检索结果-内蒙古大学图书馆

临床肝胆病杂志 2020年第5期36卷 983-988页

作者：宰文静陈捷亮袁正宏复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫健委重点实验室上海200032

已知HBV cccDNA在感染肝细胞的细胞核内以微染色体的形式持续稳定存在,难以被靶向调控和清除。围绕HBV cccDNA持续沉默或降解清除机制及策略的研究是当前慢性乙型肝炎“功能性治愈”目标下的重点。介绍了目前对cccDNA基本生物学特性、... 详细信息

已知HBV cccDNA在感染肝细胞的细胞核内以微染色体的形式持续稳定存在,难以被靶向调控和清除。围绕HBV cccDNA持续沉默或降解清除机制及策略的研究是当前慢性乙型肝炎“功能性治愈”目标下的重点。介绍了目前对cccDNA基本生物学特性、转录和代谢调控机制及相关宿主因子的认知,重点分析了cccDNA沉默清除的可能途径和靶向调控策略。

关键词：乙型肝炎病毒 DNA,环状代谢转录调控抗病毒策略

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基于糖谱的体外检测和诊断的临床应用研究进展

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药学进展 2023年第6期47卷 424-432页

作者：孙桂芹陈妍雯张绍兴刘瑞杰张瑜芯芦鑫荣童永亮陈力陈萃英浙江中医药大学医学技术与信息工程学院浙江杭州310053 复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫健委/中国医科院重点实验室上海200032 先思达生物科技有限公司江苏南京211800

检测样本中游离及共价连接在糖肽上的寡糖链,构成糖谱。糖谱上寡糖链类型和丰度的变化可能与病理生理改变相关,具重要的诊断价值,并已应用于临床检测。综述糖谱在肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病、遗传性疾病中的变化,以及糖谱分析在... 详细信息

检测样本中游离及共价连接在糖肽上的寡糖链,构成糖谱。糖谱上寡糖链类型和丰度的变化可能与病理生理改变相关,具重要的诊断价值,并已应用于临床检测。综述糖谱在肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病、遗传性疾病中的变化,以及糖谱分析在体外诊断中的进展,为糖谱检测的临床应用提供方向。

关键词：糖基化糖谱疾病体外诊断临床应用

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两种抽提乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA方法的效果比较

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微生物与感染 2021年第5期16卷 313-321页

作者：胡孔颖金宇焘叶建宇宰文静王洋李雨檬陈捷亮复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫健委重点实验室上海200032

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)作为一种嗜肝DNA病毒,在感染肝细胞后会在细胞核中形成病毒转录复制的模板和基因储存库——共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),其持续存在是乙型肝炎慢性化和难以治愈的核心... 详细信息

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)作为一种嗜肝DNA病毒,在感染肝细胞后会在细胞核中形成病毒转录复制的模板和基因储存库——共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),其持续存在是乙型肝炎慢性化和难以治愈的核心,也是此研究领域内的重点。从细胞样品中稳定抽提获取cccDNA对于保证cccDNA检测的准确性至关重要。Hirt法是一种抽提真核细胞染色体外DNA的方法,被用于HBV cccDNA的抽提,但存在操作复杂和耗时长等问题。为简化操作,有研究对Hirt法进行改良,结合硅胶膜离心柱来抽提染色体外DNA,但尚不清楚该法用于HBV cccDNA抽提与传统Hirt法的效果差异。本研究基于HBV cccDNA细胞转染系统、HBV复制细胞系及感染系统,以DNA印迹(Southern blot)和定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)作为检测评价手段,平行比较了传统Hirt-酚/氯仿法与改良Hirt-过柱法抽提HBV cccDNA的效果。结果表明,两种方法具有相当的抽提效率和抽提特异性,而改良Hirt-过柱法耗时更短,提示在进行细胞HBV cccDNA抽提时可选择改良Hirt-过柱法以提高实验效率。

关键词：乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA 抽提方法 Hirt法硅胶膜离心柱

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英国等地不明原因儿童肝炎的暴发情况及病因

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微生物与感染 2022年第3期17卷 184-187页

作者：谢幼华陈捷亮王勇翔袁正宏复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 上海市重大传染病和生物安全研究院上海200032

