检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物与感染 2024年第5期19卷 267-279页

作者：王永康曹恒龙钢复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 上海市重大传染病与生物安全研究院上海200032

本研究利用反向遗传学的方法成功拯救了一株盖塔病毒(Getah virus, GETV)(GenBank:OM363683)。首先,将优化后的病毒序列克隆到含有T7或CMV启动子的低拷贝质粒pFK中,分别命名为T7-GETV和CMV-GETV。以T7-GETV为模板,通过体外转录(in vitro... 详细信息

本研究利用反向遗传学的方法成功拯救了一株盖塔病毒(Getah virus, GETV)(GenBank:OM363683)。首先,将优化后的病毒序列克隆到含有T7或CMV启动子的低拷贝质粒pFK中,分别命名为T7-GETV和CMV-GETV。以T7-GETV为模板,通过体外转录(in vitro transcription, IVT)合成病毒RNA。随后,采用脂质体转染的方式将RNA递送到BHK-21细胞中,通过半数组织培养感染量(50%tissue culture infectious dose, TCID_(50))法测定病毒滴度,并利用免疫印迹法(western blot, WB)检测病毒蛋白E1表达,证明盖塔病毒被成功拯救。进一步通过光学显微镜观察细胞病变(cytopathic effect, CPE),以及TCID_(50)法、实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)和WB的方法,系统地表征盖塔病毒的生长特征。此外,在CMV-GETV的基础上,基于盖塔病毒复制子的结构,采取保留非结构蛋白基因并用报告基因mCherry或renilla luciferase(Rluc)代替结构蛋白基因的策略构建盖塔病毒复制型表达载体,分别命名为pFK-GETV-mCherry和pFK-GETV-Rluc。随后构建pFK质粒的CMV启动子并仅插入报告基因的对照质粒,分别命名为pFK-mCherry和pFK-Rluc。Image J软件分析显示,转染pFK-GETV-mCherry后单细胞平均荧光强度比转染pFK-mCherry高约5倍。同时,RT-qPCR结果表明,转染pFK-GETV-mCherry后mCherry基因转录水平也比转染pFK-mCherry高约5倍,两组结果高度一致。WB结果进一步说明,在相同时间点转染pFK-GETV-mCherry组mCherry蛋白表达水平比转染pFK-mCherry组高。荧光素酶检测显示,转染pFK-GETV-Rluc后细胞表达Rluc的效率比转染pFK-Rluc高约3个数量级。本研究为后续盖塔病毒研究提供了有力的反向遗传学工具,同时验证了盖塔病毒复制型表达载体提高外源基因表达水平的能力,为研究盖塔病毒复制型DNA疫苗奠定了基础。

关键词：盖塔病毒感染性克隆病毒拯救复制型表达载体 DNA疫苗

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基于聚谷氨酸聚氨基酯的核酸递送载体构建

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微生物与感染 2024年第1期19卷 1-11页

作者：姚婷婷杨荣苏润萍高西辉复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海市重大传染病和生物安全研究院上海200032

核酸疫苗已成为现代传染病疫苗中的研究热点,然而,核酸疫苗的临床转化仍然面临着转染效率低下和生物相容性不佳等瓶颈,迫切需要研发安全、高效的核酸递送载体。本研究提出一种新的核酸递送策略,在聚(β-氨基酯)[poly(β-amino ester),PB... 详细信息

核酸疫苗已成为现代传染病疫苗中的研究热点,然而,核酸疫苗的临床转化仍然面临着转染效率低下和生物相容性不佳等瓶颈,迫切需要研发安全、高效的核酸递送载体。本研究提出一种新的核酸递送策略,在聚(β-氨基酯)[poly(β-amino ester),PBAE]和核酸自组装形成PBAE纳米颗粒(PBAE nanoparticles,PBAE-NPs)的基础上,进一步采用聚谷氨酸[poly(glutamic acid),PGA]进行修饰,形成PGA修饰的PBAE纳米颗粒(PGA modified PBAE nanoparticles,PPs)。本文将通过结构表征和生物学评价探究PPs作为核酸递送载体的性能。体外表征结果显示,PPs具有粒径小、Zeta电位低和血清稳定性强等良好的生物学特性。细胞溶酶体逃逸实验结果表明,PGA修饰能够提高PPs的溶酶体逃逸能力。流式细胞术结果表明,相较于PBAE-NPs,PPs显著增强了核酸转染效率。此外,CCK-8实验结果显示,PPs具有良好的生物安全性。综上所述,PPs具有安全性好、核酸转染效率高等特点,是一种具有开发前景的核酸递送载体,为今后核酸疫苗载体的设计提供了新的思路。

