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细胞与分子免疫学杂志 2024年第5期40卷 447-454页

作者：薛潘董阳超武福星陈洋张剑元航武苏闪袁若栋李宝莉雷迎峰延安大学医学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表... 详细信息

目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表达,经过变性、复性和超滤获得纯化的蛋白。将Eecto蛋白3次免疫后,获得多克隆抗体血清,进行效价测定,并利用ZIKV prME真核表达质粒转染的HEK293T细胞进行Western blot法和免疫荧光法分析。取效价较高的小鼠脾脏制备脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法获取分泌抗体的杂交瘤细胞,并进一步制备腹水。对腹水进行抗体效价测定、亚类分析。以ZIKV同属病毒日本脑炎病毒(JEV)、黄热病病毒(YFV)、登革病毒1-4(DENV1-4)、蜱传脑炎病毒(TBEV)的Eecto为包被抗原,利用ELISA分析ZIKV单克隆抗体的交叉反应性,进一步对效价高、特异性强的抗体进行特异性分析。结果成功构建了原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,并获得纯化的Eecto蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性;制备筛选得到1D6、4F11、4H7、4F8四株单克隆抗体,其中三株(1D6、4H7、4F8)为IgGκ型抗体,一株(4F11)为IgMκ,1D6腹水效价大于1∶108;其中1D6和4H7为ZIKV特异性抗体,与其他黄病毒无交叉反应。结论成功制备了小鼠抗ZIKV Eecto单克隆抗体,为后续建立ZIKV检测方法及致病机制研究提供了实验材料。

关键词：寨卡病毒(ZIKV) 包膜蛋白胞外区(Eecto) 原核表达单克隆抗体

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基于UHPLC-QE-MS技术的两色金鸡菊总黄酮干预肺癌移植瘤小鼠瘤组织的代谢组学研究

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中国临床药理学杂志 2023年第9期39卷 1321-1325页

作者：国鲁源阿不来提·阿合买提布威阿丽耶·胡加阿布都拉岳进巧吴桂霞新疆医科大学基础医学院生理教研室新疆医科大学基础医学院机能中心新疆昌吉职业技术学院医学分院生物微生物教研室

目的利用超高效液相色谱-质谱联用（UHPLC-QE-MS）技术，分析两色金鸡菊总黄酮（CTFs）对非小细胞肺癌移植瘤裸鼠瘤组织中代谢物的影响，初步探讨其抗瘤作用的潜在机制。方法建立非小细胞肺癌移植瘤裸鼠模型。CTFs干预组(100 mg·... 详细信息

目的利用超高效液相色谱-质谱联用（UHPLC-QE-MS）技术，分析两色金鸡菊总黄酮（CTFs）对非小细胞肺癌移植瘤裸鼠瘤组织中代谢物的影响，初步探讨其抗瘤作用的潜在机制。方法建立非小细胞肺癌移植瘤裸鼠模型。CTFs干预组(100 mg·kg-1)从小鼠接种肿瘤细胞起灌胃给药；CTFs治疗组(100 mg·kg-1)从移植瘤体积达40～50 mm3后开始灌胃给药，模型组给予等量的羧甲基纤维素钠盐溶液，每天1次，连续21 d,记录瘤质量和体积，并进行苏木精-伊红染色。用UHPLC-QE-MS技术对3组瘤组织进行代谢组分析，用主成分分析法（PCA）和正交偏最小二乘判别分析法（OPLS-DA）筛选出相关差异代谢物，通过KEGG、HMDB数据库进行潜在的代谢通路分析。结果模型组、CTFs干预组和CTFs治疗组瘤质量分别为（0.60±0.15）、（0.21±0.14）、（0.52±0.23）g,瘤体积分别为（453.89±72.38）、（306.71±70.35）、（422.20±77.55）mm3,与模型组相比，CTFs干预组中瘤质量及瘤体积明显降低，而CTFs治疗组差异无统计学意义。UHPLC-QE-MS的结果显示，与模型组小鼠相比，CTFs干预组共有43个差异代谢物，涉及15条代谢通路；CTFs治疗组有23个差异代谢物，涉及5条代谢通路。结论 CTFs可能通过调节牛磺酸和亚牛磺酸代谢、苯丙氨酸代谢等通路，调控相关代谢产物水平，进而发挥抗肺癌的作用。

关键词：两色金鸡菊肺癌凋亡代谢组学

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小鼠抗西方马脑炎病毒E2蛋白胞外区(E2ecto)单克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第1期40卷 62-68页

作者：武福星董阳超张剑薛潘袁若栋陈洋元航李宝莉雷迎峰延安大学医学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通... 详细信息

