检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物与感染 2014年第4期9卷 224-229页

作者：李蒙孙桂芹陈菁李天胜王蕾策力木格陈力复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

N‐糖苷酶（PNGase）是真核生物中的常见酶，但在原核生物中极为罕见，目前仅报道在脑膜炎败血伊丽莎白金菌（EM）中存在。本文旨在检测 PNGase基因在EM临床分离株中的分布，为该菌的亚型分类及快速核酸分子检测提供依据，为研究PNGase... 详细信息

N‐糖苷酶（PNGase）是真核生物中的常见酶，但在原核生物中极为罕见，目前仅报道在脑膜炎败血伊丽莎白金菌（EM）中存在。本文旨在检测 PNGase基因在EM临床分离株中的分布，为该菌的亚型分类及快速核酸分子检测提供依据，为研究PNGase在原核生物中的生物学功能奠定基础。于2010年7月～2012年12月收集浙江省3家三级甲等医院的65株EM临床分离株，提取细菌基因组 DNA ，利用16 S rRNA细菌通用引物、PNGase F和PNGase F‐Ⅱ特异性引物，进行组合聚合酶链反应（PCR）。阳性扩增产物测序后与美国国立生物技术信息中心（NCBI）数据库中已知EM序列比对确认。结果显示，PNGase阳性菌64株，总阳性率为98．5％；PNGase F和PNGase F‐Ⅱ共阳性菌39株，共阳性率为60．0％。 PNGase F阳性菌41株，阳性率为63．1％；PNGase F‐Ⅱ阳性菌62株，阳性率为95．4％，PNGase F‐Ⅱ阳性率高于 PNGase F （配对χ^2检验， P＜0．01），提示 PNGase可能对EM具有重要的生物学意义。结果还表明，本研究建立的组合PCR可应用于E M菌株中 PN G ase基因分型。

关键词：脑膜炎败血伊丽莎白金菌聚合酶链反应 N-糖苷酶F-Ⅱ Peptide:N-glycanase F-Ⅱ

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肠-肝轴与非酒精性脂肪性肝病

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微生物与感染 2014年第2期9卷 65-70页

作者：丁佳吴健复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

肠道菌群组成和数量的改变影响宿主的能量代谢、免疫应答和炎症反应状态。非酒精性脂肪性肝病患者常伴有小肠细菌过度生长或某些菌群种类和数量的改变,以及肠道黏膜通透性增加。肠道细菌通过增强肝脏脂肪合成、诱导机体胰岛素抵抗、激... 详细信息

肠道菌群组成和数量的改变影响宿主的能量代谢、免疫应答和炎症反应状态。非酒精性脂肪性肝病患者常伴有小肠细菌过度生长或某些菌群种类和数量的改变,以及肠道黏膜通透性增加。肠道细菌通过增强肝脏脂肪合成、诱导机体胰岛素抵抗、激活天然免疫系统相关分子模式等机制,诱发肝脏炎症反应,启动纤维化进程,促进单纯性脂肪变向脂肪性肝炎发展。鉴定影响机体能量代谢和炎症反应的肠道菌群及其产物将为阐明肠-肝轴对肝脏炎症发生、发展所起的作用奠定基础,为揭示非酒精性脂肪性肝病发生、发展的机制开辟新思路,为该病的防治探索新策略。

关键词：肠-肝轴非酒精性脂肪性肝病肠道菌群

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结核分枝杆菌新型抗原Rv3117联合DDA/MPL佐剂作为亚单位疫苗在小鼠体内的免疫评估

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上海交通大学学报（医学版） 2015年第1期35卷 1-7页

作者：叶娟高孟哲张舒林陈力孙战强复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学实验室上海200032 上海交通大学基础医学院免疫学与微生物学系上海200025 郑州大学医学实验中心郑州450006 复旦大学生命科学院上海200433