关键词：核酸疫苗聚(β-氨基酯) 聚谷氨酸纳米颗粒

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NMN在肥胖及相关代谢紊乱中的作用

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生命的化学 2022年第11期42卷 2089-2094页

作者：夏瑞雪赵冰于敏复旦大学基础医学院生物化学与分子生物学系复旦大学代谢分子医学教育部重点实验室上海200032

目前,肥胖及其相关的代谢紊乱在我国呈流行趋势,严重危害了公共卫生健康。机体从外界摄取以及自身合成的烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)进入细胞后,可转化生成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine denucleariz... 详细信息

目前,肥胖及其相关的代谢紊乱在我国呈流行趋势,严重危害了公共卫生健康。机体从外界摄取以及自身合成的烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)进入细胞后,可转化生成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine denuclearize,NAD+),参与能量和糖脂代谢等调控过程。肥胖会引起机体肝脏、肌肉和脂肪等组织和器官NAD+含量的下降,补充NMN可以提高肥胖小鼠体内NAD+的含量,改善肥胖和相关代谢紊乱的症状。相关临床试验显示,作为膳食补充剂,NMN可以提高肥胖受试者的代谢功能。但NMN具体的作用机制仍不十分清楚,其对人体的安全性和有效性也有待更深入的研究。本文介绍了NMN细胞内的代谢过程和在肥胖及相关代谢紊乱中的调控作用,分析了可能存在的安全性问题,以期为肥胖相关代谢疾病的干预和治疗提供新思路。

关键词：烟酰胺单核苷酸烟酰胺腺嘌呤二核苷酸肥胖

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BCP区突变的HBV转基因小鼠转录组学分析

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微生物与感染 2024年第5期19卷 257-266页

作者：朱琴苏瑜杨咏玉谢黎陈鸿杨乐卜凡邓强吴健蒋炜复旦大学附属中山医院消化内科上海200032 复旦大学基础医学院病原生物学系教育部/卫健委医学分子病毒学重点实验室上海200032 上海市肝病研究所上海200032

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)慢性感染可引发肝硬化、肝细胞癌等严重肝病,对全球健康造成重大威胁。本研究利用基本核心启动子(basic core promoter,BCP)突变的HBV转基因小鼠模型,评估其病毒学特征和肝损伤情况。本研究通过肝... 详细信息

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)慢性感染可引发肝硬化、肝细胞癌等严重肝病,对全球健康造成重大威胁。本研究利用基本核心启动子(basic core promoter,BCP)突变的HBV转基因小鼠模型,评估其病毒学特征和肝损伤情况。本研究通过肝组织天狼猩红染色和全基因转录组学分析,发现12周龄的BCP区突变HBV转基因小鼠表现出HBV DNA高复制水平和自发性肝纤维化。差异基因分析显示,HBV-Tg组有729个基因上调,325个基因下调。这些差异表达基因主要富集于细胞外基质、PPAR通路以及细胞色素P450通路等。蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络互作揭示,关键基因涉及胶原合成、炎症反应以及细胞周期和死亡等。该模型小鼠的病理变化与慢性肝病进展一致,可为HBV感染相关肝病的机制研究提供可靠且有效的模型。

关键词：乙型肝炎病毒慢性乙型病毒性肝炎转录组学

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云南省布鲁氏菌病流行状况

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中国人兽共患病学报 2021年第2期37卷 138-145页

作者：乾莲孟媛媛孙海龙武有聪大理大学基础医学院病原生物学综合实验室大理671000 复旦大学医学分子病毒学教育部/卫健委重点实验室上海200032

布鲁氏菌病(布病)是我国流行较为严重的一种人兽共患传染病,危害人体健康,造成畜牧业巨大的经济损失。云南省属于边疆农牧大省,历史上曾有过布病的流行,近年来有关布病的报道越来越多,但目前云南省布病总体流行状况仍不清楚。本文通过C... 详细信息

布鲁氏菌病(布病)是我国流行较为严重的一种人兽共患传染病,危害人体健康,造成畜牧业巨大的经济损失。云南省属于边疆农牧大省,历史上曾有过布病的流行,近年来有关布病的报道越来越多,但目前云南省布病总体流行状况仍不清楚。本文通过CNKI和万方数据库检索整理了1990-2017年云南省布病疫情的相关文献,对云南省布病的流行病学特点及人畜间布病的流行情况做一综述,在此基础上分析病原学特征与宿主种类、易感群体与感染途径、布病流行的时间和空间分布状况以及影响因素,为云南布病的防控提供依据。

关键词：布鲁氏菌病流行状况云南

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一种非天然广谱抗病毒多肽的发现、活性评价及作用机制研究

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沈阳药科大学学报 2023年第12期40卷 1598-1607页