2022年3月31日,苏格兰首先报告了5例患有不明原因重症肝炎的儿童。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)于4月15日就不明原因儿童肝炎发布指导性意见,对确诊病例、可疑病例和流行病学相关病例进行了定义。截至4月21日,已有12个... 详细信息

2022年3月31日,苏格兰首先报告了5例患有不明原因重症肝炎的儿童。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)于4月15日就不明原因儿童肝炎发布指导性意见,对确诊病例、可疑病例和流行病学相关病例进行了定义。截至4月21日,已有12个国家报告169例确诊病例,从1月龄至16岁不等。临床表现为急性肝炎,谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)或谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)>500 IU/L,多数患儿有黄疸、恶心、腹痛、乏力、嗜睡和胃肠道症状,包括腹泻和呕吐,大多数患儿无发热。17例接受了肝移植,至少报告1例死亡。考虑到流行病学特点和患儿的临床特征,感染性因素导致该疾病的可能性更大。病例的实验室检查结果均排除了甲、乙、丙、丁和戊型肝炎,并提示腺病毒可能与不明原因儿童肝炎有关,但其他感染性因素或环境因素仍不能完全排除。本文对此次不明原因儿童肝炎的发展情况及其可能病因进行了介绍。该疾病存在输入性风险,我国应对此早做准备。

关键词：不明原因肝炎腺病毒严重急性呼吸综合征冠状病毒2 谷丙转氨酶

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CD137^(+)T细胞效应功能研究进展

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生命的化学 2023年第6期43卷 915-921页

作者：姬雪娇沈洪波王菲菲郑碧英广东医科大学检验医学研究所临床免疫学研究室东莞523808 同济大学附属上海市肺科医院结核病临床研究中心上海200433 复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系、教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

CD137^(+)(又称4-1BB、TNFRSF9)T细胞亚群是一类抗原特异性活化的效应细胞。CD137^(+)T细胞产生细胞毒效应因子以及在抗原刺激后进行增殖的能力较强,使其在多种疾病中发挥免疫调节作用,其中CD137^(+)调节性T细胞分泌的分泌型CD137具有... 详细信息

CD137^(+)(又称4-1BB、TNFRSF9)T细胞亚群是一类抗原特异性活化的效应细胞。CD137^(+)T细胞产生细胞毒效应因子以及在抗原刺激后进行增殖的能力较强,使其在多种疾病中发挥免疫调节作用,其中CD137^(+)调节性T细胞分泌的分泌型CD137具有重要的免疫抑制作用。因此,全面了解CD137^(+)T细胞在疾病中的作用,对开发有效的疾病免疫防治策略至关重要。本文通过介绍CD137相关信号对T细胞尤其是CD8^(+)T细胞功能的调控机制、CD137^(+)T细胞的特征和效应功能、CD137^(+)T细胞在多种疾病进展中的免疫调控作用,为靶向CD137^(+)T细胞的免疫治疗提供参考。

关键词： CD137^(+)T细胞抗原特异性T细胞免疫微环境免疫治疗

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类器官组织在感染性疾病研究中的应用

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微生物与感染 2021年第3期16卷 196-207页

作者：张舒心蔡启良朱彩霞复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫健委/医科院重点实验室上海200032

类器官(organoid)是体外3D培养组织干细胞所形成的多功能细胞团,具有自身增殖和多向分化的能力,在空间和结构上与来源器官组织的基因、结构和功能相似,可用于模拟体内组织细胞生长、分化及器官形成过程,在药物筛选与评价、生物医学材料... 详细信息

类器官(organoid)是体外3D培养组织干细胞所形成的多功能细胞团,具有自身增殖和多向分化的能力,在空间和结构上与来源器官组织的基因、结构和功能相似,可用于模拟体内组织细胞生长、分化及器官形成过程,在药物筛选与评价、生物医学材料及组织工程等方面具有重要的应用潜能。当前在感染性疾病研究方面,越来越多数据表明不同类器官组织可用于在体外模拟病原入侵和引发疾病过程。鉴于此,本文对类器官组织在病原感染相关疾病模型上的研究进展及其应用前景进行综述。