目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通过变性、复性、超滤等制备得到E2ecto蛋白;以QuickAntibody-Mouse5W为佐剂,将E2ecto蛋白肌肉免疫BALB/c小鼠,间隔21 d加强1次。免疫后35 d,取效价超过1×104的小鼠腹腔接种1次E2ecto蛋白,3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过有限稀释法筛选稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,接种小鼠腹腔后制备腹水;利用ELISA检测抗体亚型及腹水中抗体效价的水平;将真核表达质粒pCAGGS-WEEV-CE3E2E1转染BHK-21细胞,通过免疫荧光法(IFA)鉴定上述mAb的生物学活性;利用东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的E2ecto蛋白进行ELISA鉴定上述抗体的特异性。结果成功表达及复性获得了纯化的WEEV E2ecto蛋白;制备了3G6G10、3D7G2、3B9E8、3D5B7四株mAb,其亚型分别为IgG2c(κ)、IgM(κ)、IgM(κ)、IgG1(κ);3G6G10、3B9E8、3D7G2腹水抗体效价均为105,3D5B7达到107;该4株抗体与VEEV和EEEV等其他脑炎甲病毒无交叉反应。结论成功制备了4株特异性结合WEEVE2ecto的小鼠mAb。

关键词：西方马脑炎病毒(WEEV) E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto) 原核表达单克隆抗体(mAb)

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“半”翻转课堂教学模式在《医学寄生虫学》课程教学的路径探索

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医学动物防制 2023年第2期39卷 202-204,F0003页

作者：沈燕王军梁姣赵亚李英辉空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西安710032

目的针对我国医学教育课程学习难度大、师资力量不足、学生自主学习积极性不高、学生课业负担普遍较重等特点,探索改良型“半”翻转课堂教学模式在《医学寄生虫学》课程的实施路径。方法按照《医学寄生虫学》各论讲授的一般规律,设计... 详细信息

目的针对我国医学教育课程学习难度大、师资力量不足、学生自主学习积极性不高、学生课业负担普遍较重等特点,探索改良型“半”翻转课堂教学模式在《医学寄生虫学》课程的实施路径。方法按照《医学寄生虫学》各论讲授的一般规律,设计“半”翻转教学模式和实施流程,举例分析案例选取、资源筛选、个性化学习、课后学习、考核多元化等步骤的实际操作和方法。结果为保证“半”翻转课堂教学效果,课前预习内容以学生盲点和兴趣点为核心,选择适合自主学习的短视频,合理利用在线资源和APP实现个性化学习。课堂翻转内容的选择要注重知识体系完整性和自主探究深广度的平衡,课后自学部分则应兼顾巩固性和开放性。考核的多元化选择也是以能力培养为目的。结论 “半”翻转教学模式虽然在一定程度增加教师的备课辅导负担和学生的学习课业压力,但适应后是终身受益的,在获得知识的同时培养学生辩证和创新的思维。

关键词：医学寄生虫学教学改革教学模式翻转课堂半翻转课堂过程性考核

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结核分枝杆菌细胞外囊泡的研究进展

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中国感染控制杂志 2024年第12期23卷 1591-1596页

作者：马枫茜邱章华杜文雅代禹美吴利先王国富大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000 昆明理工大学医学院云南昆明651000

结核病仍然是一个严重威胁全球公共卫生的问题,每年造成数百万人感染。结核分枝杆菌(MTB)是引起结核病的主要病原菌。近年来,MTB细胞外囊泡(MEVs)作为MTB分泌分枝杆菌抗原的重要载体已引起研究者关注。MEVs能够使MTB以集中保护的方式分... 详细信息

结核病仍然是一个严重威胁全球公共卫生的问题,每年造成数百万人感染。结核分枝杆菌(MTB)是引起结核病的主要病原菌。近年来,MTB细胞外囊泡(MEVs)作为MTB分泌分枝杆菌抗原的重要载体已引起研究者关注。MEVs能够使MTB以集中保护的方式分泌磷脂、核酸、脂多糖和周质成分,并与宿主相互作用。对MEVs部分内容物的研究已取得了一些进展,但对其在宿主感染MTB过程中的生物发生机制、功能以及对机体免疫应答作用的认识仍处于初级阶段。本文综述目前MEVs生物发生机制的进展,在宿主感染MTB过程中,以及在调节免疫应答中的作用,并讨论其在疫苗开发和诊断技术方面的应用。

关键词：结核分枝杆菌细胞外囊泡免疫调节

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分枝杆菌诱导宿主免疫细胞凋亡机制的研究进展

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中国病原生物学杂志 2022年第12期17卷 1480-1483页

