检索结果-内蒙古大学图书馆

复旦学报（医学版） 2005年第5期32卷 513-516,F0002页

作者：任涛蔡映云金美玲李传友袁正宏田苗赵冰复旦大学附属中山医院呼吸病研究所北京市结核病胸部肿瘤研究所北京101149 复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

目的观察卡介菌多糖核酸(BCGPSN)对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫保护作用及其免疫学机制。方法将BALB/c小鼠48只随机分成BCGPSN免疫治疗组和结核菌感染对照组,每组24只。两组小鼠制成结核分枝杆菌感染模型。感染后1周,每天分别腹腔内注射... 详细信息

目的观察卡介菌多糖核酸(BCGPSN)对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫保护作用及其免疫学机制。方法将BALB/c小鼠48只随机分成BCGPSN免疫治疗组和结核菌感染对照组,每组24只。两组小鼠制成结核分枝杆菌感染模型。感染后1周,每天分别腹腔内注射BCGPSN(10mg/kg)或生理盐水(10mL/kg),连续7d。感染后3周和4周每组处死12只小鼠,检测小鼠体重以及肺、脾脏湿重,观察肺脏病理改变,取肺、脾组织进行结核菌培养和菌落计数,用real-timePCR法测定肺、脾组织IFNγmRNA、IL10mRNA和IL4mRNA的表达。结果感染后4周,治疗组小鼠体重和脾脏重量高于对照组,肺脏重量低于对照组,且肺部病变较轻。感染后3周和4周,治疗组小鼠肺、脾组织结核菌落均低于对照组,小鼠肺组织IFNγmRNA表达与对照组无差别,IL10mRNA和IL4mRNA的表达低于对照组。感染后3周,治疗组小鼠脾组织IFNγmRNA表达与对照组相似;感染后4周,脾组织治疗组脾组织IFNγmRNA的表达高于对照组。感染后3周和4周,IL10mRNA和IL4mRNA的表达低于对照组。结论BCGPSN可减轻结核病小鼠体重下降,减少结核病小鼠肺和脾脏结核菌数量,并增强Th1型免疫反应。

关键词：卡介菌多糖核酸分枝杆菌结核细胞因子

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肠-肝轴与非酒精性脂肪性肝病

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微生物与感染 2014年第2期9卷 65-70页

作者：丁佳吴健复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

肠道菌群组成和数量的改变影响宿主的能量代谢、免疫应答和炎症反应状态。非酒精性脂肪性肝病患者常伴有小肠细菌过度生长或某些菌群种类和数量的改变,以及肠道黏膜通透性增加。肠道细菌通过增强肝脏脂肪合成、诱导机体胰岛素抵抗、激... 详细信息

肠道菌群组成和数量的改变影响宿主的能量代谢、免疫应答和炎症反应状态。非酒精性脂肪性肝病患者常伴有小肠细菌过度生长或某些菌群种类和数量的改变,以及肠道黏膜通透性增加。肠道细菌通过增强肝脏脂肪合成、诱导机体胰岛素抵抗、激活天然免疫系统相关分子模式等机制,诱发肝脏炎症反应,启动纤维化进程,促进单纯性脂肪变向脂肪性肝炎发展。鉴定影响机体能量代谢和炎症反应的肠道菌群及其产物将为阐明肠-肝轴对肝脏炎症发生、发展所起的作用奠定基础,为揭示非酒精性脂肪性肝病发生、发展的机制开辟新思路,为该病的防治探索新策略。

关键词：肠-肝轴非酒精性脂肪性肝病肠道菌群

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表皮葡萄球菌PhoU同源物(SERP0316)的抗体制备及免疫鉴定

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微生物与感染 2014年第3期9卷 174-181页

作者：韩海燕王小飞武有聪许涛刘华勇蔡霞瞿涤复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

表皮葡萄球菌可在植入性医疗材料表面形成生物膜,对多种抗生素耐受,而持留菌的形成是导致细菌生物膜耐药的原因之一。研究发现,大肠埃希菌中PhoU可影响持留菌的形成,与细菌对多种抗生素及压力条件的耐受相关,但表皮葡萄球菌中PhoU的功... 详细信息