作者：梁国栋李瑞娟田阳丽夏帅马宇衡内蒙古医科大学药学院基于化学生物学的候选药物设计与筛选重点实验室内蒙古呼和浩特010110 军事科学院军事医学研究院北京100850 复旦大学基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

目的本文以MERS-CoV、H1N1和HIV-13种病毒Ⅰ型包膜蛋白中跨膜亚基的NHR区域为靶标,设计能够与靶标特异性结合并对3种病毒均发挥抑制活性的完全非天然广谱抗病毒多肽。方法对非天然多肽IIS序列优化改造并经Fmoc固相合成法获得目标肽,开展... 详细信息

目的本文以MERS-CoV、H1N1和HIV-13种病毒Ⅰ型包膜蛋白中跨膜亚基的NHR区域为靶标,设计能够与靶标特异性结合并对3种病毒均发挥抑制活性的完全非天然广谱抗病毒多肽。方法对非天然多肽IIS序列优化改造并经Fmoc固相合成法获得目标肽,开展3种病毒的抑制活性测试,通过圆二色谱、分析型超离心和等温滴定量热实验研究目标肽与靶标的作用机制。结果目标肽对MERS-CoV、H1N1和HIV-13种病毒均具有抑制活性,能够与3种病毒的NHR区域作用阻止病毒的膜融合过程。结论本文建立以病毒膜融合过程为基础的非天然抗病毒多肽设计方法和评价思路,为广谱抗病毒药物的开发提供一种新兴且有效的研究路径。

关键词：非天然抗病毒多肽病毒膜融合六股螺旋广谱性

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HBV感染对肝癌细胞脂类代谢相关蛋白表达的影响

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微生物与感染 2023年第5期18卷 257-268页

作者：白金金庞智方钟复旦大学附属中山医院生物治疗中心上海200032 复旦大学附属中山医院肝癌研究所癌变与侵袭原理教育部重点实验室上海200032 复旦大学基础医学院病原生物学系教育部/卫健委医学分子病毒学重点实验室上海200032

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是非细胞病变的病毒,其持续感染造成的肝脏损伤逐步引起肝脏炎症,进而导致肝纤维化、肝硬化,最终引发了80%的肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)。肝脏是机体代谢的重要器官,癌基因的异常活... 详细信息

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是非细胞病变的病毒,其持续感染造成的肝脏损伤逐步引起肝脏炎症,进而导致肝纤维化、肝硬化,最终引发了80%的肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)。肝脏是机体代谢的重要器官,癌基因的异常活化以及抑癌基因的抑制失活会造成细胞代谢水平以及代谢方式的改变,此过程被称为细胞代谢重编程(metabolism reprogramming),代谢重编程是肝脏炎症向癌症转化的关键步骤。本研究通过逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、多重荧光免疫组化等方法检测HBV阳性细胞(或组织)与对照细胞(或组织)中脂质代谢关键基因的表达,在此基础上分析其功能和脂代谢的关系。结果显示,在稳定表达HBV的HepG2.2.15及HBsAg的Hep3B细胞中,脂代谢相关基因HMGCR、SREBP-2以及PSCK9的mRNA表达量显著上调,且在肝细胞癌患者的临床病理结果中相应蛋白表达水平也同步提高,提示HBV感染导致了相应代谢基因的高表达,且HBsAg是调控脂质代谢酶基因紊乱的关键蛋白。通过分析365例大样本肝癌患者的病理资料,本文发现脂代谢相关基因在肝癌组织中的高表达有预后变差的趋势,提示脂质代谢的紊乱可能是影响肝癌患者总生存期的危险因素。

关键词：乙型肝炎病毒脂质代谢重编程肝细胞肝癌

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急慢性感染中B淋巴细胞应答规律比较研究的病毒工具构建

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微生物与感染 2023年第6期18卷 321-330页

作者：金程萌白露李雨檬王倩瑜李建华复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部/卫健委/中国医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

在急性或慢性等不同感染情况下B淋巴细胞应答规律各异。本研究旨在构建重组Armstrong株和重组Clone13株淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus,LCMV),以诱导针对WE株糖蛋白(glycoprotein,GP)特异的B细胞受体(B c... 详细信息

