检索结果-内蒙古大学图书馆

利用CRISPR/Cas9技术敲除dync1h1基因显著影响斑马鱼神经系统发育

中国细胞生物学学报 2016年第5期38卷 487-498页

作者：钱亭陈向军邓波张祥王旭复旦大学附属华山医院神经科上海200040 复旦大学神经病学研究所上海200040 复旦大学基础医学院生化与分子生物学系及代谢与分子医学教育部重点实验室上海200032

细胞质动力蛋白（cytoplasmic dynein）是神经系统内重要的马达蛋白复合体，负责轴浆内重要物质从轴索末端到神经细胞胞体的逆行性运输。重链蛋白二聚体1（dynein 1 heavy chain 1，DYNC1H1）是dynein复合体的核心结构。其是否正常表达... 详细信息

细胞质动力蛋白（cytoplasmic dynein）是神经系统内重要的马达蛋白复合体，负责轴浆内重要物质从轴索末端到神经细胞胞体的逆行性运输。重链蛋白二聚体1（dynein 1 heavy chain 1，DYNC1H1）是dynein复合体的核心结构。其是否正常表达与神经系统发育及神经退行性疾病的发生存在密切联系。该研究运用CRISPR／Cas9基因编辑技术在斑马鱼中对dync1h1基因进行敲除，并将dync1h1突变体与转基因Tg（HuC：mCherry；FLK1：eGFP）外交，获得带有荧光标记且突变稳定遗传的斑马鱼种系。表型鉴定提示，dync1h1杂合突变斑马鱼发育较野生型斑马鱼无明显异常；而dync1h1纯合突变斑马鱼胚胎正常形态发育受到严重抑制，dync1h1基因表达量及Dync1h1蛋白质含量均有明显下降，脊髓肿胀，脊髓神经细胞数目显著减少，背部血管存在发育畸形，并于受精后5～6d（days post fertilization，dpf）死亡。该研究利用CRISPR／Cas9技术成功建立了dync1h1基因敲除的斑马鱼模型，为dync1h1突变致病机制相关的信号通路或者分子网络间相互作用的探索打下了基础。

关键词： dync1h1 斑马鱼 CRISPR/Cas9 神经系统发育异常

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牛骨肽预防骨质疏松的作用研究

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食品工业 2017年第5期38卷 179-183页

作者：李亚然张艳玲尹中夏吴海于敏莫炜复旦大学代谢与分子医学教育部重点实验室上海200032 复旦大学基础医学院生物化学与分子生物学系上海200032 亿菩升(上海)生物科技有限公司上海200233

研究了牛骨肽预防骨质疏松的作用。摘除SD雌性大鼠双侧卵巢构建骨质疏松模型,灌胃给与生理盐水、牛骨肽,灌胃5周和11周时CT扫描观察骶骨、11周时扫描电镜和病理切片观察骨小梁并检测血液生化指标。CT扫描、扫描电镜及病理切片结果显示,... 详细信息

研究了牛骨肽预防骨质疏松的作用。摘除SD雌性大鼠双侧卵巢构建骨质疏松模型,灌胃给与生理盐水、牛骨肽,灌胃5周和11周时CT扫描观察骶骨、11周时扫描电镜和病理切片观察骨小梁并检测血液生化指标。CT扫描、扫描电镜及病理切片结果显示,牛骨肽100 mg/kg组大鼠骨密度比阴性对照组大鼠骨密度高。血液生化指标结果显示,牛骨肽100 mg/kg组大鼠与阴性对照组大鼠相比血钙含量明显高(p<0.05)、骨钙素含量低(p<0.05)、碱性磷酸酶酶活高(p<0.05)、抗酒石酸酸性磷酸酶酶活高(p<0.05)。牛骨肽对去卵巢大鼠具有预防骨质疏松的作用。提示绝经女性服用含有牛骨肽的保健品可以预防和改善骨质疏松。

关键词：牛骨肽卵巢摘除骨质疏松预防

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NMN在肥胖及相关代谢紊乱中的作用

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生命的化学 2022年第11期42卷 2089-2094页

作者：夏瑞雪赵冰于敏复旦大学基础医学院生物化学与分子生物学系复旦大学代谢分子医学教育部重点实验室上海200032

目前,肥胖及其相关的代谢紊乱在我国呈流行趋势,严重危害了公共卫生健康。机体从外界摄取以及自身合成的烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)进入细胞后,可转化生成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine denucleariz... 详细信息

