检索结果-内蒙古大学图书馆

泛素特异性修饰酶2-69对大鼠系膜细胞内饰胶蛋白聚糖表达和泛素化降解的调节

中国循证儿科杂志 2015年第4期10卷 297-301页

作者：骆伟丽茅幸孙建勇赵仲华张志刚吴慧娟复旦大学基础医学院病理系上海200032 复旦大学附属中山医院上海市肾病与透析研究所上海200032 复旦大学基础医学院教育部分子医学重点实验室上海200032 中科院上海生命科学研究所、健康科学研究所上海200032

目的研究泛素特异性修饰酶2-69(USP2-69)对系膜细胞(MC)内饰胶蛋白聚糖(DCN)表达和泛素化的调节作用。方法 1培养MC细胞,采用Western blot法检测大鼠肾MC内USP2-69的表达;2采用免疫共沉淀、激光共聚焦和免疫荧光法,检测MC内USP2-69是否... 详细信息

目的研究泛素特异性修饰酶2-69(USP2-69)对系膜细胞(MC)内饰胶蛋白聚糖(DCN)表达和泛素化的调节作用。方法 1培养MC细胞,采用Western blot法检测大鼠肾MC内USP2-69的表达;2采用免疫共沉淀、激光共聚焦和免疫荧光法,检测MC内USP2-69是否与DCN结合,并观察两者在MC内的定位;3将pRK5-USP2-69-HA质粒瞬时转染MC后,用Western blot法检测HA、USP2-69和DCN的蛋白表达,用免疫共沉淀法检测DCN的泛素化水平;4采用USP2-69siRNA处理MC,用PCR检测USP2-69和DCN的mRNA表达,用time-course Western blot法检测DCN的半衰期,Western blot法检测DCN的下游效应分子(TGF-β1和ColⅣ)的蛋白表达。结果 1 USP2-69在MC、肝细胞(BRL-3A)和足细胞(GEC)内均有表达,其在MC内的基础蛋白表达水平显著高于BRL-3A和GEC[MCs:(0.27±0.05),BRL-3A:(0.035±0.009),GEC:(0.012±0.004),P<0.01]。2 MC总蛋白经DCN抗体免疫沉淀后,可检测到USP2-69的表达;经USP2-69抗体免疫沉淀后,可检测到DCN表达;且在MC胞质内,代表USP2-69蛋白的荧光与代表DCN蛋白的荧光存在共定位。3转染pRK5-USP2-69-HA质粒的MC内可检测到代表外源性USP2-69表达的HA蛋白,USP2-69和DCN蛋白表达的升高,同时DCN的泛素化水平明显降低。4经USP2-69 RNA干扰的MC内DCN的mRNA水平没有明显改变,但其半衰期明显缩短(3 h),且TGF-β1和ColⅣ的蛋白表达均明显升高。结论大鼠肾MC内USP2-69可与DCN相结合,及两者在胞质内共定位,USP2-69能够降低MC内DCN的泛素化水平及提高DCN蛋白总量并促进其功能。

关键词：饰胶蛋白聚糖泛素特异性修饰酶2-69 系膜细胞

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新型冠状病毒SARS-CoV-2感染治疗中的“老药新用”

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中国临床药理学与治疗学 2020年第2期25卷 126-134页

作者：蓝巧帅夏帅周洁王茜陆路复旦大学基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室

近期,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引发的肺炎在中国武汉暴发,给人类的生命健康带来了威胁,并给中国人民的生活带来了极大影响。但是目前临床上尚无疗效明确的针对SARS-CoV-2的特效药物,一些在体外细胞水平上初步证明对该病毒有一定抑制活... 详细信息

近期,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引发的肺炎在中国武汉暴发,给人类的生命健康带来了威胁,并给中国人民的生活带来了极大影响。但是目前临床上尚无疗效明确的针对SARS-CoV-2的特效药物,一些在体外细胞水平上初步证明对该病毒有一定抑制活性或之前文献报道的对冠状病毒感染有抑制效果的临床药物,目前正在开展SARS-CoV-2感染患者治疗的临床试验研究或已用于试用性治疗。本综述主要从老药新用的角度来简要介绍这些药物的作用机制、体外抗病毒效果、副作用等特征及研究现状,希望能为SARS-CoV-2感染患者的治疗提供思路。

