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乙型肝炎病毒核心颗粒展示新型冠状病毒刺突蛋白B细胞线性表位及其免疫原性分析

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第3期44卷 234-240页

作者：陈小美袁雯婕王世杰王建荣杭小锋万延民王勇翔复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 海军军医大学长征医院感染科上海200003 复旦大学附属华山医院感染科上海市传染病与生物安全应急响应重点实验室国家传染病医学中心上海200040

目的获得展示新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)刺突蛋白B细胞线性表位的乙型肝炎病毒衣壳样颗粒(capsid-like particles,CLPs)并评价其免疫原性。方法将SARS-CoV-2的4条B细胞线性表位(M1、S1-57、S14P5和S21P2)置换乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)第80位丙氨酸。在大肠埃希菌BL21 Star(DE3)中诱导表达这4种线性表位和HBc的重组融合蛋白(M1-HBc、S1-57-HBc、S14P5-HBc和S21P2-HBc)。SDS-PAGE、Western blot和非变性琼脂糖凝胶电泳(native agarose gel electrophoresis,NAGE)鉴定表达产物。蔗糖密度梯度超速离心纯化CLPs并经Western blot验证其抗原性。用纯化的CLPs免疫BALB/c小鼠,通过ELISA测定血清中的抗体滴度。结果重组融合蛋白M1-HBc和S1-57-HBc自组装成M1-CLP和S1-57-CLP,S1-57-CLP免疫小鼠后靶向S1-57多肽的抗体滴度高达1∶1000000。结论在原核系统中成功表达了展示SARS-CoV-2 M1或S1-57线性表位的乙型肝炎病毒CLPs,S1-57-CLP具有良好的免疫原性,为研制SARS-CoV-2新型诊断试剂和疫苗提供了新思路。

关键词：免疫原性新型冠状病毒 B细胞线性表位衣壳样颗粒抗体

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细菌鞭毛蛋白免疫调节作用及机制的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第5期41卷 395-399页

作者：肖振明赵超邬永琳徐俊复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫生健康委员会/医科院医学分子病毒学重点实验室 200032 复旦大学附属华山医院国家老年疾病临床医学研究中心上海200040 上海交通大学附属第六人民医院骨科 200233

鞭毛是位于某些细菌菌体表面细长呈波状弯曲的具有运动功能的蛋白质附属丝状物,不仅在细菌的运动与致病能力中起到重要作用,而且参与宿主多种免疫调节。鞭毛蛋白(flagellin)是形成鞭毛细丝主要部分的结构蛋白,可以被宿主细胞的Toll样受... 详细信息

鞭毛是位于某些细菌菌体表面细长呈波状弯曲的具有运动功能的蛋白质附属丝状物,不仅在细菌的运动与致病能力中起到重要作用,而且参与宿主多种免疫调节。鞭毛蛋白(flagellin)是形成鞭毛细丝主要部分的结构蛋白,可以被宿主细胞的Toll样受体5(TLR5)等受体识别,诱导机体免疫应答。目前,鞭毛蛋白因其免疫激活作用被广泛应用于新型免疫佐剂的研究,而其炎症抑制作用也在对抗免疫病理损伤方面具有良好前景。本文将对鞭毛蛋白的基本结构功能、宿主识别机制及其对宿主免疫系统起到的调节作用的研究进展作一概述。

关键词：细菌鞭毛蛋白 TLR5 免疫调节炎性抑制

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新型冠状病毒SARS-CoV-2感染治疗中的“老药新用”

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中国临床药理学与治疗学 2020年第2期25卷 126-134页

作者：蓝巧帅夏帅周洁王茜陆路复旦大学基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室

近期,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引发的肺炎在中国武汉暴发,给人类的生命健康带来了威胁,并给中国人民的生活带来了极大影响。但是目前临床上尚无疗效明确的针对SARS-CoV-2的特效药物,一些在体外细胞水平上初步证明对该病毒有一定抑制活... 详细信息

近期,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引发的肺炎在中国武汉暴发,给人类的生命健康带来了威胁,并给中国人民的生活带来了极大影响。但是目前临床上尚无疗效明确的针对SARS-CoV-2的特效药物,一些在体外细胞水平上初步证明对该病毒有一定抑制活性或之前文献报道的对冠状病毒感染有抑制效果的临床药物,目前正在开展SARS-CoV-2感染患者治疗的临床试验研究或已用于试用性治疗。本综述主要从老药新用的角度来简要介绍这些药物的作用机制、体外抗病毒效果、副作用等特征及研究现状,希望能为SARS-CoV-2感染患者的治疗提供思路。

关键词：新型冠状病毒 SARS-CoV-2 抗病毒药物临床药物老药新用

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小G蛋白RhoA活性检测方法的优化

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生物学杂志 2016年第4期33卷 103-106页

作者：曾婷崔照盟蒋维李增霞党永军余龙复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200032 复旦大学基础医学院代谢与分子医学教育部重点实验室上海200000