关键词：类器官感染性疾病疾病模型应用

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绿色荧光蛋白分裂肽基因重组乙型肝炎病毒复制子模型的建立

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微生物与感染 2021年第2期16卷 79-87页

作者：田青右朱园飞常豪于琳邓强复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

为构建一种重组乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制子模型,使其能够在病毒感染的细胞中表达可视化报告基因蛋白,本研究删除HBV基因组核心蛋白(HBV core,HBc)编码区部分序列,构建HBV1.1-ΔHBc113复制子载体。利用内含肽(intein)介... 详细信息

为构建一种重组乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制子模型,使其能够在病毒感染的细胞中表达可视化报告基因蛋白,本研究删除HBV基因组核心蛋白(HBV core,HBc)编码区部分序列,构建HBV1.1-ΔHBc113复制子载体。利用内含肽(intein)介导蛋白拼接的特性,选取加强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和超级折叠绿色荧光蛋白(super folder green fluorescent protein,sfGFP)作为外显肽,建立EGFP^(N1-8)/EGFP^(C9-11)和sfGFP^(N1-10)/sfGFP^(C11)蛋白分裂系统。基于ΔHBc113载体,分别构建EGFP^(C9-11)和sfGFP^(C11)重组HBV复制子;应用DNA印迹法(Southern blotting)验证两种rHBV载体的细胞内复制能力。结果显示,构建的HBV1.1-ΔHBc113复制子载体能够在HBc反式互补条件下在转染细胞中形成病毒复制。构建的EGFP^(C9-11)和sfGFP^(C11)重组HBV复制子能够支持HBc互补条件下的细胞内病毒复制,并产生子代病毒颗粒;HBV重组复制子表达的EGFP^(C9-11)或sfGFP^(C11)蛋白在共表达氮端蛋白EGFP^(N)/sfGFP^(N)细胞中,通过intein介导的蛋白质高效拼接,能够形成完整的、有功能的GFP。结果表明,构建的荧光蛋白重组HBV复制子系统能够为HBV高通量药物筛选和HBV易感性研究提供实验工具,具有重要的病毒学意义和应用前景。

关键词：乙型肝炎病毒复制子内含肽绿色荧光蛋白分裂肽

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肠球菌属生物膜表型和基因型相关性分析

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中国感染与化疗杂志 2020年第2期20卷 157-162页

作者：丁丽吴旸李培林东昉复旦大学附属华山医院抗生素研究所国家卫健委抗生素临床药理重点实验室上海200040 复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室

目的了解肠球菌属生物膜形成能力及其毒力基因携带率,分析生物膜的形成能力与毒力基因间的相关性。方法收集复旦大学附属华山医院2015-2017年临床分离自无菌体液的肠球菌属细菌,使用结晶紫染色法测定肠球菌的生物膜形成能力并进行形成... 详细信息

目的了解肠球菌属生物膜形成能力及其毒力基因携带率,分析生物膜的形成能力与毒力基因间的相关性。方法收集复旦大学附属华山医院2015-2017年临床分离自无菌体液的肠球菌属细菌,使用结晶紫染色法测定肠球菌的生物膜形成能力并进行形成能力的强弱分级,采用PCR方法筛查7种常见的肠球菌毒力基因以及Fsr群体感应系统基因(fsrA、fsrB、fsrC)。结果共收集了112株肠球菌菌株,其中粪肠球菌52株,屎肠球菌60株;两者生物膜形成的阳性率分别为63.46%和13.33%,差异具有统计学意义(P<0.001)。52株粪肠球菌毒力基因携带率分别为:esp 40.38%、gelE 69.23%、sprE 73.08%、asa157.69%、cylA 46.15%、cylB 48.08%、cylM 50.00%、fsrA 40.38%、fsrB 42.31%、fsrC 80.77%,携带esp、asa1、cylA、cylB、cylM和fsrB基因的菌株更易形成生物膜。60株屎肠球菌毒力基因携带率分别为:esp 65.00%、gelE 10.00%。结论粪肠球菌比屎肠球菌更容易形成生物膜;多种毒力基因与生物膜形成相关,提示生物膜的形成并不是由单一基因调控,而是由多个基因多系统调控。