目前,肥胖及其相关的代谢紊乱在我国呈流行趋势,严重危害了公共卫生健康。机体从外界摄取以及自身合成的烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)进入细胞后,可转化生成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine denuclearize,NAD+),参与能量和糖脂代谢等调控过程。肥胖会引起机体肝脏、肌肉和脂肪等组织和器官NAD+含量的下降,补充NMN可以提高肥胖小鼠体内NAD+的含量,改善肥胖和相关代谢紊乱的症状。相关临床试验显示,作为膳食补充剂,NMN可以提高肥胖受试者的代谢功能。但NMN具体的作用机制仍不十分清楚,其对人体的安全性和有效性也有待更深入的研究。本文介绍了NMN细胞内的代谢过程和在肥胖及相关代谢紊乱中的调控作用,分析了可能存在的安全性问题,以期为肥胖相关代谢疾病的干预和治疗提供新思路。

关键词：烟酰胺单核苷酸烟酰胺腺嘌呤二核苷酸肥胖

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一种可通过皮下注射的新型直接凝血酶抑制剂

一种可通过皮下注射的新型直接凝血酶抑制剂

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第九届国际分子模拟与信息技术应用学术会议(ICMS&I2018)

作者：赵冰张艳玲黄一农于锦超李亚然王琪马亦信宋后燕于敏莫炜复旦大学基础医学院生物化学与分子生物学系代谢与分子医学教育部重点实验室代谢与分子医学教育部重点实验室

目的:重组双功能水蛭素(RGD-hirudin)是在野生型水蛭素分子的合理部位融入了Arg-Gly-Asp(RGD)序列融合在野生型水蛭素的合理部位,具有抗凝血酶、抗血小板聚集的双重功能.但是RGD-Hirudin是一种蛋白质,只能通过静脉注射给药,临床应用范... 详细信息

目的:重组双功能水蛭素(RGD-hirudin)是在野生型水蛭素分子的合理部位融入了Arg-Gly-Asp(RGD)序列融合在野生型水蛭素的合理部位,具有抗凝血酶、抗血小板聚集的双重功能.但是RGD-Hirudin是一种蛋白质,只能通过静脉注射给药,临床应用范围有限.以RGD-hirudin序列为基础,保留其C末端和N末端的功能氨基酸残基,利用分子模拟和同源建模技术设计具有抗凝活性的短肽(Direct Thrombin Inhibitor Peptide,DTIP),以利于皮下用药. 方法:利用同源建模和分子模拟,以RGD-hirudin的序列为基础,保留其功能氨基酸残基,借助分子模拟软件设计多肽类似物;利用毕赤酵母表达DTIP;经纯化后获得目的蛋白;利用毕赤酵母表达DTIP;经纯化后获得目的蛋白;凝血酶滴定法测定DTIP的抗凝活性;HPLC-MS测定DTIP的纯度、分子量,利用生物膜干涉技术测定凝血酶与DTIP的亲和力.在体外实验中,通过血栓弹力试验测定DTIP对血栓形成的抑制作用.大鼠皮下注射DTIP,比较给药前后部分凝血活酶时间(Activated Partial Thromboplastin Time,aPTT),凝血酶原时间(Prothrombin Time,PT),凝血酶时间(Thrombin Time,TT)和凝血时间(Clotting Time)的变化.分别构建尾静脉注射肾上腺素和胶原诱导的急性肺栓塞模型和FeCl3损伤诱导的肠系膜微动脉血栓模型,研究DTIP预防血栓形成的药效学作用. 结果:利用同源建模设计出一条具有抗凝活性的短肽DTIP;DTIP抗凝比活性为7000ATU/mg,与凝血酶的亲和力为0.9μMol/L.体内和体外试验结果均显示DTIP显著延长aPTT、PT和TT,体内试验中,用药后,CT也显著延长,但不会引起出血.在急性肺栓塞模型中,DTIP显著提高小鼠存活率;在肠系膜微动脉血栓模型中,DTIP抑制血栓的形成. 结论:DTIP具有抗凝活性,且可以通过皮下注射的方式预防血栓的形成,可作为一种潜在的皮下注射直接凝血酶抑制剂进行更加深入的研究.