作者：丁寿鹏王国富吴利先大理大学基础医学院医学微生物与免疫教研室云南大理671000

鸟结核分枝杆菌(Mycobacterium avium tuberculosis,MAV)是引起严重机会性肺病的重要病原体之一。对于免疫功能低下的患者,例如合并HIV感染者,MAV是严重的晚期并发症。目前,MAV与免疫细胞间作用机制尚不清楚。MAV主要寄生于巨噬细胞中,... 详细信息

鸟结核分枝杆菌(Mycobacterium avium tuberculosis,MAV)是引起严重机会性肺病的重要病原体之一。对于免疫功能低下的患者,例如合并HIV感染者,MAV是严重的晚期并发症。目前,MAV与免疫细胞间作用机制尚不清楚。MAV主要寄生于巨噬细胞中,因此了解其对巨噬凋亡的诱导机制极其上游调控基因对未来寻找有效的治疗手段尤为重要。本文将对MAV诱导巨噬细胞及其他免疫细胞凋亡的机制进行综述。

关键词： MAV 巨噬细胞免疫细胞细胞因子综述

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动物双歧杆菌B4株的全基因组测序及其益生特性分析

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安徽医科大学学报 2025年第2期60卷 255-265页

作者：丁瑞培刘承忠史灿灿张慧玉代宜萍穆如雪李子龙何茂章李卓君安徽医科大学第一临床医学院合肥230032 安徽医科大学基础医学院微生物学教研室合肥230032 南昌大学抚州医学院基础医学部抚州344000

目的分析由健康人粪便中新分离出的一株动物双歧杆菌B4株的全基因组信息,并探究其益生特性。方法采用体外实验方法对动物双歧杆菌B4的耐药性、溶血性、耐胃酸特性以及生化特性进行评估,并利用二代+三代测序技术对该菌进行全基因组测序... 详细信息

目的分析由健康人粪便中新分离出的一株动物双歧杆菌B4株的全基因组信息,并探究其益生特性。方法采用体外实验方法对动物双歧杆菌B4的耐药性、溶血性、耐胃酸特性以及生化特性进行评估,并利用二代+三代测序技术对该菌进行全基因组测序以及基因功能注释。结果经全基因组测序后显示该动物双歧杆菌B4株基因组大小为1944146 bp,GC含量为60.49%,不含质粒,总基因数为1642个。体外实验分析结果显示,该动物双歧杆菌B4株具有良好的益生特性,包括非溶血性和耐胃酸的特性。同时基因组结果显示,该动物双歧杆菌B4株不具有毒素、致病相关基因,耐药基因少且传播能力不高,具有很高的安全性。通过KEGG、COG、GO等基因注释显示其含有很多生物活性酶,如β-半乳糖苷酶、L-乳酸脱氢酶等益生基因。结论该动物双歧杆菌B4株具有良好的益生特性,在基因层面上展示了优良的安全性,具有益生特性的基因序列。

关键词：动物双歧杆菌分离培养全基因组测序基因组分析益生菌益生基因

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提升医学微生物学研究人员生物安全意识的管理与探讨

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医学动物防制 2023年第10期39卷 1011-1017页

作者：柏银兰张芳琳路延之宁唤唤康健空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

随着新冠肺炎疫情的不断蔓延,生物安全显得尤其重要。结合某校微生物与病原生物学教研室的管理制度,本文分别从强化生物安全实验室等级概念、培养生物安全意识、建立良好实验习惯、规范科研人员实验操作、正确使用实验室科学仪器、提高... 详细信息

随着新冠肺炎疫情的不断蔓延,生物安全显得尤其重要。结合某校微生物与病原生物学教研室的管理制度,本文分别从强化生物安全实验室等级概念、培养生物安全意识、建立良好实验习惯、规范科研人员实验操作、正确使用实验室科学仪器、提高科研人员实验技能、安全处理实验废弃物7个方面,探讨如何提升医学微生物学研究人员平时工作的生物安全意识,有效保证研究人员人身安全和实验室环境安全,为科研工作顺利进行奠定基础。

关键词：医学微生物学研究人员生物安全意识实验室管理危险因素调查

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m6A甲基化修饰过程中关键分子对日本脑炎病毒复制增殖影响的研究

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中国人兽共患病学报 2025年第2期41卷 150-157页

作者：程治蓉姚敏李雪云柴超杰党品香王思雨张芳琳吕欣延安大学生命科学学院延安716000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西安710032 延安大学医学院延安716000