表皮葡萄球菌可在植入性医疗材料表面形成生物膜,对多种抗生素耐受,而持留菌的形成是导致细菌生物膜耐药的原因之一。研究发现,大肠埃希菌中PhoU可影响持留菌的形成,与细菌对多种抗生素及压力条件的耐受相关,但表皮葡萄球菌中PhoU的功能仍不清楚。生物信息学分析显示,在表皮葡萄球菌中存在2个phoU同源基因,其中serp0956位于pst操纵子中,命名为phoU1;另一个编码功能未知蛋白的phoU基因同源物(serp0316)命名为phoU2。前期研究显示,敲除phoU1并不影响表皮葡萄球菌生长、生物膜形成等生物学特性,为此本研究对PhoU2进行了初步探讨。利用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测phoU2基因在表皮葡萄球菌SE1457不同生长时期的转录水平,发现其在细菌生长不同时间点持续表达,其中对数期(6h)表达量相对较高。为进一步研究表皮葡萄球菌中PhoU2的表达情况,对PhoU2蛋白进行原核表达和纯化,并用纯化的重组PhoU2蛋白免疫小鼠制备PhoU2多克隆抗体。在此基础上,利用蛋白免疫印迹法检测PhoU2在SE1457菌株不同生长时间点的表达水平,结果显示PhoU2在细菌生长对数期和平台期均有表达。另外,在不同的表皮葡萄球菌临床分离株中均检测到PhoU2蛋白表达,表明PhoU2具有一定的保守性。以上研究提示,PhoU2可能作为PhoU的功能同源物发挥一定的作用,为进一步研究表皮葡萄球菌PhoU2的生物学功能及其在生物膜和持留菌形成中的作用奠定了基础。

关键词：表皮葡萄球菌 phoU同源基因原核表达持留菌

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二代测序技术在结核分枝杆菌研究中的应用进展

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微生物与感染 2015年第1期10卷 54-60页

作者：徐鹏甘明宇高谦复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

结核病是由结核分枝杆菌引起的全球第二大传染病。二代测序技术为从基因组水平研究结核分枝杆菌提供了重要的研究方法。本文从结核病流行病学、结核分枝杆菌耐药和进化及相关生物信息学等方面,介绍二代测序技术在结核分枝杆菌研究中的... 详细信息

结核病是由结核分枝杆菌引起的全球第二大传染病。二代测序技术为从基因组水平研究结核分枝杆菌提供了重要的研究方法。本文从结核病流行病学、结核分枝杆菌耐药和进化及相关生物信息学等方面,介绍二代测序技术在结核分枝杆菌研究中的应用进展。

关键词：结核分枝杆菌二代测序基因组

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Ⅱ型成簇恒间隔短回文序列及相关蛋白系统（CRISPR／Cas）研究近况

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第10期34卷 798-802页

作者：王蕾马丽俐孙桂芹李蒙策力木格陈力复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室 200032 浙江中医药大学附属第一医院杭州340006

1987年在大肠杆菌K12的碱性磷酸酶（ iap）基因的3′侧翼区首先发现了一类具有短回文特质的DNA重复序列［1］。2002年，这类结构被正式命名为成簇恒间隔短回文重复序列（CRISPR），CRISPR关联蛋白也同时得以命名［2］。2005年，3个研究... 详细信息