Rho蛋白家族的小G蛋白是调节细胞迁移的关键蛋白,具有GTP酶活性。RhoA是该蛋白家族的重要成员,通过其催化活性来调节肌动蛋白的聚集和收缩,在肿瘤迁移和侵袭中发挥重要作用。所以,RhoA的GTP酶活性检测对于研究细胞迁移的机制,以及靶向R... 详细信息

Rho蛋白家族的小G蛋白是调节细胞迁移的关键蛋白,具有GTP酶活性。RhoA是该蛋白家族的重要成员,通过其催化活性来调节肌动蛋白的聚集和收缩,在肿瘤迁移和侵袭中发挥重要作用。所以,RhoA的GTP酶活性检测对于研究细胞迁移的机制,以及靶向RhoA的治疗策略具有重要意义。RhoA下游效应子Rhotekin基因(RhoA effector)具有RhoA结合结构域(RhoA binding domain,RBD),该RBD蛋白结构域能与活化状态的GTP-RhoA特异结合。通常用外源表达的RBD蛋白pulldown结合GTP-RhoA的蛋白量,作为RhoA活性检测方法。但是,哺乳动物来源的RBD蛋白在原核细胞中的表达量很低,使得pulldown结合GTP-RhoA蛋白量的效率低下,从而不利于RhoA的活性检测。因此,目的在于提高RBD蛋白在大肠杆菌中的产量,提高RBD蛋白pulldown结合GTP-RhoA的效率,从而优化RhoA活性检测方法。通过密码子优化技术对RBD基因进行改良,提高其蛋白在大肠杆菌中的表达量,优化RBD蛋白pulldown实验检测GTP-RhoA的效率。优化后的RBD与GST标签蛋白融合后在大肠杆菌中高效表达,并且能够特异性地与GTP-RhoA结合。成功地构建了具有较高表达水平的GST-RBD载体,并优化了传统的GST-RBD pulldown检测体系,为进一步深入研究RhoA在细胞迁移中的功能提供了一种有效的技术手段。

关键词： RhoA 密码子优化 GST-RBD pulldown

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蛋白质赖氨酸乳酸化修饰及其在脂肪组织免疫代谢中的作用

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生命的化学 2020年第12期40卷 2134-2141页

作者：李白玉郭亮上海体育学院运动科学学院上海200438 复旦大学基础医学院代谢分子医学教育部重点实验室基础医学院生物化学与分子生物学系上海200032

乳酸作为细胞糖酵解的终产物,在细胞代谢过程中发挥重要作用。作为信号分子,乳酸在癌症、神经发育、脂肪细胞代谢中也具有重要功能。上述这些研究主要集中在乳酸的代谢和信号传递功能。最新研究揭示,乳酸可以作为蛋白质翻译后修饰的底物... 详细信息

乳酸作为细胞糖酵解的终产物,在细胞代谢过程中发挥重要作用。作为信号分子,乳酸在癌症、神经发育、脂肪细胞代谢中也具有重要功能。上述这些研究主要集中在乳酸的代谢和信号传递功能。最新研究揭示,乳酸可以作为蛋白质翻译后修饰的底物,促进组蛋白赖氨酸乳酸化的发生,调控M1型巨噬细胞向M2型转变。巨噬细胞作为肥胖过程中脂肪组织内变化显著的免疫细胞,其是否受到乳酸化修饰的调节有待于进一步研究。本文对已有的乳酸调控细胞代谢、细胞信号传递以及免疫细胞功能的报道进行了总结,并对乳酸化修饰在肥胖诱导的脂肪组织炎症中可能发挥的作用进行了展望。

关键词：乳酸组蛋白乳酸化脂肪组织巨噬细胞代谢性炎症

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LC-MS/MS测定兔血浆中B07浓度

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中国药学杂志 2017年第12期52卷 1056-1060页

作者：孙涛尹林田芳陆路董铭心李卫华张丽军上海市公共卫生临床中心上海201508 上海计划生育研究所上海200032 复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032 军事医学科学院生物工程研究所北京100071

目的建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定兔血浆中B07的浓度。方法血浆样品经碱化沉淀蛋白后,用甲基叔丁基醚液-液萃取,以乙腈(含0.2%乙酸)-40 mmol·L^(-1)乙酸铵(含0.2%乙酸)水溶液(80∶20)为流动相,采用Waters Symmetry C18(4.6... 详细信息

目的建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定兔血浆中B07的浓度。方法血浆样品经碱化沉淀蛋白后,用甲基叔丁基醚液-液萃取,以乙腈(含0.2%乙酸)-40 mmol·L^(-1)乙酸铵(含0.2%乙酸)水溶液(80∶20)为流动相,采用Waters Symmetry C18(4.6 mm×150 mm,5μm)柱分离;采用电喷雾电离源,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子对B07为529.3→335.4,内标卡马西平为237.1→194.1。结果测定血浆中B07线性范围为0.31~310 ng·mL^(-1),r>0.99。日内和日间精密度小于15%,提取回收率均大于75%。结论该法选择性强、灵敏度高、重现性好,能够快速、准确测定兔血浆中B07浓度。