目的探讨N6-甲基腺苷酸(m6A)修饰中关键分子去甲基化酶—脂肪和肥胖相关蛋白(FTO)及甲基化转移酶—甲基转移酶样蛋白3(METTL3)对日本脑炎病毒(JEV)复制增殖的影响。方法利用表达FTO及绿色荧光蛋白的重组慢病毒,感染Neuro2a(小鼠神经... 详细信息

目的探讨N6-甲基腺苷酸(m6A)修饰中关键分子去甲基化酶—脂肪和肥胖相关蛋白(FTO)及甲基化转移酶—甲基转移酶样蛋白3(METTL3)对日本脑炎病毒(JEV)复制增殖的影响。方法利用表达FTO及绿色荧光蛋白的重组慢病毒,感染Neuro2a(小鼠神经母细胞瘤细胞),通过嘌呤霉素筛选获取稳定表达FTO细胞系,荧光显微镜观察绿色荧光表达,实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测细胞中FTO的表达情况。JEV分别感染对照组(空载体组)及实验组(过表达FTO)Neuro2a细胞。此外,用METTL3特异性抑制剂STM2457处理JEV感染的Neuro2a细胞。实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测JEV的复制、干扰素及相关分子表达。结果 FTO过表达细胞中FTO mRNA和蛋白水平均显著升高,且与对照组相比,JEV复制被显著抑制,同样的抑制效应也发生在抑制剂STM2457处理的JEV感染细胞组中,而且JEV感染后的FTO过表达细胞中干扰素及相关分子的表达显著增加。结论抑制细胞的m6A甲基化修饰过程可抑制JEV的复制,进一步明确了甲基化修饰在JEV复制中的调控作用。

关键词：脂肪和肥胖相关蛋白(FTO) 甲基转移酶样蛋白3(METTL3) m6A甲基化修饰日本脑炎病毒干扰素

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表皮葡萄球菌vraSR-srrAB突变株的构建及生物学表型

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微生物学通报 2023年第8期50卷 3562-3574页

作者：陈晓婷乾莲陈卫国孙士正白宗凯赵纯静武有聪大理大学基础医学院病原生物学综合实验室云南大理671000 大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室云南大理671000

【背景】形成生物被膜是表皮葡萄球菌的主要致病方式,双组分系统(two-component regulatory system,TCS)VraSR和SrrAB与细菌的生长、生物被膜形成等多种生物学表型密切相关。敲除表皮葡萄球菌SE1457 vraSR后细胞壁变薄,生物被膜形成量降... 详细信息

【背景】形成生物被膜是表皮葡萄球菌的主要致病方式,双组分系统(two-component regulatory system,TCS)VraSR和SrrAB与细菌的生长、生物被膜形成等多种生物学表型密切相关。敲除表皮葡萄球菌SE1457 vraSR后细胞壁变薄,生物被膜形成量降低,而敲除srrAB后生长进入稳定期的时间延长,生物被膜形成量也降低,且TCS-VraSR和SrrAB均通过ica途径调控表皮葡萄球菌生物被膜的形成。ica操作子是表皮葡萄球菌生物被膜形成的重要调节元件,由icaADBC这4个开放阅读框(openreadingframe,ORF)和1个转录方向相反的icaR组成,IcaR是icaADBC的抑制子。【目的】探索TCS-VraSR和SrrAB协同调控表皮葡萄球菌生长及生物被膜形成中的作用,为防控表皮葡萄球菌引起的持续性感染奠定基础。【方法】构建pKOR1-ΔvraSR重组质粒,经大肠杆菌DC10B修饰后转入ΔsrrAB,通过同源重组在ΔsrrAB突变株的基础上进一步敲除vraSR基因,疑似ΔvraSR-srrAB突变株经PCR、RT-PCR和测序验证。检测ΔvraSR-srrAB突变株的生长、生物被膜形成及药物敏感性。【结果】成功构建表皮葡萄球菌ΔvraSR-srrAB突变株。与表皮葡萄球菌SE1457野生株、ΔvraSR和ΔsrrAB突变株相比,ΔvraSR-srrAB突变株生长更为迟缓,药物敏感性增强,几乎不能形成生物被膜;RT-qPCR显示,ΔvraSR和ΔsrrAB突变株中icaA转录水平较SE1457下调约13%-17%,icaR转录水平上调约5-9倍,而ΔvraSR-srrAB突变株中icaA转录水平较SE1457下调约6%,icaR转录水平上调约14倍。【结论】VraSR-SrrAB可能通过ica途径协同调控表皮葡萄球菌生物被膜形成,对压力应激胁迫作用还需进一步研究。

关键词： VraSR SrrAB 双组分信号转导系统生物被膜表皮葡萄球菌

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