1987年在大肠杆菌K12的碱性磷酸酶（ iap）基因的3′侧翼区首先发现了一类具有短回文特质的DNA重复序列［1］。2002年，这类结构被正式命名为成簇恒间隔短回文重复序列（CRISPR），CRISPR关联蛋白也同时得以命名［2］。2005年，3个研究课题组同时发现间隔序列可能源自于细菌染色体外的其他遗传物质，如噬菌体和接合质粒，并推论CRISPR／Cas系统可以抵制入侵的外源 DNA［3-5］。2007年，来源于侵染噬菌体的新的整合间隔序列得到实验验证；研究同时建立了新获得的间隔序列与细菌抵抗该噬菌体侵袭的直接关联关系，证明了CRISPR／Cas系统是抵抗噬菌体的获得性免疫系统［6］。 Marraffini和Sontheimer［7］证实CRISPR／Cas系统对于接合现象和质粒转化的干扰作用。最近基于CRISPR／Cas作用机制的研究，发现了其在细菌毒力、致病性以及如何逃避宿主免疫系统等方面的相关作用［8］。

关键词： Cas系统回文序列蛋白系统成簇 DNA重复序列大肠杆菌K12 Ⅱ型细菌染色

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猪乙脑病毒IgG抗体间接免疫荧光检测方法的建立与初步应用

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中国人兽共患病学报 2006年第2期22卷 150-152页

作者：朱兆奎张曦滕峥赵百慧李燕婷袁正宏卢伟上海市疾病预防控制中心上海200336 复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部重点实验室上海200032

目的建立检测猪血清中流行性乙型脑炎病毒(JEV)IgG抗体的间接免疫荧光试验(IFA)。方法用乙脑病毒感染C6/36白蚊伊蚊细胞制备抗原片,建立检测猪血清中JEV-IgG抗体的IFA方法,并用于猪乙脑血清流行病学调查。结果成功建立特异的猪JEV-IgG的... 详细信息

目的建立检测猪血清中流行性乙型脑炎病毒(JEV)IgG抗体的间接免疫荧光试验(IFA)。方法用乙脑病毒感染C6/36白蚊伊蚊细胞制备抗原片,建立检测猪血清中JEV-IgG抗体的IFA方法,并用于猪乙脑血清流行病学调查。结果成功建立特异的猪JEV-IgG的IFA检测方法,并对50份母猪、55份仔猪和65份屠宰猪的血清进行检测。乙脑血清抗体效价≥1:200的分别为88.00%,10.91%和24.62%。结论建立的IFA方法能较好的用于猪血清乙脑流行病学调查。

关键词：乙型脑炎病毒间接免疫荧光 IgG抗体

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质粒介导16S rRNA甲基化酶肺炎克雷伯菌临床分离株的检测及分子流行病学研究

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中华检验医学杂志 2009年第3期32卷 268-273页

作者：余方友陈婵杜卫良李国安张雪青陈增强陈坚王良兴朱涛瞿涤温州医学院附属第一医院检验科 325000 温州医学院附属第一医院呼吸科 325000 复旦大学上海医学院教育部卫生部医学分子病毒学重点实验室

目的调查16SrRNA甲基化酶在肺炎克雷伯菌临床分离株中的流行情况。方法收集我院2006年1月至2007年9月从临床标本中分离的肺炎克雷伯菌337株，所有菌株均为非重复株。菌种鉴定采用全自动微生物分析仪，庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素的药... 详细信息

目的调查16SrRNA甲基化酶在肺炎克雷伯菌临床分离株中的流行情况。方法收集我院2006年1月至2007年9月从临床标本中分离的肺炎克雷伯菌337株，所有菌株均为非重复株。菌种鉴定采用全自动微生物分析仪，庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素的药敏试验采用琼脂稀释法。超广谱B内酰胺酶（ESBLs）检测采用美国临床和实验室标准协会（CLSI）规定的纸片确证法。使用PCR检测16SrRNA甲基化酶基因、整合酶基因和ESBL基因。接合试验检测质粒的可转移性；脉冲场电泳分析菌株的同源性。结果337株肺炎克雷伯菌对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星的耐药率分别为19．0％（64／337）、8．3％（28／337）和16．3％（55／337）。21株16SrRNA甲基化酶基因阳性，阳性率为6．2％（21／337），其中13株rmtB阳性、3株armA阳性、5株rmtB和armA同时阳性。所有16SrRNA甲基化酶基因阳性株对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星同时耐药且都为高度耐药（MICs≥256彬L），21株甲基化酶基因阳性株有19株产ESBLs，ESBL基因主要为CTX-M-14-like、CTX-M-15-like和SHV．12-like。21株均为Ⅰ类整合酶基因阳性。13株通过接合试验把质粒传递给受体菌***53。所有接合子Ⅰ类整合酶基因阳性、blaTEM-1基因阳性、产ESBLs及对庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星和复方磺胺甲略唑耐药，对其他抗菌药物敏感。接合子ESBL基因型与供菌一致。21株16SrRNA甲基化酶基因阳性株经脉冲场凝胶电泳（PFGE）分成14个基因型，主要为A型和I型。结论armA和rmtB型16SrRNA甲基化酶基因已经在肺炎克雷伯菌中播散，既可通过克隆株播散也可通过接合性质粒在不同菌株间播散。

