检索结果-内蒙古大学图书馆

中国比较医学杂志 2015年第1期25卷 1-8,I0001页

作者：陈丽香周晓静刘文文周文江任晓楠于士颜周晓辉上海市公共卫生临床中心上海201508 蚌埠医学院第一附属医院安徽蚌埠233004 赤峰学院附属医院内蒙古赤峰024000 复旦大学医学分子病毒学教育部卫生部重点实验室上海200032

目的构建可调控性尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,u PA)诱导表达系统并进行相关鉴定,可为进一步构建可诱导型肝脏人源化u PA-SCID动物模型奠定基础。方法可调控性u PA诱导表达系统即在强力霉素(doxycycli... 详细信息

目的构建可调控性尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,u PA)诱导表达系统并进行相关鉴定,可为进一步构建可诱导型肝脏人源化u PA-SCID动物模型奠定基础。方法可调控性u PA诱导表达系统即在强力霉素(doxycycline,Dox)诱导下通过tet-on系统调控u PA表达。为此,需要构建两个重组质粒,分别为p LNHXO1O2-Alb-GLUC-FMN2A-rt TA和p LNHXO5O6-TRE2-u PA-IRES-Zs Green,前者引入Gaussia荧光素酶(gaussia enzyme fluorescent element,Gluc)与四环素反式激活因子(reverse tetracycline transactivator,rt TA)偶联表达,以便于监测rt TA表达水平;后者同时偶联表达Zs Green,以便于用荧光显微镜观察基因表达。重组逆转录病毒载体进行表达功能鉴定后,将构建质粒与病毒包装衣壳蛋白VSV-G质粒共转染GP2-293包装细胞系后获得具有感染能力的病毒颗粒,利用该病毒感染NIH/3T3细胞,并用G418筛选出阳性细胞;期间各取部分细胞,使用PCR方法鉴定其基因组内是否含有相应基因转录调控本。结果成功构建p LNHXO1O2-Alb-GLUC-FMN2A-rt TA和p LNHXO5O6-TRE2-u PA-IRES-Zs Green克隆。功能鉴定显示,p LNHXO1O2-Alb-GLUC-FMN2A-rt TA克隆可表达rt TA;p LNHXO5O6-TRE2-u PA-IRES-Zs Green克隆转染Hep G-Tet-on细胞,加Dox可诱导u PA表达。包装病毒感染NIH/3T3细胞后通过G418筛选获得单细胞克隆,通过PCR方法鉴定表明其基因组内含有相应转录本,从而成功构建u PA诱导表达稳定细胞株。结论本研究初步建立了可调控性u PA诱导表达系统,从而为可诱导肝损的u PASCID转基因小鼠的构建及在此基础上的肝脏人源化动物模型的建立奠定了基础。

关键词：可调控肝脏损伤 Alb uPA 肝脏人源化小鼠

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HBV感染与天然免疫

HBV感染与天然免疫

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第二届全国病毒感染与器官功能衰竭学术会议

作者：袁正宏复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室

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非霍奇金淋巴瘤患者脑膜脓毒黄杆菌肺部感染1例

非霍奇金淋巴瘤患者脑膜脓毒黄杆菌肺部感染1例

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：孙桂芹李蒙王蕾陈力复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室

目的阐述脑膜脓毒黄杆菌对免疫功能低下患者的1例肺部感染,以期临床能够重视该菌的分离、鉴定,在治疗时应根据药敏结果,合理选用抗生素。方法以一个非霍奇金淋巴瘤患者的肺部感染脑膜脓毒黄杆菌的病例分析为出发点,讨论脑膜脓毒黄杆菌... 详细信息

目的阐述脑膜脓毒黄杆菌对免疫功能低下患者的1例肺部感染,以期临床能够重视该菌的分离、鉴定,在治疗时应根据药敏结果,合理选用抗生素。方法以一个非霍奇金淋巴瘤患者的肺部感染脑膜脓毒黄杆菌的病例分析为出发点,讨论脑膜脓毒黄杆菌临床分离率增加、治疗困难的现状。结果脑膜脓毒黄杆菌感染因其多重耐药给临床治疗带来困难,使得该菌感染的死亡率升高,不合理使用抗生素和免疫抑制剂的使用给脑膜脓毒黄杆菌感染创造了条件,静脉导管、气管插管、呼吸机的广泛应用增加了脑膜脓毒黄杆菌接触感染的机率。结论脑膜脓毒性黄杆菌广泛存在,并引起人不同部位的感染,尤其随着广谱抗生素的广泛应用及导管在治疗时应根据药敏结果,合理选用抗生素。临床医务工作者应对脑膜炎脓毒黄杆菌有较全面的、新的认识,重视该菌的分离、鉴定及药敏实验,从而采取合理措施,控制该菌的感染,提高治疗效果。