关键词：肠球菌生物膜毒力基因

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HBV cccDNA的体外细胞模型和实验小鼠模型

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临床肝胆病杂志 2019年第6期35卷 1205-1211页

作者：苏瑜朱园飞田青右谢幼华邓强复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学重点实验室

HBV慢性感染仍然是世界性公共健康问题。现有抗病毒药物能够有效抑制HBV复制,却无法使之完全治愈。共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV复制的原始模版,具有显著的稳定性,是HBV持续感染的分子基础,也是实现感染治愈的关键靶点。由于较低的细... 详细信息

HBV慢性感染仍然是世界性公共健康问题。现有抗病毒药物能够有效抑制HBV复制,却无法使之完全治愈。共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV复制的原始模版,具有显著的稳定性,是HBV持续感染的分子基础,也是实现感染治愈的关键靶点。由于较低的细胞内拷贝数,以及缺乏灵敏可靠的检测方法,限制了对HBV cccDNA生物合成、代谢和调控等方面的相关研究。建立合适的cccDNA研究模型有助于了解这些生物学过程。综述了近年来HBV cccDNA细胞培养模型和实验小鼠模型等方面的主要进展,以期为进一步研究HBV病毒学和抗病毒药物研发提供帮助。

关键词：乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA 细胞培养模型模型,动物

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人类诺如病毒反向遗传体系的构建与验证

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微生物与感染 2021年第2期16卷 71-78页

作者：陈水叶宋武慧易志刚复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 复旦大学附属上海市公共卫生临床中心上海201508

为验证已报道的能复制人类诺如病毒(human norovirus,HuNoV)GⅡ.3 U201感染性克隆的复制能力,进一步在HuNoV临床病毒株中寻找更优序列,构建能高效复制的感染性克隆,本研究合成含有T7启动子和EF-1α启动子的HuNoV GⅡ.3 U201全长序列,构... 详细信息

为验证已报道的能复制人类诺如病毒(human norovirus,HuNoV)GⅡ.3 U201感染性克隆的复制能力,进一步在HuNoV临床病毒株中寻找更优序列,构建能高效复制的感染性克隆,本研究合成含有T7启动子和EF-1α启动子的HuNoV GⅡ.3 U201全长序列,构建质粒pU201和pEF-1α-U201及对应的病毒RNA聚合酶失活的突变质粒。在COS 7细胞和Huh 7细胞中分别共转染T7聚合酶与pU201以及单独转染pEF-1α-U201,利用实时荧光定量聚合酶链反应检测转染后不同时间点细胞内病毒RNA水平。结果显示,与对照组相比,pU201和pEF-1α-U201的病毒RNA水平升高约2倍和3倍。为便于检测HuNoV复制,在pU201和pEF-1α-U201质粒中分别插入NanoLuc TM荧光素酶报告基因,并命名为pU201-Nluc和pEF-1α-U201-Nluc。将质粒分别转染COS 7细胞和Huh 7细胞,检测转染后不同时间点Nluc荧光素酶活性。结果显示,pEF-1α-U201-Nluc的Nluc荧光素酶活性相较于对照组增高近2倍,而pU201-Nluc无明显升高,提示EF-1α启动子起始病毒复制优于T7启动子。为寻找优于HuNoV GⅡ.3 U201的HuNoV序列,合成HuNoV GⅡ.4临床病毒株全长序列,将其插入EF-1α启动子载体中并转染细胞,于不同时间点检测上清及细胞中病毒RNA水平。结果显示,上清及细胞中病毒RNA水平与对照组相比无显著差异。以上结果提示,已报道可复制的HuNoV GⅡ.3 U201反向遗传体系复制效率有限,且HuNoV反向遗传体系复制能力可能与不同序列的病毒相关。

关键词：人类诺如病毒 T7启动子 EF-1α启动子感染性克隆亚基因组克隆临床病毒株

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