目的用结核分枝杆菌(***)特异性抗原Rv3117联合双十八烷基二甲基溴化铵(DDA)/单磷酰脂质体A(MPL)佐剂构建结核亚单位疫苗(Rv3117/DDA/MPL),并在C57BL/6小鼠体内评估其加强卡介苗(BCG)首次免疫后的免疫效应。方法采用分子克隆方法构建重... 详细信息

目的用结核分枝杆菌(***)特异性抗原Rv3117联合双十八烷基二甲基溴化铵(DDA)/单磷酰脂质体A(MPL)佐剂构建结核亚单位疫苗(Rv3117/DDA/MPL),并在C57BL/6小鼠体内评估其加强卡介苗(BCG)首次免疫后的免疫效应。方法采用分子克隆方法构建重组质粒p ET32a-Rv3117,转入感受态大肠埃希菌BL21(DE3)PLys S,诱导表达并纯化目的蛋白,用Triton X-114相分离法去除目的蛋白中的内毒素,然后与DDA/MPL佐剂充分乳化构建亚单位疫苗。C57BL/6小鼠随机分为对照组(未予任何处理)、PBS组(免疫PBS)、BCG组(单纯首次免疫BCG)、BCG+DDA/MPL组(首次免疫BCG,2周后用佐剂DDA/MPL加强免疫2次)和BCG+Rv3117/DDA/MPL组(首次免疫BCG后用亚单位疫苗Rv3117加强免疫2次),每组5只。分别采用酶联免疫斑点检测(ELISPOT)和酶联免疫吸附测定(ELISA)技术对免疫小鼠的细胞免疫和体液免疫进行评估。结果成功克隆表达并纯化结核特异性抗原Rv3117。ELISPOT和ELISA结果显示:受10.0μg/m L结核菌素纯化衍生蛋白(PPD)刺激后,与对照组、PBS组、BCG组和BCG+DDA/MPL组比较,BCG+Rv3117/DDA/MPL组小鼠T细胞产生γ干扰素(IFN-γ)的水平明显升高(P<0.05);BCG+DDA/MPL组培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素12(IL-12p70)细胞因子水平均显著高于对照组和PBS组(P<0.05),总抗体Ig G和Ig G1亚型水平亦较高;而BCG+Rv3117/DDA/MPL组上述指标水平均显著优于BCG+DDA/MPL组(P<0.05)。结论亚单位疫苗Rv3117/DDA/MPL在C57BL/6小鼠体内可增强BCG的细胞免疫和体液免疫效应。结核分枝杆菌特异性抗原Rv3117有望成为新的结核疫苗设计及结核诊断的候选抗原。

关键词：结核分枝杆菌 Rv3117 亚单位疫苗体液免疫细胞免疫

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表皮葡萄球菌PhoU同源物(SERP0316)的抗体制备及免疫鉴定

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微生物与感染 2014年第3期9卷 174-181页

作者：韩海燕王小飞武有聪许涛刘华勇蔡霞瞿涤复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

表皮葡萄球菌可在植入性医疗材料表面形成生物膜,对多种抗生素耐受,而持留菌的形成是导致细菌生物膜耐药的原因之一。研究发现,大肠埃希菌中PhoU可影响持留菌的形成,与细菌对多种抗生素及压力条件的耐受相关,但表皮葡萄球菌中PhoU的功... 详细信息