关键词：新型冠状病毒 SARS-CoV-2 抗病毒药物临床药物老药新用

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弓形虫棒状体蛋白ROP16与Lamin B1相互作用及功能研究

弓形虫棒状体蛋白ROP16与Lamin B1相互作用及功能研究

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中华医学会第十五次全国医学遗传学学术会议、中国医师协会医学遗传医师分会第一届全国学术会议暨2016年浙江省医学遗传学年会

作者：高德俊范巍巍单秀梅常爽姜楠张进马端毛佐华复旦大学基础医学院病原生物学系复旦大学代谢分子医学教育部重点实验室

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弓形虫棒状体蛋白ROP16与Lamin B1相互作用及功能研究

弓形虫棒状体蛋白ROP16与Lamin B1相互作用及功能研究

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中华医学会第十五次全国医学遗传学学术会议暨中国医师协会医学遗传医师分会第一届全国学术会议暨2016年浙江省医学遗传学年会

作者：高德俊范巍巍单秀梅常爽姜楠张进马端毛佐华复旦大学基础医学院病原生物学系复旦大学代谢分子医学教育部重点实验室

目的弓形虫脑病是导致免疫功能缺陷病人重要死亡原因之一,弓形虫棒状体蛋白16(ROP16)可快速侵入宿主(人)细胞核内,本课题组前期鉴定出了与ROP16相互作用的人体核纤层蛋白Lami n B1。方法利用蛋白纯化技术纯化蛋白,进行pull-down实验,Lam... 详细信息

目的弓形虫脑病是导致免疫功能缺陷病人重要死亡原因之一,弓形虫棒状体蛋白16(ROP16)可快速侵入宿主(人)细胞核内,本课题组前期鉴定出了与ROP16相互作用的人体核纤层蛋白Lami n B1。方法利用蛋白纯化技术纯化蛋白,进行pull-down实验,Lamin B1/HA截短体与ROP16/Flag共转染293T细胞进行免疫沉淀,Phos-tag技术检测磷酸化。划痕实验检测细胞的迁移能力,流式细胞术和CCK-8实验检测细胞凋亡增殖情况。结果实验证实ROP16与lamin B1结合,RROP16能够磷酸化核纤层蛋白Lamin B1且不影响LM NB1的表达量。Lamin B1Head部位T19被磷酸化。ROP16会影响细胞的迁移能力,ROP16促进SH-SY5Y细胞的凋亡,对增殖而无明显影响。ROP16与lamin B1结合后使神经元细胞核仁增多、核膜出现空泡、大量微管成簇排列。ROP16对诱导前SH-SY5Y细胞形态未见显著影响,纺锤体出现多极化现象。结论通过研究,我们证明ROP16可以与Lamin B1结合并促进SH-SY5Y细胞Lamin B1的磷酸化(T19),并且可以促进SH-SY5Y细胞的迁移。

关键词： ROP16 棒状体蛋白弓形虫 Lamin B1 功能研究

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LC-MS/MS测定兔血浆中B07浓度

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中国药学杂志 2017年第12期52卷 1056-1060页

作者：孙涛尹林田芳陆路董铭心李卫华张丽军上海市公共卫生临床中心上海201508 上海计划生育研究所上海200032 复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032 军事医学科学院生物工程研究所北京100071

目的建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定兔血浆中B07的浓度。方法血浆样品经碱化沉淀蛋白后,用甲基叔丁基醚液-液萃取,以乙腈(含0.2%乙酸)-40 mmol·L^(-1)乙酸铵(含0.2%乙酸)水溶液(80∶20)为流动相,采用Waters Symmetry C18(4.6... 详细信息