在急性或慢性等不同感染情况下B淋巴细胞应答规律各异。本研究旨在构建重组Armstrong株和重组Clone13株淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus,LCMV),以诱导针对WE株糖蛋白(glycoprotein,GP)特异的B细胞受体(B cell receptor,BCR)转基因细胞KL25HL B细胞应答,从而为比较急慢性感染过程中宿主B细胞的免疫应答差异建立实验模型。首先,通过共转染细胞,使之转录LCMV基因组片段并表达病毒蛋白,成功拯救出重组LCMV-Armstrong(recombinant LCMV-Armstrong,rARM)和重组LCMV-Clone13(recombinant LCMV-Clone13,rCL13)。测序分析表明,这2种重组病毒的GP序列被成功替换为LCMV-WE株的GP序列,并证实它们在感染细胞后具备蚀斑形成能力。随后,本研究使用rARM及rCL13感染野生型C56BL/6J小鼠。结果表明,这2种重组病毒保留了野生LCMV-Armstrong(wild type LCMV-Armstrong,wtARM)或野生LCMV-Clone13(wild type LCMV-Clone13,wtCL13)株等所具备的急性或慢性感染特性。具体而言,在rARM和rCL13建立感染后,rARM将在1周内被宿主免疫系统快速清除,而rCL13可在宿主体内持续存在超过2个月。最后,用不同LCMV感染过继转移了KL25HL B细胞的野生型小鼠。结果显示,与wtARM或wtCL13相比,感染rARM或rCL13后可明显诱导特异性B细胞发生激活、增殖等免疫应答反应。本研究构建的rARM及rCL13在感染小鼠并过继KL25HL B细胞后,可作为急慢性感染中B淋巴细胞应答规律比较研究的有力工具,对于深入理解体液免疫应答机制具有重要意义。

关键词：淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 B细胞感染模型

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从效应蛋白多样性看革兰氏阳性菌Ⅶ型分泌系统功能多样性

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微生物与感染 2024年第3期19卷 177-185页

作者：张旸王德禹吴旸复旦大学上海医学院基础医学院教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海市病原微生物与感染前沿科学研究基地上海200032

Ⅶ型分泌系统(type VII secretion system,T7SS)是唯一的仅存在于革兰氏阳性细菌中的分泌系统。T7SS在细菌与细菌、细菌与宿主、细菌与环境的相互作用中发挥着重要功能,与细菌的生长和致病性密切相关。T7SS的功能多样性与其所分泌的效... 详细信息

Ⅶ型分泌系统(type VII secretion system,T7SS)是唯一的仅存在于革兰氏阳性细菌中的分泌系统。T7SS在细菌与细菌、细菌与宿主、细菌与环境的相互作用中发挥着重要功能,与细菌的生长和致病性密切相关。T7SS的功能多样性与其所分泌的效应蛋白的多样性密切相关。因此,本文将围绕T7SS所分泌的效应蛋白展开讨论,对效应蛋白的结构和功能、分泌机制及其基因转录水平的调控方式等研究进行综述,以期为进一步研究细菌的T7SS提供新的思路。

关键词： Ⅶ型分泌系统结核分枝杆菌金黄色葡萄球菌效应蛋白

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上海脑库脑组织样本的质量控制分析

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解剖学报 2021年第2期52卷 168-174页

作者：李凤娇咸伟伟卜硕蕾曹静丽吴劲松李文生尤琳雅复旦大学基础医学院人体解剖学与组织学胚胎学系上海200032 复旦大学生物医学研究院上海200032 复旦大学附属华山医院神经外科上海200040 上海市医学图像处理与计算机辅助手术重点实验室上海200032

目的通过对脑脊液pH值、脑组织RNA完整值(RIN)、转录组和蛋白质组检测以及形态学观察,评估上海脑库收集的脑组织用于后续生物学研究的可行性。方法使用pH试纸检测新鲜脑脊液pH值;使用安捷伦RNA 6000 Nano芯片和2100生物分析仪对低温冻... 详细信息

目的通过对脑脊液pH值、脑组织RNA完整值(RIN)、转录组和蛋白质组检测以及形态学观察,评估上海脑库收集的脑组织用于后续生物学研究的可行性。方法使用pH试纸检测新鲜脑脊液pH值;使用安捷伦RNA 6000 Nano芯片和2100生物分析仪对低温冻存的脑组织RNA进行完整性检测;使用BGIseq-500测序仪对低温冻存的颞上回(STG)或尾状核(CN)进行转录组测序;使用Q Exactive HF质谱仪对低温冻存脑组织进行蛋白质组分析;使用HE染色观察STG的形态学。结果捐献脑组织样本的脑脊液pH值在6.5左右;65%以上的低温冻存脑组织的RIN>6,RNA质量较好;转录组测序过滤后clean reads比值>20或30的碱基数占总碱基数比例基本达到80%以上,表明文库质量较高;质谱分析得到超过4000个蛋白质组,3万多个肽段,说明蛋白数据质量较好;脑组织形态学较为正常,能清晰观察到神经元形态。结论上海脑库脑组织样本的RNA和蛋白质质量能用于开展分子生物学相关研究,并可用于形态学观察。

关键词：脑脊液酸碱度脑组织核糖核酸蛋白质 HE染色人

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