表皮葡萄球菌可在植入性医疗材料表面形成生物膜,对多种抗生素耐受,而持留菌的形成是导致细菌生物膜耐药的原因之一。研究发现,大肠埃希菌中PhoU可影响持留菌的形成,与细菌对多种抗生素及压力条件的耐受相关,但表皮葡萄球菌中PhoU的功能仍不清楚。生物信息学分析显示,在表皮葡萄球菌中存在2个phoU同源基因,其中serp0956位于pst操纵子中,命名为phoU1;另一个编码功能未知蛋白的phoU基因同源物(serp0316)命名为phoU2。前期研究显示,敲除phoU1并不影响表皮葡萄球菌生长、生物膜形成等生物学特性,为此本研究对PhoU2进行了初步探讨。利用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测phoU2基因在表皮葡萄球菌SE1457不同生长时期的转录水平,发现其在细菌生长不同时间点持续表达,其中对数期(6h)表达量相对较高。为进一步研究表皮葡萄球菌中PhoU2的表达情况,对PhoU2蛋白进行原核表达和纯化,并用纯化的重组PhoU2蛋白免疫小鼠制备PhoU2多克隆抗体。在此基础上,利用蛋白免疫印迹法检测PhoU2在SE1457菌株不同生长时间点的表达水平,结果显示PhoU2在细菌生长对数期和平台期均有表达。另外,在不同的表皮葡萄球菌临床分离株中均检测到PhoU2蛋白表达,表明PhoU2具有一定的保守性。以上研究提示,PhoU2可能作为PhoU的功能同源物发挥一定的作用,为进一步研究表皮葡萄球菌PhoU2的生物学功能及其在生物膜和持留菌形成中的作用奠定了基础。

关键词：表皮葡萄球菌 phoU同源基因原核表达持留菌

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二代测序技术在结核分枝杆菌研究中的应用进展

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微生物与感染 2015年第1期10卷 54-60页

作者：徐鹏甘明宇高谦复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

结核病是由结核分枝杆菌引起的全球第二大传染病。二代测序技术为从基因组水平研究结核分枝杆菌提供了重要的研究方法。本文从结核病流行病学、结核分枝杆菌耐药和进化及相关生物信息学等方面,介绍二代测序技术在结核分枝杆菌研究中的... 详细信息

结核病是由结核分枝杆菌引起的全球第二大传染病。二代测序技术为从基因组水平研究结核分枝杆菌提供了重要的研究方法。本文从结核病流行病学、结核分枝杆菌耐药和进化及相关生物信息学等方面,介绍二代测序技术在结核分枝杆菌研究中的应用进展。

关键词：结核分枝杆菌二代测序基因组

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宏转录组测序分析老年抗生素相关性腹泻患者肠道菌群组成及耐药通路特点

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中国微生态学杂志 2022年第4期34卷 413-419页

作者：王虹王悦之荣星喻王同尧王菲菲张玉赵超复旦大学基础医学院教育部医学分子病毒学重点实验室上海200032 国家老年疾病临床医学研究中心(复旦大学附属华山医院) 上海200040

目的为探究老年抗生素相关性腹泻(AAD)患者肠道菌群结构变化的特点以及与细菌耐药性之间的关联。方法对来自华山医院老年科的6名老年AAD患者的肠道菌群进行宏转录组测序,并以另5名相同饮食标准下接受抗生素治疗但未发生腹泻的患者作为对... 详细信息

目的为探究老年抗生素相关性腹泻(AAD)患者肠道菌群结构变化的特点以及与细菌耐药性之间的关联。方法对来自华山医院老年科的6名老年AAD患者的肠道菌群进行宏转录组测序,并以另5名相同饮食标准下接受抗生素治疗但未发生腹泻的患者作为对照,深入分析老年AAD患者肠道菌群物种组成及耐药通路变化。结果AAD组物种丰度和多样性均低于对照组,且两组菌群组成在不同分类学水平上存在明显差异(P<0.05)。KEGG比对结果显示,AAD组多条抗生素耐药通路的表达量均有显著上调,包括与β-内酰胺类抗生素耐药相关的青霉素结合蛋白pbp1B、pbp5、金属β-内酰胺酶bla2,β-内酰胺酶基因表达调节因子ampR、ampC等,与万古霉素耐药相关的VanX、VanB、VanW和VanH等。另外,mlaC、natB、znuC、tcyB、tcyC等53条ATP结合盒超家族(ABC转运蛋白)相关通路在AAD组中显著上调。结论菌群结构变化、某些优势菌属的扩张、菌群失调相关的代谢变化以及抗生素耐药性等因素与老年人AAD有潜在联系。

关键词：肠道菌群老年人抗生素相关性腹泻耐药性宏转录组

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质粒介导16S rRNA甲基化酶肺炎克雷伯菌临床分离株的检测及分子流行病学研究

