检索结果-内蒙古大学图书馆

传染病信息 2020年第5期33卷 407-411,415页

作者：思越宋曦玉杨继磊雷迎峰张芳琳程林峰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西安710032

目的利用杆状病毒表达系统(baculovirus expression vector systems,BEVS)构建含有克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV)S基因的重组杆状病毒,并在sf9昆虫细胞中表达出核衣壳蛋白(nucleoprotein,NP)。方法将合成的CCHFV S基因定向克隆入杆状病毒转移载体pFastBac^TM Dual,获得重组的转移载体pFastBac^TM Dual-CCHFV-S。将其转化到*** DH10Bac^TM感受态细胞中,筛选得到重组杆状病毒杆粒rBV-Bacmid-S。用Cellfectin®II试剂将rBV-Bacmid-S转染入sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-CCHFV-S。通过IFA和Western blot检测CCHFV S基因的表达。结果构建了含有S基因的rBV-CCHFV-S,在sf9昆虫细胞中成功表达CCHFV NP。结论利用BEVS可以成功表达CCHFV NP,这为研究CCHFV NP的生物学特性,研制特异性的治疗药物和预防控制疫苗奠定基础。

关键词：克里米亚-刚果出血热病毒杆状病毒表达系统核衣壳蛋白

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逆向设计在全科医学专业基础教学中的应用

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中国医药导报 2020年第1期17卷 82-85页

作者：柏银兰吕欣路延之康健吴兴安张芳琳空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室

加强全科医生培养是我国未来卫生事业发展所必须。逆向设计是用于设计教育课程的一种方法,是以学习目标为终点的教学方式。本文从医学基础主干课《医学微生物学》课程特点出发,根据逆向设计教学的程序,从明确教学实施对象、确定学习目... 详细信息

加强全科医生培养是我国未来卫生事业发展所必须。逆向设计是用于设计教育课程的一种方法,是以学习目标为终点的教学方式。本文从医学基础主干课《医学微生物学》课程特点出发,根据逆向设计教学的程序,从明确教学实施对象、确定学习目标、设计和实施评估方法、教学课程的设置和教学方法的选择、课程的实施和总结评价5个方面进行设计和讨论,探索逆向设计用于医学院校全科医学基础教学的方式。

关键词：逆向设计全科医学基础教学医学微生物学

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炎症小体在结核分枝杆菌感染中的作用研究进展

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中国病原生物学杂志 2019年第7期14卷 857-859,863页

作者：刘丽婷吴利先王国富大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室

炎症小体(inflammasome)是由应激,组织损伤和细胞内感染等途径激活的多蛋白复合物,它通过激活半胱天冬酶-1(caspase-1)从而促进IL-1β,IL-18等有效促炎细胞因子的释放,引起炎症反应和细胞焦亡。它是先天免疫中的一部分,和多种疾病相关,... 详细信息

炎症小体(inflammasome)是由应激,组织损伤和细胞内感染等途径激活的多蛋白复合物,它通过激活半胱天冬酶-1(caspase-1)从而促进IL-1β,IL-18等有效促炎细胞因子的释放,引起炎症反应和细胞焦亡。它是先天免疫中的一部分,和多种疾病相关,研究表示结核分枝杆菌感染巨噬细胞亦可激活NLRP3和AIM2炎症小体并引起炎症反应,本文就NLRP3炎症小体和AIM2炎症小体在结核分枝杆菌感染中的作用进展做一综述。

关键词： NLRP3炎症小体 AIM2炎症小体结核分枝杆菌

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非结核分枝杆菌基因分型的研究进展

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中国病原生物学杂志 2019年第3期14卷 371-372,F0003页

作者：翟凯新吴利先大理大学基础医学院微生物与免疫学教研室云南大理671000

非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM)是除结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌以外的所有的分枝杆菌的总称。近年来,非结核分枝杆菌病呈上升趋势,NTM可侵犯以肺部病变为主的全身各部分组织器官。由于非结核分枝杆菌菌种多样,基因... 详细信息