目的建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定兔血浆中B07的浓度。方法血浆样品经碱化沉淀蛋白后,用甲基叔丁基醚液-液萃取,以乙腈(含0.2%乙酸)-40 mmol·L^(-1)乙酸铵(含0.2%乙酸)水溶液(80∶20)为流动相,采用Waters Symmetry C18(4.6 mm×150 mm,5μm)柱分离;采用电喷雾电离源,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子对B07为529.3→335.4,内标卡马西平为237.1→194.1。结果测定血浆中B07线性范围为0.31~310 ng·mL^(-1),r>0.99。日内和日间精密度小于15%,提取回收率均大于75%。结论该法选择性强、灵敏度高、重现性好,能够快速、准确测定兔血浆中B07浓度。

关键词： B07 液相色谱-串联质谱法液-液萃取血药浓度

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抗体治疗的重生

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微生物与感染 2018年第4期13卷 193-197页

作者：应天雷闻玉梅复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

近年来,治疗性单克隆抗体已成为基础和临床医学研究者及企业关注的热点。目前,针对免疫检查点的治疗性抗体用于肿瘤治疗已显示出较好疗效。在微生物耐药性日益增多、全球突发传染病威胁依然存在及持续性微生物感染难以治愈的当下,抗微... 详细信息

近年来,治疗性单克隆抗体已成为基础和临床医学研究者及企业关注的热点。目前,针对免疫检查点的治疗性抗体用于肿瘤治疗已显示出较好疗效。在微生物耐药性日益增多、全球突发传染病威胁依然存在及持续性微生物感染难以治愈的当下,抗微生物领域中的抗体治疗正在积极研发中。本文综述了抗体治疗在抗微生物感染领域中的进展,并展望了其应用前景。

关键词：单克隆抗体微生物感染突发传染病

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埃博拉病毒及其致病机制

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微生物与感染 2014年第4期9卷 197-201页

作者：瞿涤袁正宏闻玉梅复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

自2014年2～3月，西非埃博拉病毒感染的暴发流行已呈播散趋势，受到世界卫生组织的高度重视。我国也提高了防止埃博拉病毒进入国内的警示，并采取了相应措施。现将有关埃博拉病毒的生物学特性、致病机制及相关流行病学与防治策略作简要... 详细信息

自2014年2～3月，西非埃博拉病毒感染的暴发流行已呈播散趋势，受到世界卫生组织的高度重视。我国也提高了防止埃博拉病毒进入国内的警示，并采取了相应措施。现将有关埃博拉病毒的生物学特性、致病机制及相关流行病学与防治策略作简要综述，供参考。

关键词：埃博拉病毒致病机制流行病学

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精准医学与微生物感染——实施精准感染病学的探讨

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微生物与感染 2016年第5期11卷 258-261页

作者：闻玉梅复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

2015年3月,习近平主席亲自指示科技部召开了国家首次精准医学战略专家座谈会。鉴于我国在病原微生物学、免疫学、疫苗学及感染病学中的成就,本文从病因和机体免疫应答方面分析了我国开展精准感染病学的优势并提出主要切入点。通过对免... 详细信息

2015年3月,习近平主席亲自指示科技部召开了国家首次精准医学战略专家座谈会。鉴于我国在病原微生物学、免疫学、疫苗学及感染病学中的成就,本文从病因和机体免疫应答方面分析了我国开展精准感染病学的优势并提出主要切入点。通过对免疫基因组学的研究,结合环境因素及生活习惯的综合研究,将对控制感染性疾病作出创新性贡献,这具有全球性的重要价值。

关键词：精准医学微生物感染精准感染病学基因组学大数据

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S-炔丙基半胱氨酸延缓动脉粥样硬化进展并上调内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶磷酸化(英文)

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生理学报 2023年第3期75卷 317-327页

作者：李志明李娉朱磊张育文朱依纯王鹤余波王铭洁小分子活性物质上海高校重点实验室上海高水平地方高校创新团队复旦大学基础医学院生理与病理生理学系上海200032 复旦大学附属华山医院血管外科上海200040 计算神经科学与类脑智能教育部重点实验室复旦大学类脑智能科学与技术研究院上海200433