关键词：脑膜脓毒黄杆菌非霍奇金淋巴瘤感染多重耐药

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脑膜脓毒黄杆菌的全基因组de novo测序及生物信息学分析

脑膜脓毒黄杆菌的全基因组de novo测序及生物信息学分析

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中华医学会第十次全国临床微生物学术年会暨第九届全球华人临床微生物与感染症学术论坛暨2013年浙江省医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会

作者：孙桂芹李蒙王蕾陈力复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室

目的:脑膜脓毒黄杆菌(Elizabethkingiameningosepticum)又称脑膜炎败血伊丽莎白杆菌,引起人不同部位的感染,其多重耐药性给临床治疗带来严峻挑战。针对脑膜脓毒黄杆菌的研究主要是病例报道和耐药性分析,对该菌致病机制、毒力因子等方面... 详细信息

目的:脑膜脓毒黄杆菌(Elizabethkingiameningosepticum)又称脑膜炎败血伊丽莎白杆菌,引起人不同部位的感染,其多重耐药性给临床治疗带来严峻挑战。针对脑膜脓毒黄杆菌的研究主要是病例报道和耐药性分析,对该菌致病机制、毒力因子等方面缺乏研究,高通量测序技术的发展,不同微生物物种的基因组测序陆续完成,而脑膜脓毒黄杆菌的全基因组仍未完成,本研究对临床分离的1株引起呼吸道感染的脑膜脓毒黄杆菌进行全基因组从头测序(denovo测序),并进行生物信息学分析,为该菌的致病机制、耐药机制等研究奠定基础。方法:利用IlluminaHiseq2000测序平台,200倍的测序深度,用SOAPdenov(oV1.05)短序列组装软件进行组装,再用PCR补洞和验证。用Glimmer3.0软件进行基因预测,将基因的序列与KEGG、COG、GO等数据库进行比对,得到对应的功能注释信息。结果:经过denovo测序得到1条contig的序列,基因组大小为3,938,967bp,G+C含量35.63%,基因预测3,625个ORFs占基因组长度的88.39%,tRNA和rRNA分别占基因组长度的0.1016%和0.5566%。对耐药基因初步分析,发现有11个与β-内酰胺类抗生素耐药相关的候选基因。CRISPRFinder软件分析发现该菌基因组有一个与细菌的免疫相关CRISPR/Cas系统(clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats/CRISPR-associated)。结论:脑膜脓毒黄杆菌为条件致病菌,对健康人难以致病,易被临床重视,然而抗生素的广泛使用、免疫抑制剂使用量的增加及气管插管等,给脑膜脓毒黄杆菌感染创造了条件。本研究通过denovo测序国际上首次得到了脑膜脓毒黄杆菌全基因组信息的完成图,并进行了生物信息学分析,该序列信息已提交GeneBank数据库,为脑膜脓毒黄杆菌的致病机制、耐药机制等基础研究提供信息。

关键词：全基因组黄杆菌 de novo 生物信息学分析

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耻垢分枝杆菌MSMEG_4259的基因组维护功能研究

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微生物与感染 2022年第5期17卷 273-281页

作者：邓茗芝许原原吕亮东复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

MSMEG_4259基因及其同源基因广泛存在于分枝杆菌属中。蛋白序列分析显示,MSMEG_4259包含DEDDh核酸外切酶结构域以及一个类似UvrC的核酸内切酶结构域,提示其可能参与DNA修复。为了探究MSMEG_4259的生理功能,本研究利用同源重组方法在耻... 详细信息

MSMEG_4259基因及其同源基因广泛存在于分枝杆菌属中。蛋白序列分析显示,MSMEG_4259包含DEDDh核酸外切酶结构域以及一个类似UvrC的核酸内切酶结构域,提示其可能参与DNA修复。为了探究MSMEG_4259的生理功能,本研究利用同源重组方法在耻垢分枝杆菌(Mycolicibacterium smegmatis)构建了MSMEG_4259基因敲除(ΔMs4259)菌株,并采用波动试验测定菌株在对数生长期以及H2O2处理后的利福平耐药突变频率。结果显示,ΔMs4259菌株的利福平耐药自发突变频率较野生型菌株升高1.9倍(P<0.05),该表型能够通过表达MSMEG_4259回补。测定耐药突变菌株rpoB基因的耐药决定区域序列,发现ΔMs4259菌株的A:T>C:G突变概率较野生型菌株上升约10倍,有研究证明该突变谱是DNA氧化损伤的常见突变。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)结果显示,野生型菌株的MSMEG_4259表达在H2O2处理后上调约7倍,提示该基因在转录水平参与了氧化压力应答。野生型菌株与ΔMs4259菌株在氧氟沙星、叔丁基过氧化氢和紫外线处理下的存活率无显著差异,提示MSMEG_4259不参与耻垢分枝杆菌对上述DNA损伤剂的耐受。本研究初步揭示了MSMEG_4259参与耻垢分枝杆菌基因组维护的生理功能、突变谱及转录调控等特性,为进一步研究其同源基因在结核分枝杆菌致病和耐药中的作用机制奠定了基础。