非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM)是除结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌以外的所有的分枝杆菌的总称。近年来,非结核分枝杆菌病呈上升趋势,NTM可侵犯以肺部病变为主的全身各部分组织器官。由于非结核分枝杆菌菌种多样,基因型复杂,且不同菌株毒力与耐药性不同。其基因分型将为临床的诊断和治疗提供了有力的依据。目前非结核分枝杆菌基因分型技术主要分为非核酸法(传统方法)和核酸法(分子生物法)。本文就当前主要的核酸分型技术做一综述。

关键词：非结核分枝杆菌基因分型分子生物技术综述

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Rasmussen脑炎患者脑组织的转录组学特征分析

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第三军医大学学报 2020年第14期42卷 1407-1413页

作者：罗乔荔王一松关宇光陈思畅范东瀛王培刚栾国明安静首都医科大学基础医学院病原生物学系微生物学教研室北京100069 首都医科大学三博脑科医院功能神经外科北京100093

目的探究Rasmussen脑炎(Rasmussen encephalitis,RE)患者脑组织的转录组学特征。方法采用RNA-seq的方法,对2008年4月至2013年12月首都医科大学附属北京三博脑科医院收治的RE及颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)患者(对照)中各选取4... 详细信息

目的探究Rasmussen脑炎(Rasmussen encephalitis,RE)患者脑组织的转录组学特征。方法采用RNA-seq的方法,对2008年4月至2013年12月首都医科大学附属北京三博脑科医院收治的RE及颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)患者(对照)中各选取4例脑组织的基因表达谱进行检测。结果聚类分析显示RE患者及对照脑组织差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)谱存在明显差异。共筛选出1285个DEGs,其中782个(60.9%)下调,503个(39.1%)上调。上调表达的DEGs主要富集于神经元信号转导相关的通路,可能与RE患者频繁的癫痫发作相关;下调表达的DEGs主要富集于细胞骨架、细胞周期及趋化作用相关的通路,可能与RE患者脑组织中神经元的丢失及再生以及部分病原体感染后的免疫应答相关。上调表达的关键基因为TAS2R40、HTR4、NAP1L2,下调表达的关键基因为CXXC1、SEPTIN8、CCR7。结论RE患者脑组织的转录组学具有明显特征,DEGs主要富集于神经元信号转导、细胞周期以及趋化作用相关的通路中。

关键词： Rasmussen脑炎癫痫 RNA-Seq 转录组学

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大理地区13株疑似非结核分枝杆菌临床分离株的鉴定

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中国病原生物学杂志 2019年第3期14卷 319-322页

作者：程睿儇王国富吴利先大理大学基础医学院微生物与免疫学教研室云南大理671000

目的对云南大理地区13株疑似非结核分枝杆菌(Non-Tuberculous mycobacteria,NTM)进行鉴定,了解其菌种构成。方法大理州疾控中心提供的疑似非结核分枝杆菌13株,经罗氏培养基(L-J)、噻吩-2-羧酸肼(TCH)和对硝基苯甲酸(PNB)鉴别培养基初步... 详细信息

目的对云南大理地区13株疑似非结核分枝杆菌(Non-Tuberculous mycobacteria,NTM)进行鉴定,了解其菌种构成。方法大理州疾控中心提供的疑似非结核分枝杆菌13株,经罗氏培养基(L-J)、噻吩-2-羧酸肼(TCH)和对硝基苯甲酸(PNB)鉴别培养基初步鉴别培养确定为NTM后分别通过16S rRNA、hsp65和rpoB基因片段测序进行菌种鉴定。结果 13株疑似NTM临床分离株经16S rRNA、rpoB和hsp65基因DNA测序分析鉴定为NTM 11株(84.62%),束村氏菌1株(7.69%),戈登氏菌1株(7.69%)。11株NTM中鸟分枝杆菌(***)9株,脓肿分支杆菌(***)2株。结论经抗酸染色筛查、L-J和PNB/TCH培养基初步鉴定为NTM的临床分离株通过3种不同基因测序分析鉴定为NTM、束村氏菌和戈登氏菌,以NTM中的鸟分枝杆菌占多数。