关键词：直接凝血酶抑制剂药物设计分子模拟同源建模抗凝活性

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模式生物斑马鱼在衰老生物学中的研究初探

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广东医学院学报 2016年第5期34卷 443-446页

作者：姚玉霄孙少阳费飞王旭复旦大学代谢与分子医学教育部重点实验室上海200032 复旦大学生物化学与分子生物学系基础医学院上海200032

目的对模式生物斑马鱼的衰老及相关表型进行初步研究。方法运用SA-β-Gal染色、转基因荧光示踪和定量基因转录分析对衰老相关的细胞学现象和基因表达水平进行观测。结果 (1)下丘脑和心脏是年老斑马鱼体内出现衰老细胞较多的器官;(2)衰... 详细信息

目的对模式生物斑马鱼的衰老及相关表型进行初步研究。方法运用SA-β-Gal染色、转基因荧光示踪和定量基因转录分析对衰老相关的细胞学现象和基因表达水平进行观测。结果 (1)下丘脑和心脏是年老斑马鱼体内出现衰老细胞较多的器官;(2)衰老相关的基因表达变化具有器官间和性别间的显著差别。结论调控个体衰老的分子细胞运行机制在进化中具有一定的保守性,斑马鱼可作为研究脊椎动物衰老的新工具。

关键词：斑马鱼衰老心脏下丘脑代谢

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新型直接凝血酶抑制剂短肽(DTIP)重要氨基酸研究

新型直接凝血酶抑制剂短肽(DTIP)重要氨基酸研究

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中国生物化学与分子生物学会第十二届全国会员代表大会暨2018年全国学术会议

作者：李亚然于敏莫炜复旦大学代谢与分子医学教育部重点实验室复旦大学基础医学院生物化学与分子生物学系

目的研究影响DTIP稳定性及与凝血酶相互作用的氨基酸并进行结构改造。方法通过discovery studio同源建模构建DTIP三维结构模型,与凝血酶分子对接,通过丙氨酸扫描筛选突变能不稳定的氨基酸;其次通过单氨基酸突变,获得DTIP突变体;用凝血... 详细信息

目的研究影响DTIP稳定性及与凝血酶相互作用的氨基酸并进行结构改造。方法通过discovery studio同源建模构建DTIP三维结构模型,与凝血酶分子对接,通过丙氨酸扫描筛选突变能不稳定的氨基酸;其次通过单氨基酸突变,获得DTIP突变体;用凝血酶滴定法测定各突变体抗凝血酶活性,利用小鼠模型测定部分凝血酶活酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间,剪尾实验测定出血时间,通过生物膜层干涉实验测定各突变蛋白与凝血酶相互作用的亲和力,血栓弹力实验检测其对全血的影响。结果模拟结果显示丙氨酸扫描突变能不稳定氨基酸或者形成分子内二硫键或者与凝血酶的氨基酸间存在氢键,突变为丙氨酸后二硫键或氢键不能形成。凝血酶滴定结果显示突变为丙氨酸后活性都有较明显下降。初步的生物膜层干涉实验结果显示DTIP特定的氨基酸残基突变为丙氨酸后其KD值没有显著性差异。

关键词： DTIP 丙氨酸扫描凝血酶血栓

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蛋白质赖氨酸乳酸化修饰及其在脂肪组织免疫代谢中的作用

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生命的化学 2020年第12期40卷 2134-2141页

作者：李白玉郭亮上海体育学院运动科学学院上海200438 复旦大学基础医学院代谢分子医学教育部重点实验室基础医学院生物化学与分子生物学系上海200032

乳酸作为细胞糖酵解的终产物,在细胞代谢过程中发挥重要作用。作为信号分子,乳酸在癌症、神经发育、脂肪细胞代谢中也具有重要功能。上述这些研究主要集中在乳酸的代谢和信号传递功能。最新研究揭示,乳酸可以作为蛋白质翻译后修饰的底物... 详细信息

乳酸作为细胞糖酵解的终产物,在细胞代谢过程中发挥重要作用。作为信号分子,乳酸在癌症、神经发育、脂肪细胞代谢中也具有重要功能。上述这些研究主要集中在乳酸的代谢和信号传递功能。最新研究揭示,乳酸可以作为蛋白质翻译后修饰的底物,促进组蛋白赖氨酸乳酸化的发生,调控M1型巨噬细胞向M2型转变。巨噬细胞作为肥胖过程中脂肪组织内变化显著的免疫细胞,其是否受到乳酸化修饰的调节有待于进一步研究。本文对已有的乳酸调控细胞代谢、细胞信号传递以及免疫细胞功能的报道进行了总结,并对乳酸化修饰在肥胖诱导的脂肪组织炎症中可能发挥的作用进行了展望。

关键词：乳酸组蛋白乳酸化脂肪组织巨噬细胞代谢性炎症

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新型直接凝血酶抑制剂短肽(DTIP)重要氨基酸研究

新型直接凝血酶抑制剂短肽(DTIP)重要氨基酸研究

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中国生物化学与分子生物学会第十二届会员代表大会暨2018年全国学术会议

作者：李亚然于敏莫炜复旦大学代谢与分子医学教育部重点实验室上海 200032 复旦大学基础医学院生物化学与分子生物学系上海 200032

目的研究影响 DTIP 稳定性及与凝血酶相互作用的氨基酸并进行结构改造。方法通过 discovery studio 同源建模构建 DTIP 三维结构模型，与凝血酶分子对接，通过丙氨酸扫描筛选突变能不稳定的氨基酸;其次通过单氨基酸突变，获得 DTIP ...