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中华检验医学杂志 2009年第3期32卷 268-273页

作者：余方友陈婵杜卫良李国安张雪青陈增强陈坚王良兴朱涛瞿涤温州医学院附属第一医院检验科 325000 温州医学院附属第一医院呼吸科 325000 复旦大学上海医学院教育部卫生部医学分子病毒学重点实验室

目的调查16SrRNA甲基化酶在肺炎克雷伯菌临床分离株中的流行情况。方法收集我院2006年1月至2007年9月从临床标本中分离的肺炎克雷伯菌337株，所有菌株均为非重复株。菌种鉴定采用全自动微生物分析仪，庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素的药... 详细信息

目的调查16SrRNA甲基化酶在肺炎克雷伯菌临床分离株中的流行情况。方法收集我院2006年1月至2007年9月从临床标本中分离的肺炎克雷伯菌337株，所有菌株均为非重复株。菌种鉴定采用全自动微生物分析仪，庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素的药敏试验采用琼脂稀释法。超广谱B内酰胺酶（ESBLs）检测采用美国临床和实验室标准协会（CLSI）规定的纸片确证法。使用PCR检测16SrRNA甲基化酶基因、整合酶基因和ESBL基因。接合试验检测质粒的可转移性；脉冲场电泳分析菌株的同源性。结果337株肺炎克雷伯菌对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星的耐药率分别为19．0％（64／337）、8．3％（28／337）和16．3％（55／337）。21株16SrRNA甲基化酶基因阳性，阳性率为6．2％（21／337），其中13株rmtB阳性、3株armA阳性、5株rmtB和armA同时阳性。所有16SrRNA甲基化酶基因阳性株对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星同时耐药且都为高度耐药（MICs≥256彬L），21株甲基化酶基因阳性株有19株产ESBLs，ESBL基因主要为CTX-M-14-like、CTX-M-15-like和SHV．12-like。21株均为Ⅰ类整合酶基因阳性。13株通过接合试验把质粒传递给受体菌***53。所有接合子Ⅰ类整合酶基因阳性、blaTEM-1基因阳性、产ESBLs及对庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星和复方磺胺甲略唑耐药，对其他抗菌药物敏感。接合子ESBL基因型与供菌一致。21株16SrRNA甲基化酶基因阳性株经脉冲场凝胶电泳（PFGE）分成14个基因型，主要为A型和I型。结论armA和rmtB型16SrRNA甲基化酶基因已经在肺炎克雷伯菌中播散，既可通过克隆株播散也可通过接合性质粒在不同菌株间播散。

关键词：克雷伯菌,肺炎 RNA,核糖体,16S 甲基转移酶类质粒

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表皮葡萄球菌双组分信号转导系统saeRS对相关蛋白调控的研究

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西安交通大学学报（医学版） 2012年第6期33卷 680-684页

作者：娄强王艳歌瞿涤河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室河南开封475004 河南大学医学院细胞生物学教研室河南开封475004 复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

目的利用双向电泳技术对表皮葡萄球菌菌体蛋白进行蛋白质组学分析,寻找双组分信号转导系统saeRS的调控网络。方法对表皮葡萄球菌1457双组分信号转导系统saeRS删除株与野生株菌体蛋白进行双向电泳差异比较;电泳图谱采用Image Master 2DPl... 详细信息

目的利用双向电泳技术对表皮葡萄球菌菌体蛋白进行蛋白质组学分析,寻找双组分信号转导系统saeRS的调控网络。方法对表皮葡萄球菌1457双组分信号转导系统saeRS删除株与野生株菌体蛋白进行双向电泳差异比较;电泳图谱采用Image Master 2DPlatinum软件分析;免疫印迹法验证saeRS调控的差异蛋白。结果在表皮葡萄球菌1457双组分信号转导系统saeRS删除株与野生株蛋白质图谱中共发现23个差异表达的蛋白点(10个下调,13个上调)。结论蛋白质双向电泳技术可以成功应用于分析表皮葡萄球菌双组分信号转导系统saeRS的调控网络;此图谱为进一步研究saeRS在表皮葡萄球菌中的调控机制奠定了基础。

