检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物与感染 2021年第5期16卷 304-312页

作者：唐嘉怡蔡艳星王欣玲姜世勃陆路复旦大学基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

目前国内外大多数针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的研究须在生物安全三级实验室(biosafety level 3 laboratories,BSL-3 labs)中进行,因此针对该病毒的感染过程、中和抗体逃逸机制、药物研发等研究受到了一定限制。... 详细信息

目前国内外大多数针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的研究须在生物安全三级实验室(biosafety level 3 laboratories,BSL-3 labs)中进行,因此针对该病毒的感染过程、中和抗体逃逸机制、药物研发等研究受到了一定限制。鉴于此,本研究选择ASFV包膜蛋白中与其进入细胞紧密相关的蛋白p12、CD2v、p30、p54和pE248R,构建表达这5种包膜蛋白的真核表达质粒,利用水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)假病毒包装体系,制备多种ASFV假病毒。以荧光素酶报告基因实验(luciferase assay)检测假病毒感染水平;选择1个包膜蛋白为代表,使用蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测其在假病毒中的表达情况;采用芫花素检测其对所建立的ASFV假病毒(p30-pE248R-ASFV-PsV)的抑制活性。结果显示,VSV包装体系以及p30、pE248R包膜蛋白质粒的组合制备方法所包装出的假病毒具有较优的感染活性,适合用于建立细胞感染模型。ASFV的包膜蛋白pE248R被有效整合到VSV-ΔG rLuc颗粒中,并包装出ASFV假病毒。芫花素可浓度依赖性地抑制ASFV假病毒感染Vero细胞,其半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC 50)为4.05±0.88μmol/L。本研究通过建立基于ASFV假病毒的细胞感染模型,筛选获得了1种可感染已报道的一些ASFV敏感细胞的假病毒。该假病毒无复制性,可在生物安全级别较低的实验室中进行操作,并且带有海肾荧光素酶报告基因,有望用于ASFV入侵抑制剂的高通量筛选及中和活性的初步评价,为研发抗ASFV药物提供了一个安全、方便的研究模型。

关键词：非洲猪瘟病毒假病毒细胞感染模型病毒入侵抑制剂

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多肽类中东呼吸系统综合征冠状病毒进入抑制剂的研究进展

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药学学报 2015年第12期50卷 1513-1519页

作者：夏帅王茜刘叔文陆路姜世勃复旦大学基础医学院上海市公共卫生临床中心医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032 南方医科大学药学院广东广州510515 美国纽约血液中心Lindsley F.Kimball研究所纽约州纽约市10065

2012年,中东地区出现一种与严重急性呼吸综合征(SARS)病毒类似的新型人冠状病毒,即中东呼吸系统综合征(MERS)冠状病毒(MERS-Co V)。MERS患者的高死亡率引起了全球关注。MERS-Co V在侵染靶细胞时,其S蛋白的S1亚单位负责与受体DPP4结合,... 详细信息

2012年,中东地区出现一种与严重急性呼吸综合征(SARS)病毒类似的新型人冠状病毒,即中东呼吸系统综合征(MERS)冠状病毒(MERS-Co V)。MERS患者的高死亡率引起了全球关注。MERS-Co V在侵染靶细胞时,其S蛋白的S1亚单位负责与受体DPP4结合,而S2亚单位通过HR1和HR2区域相互作用形成稳定的六螺旋结构从而介导病毒与靶细胞间的膜融合及病毒基因进入靶细胞内进行复制。因此,阻断病毒S蛋白S2亚单位的六螺旋的形成,可有效抑制MERS-Co V感染靶细胞。本文重点介绍了靶向于MERS-Co V S2亚单位的多肽类病毒进入抑制剂的研究进展。

关键词：多肽进入抑制剂中东呼吸系统综合征冠状病毒六螺旋

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模式生物斑马鱼在衰老生物学中的研究初探

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广东医学院学报 2016年第5期34卷 443-446页

作者：姚玉霄孙少阳费飞王旭复旦大学代谢与分子医学教育部重点实验室上海200032 复旦大学生物化学与分子生物学系基础医学院上海200032

目的对模式生物斑马鱼的衰老及相关表型进行初步研究。方法运用SA-β-Gal染色、转基因荧光示踪和定量基因转录分析对衰老相关的细胞学现象和基因表达水平进行观测。结果 (1)下丘脑和心脏是年老斑马鱼体内出现衰老细胞较多的器官;(2)衰... 详细信息