关键词：非结核分枝杆菌 16S rRNA rpoB hsp65 序列分析菌种鉴定

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两类不孕女性行IVF/ICSI-ET术后妊娠结局的影响因素

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贵州医科大学学报 2024年第10期49卷 1498-1505页

作者：赵慧敏王聪李世军罗罡康颖倩贵州医科大学公共卫生与健康学院&环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州贵阳561113 贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳561113 贵州省普通高校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳561113 贵阳市妇幼保健院生殖中心贵州贵阳550001 贵州省疾病预防控制中心细菌科贵州贵阳550004

目的探讨输卵管性不孕(TFI)与多囊卵巢综合征(PCOS)不孕症患者行体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)-胚胎移植(ET)后妊娠结局的相关影响因素。方法选取行IVF/ICSI助孕的TFI和PCOS不孕症患者77例为研究对象,分为TFI组(n=45)和PCOS组... 详细信息

目的探讨输卵管性不孕(TFI)与多囊卵巢综合征(PCOS)不孕症患者行体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)-胚胎移植(ET)后妊娠结局的相关影响因素。方法选取行IVF/ICSI助孕的TFI和PCOS不孕症患者77例为研究对象,分为TFI组(n=45)和PCOS组(n=32),根据是否发生妊娠分为TFI组妊娠者(n=21)和未妊娠者(n=24)、PCOS组妊娠者(n=10)及未妊娠者(n=22),收集各组不孕症患者的一般临床资料[年龄、文化水平、体质量指数(BMI)、月经周期、既往阴道炎史、不孕类型、不孕年限及既往孕产史];采集各组不孕症患者月经第2~3天静脉血,检测血清中抗苗勒氏管激素(AMH)及基础性激素水平[促卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、催乳素(PRL)及睾酮(T)],并计算FSH/LH;收集各组患者进入IVF/ICSI周期后的促排卵资料[控制性超促排卵(COH)方案、促性腺激素(Gn)总剂量、Gn总天数]及注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)日血清FSH、LH、E2、P水平;各组不孕症患者卵泡成熟后取卵,收集实验室相关资料(总获卵数、成熟卵数、受精方式及优质卵数)及移植情况(移植胚胎数量、移植胚胎类型及移植日子宫内膜厚度),并计算成熟卵数占卵子总数比例;行IVF/ICSI助孕4~6周,收集各组ET后的妊娠结局,采用单因素和多因素logistic回归分析影响两类患者妊娠结局的因素。结果PCOS组不孕症患者年龄、Gn总剂量低于TFI组(P<0.05),月经稀发、原发性不孕、孕产史、异位妊娠史、总获卵数及成熟卵数高于TFI组(P<0.05);TFI组不孕症患者中未妊娠者基础P水平低于妊娠者(P<0.05),Gn总剂量、Gn总天数及卵裂期ET比例高于妊娠者(P<0.05);PCOS组不孕症患者中妊娠者的年龄、月经周期正常比例低于TFI妊娠者(P<0.05),基础FSH激素水平、总获卵数及成熟卵数高于TFI组妊娠者(P<0.05);PCOS组不孕症患者中未妊娠者月经周期正常、继发性不孕患者比例低于TFI组未妊娠者(P<0.05),基础LH激素水平、Gn总剂量、注射HCG日LH水平、总获卵数及成熟卵数高于TFI组未妊娠者(P<0.05);TFI组不孕症患者妊娠结局的logistic回归分析结果未筛选出有统计学意义的指标。结论一般临床资料、血清激素水平、促排卵及卵细胞实验室培养情况等指标未对行IVF/ICSI-ET的TFI及PCOS不孕症患者妊娠结局产生影响。