关键词：克雷伯菌,肺炎 RNA,核糖体,16S 甲基转移酶类质粒

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胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸对慢性支气管哮喘小鼠气道重塑的影响

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中华结核和呼吸杂志 2006年第9期29卷 612-616页

作者：揭志军金美玲蔡映云袁正宏胡芸文徐扬任涛杨振华上海第二医科大学附属新华医院呼吸科复旦大学附属中山医院呼吸疾病研究所上海200032 复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室

目的研究含非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤（CpG）寡脱氧核苷酸（CpG-ODN）能否预防或减轻慢性支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道重塑的发生。方法 40只雌性清洁级C57BL／6小鼠按随机数字表法分为4组，每组10只。（1）慢性哮喘组（A组）... 详细信息

目的研究含非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤（CpG）寡脱氧核苷酸（CpG-ODN）能否预防或减轻慢性支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道重塑的发生。方法 40只雌性清洁级C57BL／6小鼠按随机数字表法分为4组，每组10只。（1）慢性哮喘组（A组）：分别于第1、14天小鼠腹腔注射1ml致敏液[卵蛋白（OVA，10μg）＋氢氧化铝凝胶（100μg）]；从第21天开始雾化吸入2．5％OVA溶液，每次30min，每周3次，连续8周。（2）CpG—ODN干预组（B组）：在OVA致敏的同时给予浓度为60μg／ml的CpG—ODN腹腔注射1ml共2次，以后每2周腹腔注射1次共4次。（3）GpC—ODN对照组（C组）：将CpG替换为鸟嘌呤-磷酸-胞嘧啶（GpC，剂量及用法同CpG-ODN）作为对照。（4）生理盐水（NS）对照组（D组）：给予NS进行致敏（每次1ml腹腔注射）和激发（用NS雾化吸入）。在末次激发24h后所有小鼠取血测嗜酸粒细胞（EOS）数和血清IgE；收集支气管肺泡灌洗液（BALF）做细胞分类计数，用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测上清液中自细胞介素13（IL-13）和转化生长因子β1（TGF—β1）的浓度。取左肺组织行苏木精-伊红（HE）染色和Masson三色染色，用抗α平滑肌肌动蛋白（α—SMA）抗体和抗TGF—β1抗体行免疫组化染色。结果 A组外周血EOS计数为（89±10）×10^4／ml、血清IgE为（279±53）ng／ml，BALF中EOS计数和分类分别为（6．30±1．30）×10^5／ml、0．181±0．030，A组IL-13浓度为（4015±361）pg／ml、TGF—β1浓度为（356±64）pg／ml，以上数值与D组比较差异有统计学意义（t值分别为24．0、15．7、14．7、18．4、12．0和18．9，P均〈0．01）；A组Masson三色染色、α-SMA、TGF-β1阳性染色面积百分比[分别为（29．7±4．2）％、（45±7）％、（34±4）％]与D组比较差异也有统计学意义（t值分别为18．0、15．6和17．9，P均〈0．01）。应用CpG-ODN干预后（B组）的Masson三色染色、α—SMA、TGF—β1阳性染色面积百分比[分别为（13．8±3．2）％、（25±3）％、（18±4）％]与A组比较差异也有统计学意义（t值分别为9．5、8．9、9．8，P均〈0．05）。结论应用CpG-ODN干预慢性哮喘模型，不仅能抑制Th2细胞反应和EOS肺浸润，还能抑制气道重塑的发生和发展，它可能是通过抑制TGF—β1、IL-13等因子而抑制气道重塑的。