目的对模式生物斑马鱼的衰老及相关表型进行初步研究。方法运用SA-β-Gal染色、转基因荧光示踪和定量基因转录分析对衰老相关的细胞学现象和基因表达水平进行观测。结果 (1)下丘脑和心脏是年老斑马鱼体内出现衰老细胞较多的器官;(2)衰老相关的基因表达变化具有器官间和性别间的显著差别。结论调控个体衰老的分子细胞运行机制在进化中具有一定的保守性,斑马鱼可作为研究脊椎动物衰老的新工具。

关键词：斑马鱼衰老心脏下丘脑代谢

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维生素与免疫系统健康

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四川大学学报（医学版） 2023年第1期54卷 7-13页

作者：孔维溧芦鑫荣侯琳琳孙秀发孙桂芹陈力复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫健委/医科院重点实验室上海200032 青岛农业大学动物医学院青岛266109 华中科技大学同济医学院营养与食品卫生系武汉430030 浙江中医药大学医学技术与信息工程学院杭州310053

维持免疫系统健康是有效的抗感染手段之一。实践证明,除疫苗接种、药物治疗及非药物干预之外,膳食营养及心理健康也是维持免疫系统健康,抗击新发和突发感染的关键因素。维生素作为主要膳食营养素,是免疫应答的调节因子,对人体免疫力的... 详细信息

维持免疫系统健康是有效的抗感染手段之一。实践证明,除疫苗接种、药物治疗及非药物干预之外,膳食营养及心理健康也是维持免疫系统健康,抗击新发和突发感染的关键因素。维生素作为主要膳食营养素,是免疫应答的调节因子,对人体免疫力的影响至关重要。缺乏维生素会引起体内炎症水平增加,免疫力降低等情况,往往最先发生在口腔组织。补充适当的维生素可以帮助机体改善免疫功能,增强口腔免疫,降低病原体感染对机体的影响,这是一种可行性和有效性皆具的通用抗感染方案。本文重点综述了维生素A、B、C、D和E的免疫调节作用,为突破传统单因子单通路的研究局限,利用组学研究进行全方位的维生素免疫调控及抗感染的基础和应用研究提供方向。

关键词：维生素免疫力感染

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新型直接凝血酶抑制剂短肽(DTIP)重要氨基酸研究

新型直接凝血酶抑制剂短肽(DTIP)重要氨基酸研究

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中国生物化学与分子生物学会第十二届全国会员代表大会暨2018年全国学术会议

作者：李亚然于敏莫炜复旦大学代谢与分子医学教育部重点实验室复旦大学基础医学院生物化学与分子生物学系

目的研究影响DTIP稳定性及与凝血酶相互作用的氨基酸并进行结构改造。方法通过discovery studio同源建模构建DTIP三维结构模型,与凝血酶分子对接,通过丙氨酸扫描筛选突变能不稳定的氨基酸;其次通过单氨基酸突变,获得DTIP突变体;用凝血... 详细信息

目的研究影响DTIP稳定性及与凝血酶相互作用的氨基酸并进行结构改造。方法通过discovery studio同源建模构建DTIP三维结构模型,与凝血酶分子对接,通过丙氨酸扫描筛选突变能不稳定的氨基酸;其次通过单氨基酸突变,获得DTIP突变体;用凝血酶滴定法测定各突变体抗凝血酶活性,利用小鼠模型测定部分凝血酶活酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间,剪尾实验测定出血时间,通过生物膜层干涉实验测定各突变蛋白与凝血酶相互作用的亲和力,血栓弹力实验检测其对全血的影响。结果模拟结果显示丙氨酸扫描突变能不稳定氨基酸或者形成分子内二硫键或者与凝血酶的氨基酸间存在氢键,突变为丙氨酸后二硫键或氢键不能形成。凝血酶滴定结果显示突变为丙氨酸后活性都有较明显下降。初步的生物膜层干涉实验结果显示DTIP特定的氨基酸残基突变为丙氨酸后其KD值没有显著性差异。

关键词： DTIP 丙氨酸扫描凝血酶血栓

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耻垢分枝杆菌MSMEG_4259的基因组维护功能研究

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微生物与感染 2022年第5期17卷 273-281页

作者：邓茗芝许原原吕亮东复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

MSMEG_4259基因及其同源基因广泛存在于分枝杆菌属中。蛋白序列分析显示,MSMEG_4259包含DEDDh核酸外切酶结构域以及一个类似UvrC的核酸内切酶结构域,提示其可能参与DNA修复。为了探究MSMEG_4259的生理功能,本研究利用同源重组方法在耻... 详细信息