关键词：表皮葡萄球菌双组分信号转导系统 saeRS 蛋白质组双向电泳

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DNA的识别分子及其识别模式

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自然科学进展 2008年第6期18卷 609-614页

作者：张伟娟徐洁杰徐薇熊思东复旦大学上海医学院免疫学系免疫生物学研究所上海200032 复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

固有免疫以TLR9依赖和TLR9非依赖的方式对DNA识别,在保护性免疫和病理性自身免疫反应中发挥重要作用.目前发现TLR9,DAI(DLM-1/ZBP1),RIG-I,尚未定义的识别B-DNA的分子,损伤DNA结合分子如:DNA-PKcs,Ku70,p53,ATM,ATR和含有SAP或PHD结构... 详细信息

固有免疫以TLR9依赖和TLR9非依赖的方式对DNA识别,在保护性免疫和病理性自身免疫反应中发挥重要作用.目前发现TLR9,DAI(DLM-1/ZBP1),RIG-I,尚未定义的识别B-DNA的分子,损伤DNA结合分子如:DNA-PKcs,Ku70,p53,ATM,ATR和含有SAP或PHD结构域等的分子可以识别DNA,并且分别以不同的识别模式识别细胞不同部位或不同类型的DNA.近几年来国内外针对DNA识别的研究较多并取得了重要进展,给研究保护性免疫和自身免疫提供了新的视野.文中结合作者所在实验室的研究探索,对DNA的识别分子和识别模式的研究进展进行综述.

关键词：固有免疫 TLR9 RIG-I DAI(DLM-1/ZBPl)

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pH敏感型聚合物胶束对I型志贺毒素A亚基的递送及细胞毒性

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华东理工大学学报（自然科学版） 2022年第2期48卷 213-220页

作者：孙敏佳刘晔宏薛依桐徐俊王彤徐首红张俊琪华东理工大学化学与分子工程学院结构可控先进功能材料及其制备教育部重点实验室上海200237 复旦大学基础医学院教育部/卫建委医学分子病毒学重点实验室&病原生物系上海200032

探究了pH敏感型聚合物胶束递送和释放I型志贺毒素A亚基至肿瘤细胞Hela的效率和功能。首先将在大肠杆菌中分别重组表达I型志贺毒素A亚基Stx1A和减毒突变A亚基Mu-Stx1A,然后将对pH敏感的聚合物胶束PEG_(8)-PDPA_(100)-PEG_(8)(其中PEG为... 详细信息

探究了pH敏感型聚合物胶束递送和释放I型志贺毒素A亚基至肿瘤细胞Hela的效率和功能。首先将在大肠杆菌中分别重组表达I型志贺毒素A亚基Stx1A和减毒突变A亚基Mu-Stx1A,然后将对pH敏感的聚合物胶束PEG_(8)-PDPA_(100)-PEG_(8)(其中PEG为聚乙二醇,PDPA为聚异丙基甲基烯酸酯)分别运载至宫颈癌细胞Hela中。体外活性实验证明重组蛋白Stx1A具有明显的抑制蛋白合成作用,而减毒变异型Mu-Stx1A不具备这种作用。用聚合物胶束将Stx1A及Mu-Stx1A转运至Hela细胞中,发现随着蛋白浓度的增加细胞转染效率增大。包载了Stx1A的胶束进入细胞后,释放活性Stx1A导致细胞病变和凋亡,该现象随着Stx1A浓度的增加表现更显著。实验证明聚合物胶束可以成功包载、运输和稳定释放具有活性的Stx1A分子至肿瘤细胞内,发挥毒性功能诱导细胞程序性死亡。该聚合物胶束可以在蛋白类药物运输中发挥有效作用,为后续I型志贺毒素A亚基在肿瘤治疗中的应用性研究提供重要的理论基础。

关键词： I型志贺毒素 pH敏感型聚合物胶束蛋白类药物胞内递送肿瘤治疗

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