关键词：体外受精胚胎移植多囊卵巢综合征妊娠结局不孕症卵胞浆内单精子注射输卵管性不孕

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结核分枝杆菌MPT64单克隆抗体的制备与可变区序列鉴定

结核分枝杆菌MPT64单克隆抗体的制备与可变区序列鉴定

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中国防痨协会第33届全国学术大会暨中国防痨科技奖颁奖大会

作者：谢燕玲梁璇白鹭康健路延之任瑞宁唤唤柏银兰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西北大学生命科学学院

目的制备结核分枝杆菌(MTB)分泌蛋白MPT64的单克隆抗体(mAb),并鉴定其编码重链及轻链可变区的序列。方法采用分子生物学方法构建MPT64原核表达载体,亲和层析法获得重组的纯化蛋白。用纯化的MPT64蛋白免疫小鼠,将免疫小鼠的脾脏细胞与SP... 详细信息

目的制备结核分枝杆菌(MTB)分泌蛋白MPT64的单克隆抗体(mAb),并鉴定其编码重链及轻链可变区的序列。方法采用分子生物学方法构建MPT64原核表达载体,亲和层析法获得重组的纯化蛋白。用纯化的MPT64蛋白免疫小鼠,将免疫小鼠的脾脏细胞与SP2/0细胞融合,筛选可分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,检测抗体的特异性及亚类。提取杂交瘤细胞RNA并逆转录为cDNA,PCR扩增可变区编码基因序列,测序后对比分析。结果成功构建了MTP64的原核表达载体pET28a (+)-MPT64。SDS-PAGE和Western blot结果显示,重组菌表达了目的蛋白,亲和层析法获得了纯化的MPT64重组蛋白。杂交瘤细胞经克隆化之后,ELISA和Western结果显示,获得了可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株。抗MPT64的mAb可识别MTB菌体中的MPT64抗原,抗体亚类为IgG1。可变区序列测序结果显示,成功获得了该mAb重链和轻链的编码序列,与已报道的抗体可变区序列不完全一致,证明该mAb的序列具有唯一性。结论本研究成功制备了MPT64的mAb,并鉴定了编码该mAb重链和轻链的可变区序列,为该mAb用于结核病的诊断与防治提供了材料基础。

关键词：分枝杆菌,结核 MPT64 单克隆抗体可变区序列

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过表达冷休克蛋白重组耻垢分枝杆菌的构建及其耐药性研究

过表达冷休克蛋白重组耻垢分枝杆菌的构建及其耐药性研究

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中国防痨协会第33届全国学术大会暨中国防痨科技奖颁奖大会

作者：路延之康健宁唤唤梁璇许艳慧任瑞柏银兰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西北大学生命科学学院

目的通过构建过表达冷休克蛋白（cold shock proteins,CSP）的重组耻垢分枝杆菌（recombinant Mycobacterium smegmatis,rMs）,观察rMs对抗结核药物的敏感性,明确CSP在Ms耐药中的作用。方法以Ms实验室菌株mc 155基因组为模板,PCR扩增B... 详细信息