本研究旨在探究炔丙基半胱氨酸(S-propargyl-cysteine,SPRC)对延缓小鼠动脉粥样硬化进展的保护作用。用ApoE-/-小鼠通过右侧颈动脉串联双狭窄(tandem stenosis,TS)联合西方饮食构建动脉粥样硬化易损斑块小鼠模型,测定血管损伤面积、血... 详细信息

本研究旨在探究炔丙基半胱氨酸(S-propargyl-cysteine,SPRC)对延缓小鼠动脉粥样硬化进展的保护作用。用ApoE-/-小鼠通过右侧颈动脉串联双狭窄(tandem stenosis,TS)联合西方饮食构建动脉粥样硬化易损斑块小鼠模型,测定血管损伤面积、血脂和炎症水平来评估SPRC的抗动脉粥样硬化作用,组织病理学分析以评估斑块稳定性。为探究SPRC的保护机制,体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)并用氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)刺激,用细胞活力测定试剂盒测定细胞活力,用Western blot和RT-qPCR分别检测磷酸化内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白和mRNA表达。结果表明,每天80 mg/kg SPRC组小鼠主动脉弓和颈动脉病变面积显著减少,血浆胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平显著降低,斑块中的胶原水平增加,且斑块中基质金属蛋白9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)含量明显降低。体内实验结果表明SPRC发挥稳定斑块作用。离体实验表明100μmol/L SPRC提高ox-LDL处理造成的细胞活力下降,提高eNOS磷酸化蛋白的表达。以上结果提示SPRC延缓了动脉粥样硬化的进展,其作用机制可能与内皮细胞中eNOS磷酸化的增加有关。

关键词：炔丙基半胱氨酸动脉粥样硬化不稳定斑块人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶

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一种非洲猪瘟病毒假病毒细胞感染模型的建立及应用

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微生物与感染 2021年第5期16卷 304-312页

作者：唐嘉怡蔡艳星王欣玲姜世勃陆路复旦大学基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

目前国内外大多数针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的研究须在生物安全三级实验室(biosafety level 3 laboratories,BSL-3 labs)中进行,因此针对该病毒的感染过程、中和抗体逃逸机制、药物研发等研究受到了一定限制。... 详细信息

目前国内外大多数针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的研究须在生物安全三级实验室(biosafety level 3 laboratories,BSL-3 labs)中进行,因此针对该病毒的感染过程、中和抗体逃逸机制、药物研发等研究受到了一定限制。鉴于此,本研究选择ASFV包膜蛋白中与其进入细胞紧密相关的蛋白p12、CD2v、p30、p54和pE248R,构建表达这5种包膜蛋白的真核表达质粒,利用水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)假病毒包装体系,制备多种ASFV假病毒。以荧光素酶报告基因实验(luciferase assay)检测假病毒感染水平;选择1个包膜蛋白为代表,使用蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测其在假病毒中的表达情况;采用芫花素检测其对所建立的ASFV假病毒(p30-pE248R-ASFV-PsV)的抑制活性。结果显示,VSV包装体系以及p30、pE248R包膜蛋白质粒的组合制备方法所包装出的假病毒具有较优的感染活性,适合用于建立细胞感染模型。ASFV的包膜蛋白pE248R被有效整合到VSV-ΔG rLuc颗粒中,并包装出ASFV假病毒。芫花素可浓度依赖性地抑制ASFV假病毒感染Vero细胞,其半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC 50)为4.05±0.88μmol/L。本研究通过建立基于ASFV假病毒的细胞感染模型,筛选获得了1种可感染已报道的一些ASFV敏感细胞的假病毒。该假病毒无复制性,可在生物安全级别较低的实验室中进行操作,并且带有海肾荧光素酶报告基因,有望用于ASFV入侵抑制剂的高通量筛选及中和活性的初步评价,为研发抗ASFV药物提供了一个安全、方便的研究模型。

关键词：非洲猪瘟病毒假病毒细胞感染模型病毒入侵抑制剂

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