关键词：哮喘气道重塑炎症小鼠 CpG-寡脱氧核苷酸

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一种新乙型肝炎病毒表型耐药分析方法的建立

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中华传染病杂志 2014年第5期32卷 257-262页

作者：李新艳陈良马张妹毛日成黄玉仙张继明上海市公共卫生临床中心肝病科 201508 复旦大学上海医学院教育部、卫生部医学分子病毒学重点实验室复旦大学附属华山医院感染科

目的建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）... 详细信息

目的建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）,继而在RT区上、下游设计限制酶切位点,改造后的质粒分别命名为mPHY536207及mPHY97.以CHB患者血清中分离到的拉米夫定（LAM）耐药变异株和阿德福韦酯（ADV）耐药变异株为骨架,分别构建LAM耐药株质粒PHY634和ADV耐药株质粒PHY6923,再用耐药株的RT区段取代mPHY536207中的RT区构建重组质粒,命名为RT634（LAM耐药）及RT6923（ADV耐药）.分别用RT区置换前、后的质粒转染Huh7细胞,用ELISA法检测分泌到细胞上清液中的HBsAg水平,用实时PCR和Southern印迹法检测细胞内HBVDNA水平.结果成功构建B型和C型野毒株表达质粒PHY536207和PHY97,经转染Huh7细胞证实有HBV复制能力,6孔细胞培养板中每孔细胞所抽提的HBV DNA均＞1＆#215;107拷贝/mL;在RT区上游设计的Pst Ⅰ酶切位点不影响HBV的表型（HBsAg的表达及HBV DNA的复制）.在PHY634及RT634转染实验中,HBV DNA水平却并未随LAM浓度的升高而明显下降,50％抑制浓度（IC50）＞100 μmol/L,mPHY536207仅为0.18 μmol/L;PHY6923及RT6923转染实验中,HBV DNA对外加的ADV不敏感,IC50＞100 μmol/L,明显高于mPHY536207（1.2 μmol/L）.结论本研究建立了一种新的HBV表型耐药分析方法,可通过RT区置换来研究RT区变异对药物敏感性的影响.

关键词：肝炎病毒,乙型 RNA指导的DNA聚合酶抗药性表型

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DNA的识别分子及其识别模式

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自然科学进展 2008年第6期18卷 609-614页

作者：张伟娟徐洁杰徐薇熊思东复旦大学上海医学院免疫学系免疫生物学研究所上海200032 复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

固有免疫以TLR9依赖和TLR9非依赖的方式对DNA识别,在保护性免疫和病理性自身免疫反应中发挥重要作用.目前发现TLR9,DAI(DLM-1/ZBP1),RIG-I,尚未定义的识别B-DNA的分子,损伤DNA结合分子如:DNA-PKcs,Ku70,p53,ATM,ATR和含有SAP或PHD结构... 详细信息

固有免疫以TLR9依赖和TLR9非依赖的方式对DNA识别,在保护性免疫和病理性自身免疫反应中发挥重要作用.目前发现TLR9,DAI(DLM-1/ZBP1),RIG-I,尚未定义的识别B-DNA的分子,损伤DNA结合分子如:DNA-PKcs,Ku70,p53,ATM,ATR和含有SAP或PHD结构域等的分子可以识别DNA,并且分别以不同的识别模式识别细胞不同部位或不同类型的DNA.近几年来国内外针对DNA识别的研究较多并取得了重要进展,给研究保护性免疫和自身免疫提供了新的视野.文中结合作者所在实验室的研究探索,对DNA的识别分子和识别模式的研究进展进行综述.

关键词：固有免疫 TLR9 RIG-I DAI(DLM-1/ZBPl)

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