目的通过构建过表达冷休克蛋白（cold shock proteins,CSP）的重组耻垢分枝杆菌（recombinant Mycobacterium smegmatis,rMs）,观察rMs对抗结核药物的敏感性,明确CSP在Ms耐药中的作用。方法以Ms实验室菌株mc 155基因组为模板,PCR扩增B型冷休克蛋白（cold shock protein type B,CspB）基因,克隆入大肠-分枝杆菌穿梭表达载体,对重组质粒进行PCR、酶切和测序鉴定。将重组质粒电转化Ms,涂布卡那霉素抗性7H10平板,PCR鉴定阳性转化子。qRT-PCR检测rMs菌体内中cspB基因转录水平。采用大肠杆菌重组表达蛋白CspB制备的多克隆抗体,Western-blot检测rMs菌体内CspB蛋白表达水平。rMs接种到含有梯度浓度利福平或链霉素的7H9液体培养基内,37℃静置培养24 h,随后加入刃天青继续培养24 h,观察利福平、链霉素对rMs的最小抑菌浓度（minimal inhibitoryconcentration,MIC）。结果 PCR法从Ms基因组扩增出450 bp的cspB基因,成功构建分枝杆菌过表达重组质粒PW27-CspB。重组质粒电转化Ms,PCR鉴定得到阳性转化子。经qRT-PCR检测,证实cspB基因在rMs中的转录水平比Ms上调了15倍。Western-blot检测结果表明,正常培养条件下,CspB表达量很低,无特异性表达条带;而rMs在15 kDa处有明显阳性条带,表明rMs中CspB蛋白表达水平明显增加。刃天青法检测结果显示,Ms对利福平和链霉素的MIC分别为31.25μg/ml和0.05μg/ml,而rMs对利福平和链霉素的MIC分别为62.5μg/ml和0.01μg/ml,证明rMs对利福平耐药性升高、对链霉素的耐药性降低。结论本研究成功构建了过表达CspB的rMs菌株,证明CspB介导了Ms对利福平和链霉素的耐药,为Ms及结核分枝杆菌的耐药机制和防治研究奠定了理论和实验基础。

关键词：冷休克蛋白耻垢分枝杆菌重组耐药

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L,D-转肽酶LdtMt2-厄他培南加合物的新状态I-plus结构

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生物化学与生物物理进展 2020年第9期47卷 989-997页

作者：王晓燕秦亚玲韩群辜锡恩晏紫付奎李德峰邓锴湖北医药学院基础医学院生化教研室十堰442000 中国科学院微生物研究所微生物资源前期开发国家重点实验室北京100101 中国科学院大学北京100049 南昌大学玛丽女王学院南昌330000 湖北医药学院附属人民医院生殖医学中心十堰442000 胚胎干细胞研究湖北省重点实验室十堰442000

具有多重耐药性和广泛耐药性的结核分枝杆菌菌株正在全球范围内传播,因此迫切需要新的抗结核药物.结核分枝杆菌的L,D-转肽酶LdtMt2直接参与肽聚糖的形成、细菌毒性和β-内酰胺抗性.该酶是潜在的抗结核靶标,可以被碳青霉烯类抗生素抑制,... 详细信息

具有多重耐药性和广泛耐药性的结核分枝杆菌菌株正在全球范围内传播,因此迫切需要新的抗结核药物.结核分枝杆菌的L,D-转肽酶LdtMt2直接参与肽聚糖的形成、细菌毒性和β-内酰胺抗性.该酶是潜在的抗结核靶标,可以被碳青霉烯类抗生素抑制,碳青霉烯类抗生素是FDA批准的用于治疗肺结核的药物.据报道,LdtMt2与碳青霉烯类抗生素(如厄他培南、亚胺培南和美洛培南)相互作用时,存在两种不同的中间状态,即状态Ⅰ和Ⅱ.状态Ⅰ被认为是初始加合物形成状态,而状态Ⅱ被认为是稳定的蛋白质-配体相互作用状态,并伴有碳青霉烯类抗生素和蛋白质的局部构象排列.本文报告了一个LdMt2-ertapenem新中间状态Ⅰ-plus,具有与状态Ⅱ相同的碳青霉烯类抗生素构象和与状态Ⅰ相似的局部蛋白质构象.该新状态是从状态Ⅰ转变为状态Ⅱ的中间状态,构象变化发生在厄他培南分子而不是蛋白质.我们的工作有助于阐明碳青霉烯类抗生素对LdtMt2作用后发生的变化,并与其他报道的中间状态一起揭示L,D-转肽酶如何与碳青霉烯类抗生素相互作用.

关键词： L D-转肽酶 LdtMt2 厄他培南 β-内酰胺

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