关键词： MSMEG_4259 耻垢分枝杆菌 DNA损伤 DNA修复

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分枝杆菌RpsI序列差异对核糖体结构与功能的影响

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微生物与感染 2020年第5期15卷 293-301页

作者：苏梦吕亮东复旦大学上海医学院基础医学院教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

核糖体结构存在动态调控,其变化与细菌发育、环境适应等过程密切相关。使用NCBI BLAST比对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)核糖体蛋白RpsI、RpmI和RpmJ与耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)相应蛋白的氨基酸序列,发现Rps... 详细信息

核糖体结构存在动态调控,其变化与细菌发育、环境适应等过程密切相关。使用NCBI BLAST比对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)核糖体蛋白RpsI、RpmI和RpmJ与耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)相应蛋白的氨基酸序列,发现RpsI N端氨基酸序列存在较大差异。为了探究该N端序列差异对核糖体结构与功能的影响,将表达有结核分枝杆菌rpsI基因(rpsI_Rv)的质粒整合至耻垢分枝杆菌基因组中,并利用同源重组的方法敲除耻垢分枝杆菌rpsI基因,以此构建重组菌株。聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)结果表明该重组菌株构建成功。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)于16℃可诱导表达RpsI_Rv。用纯化的RpsI_Rv制备特异性多克隆抗体,其效价为1600000。反转录PCR和蛋白质印迹法(Western blot)显示rpsI_Rv在重组菌株中成功表达。测定重组菌株与空载对照菌株在不同温度下的生长曲线,该重组菌株在不同温度下的生长速率未发生改变。采用通用液体倍比稀释法测定作用于核糖体不同位点的5种抗生素最小抑菌浓度(MIC 90),重组菌株对阿米卡星(作用于核糖体小亚基A位点的抗生素)的敏感性升高,提示分枝杆菌RpsI序列差异导致核糖体小亚基A位点附近的结构发生改变,这为分枝杆菌核糖体结构与功能的机制研究提供了数据。

关键词：结核分枝杆菌核糖体核糖体蛋白RpsI 结构与功能

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上海市松江区肺结核患者治疗药品的种类及费用分析

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中国防痨杂志 2020年第12期42卷 1329-1332页

作者：李蒙路丽苹江琦洪建军高谦杨崇广郭晓芹复旦大学基础医学院教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 上海市松江区疾病预防控制中心结核病防治科

目的分析肺结核患者治疗药品的使用和支出费用情况,为完善"减轻结核病患者经济负担"的政策提供依据。方法纳入2014年12月1日至2015年12月31日于上海市松江区完成疗程且符合入组标准的248例肺结核患者,整理汇总全部患者治疗全... 详细信息

目的分析肺结核患者治疗药品的使用和支出费用情况,为完善"减轻结核病患者经济负担"的政策提供依据。方法纳入2014年12月1日至2015年12月31日于上海市松江区完成疗程且符合入组标准的248例肺结核患者,整理汇总全部患者治疗全疗程的收费票据,统计各类药品的使用及药费支出情况。药品支出及占比等非正态分布资料均以"中位数(四分位数)[M(Q1,Q3)]"描述,数据的比较采用Mann-Whitney U检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果248例患者每例平均药品总费用为3719.0(2483.4,5634.9)元,其中用于抗结核药品、保肝药、其他辅助用药分别为16.8%(11.5%,24.0%)、62.1%(47.5%,74.6%)和23.0%(12.2%,40.7%)。除抗结核药品外,全部患者均使用过保肝药,其中241例(97.2%)在就诊1个月内使用,179例(72.2%)于就诊后每月规律服用,82例在治疗期间使用2种及以上保肝药。大部分患者间歇性使用其他辅助用药,其中中草药/中成药、抗生素和免疫调节剂的费用占比分别为14.8%(5.9%,28.9%)、9.7%(5.3%,17.2%)和8.6%(0.7%,14.0%);使用上述药品的患者占比分别为58.1%(144/248)、40.3%(100/248)和27.0%(67/248)。市级定点医院每例平均药品总费用和其他辅助用药的费用分别为6392.7(3371.5,9769.0)元和2097.6(789.0,3828.0)元,明显高于区级定点医院的3424.1(2362.0,4796.1)元和889.2(305.5,1826.0)元(Z=-3.534,P<0.001;Z=-3.113,P=0.002)。结论保肝药和其他辅助用药的费用占比均高于抗结核药品支出,无减免额度,是造成患者经济负担的主要原因;应规范保肝药与其他辅助用药的临床使用,减免相应的合理费用,切实减轻患者经济负担。