关键词： B07 液相色谱-串联质谱法液-液萃取血药浓度

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新型直接凝血酶抑制剂的研究

新型直接凝血酶抑制剂的研究

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中国生物化学与分子生物学会第十二届会员代表大会暨2018年全国学术会议

作者：赵冰于敏莫炜复旦大学基础医学院上海市200032 分子医学教育部重点实验室上海市20032

心脑血管疾病为全球首位死亡原因,最主要的治疗方法便是抗凝防栓。以重组双功能水蛭素(r-RGD-hirudin)为基础,保留其主要功能氨基酸残基,设计出一条具有抗凝活性的短肽(Direct Thrombin Inhibitor Peptide,DTIP)。利用毕赤酵母表达 DTIP...

心脑血管疾病为全球首位死亡原因,最主要的治疗方法便是抗凝防栓。以重组双功能水蛭素(r-RGD-hirudin)为基础,保留其主要功能氨基酸残基,设计出一条具有抗凝活性的短肽(Direct Thrombin Inhibitor Peptide,DTIP)。利用毕赤酵母表达 DTIP,经纯化后获得纯度大于 95％的目的蛋白。体内和体外试验结果均显示 DTIP 显著延长各项凝血指标,并且与药物浓度呈正相关性,剪尾试验结果表明 DTIP 不会引起出血。

关键词：

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抗体治疗的重生

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微生物与感染 2018年第4期13卷 193-197页

作者：应天雷闻玉梅复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

近年来,治疗性单克隆抗体已成为基础和临床医学研究者及企业关注的热点。目前,针对免疫检查点的治疗性抗体用于肿瘤治疗已显示出较好疗效。在微生物耐药性日益增多、全球突发传染病威胁依然存在及持续性微生物感染难以治愈的当下,抗微... 详细信息

近年来,治疗性单克隆抗体已成为基础和临床医学研究者及企业关注的热点。目前,针对免疫检查点的治疗性抗体用于肿瘤治疗已显示出较好疗效。在微生物耐药性日益增多、全球突发传染病威胁依然存在及持续性微生物感染难以治愈的当下,抗微生物领域中的抗体治疗正在积极研发中。本文综述了抗体治疗在抗微生物感染领域中的进展,并展望了其应用前景。

关键词：单克隆抗体微生物感染突发传染病

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新型直接凝血酶抑制剂短肽(DTIP)重要氨基酸研究

新型直接凝血酶抑制剂短肽(DTIP)重要氨基酸研究

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中国生物化学与分子生物学会第十二届会员代表大会暨2018年全国学术会议

作者：李亚然于敏莫炜复旦大学代谢与分子医学教育部重点实验室上海 200032 复旦大学基础医学院生物化学与分子生物学系上海 200032

目的研究影响 DTIP 稳定性及与凝血酶相互作用的氨基酸并进行结构改造。方法通过 discovery studio 同源建模构建 DTIP 三维结构模型，与凝血酶分子对接，通过丙氨酸扫描筛选突变能不稳定的氨基酸;其次通过单氨基酸突变，获得 DTIP ...

目的研究影响 DTIP 稳定性及与凝血酶相互作用的氨基酸并进行结构改造。方法通过 discovery studio 同源建模构建 DTIP 三维结构模型，与凝血酶分子对接，通过丙氨酸扫描筛选突变能不稳定的氨基酸;其次通过单氨基酸突变，获得 DTIP 突变体;用凝血酶滴定法测定各突变体抗凝血酶活性，利用小鼠模型测定部分凝血酶活酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间，剪尾实验测定出血时间，通过生物膜层干涉实验测定各突变蛋白与凝血酶相互作用的亲和力，血栓弹力实验检测其对全血的影响。

关键词：

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埃博拉病毒及其致病机制

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微生物与感染 2014年第4期9卷 197-201页

作者：瞿涤袁正宏闻玉梅复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

自2014年2～3月，西非埃博拉病毒感染的暴发流行已呈播散趋势，受到世界卫生组织的高度重视。我国也提高了防止埃博拉病毒进入国内的警示，并采取了相应措施。现将有关埃博拉病毒的生物学特性、致病机制及相关流行病学与防治策略作简要... 详细信息

自2014年2～3月，西非埃博拉病毒感染的暴发流行已呈播散趋势，受到世界卫生组织的高度重视。我国也提高了防止埃博拉病毒进入国内的警示，并采取了相应措施。现将有关埃博拉病毒的生物学特性、致病机制及相关流行病学与防治策略作简要综述，供参考。

关键词：埃博拉病毒致病机制流行病学

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