义（t=5.07,P＜0.01）.结论利用ALA作为光敏剂,LED作为光源的PDT能于体外有效杀伤CRS患者鼻腔来源的多重耐药金葡菌和表葡菌,为后续的安全性和体内实验及该治疗手段的临床应用奠定了基础.

关键词：光化学疗法鼻窦炎葡萄球菌,金黄色葡萄球菌,表皮抗药性,细菌

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我国学校结核病预防与控制的思考

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中国防痨杂志 2020年第3期42卷 195-199页

作者：高谦梅建复旦大学上海医学院基础医学院教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室 200032 澳门特别行政区卫生局结核病防治中心

学校结核病防控一直是我国结核病防治工作的重点,学校结核病控制涉及千家万户,政策性强,稍有不当,会造成很大的社会影响。作者对学校结核病防控的重点人群、暴发公共卫生事件的定义,以及学生结核病休复学问题提出了一些不同见解.希望引... 详细信息

学校结核病防控一直是我国结核病防治工作的重点,学校结核病控制涉及千家万户,政策性强,稍有不当,会造成很大的社会影响。作者对学校结核病防控的重点人群、暴发公共卫生事件的定义,以及学生结核病休复学问题提出了一些不同见解.希望引起业界同道的关注、思考和讨论.更好地为政府制定切实可行和有效的学校结核病控制策略提供科学依据。

关键词：结核院校综合预防传染病控制

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一种可通过皮下注射的新型直接凝血酶抑制剂

一种可通过皮下注射的新型直接凝血酶抑制剂

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第九届国际分子模拟与信息技术应用学术会议(ICMS&I2018)

作者：赵冰张艳玲黄一农于锦超李亚然王琪马亦信宋后燕于敏莫炜复旦大学基础医学院生物化学与分子生物学系代谢与分子医学教育部重点实验室代谢与分子医学教育部重点实验室

目的:重组双功能水蛭素(RGD-hirudin)是在野生型水蛭素分子的合理部位融入了Arg-Gly-Asp(RGD)序列融合在野生型水蛭素的合理部位,具有抗凝血酶、抗血小板聚集的双重功能.但是RGD-Hirudin是一种蛋白质,只能通过静脉注射给药,临床应用范... 详细信息

目的:重组双功能水蛭素(RGD-hirudin)是在野生型水蛭素分子的合理部位融入了Arg-Gly-Asp(RGD)序列融合在野生型水蛭素的合理部位,具有抗凝血酶、抗血小板聚集的双重功能.但是RGD-Hirudin是一种蛋白质,只能通过静脉注射给药,临床应用范围有限.以RGD-hirudin序列为基础,保留其C末端和N末端的功能氨基酸残基,利用分子模拟和同源建模技术设计具有抗凝活性的短肽(Direct Thrombin Inhibitor Peptide,DTIP),以利于皮下用药. 方法:利用同源建模和分子模拟,以RGD-hirudin的序列为基础,保留其功能氨基酸残基,借助分子模拟软件设计多肽类似物;利用毕赤酵母表达DTIP;经纯化后获得目的蛋白;利用毕赤酵母表达DTIP;经纯化后获得目的蛋白;凝血酶滴定法测定DTIP的抗凝活性;HPLC-MS测定DTIP的纯度、分子量,利用生物膜干涉技术测定凝血酶与DTIP的亲和力.在体外实验中,通过血栓弹力试验测定DTIP对血栓形成的抑制作用.大鼠皮下注射DTIP,比较给药前后部分凝血活酶时间(Activated Partial Thromboplastin Time,aPTT),凝血酶原时间(Prothrombin Time,PT),凝血酶时间(Thrombin Time,TT)和凝血时间(Clotting Time)的变化.分别构建尾静脉注射肾上腺素和胶原诱导的急性肺栓塞模型和FeCl3损伤诱导的肠系膜微动脉血栓模型,研究DTIP预防血栓形成的药效学作用. 结果:利用同源建模设计出一条具有抗凝活性的短肽DTIP;DTIP抗凝比活性为7000ATU/mg,与凝血酶的亲和力为0.9μMol/L.体内和体外试验结果均显示DTIP显著延长aPTT、PT和TT,体内试验中,用药后,CT也显著延长,但不会引起出血.在急性肺栓塞模型中,DTIP显著提高小鼠存活率;在肠系膜微动脉血栓模型中,DTIP抑制血栓的形成. 结论:DTIP具有抗凝活性,且可以通过皮下注射的方式预防血栓的形成,可作为一种潜在的皮下注射直接凝血酶抑制剂进行更加深入的研究.