目的研究影响 DTIP 稳定性及与凝血酶相互作用的氨基酸并进行结构改造。方法通过 discovery studio 同源建模构建 DTIP 三维结构模型，与凝血酶分子对接，通过丙氨酸扫描筛选突变能不稳定的氨基酸;其次通过单氨基酸突变，获得 DTIP 突变体;用凝血酶滴定法测定各突变体抗凝血酶活性，利用小鼠模型测定部分凝血酶活酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间，剪尾实验测定出血时间，通过生物膜层干涉实验测定各突变蛋白与凝血酶相互作用的亲和力，血栓弹力实验检测其对全血的影响。

关键词：

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巨噬细胞转录因子阴阳1基因通过调节脂肪细胞因子影响胰岛素敏感性

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上海医学 2022年第12期45卷 818-823页

作者：于汐刘醒赵洁洁焦阳陆炎杨琰英李小英汤其群复旦大学生物医学研究院上海200030 复旦大学附属中山医院内分泌科复旦大学基础医学院生物化学与分子生物学系复旦大学代谢与分子医学教育部重点实验室

目的探讨巨噬细胞转录因子阴阳1(YY1)基因对葡萄糖耐量、胰岛素敏感性的影响。方法通过Cre-Loxp系统,成功获得巨噬细胞YY 1基因特异性敲除(YY 1^(f/f);lyz2-cre)小鼠。高脂喂养小鼠12~13周,检测小鼠葡萄糖耐量(血糖水平)和胰岛素耐量(... 详细信息

目的探讨巨噬细胞转录因子阴阳1(YY1)基因对葡萄糖耐量、胰岛素敏感性的影响。方法通过Cre-Loxp系统,成功获得巨噬细胞YY 1基因特异性敲除(YY 1^(f/f);lyz2-cre)小鼠。高脂喂养小鼠12~13周,检测小鼠葡萄糖耐量(血糖水平)和胰岛素耐量(相对血糖值)。将高脂喂养的YY 1基因敲除小鼠(实验组,YY 1^(f/f);lyz2-cre)与对照组(YY 1^(f/f))小鼠分别注射0.9%氯化钠溶液和胰岛素(剂量均为0.75 U/kg),取其附睾脂肪、肌肉、肝脏组织,采用免疫印迹法检测蛋白激酶B(Akt)-糖原合成酶激酶3β(Gsk3β)通路关键蛋白(Akt、Gsk3β)的磷酸化水平。采用ELISA法检测高脂饮食后实验组小鼠与对照组小鼠血清胰岛素、脂联素和瘦素水平。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常饮食的两组小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中炎症因子mRNA相对表达量。结果琼脂糖凝胶电泳见700 bp处显示条带,表明lyz2-cre基因成功表达。实验组小鼠BMDM中,YY 1基因mRNA相对表达量显著低于对照组,表明巨噬细胞YY 1基因特异性敲除小鼠模型构建成功。高脂喂养下,实验组小鼠注射葡萄糖后60、90 min时的血糖水平均显著低于对照组同时间点(P值均<0.05),实验组小鼠注射胰岛素后30、60、90 min时的相对血糖值均显著低于对照组同时间点(P值分别<0.05、0.001、0.01)。正常饮食喂养下,两组各时间点间血糖水平和相对血糖值的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。实验组小鼠附睾脂肪中胰岛素信号通路关键蛋白Akt及Gsk3β磷酸化水平较对照组均明显上调,肌肉和肝脏组织中无明显变化。实验组小鼠血清瘦素、脂联素水平均显著高于对照组(P值均<0.05);实验组小鼠血清胰岛素水平较对照组有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。实验组小鼠BMDM中IL-6 mRNA、TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量均显著低于对照组(P值均<0.001)。结论巨噬细胞转录因子YY1基因敲除,可以通过减轻巨噬细胞炎症,上调脂联素表达,增强脂肪组织胰岛素敏感性,从而改善高脂饮食小鼠的胰岛素抵抗。

关键词：阴阳1转录因子炎症巨噬细胞胰岛素敏感性脂联素

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