关键词：结核,肺抗结核药化学疗法,辅助药费支出患病代价数据说明,统计小地区分析

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葡萄球菌基因组研究及其启示

葡萄球菌基因组研究及其启示

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中华医学会第八次全国感染病暨首届SARS专题学术会议

作者：闻玉梅复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室

基因组研究是指对研究对象的全部染色体或DNA染色体外遗传物质的核苷核进行测序,并作其功能预测或分析.葡萄球菌属中共有20余种,其中金葡菌引起的皮肤感染,全身性感染及毒素致病与表葡因生物膜引起的机会性感染最为常见.金葡被列为致病... 详细信息

基因组研究是指对研究对象的全部染色体或DNA染色体外遗传物质的核苷核进行测序,并作其功能预测或分析.葡萄球菌属中共有20余种,其中金葡菌引起的皮肤感染,全身性感染及毒素致病与表葡因生物膜引起的机会性感染最为常见.金葡被列为致病菌,而表葡则被列为条件致病菌.表葡菌中TIGR已对生物膜形成菌株RP62A进行了测序和分析,但尚未作报道.该室对不形成生物膜的表葡ATCC 12228株完成了基因组测序,分析.

关键词：葡萄球菌基因组测序致病基因组

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广谱抗冠状病毒疫苗及抗冠状病毒多肽的研究进展

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微生物与感染 2021年第4期16卷 270-279页

作者：曹妙陆路姜世勃复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引起的2019冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)暴发,给人类公共卫生安全和全球经济发展造成了严重威胁。疫苗和药物是防治疫情的重要手段,但目前研发的针对冠状病毒的疫苗和药物大多以SARS-CoV-2为靶点,该病毒若发生重大突变或出现新的高致病性冠状病毒,目前研发的有效疫苗或药物可能会无效,而且疫苗和新药的研发往往比较滞后,难以在疫情发生早期投入使用。因此,亟须研发高效、安全、广谱的冠状病毒疫苗和药物,以应对未来可能出现的冠状病毒疫情。本文对广谱冠状病毒疫苗和抗冠状病毒多肽的研究进展进行综述,期望为研发此类疫苗和药物提供参考。

关键词：广谱冠状病毒 2019冠状病毒病疫苗药物

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乙型肝炎病毒核心颗粒展示新型冠状病毒刺突蛋白B细胞线性表位及其免疫原性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第3期44卷 234-240页

作者：陈小美袁雯婕王世杰王建荣杭小锋万延民王勇翔复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 海军军医大学长征医院感染科上海200003 复旦大学附属华山医院感染科上海市传染病与生物安全应急响应重点实验室国家传染病医学中心上海200040

目的获得展示新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)刺突蛋白B细胞线性表位的乙型肝炎病毒衣壳样颗粒(capsid-like particles,CLPs)并评价其免疫原性。方法将SARS-CoV-2的4条B细胞线性表位(M1、S1-57、S14P5和S21P2)置换乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)第80位丙氨酸。在大肠埃希菌BL21 Star(DE3)中诱导表达这4种线性表位和HBc的重组融合蛋白(M1-HBc、S1-57-HBc、S14P5-HBc和S21P2-HBc)。SDS-PAGE、Western blot和非变性琼脂糖凝胶电泳(native agarose gel electrophoresis,NAGE)鉴定表达产物。蔗糖密度梯度超速离心纯化CLPs并经Western blot验证其抗原性。用纯化的CLPs免疫BALB/c小鼠,通过ELISA测定血清中的抗体滴度。结果重组融合蛋白M1-HBc和S1-57-HBc自组装成M1-CLP和S1-57-CLP,S1-57-CLP免疫小鼠后靶向S1-57多肽的抗体滴度高达1∶1000000。结论在原核系统中成功表达了展示SARS-CoV-2 M1或S1-57线性表位的乙型肝炎病毒CLPs,S1-57-CLP具有良好的免疫原性,为研制SARS-CoV-2新型诊断试剂和疫苗提供了新思路。

关键词：免疫原性新型冠状病毒 B细胞线性表位衣壳样颗粒抗体

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