MSMEG_4259基因及其同源基因广泛存在于分枝杆菌属中。蛋白序列分析显示,MSMEG_4259包含DEDDh核酸外切酶结构域以及一个类似UvrC的核酸内切酶结构域,提示其可能参与DNA修复。为了探究MSMEG_4259的生理功能,本研究利用同源重组方法在耻垢分枝杆菌(Mycolicibacterium smegmatis)构建了MSMEG_4259基因敲除(ΔMs4259)菌株,并采用波动试验测定菌株在对数生长期以及H2O2处理后的利福平耐药突变频率。结果显示,ΔMs4259菌株的利福平耐药自发突变频率较野生型菌株升高1.9倍(P<0.05),该表型能够通过表达MSMEG_4259回补。测定耐药突变菌株rpoB基因的耐药决定区域序列,发现ΔMs4259菌株的A:T>C:G突变概率较野生型菌株上升约10倍,有研究证明该突变谱是DNA氧化损伤的常见突变。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)结果显示,野生型菌株的MSMEG_4259表达在H2O2处理后上调约7倍,提示该基因在转录水平参与了氧化压力应答。野生型菌株与ΔMs4259菌株在氧氟沙星、叔丁基过氧化氢和紫外线处理下的存活率无显著差异,提示MSMEG_4259不参与耻垢分枝杆菌对上述DNA损伤剂的耐受。本研究初步揭示了MSMEG_4259参与耻垢分枝杆菌基因组维护的生理功能、突变谱及转录调控等特性,为进一步研究其同源基因在结核分枝杆菌致病和耐药中的作用机制奠定了基础。

关键词： MSMEG_4259 耻垢分枝杆菌 DNA损伤 DNA修复

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蛋白质赖氨酸乳酸化修饰及其在脂肪组织免疫代谢中的作用

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生命的化学 2020年第12期40卷 2134-2141页

作者：李白玉郭亮上海体育学院运动科学学院上海200438 复旦大学基础医学院代谢分子医学教育部重点实验室基础医学院生物化学与分子生物学系上海200032

乳酸作为细胞糖酵解的终产物,在细胞代谢过程中发挥重要作用。作为信号分子,乳酸在癌症、神经发育、脂肪细胞代谢中也具有重要功能。上述这些研究主要集中在乳酸的代谢和信号传递功能。最新研究揭示,乳酸可以作为蛋白质翻译后修饰的底物... 详细信息

乳酸作为细胞糖酵解的终产物,在细胞代谢过程中发挥重要作用。作为信号分子,乳酸在癌症、神经发育、脂肪细胞代谢中也具有重要功能。上述这些研究主要集中在乳酸的代谢和信号传递功能。最新研究揭示,乳酸可以作为蛋白质翻译后修饰的底物,促进组蛋白赖氨酸乳酸化的发生,调控M1型巨噬细胞向M2型转变。巨噬细胞作为肥胖过程中脂肪组织内变化显著的免疫细胞,其是否受到乳酸化修饰的调节有待于进一步研究。本文对已有的乳酸调控细胞代谢、细胞信号传递以及免疫细胞功能的报道进行了总结,并对乳酸化修饰在肥胖诱导的脂肪组织炎症中可能发挥的作用进行了展望。

关键词：乳酸组蛋白乳酸化脂肪组织巨噬细胞代谢性炎症

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广谱抗冠状病毒疫苗及抗冠状病毒多肽的研究进展

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微生物与感染 2021年第4期16卷 270-279页

作者：曹妙陆路姜世勃复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引起的2019冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)暴发,给人类公共卫生安全和全球经济发展造成了严重威胁。疫苗和药物是防治疫情的重要手段,但目前研发的针对冠状病毒的疫苗和药物大多以SARS-CoV-2为靶点,该病毒若发生重大突变或出现新的高致病性冠状病毒,目前研发的有效疫苗或药物可能会无效,而且疫苗和新药的研发往往比较滞后,难以在疫情发生早期投入使用。因此,亟须研发高效、安全、广谱的冠状病毒疫苗和药物,以应对未来可能出现的冠状病毒疫情。本文对广谱冠状病毒疫苗和抗冠状病毒多肽的研究进展进行综述,期望为研发此类疫苗和药物提供参考。