关键词：直接凝血酶抑制剂药物设计分子模拟同源建模抗凝活性

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深圳市耐多药结核分枝杆菌耐药基因突变特征分析

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中国防痨杂志 2020年第6期42卷 583-589页

作者：洪创跃杨婷婷李金莉李霜君吴利凯杨争谭卫国深圳市慢性病防治中心实验室研究所和结核病防治科 518020 复旦大学上海医学院基础医学院教育部、卫生健康委员会、医科院医学分子病毒学重点实验室

目的利用全基因组序列分析方法研究深圳市耐多药结核分枝杆菌(MDR-MTB)的耐药基因突变类型特点,为耐药结核病的快速分子检测提供依据。方法对2013—2017年深圳市慢性病防治中心及各区慢性病防治院门诊收集的所有449株MDR-MTB临床分离株... 详细信息

目的利用全基因组序列分析方法研究深圳市耐多药结核分枝杆菌(MDR-MTB)的耐药基因突变类型特点,为耐药结核病的快速分子检测提供依据。方法对2013—2017年深圳市慢性病防治中心及各区慢性病防治院门诊收集的所有449株MDR-MTB临床分离株进行全基因组测序,经与结核分枝杆菌标准菌株(H37Rv)基因组模板序列比对后获得447株满足分析要求的全基因组测序菌株。每株菌株经单核苷酸多态性(SNP)鉴定后与H37Rv各基因型和亚型的特异性突变和对11种抗结核药品已知的耐药基因突变进行比对,获得各菌株独属的基因型或亚型和耐药基因突变,并分析不同药品耐药基因中的主要耐药突变类型不同基因型或亚型间的相关性。结果447株MDR-MTB中全基因组测序结果显示,432株(96.6%)发生基因突变,MTB对11种药品主要的耐药突变类型分别为katG-315-S/T[INH,81.7%(353/432)]、rpoB-450-S/L[RFP,59.7%(258/432)]、rpsL-43-K/R[Sm,66.0%(198/300)]、embB-306-M/V[EMB,35.5%(94/265)]、pncA启动子-11-T/C[PZA,8.9%(11/123)]、gyrA-90-A/V[Ofx,31.5%(39/124)]、rrs-1401-A/G[Am,48.1%(25/52)]、rrs-1401-A/G[Cm,100.0%(27/27)]、rrs-1401-A/G[Km,84.4%(27/32)]、inhA-15-C/T[Eto,84.2%(48/57)]、thyA-75-H/N[PAS,31.3%(10/32)],且发现存在2种及2种以上联合突变者有对INH、RFP、EMB和Sm耐药的菌株。深圳市MDR-MTB菌株的3个基因型为L1[0.4%(2/447)]、L2[84.6%(378/447)]和L4[15.0%(67/447)]型,其中L2型又分为3个亚型[L2.1型:1.9%(7/378)、L2.2型:37.0%(140/378)、L2.3型:61.1%(231/378)]。突变类型为katG-315-S/T、rpsL-43-K/R和embB-306-M/V在L2型菌株中的突变率[分别为79.6%(301/378)、50.5%(191/378)、23.0%(87/378)]明显高于L4型菌株[分别为61.2%(41/67)、10.4%(7/67)、10.4%(7/67)](χ~2值分别为10.874、37.021、5.396,P值分别为0.001、0.000、0.020),且PAS耐药突变类型folC43-I/T和thyA-75-H/N仅出现在L2型菌株中;其中katG-315-S/T在L2.2型菌株中突变频率[88.6%(124/140)]高于L2.3型[74.5%(172/231)](χ~2=10.764,P=0.000),而inhA-15-C/T(INH)、rpoB-450-S/L、rpsL-43-K/R和inhA-15-C/T(Eto)在L2.3型菌株中的突变频率[分别为8.2%(19/231)、61.9%(143/231)、59.3%(137/231)、15.6%(36/231)]明显高于L2.2型[分别为2.9%(4/140)、49.3%(69/140)、37.9%(53/140)、3.6%(5/140);χ~2值分别为4.319、5.668、16.053、12.797,P值分别为0.038、0.017、0.000、0.000)]。结论深圳市MDR-MTB菌株中11种药品耐药基因主要突变类型分别为katG-315-S/T、rpoB-450-S/L、rpsL-43-K/R、embB-306-M/V、pncA启动子-11-T/C、gyrA-90-A/V、rrs-1401-A/G、inhA-15-C/T、thyA-75-H/N;基因型为L1、L2和L4型,以L2.2型、L2.3型和L4型为主。