关键词：广谱冠状病毒 2019冠状病毒病疫苗药物

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小G蛋白RhoA活性检测方法的优化

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生物学杂志 2016年第4期33卷 103-106页

作者：曾婷崔照盟蒋维李增霞党永军余龙复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200032 复旦大学基础医学院代谢与分子医学教育部重点实验室上海200000

Rho蛋白家族的小G蛋白是调节细胞迁移的关键蛋白,具有GTP酶活性。RhoA是该蛋白家族的重要成员,通过其催化活性来调节肌动蛋白的聚集和收缩,在肿瘤迁移和侵袭中发挥重要作用。所以,RhoA的GTP酶活性检测对于研究细胞迁移的机制,以及靶向R... 详细信息

Rho蛋白家族的小G蛋白是调节细胞迁移的关键蛋白,具有GTP酶活性。RhoA是该蛋白家族的重要成员,通过其催化活性来调节肌动蛋白的聚集和收缩,在肿瘤迁移和侵袭中发挥重要作用。所以,RhoA的GTP酶活性检测对于研究细胞迁移的机制,以及靶向RhoA的治疗策略具有重要意义。RhoA下游效应子Rhotekin基因(RhoA effector)具有RhoA结合结构域(RhoA binding domain,RBD),该RBD蛋白结构域能与活化状态的GTP-RhoA特异结合。通常用外源表达的RBD蛋白pulldown结合GTP-RhoA的蛋白量,作为RhoA活性检测方法。但是,哺乳动物来源的RBD蛋白在原核细胞中的表达量很低,使得pulldown结合GTP-RhoA蛋白量的效率低下,从而不利于RhoA的活性检测。因此,目的在于提高RBD蛋白在大肠杆菌中的产量,提高RBD蛋白pulldown结合GTP-RhoA的效率,从而优化RhoA活性检测方法。通过密码子优化技术对RBD基因进行改良,提高其蛋白在大肠杆菌中的表达量,优化RBD蛋白pulldown实验检测GTP-RhoA的效率。优化后的RBD与GST标签蛋白融合后在大肠杆菌中高效表达,并且能够特异性地与GTP-RhoA结合。成功地构建了具有较高表达水平的GST-RBD载体,并优化了传统的GST-RBD pulldown检测体系,为进一步深入研究RhoA在细胞迁移中的功能提供了一种有效的技术手段。

关键词： RhoA 密码子优化 GST-RBD pulldown

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分枝杆菌RpsI序列差异对核糖体结构与功能的影响

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微生物与感染 2020年第5期15卷 293-301页

作者：苏梦吕亮东复旦大学上海医学院基础医学院教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

核糖体结构存在动态调控,其变化与细菌发育、环境适应等过程密切相关。使用NCBI BLAST比对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)核糖体蛋白RpsI、RpmI和RpmJ与耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)相应蛋白的氨基酸序列,发现Rps... 详细信息

核糖体结构存在动态调控,其变化与细菌发育、环境适应等过程密切相关。使用NCBI BLAST比对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)核糖体蛋白RpsI、RpmI和RpmJ与耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)相应蛋白的氨基酸序列,发现RpsI N端氨基酸序列存在较大差异。为了探究该N端序列差异对核糖体结构与功能的影响,将表达有结核分枝杆菌rpsI基因(rpsI_Rv)的质粒整合至耻垢分枝杆菌基因组中,并利用同源重组的方法敲除耻垢分枝杆菌rpsI基因,以此构建重组菌株。聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)结果表明该重组菌株构建成功。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)于16℃可诱导表达RpsI_Rv。用纯化的RpsI_Rv制备特异性多克隆抗体,其效价为1600000。反转录PCR和蛋白质印迹法(Western blot)显示rpsI_Rv在重组菌株中成功表达。测定重组菌株与空载对照菌株在不同温度下的生长曲线,该重组菌株在不同温度下的生长速率未发生改变。采用通用液体倍比稀释法测定作用于核糖体不同位点的5种抗生素最小抑菌浓度(MIC 90),重组菌株对阿米卡星(作用于核糖体小亚基A位点的抗生素)的敏感性升高,提示分枝杆菌RpsI序列差异导致核糖体小亚基A位点附近的结构发生改变,这为分枝杆菌核糖体结构与功能的机制研究提供了数据。

关键词：结核分枝杆菌核糖体核糖体蛋白RpsI 结构与功能

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