关键词：结核,抗多种药物性基因组,细菌高通量核苷酸测序基因型寡核苷酸序列分析深圳

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乙型肝炎病毒核心颗粒展示新型冠状病毒刺突蛋白B细胞线性表位及其免疫原性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第3期44卷 234-240页

作者：陈小美袁雯婕王世杰王建荣杭小锋万延民王勇翔复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 海军军医大学长征医院感染科上海200003 复旦大学附属华山医院感染科上海市传染病与生物安全应急响应重点实验室国家传染病医学中心上海200040

目的获得展示新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)刺突蛋白B细胞线性表位的乙型肝炎病毒衣壳样颗粒(capsid-like particles,CLPs)并评价其免疫原性。方法将SARS-CoV-2的4条B细胞线性表位(M1、S1-57、S14P5和S21P2)置换乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)第80位丙氨酸。在大肠埃希菌BL21 Star(DE3)中诱导表达这4种线性表位和HBc的重组融合蛋白(M1-HBc、S1-57-HBc、S14P5-HBc和S21P2-HBc)。SDS-PAGE、Western blot和非变性琼脂糖凝胶电泳(native agarose gel electrophoresis,NAGE)鉴定表达产物。蔗糖密度梯度超速离心纯化CLPs并经Western blot验证其抗原性。用纯化的CLPs免疫BALB/c小鼠,通过ELISA测定血清中的抗体滴度。结果重组融合蛋白M1-HBc和S1-57-HBc自组装成M1-CLP和S1-57-CLP,S1-57-CLP免疫小鼠后靶向S1-57多肽的抗体滴度高达1∶1000000。结论在原核系统中成功表达了展示SARS-CoV-2 M1或S1-57线性表位的乙型肝炎病毒CLPs,S1-57-CLP具有良好的免疫原性,为研制SARS-CoV-2新型诊断试剂和疫苗提供了新思路。

关键词：免疫原性新型冠状病毒 B细胞线性表位衣壳样颗粒抗体

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细菌鞭毛蛋白免疫调节作用及机制的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第5期41卷 395-399页

作者：肖振明赵超邬永琳徐俊复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫生健康委员会/医科院医学分子病毒学重点实验室 200032 复旦大学附属华山医院国家老年疾病临床医学研究中心上海200040 上海交通大学附属第六人民医院骨科 200233

鞭毛是位于某些细菌菌体表面细长呈波状弯曲的具有运动功能的蛋白质附属丝状物,不仅在细菌的运动与致病能力中起到重要作用,而且参与宿主多种免疫调节。鞭毛蛋白(flagellin)是形成鞭毛细丝主要部分的结构蛋白,可以被宿主细胞的Toll样受... 详细信息

鞭毛是位于某些细菌菌体表面细长呈波状弯曲的具有运动功能的蛋白质附属丝状物,不仅在细菌的运动与致病能力中起到重要作用,而且参与宿主多种免疫调节。鞭毛蛋白(flagellin)是形成鞭毛细丝主要部分的结构蛋白,可以被宿主细胞的Toll样受体5(TLR5)等受体识别,诱导机体免疫应答。目前,鞭毛蛋白因其免疫激活作用被广泛应用于新型免疫佐剂的研究,而其炎症抑制作用也在对抗免疫病理损伤方面具有良好前景。本文将对鞭毛蛋白的基本结构功能、宿主识别机制及其对宿主免疫系统起到的调节作用的研究进展作一概述。

关键词：细菌鞭毛蛋白 TLR5 免疫调节炎性抑制

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