目的:探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)在利妥昔单抗(rituximab)联合CHOP方案[环磷酰胺(cyclophosphamide)+多柔比星(doxorubicin)+长春新碱(oncovin/vincristin)+强的松(prednisone)](简称为R-CHOP方案)治...
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目的:探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)在利妥昔单抗(rituximab)联合CHOP方案[环磷酰胺(cyclophosphamide)+多柔比星(doxorubicin)+长春新碱(oncovin/vincristin)+强的松(prednisone)](简称为R-CHOP方案)治疗中对利妥昔单抗产生耐药的分子机制。方法:选取2株DLBCL细胞,生发中心B细胞亚型(germinal center B-cell-like,GCB)OCI-LY8(LY8)和活化的B细胞亚型(activated B-cell-1ike,ABC)NU-DUL-1细胞。采用FCM法检测亲本LY8和NUDUL-1细胞,以及耐药细胞株LY8-R、LY8-CHO、LY8-RCHO、NUDUL-1-R、NU-DUL-1-CHO和NU-DUL-1-RCHO中CD20和3种补体膜调控蛋白CD46、CD55和CD59的表达水平;应用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测CD20蛋白和m RNA的表达水平。收集SRY(性别决定区Y)-框转录因子2 [SRY(sex determining region Y)-box 2,SOX2]过表达的亲本LY8和NU-DUL-1细胞和沉默SOX2表达的耐药LY8-RCHO和NU-DUL-1-RCHO细胞,再用FCM法观察CD20、CD46、CD55及CD59的表达水平。采用免疫组织化学法检测25例至少接受过6次R-CHOP方案治疗无效的DLBCL患者治疗前后的肿瘤组织中CD20与SOX2的表达水平。结果 :与亲本细胞相比,在发生利妥昔单抗耐药的LY8-R、LY8-RCHO以及NU-DUL-1-R、NU-DUL-1-RCHO细胞株中膜蛋白CD20的表达水平均明显降低(P值均<0.001),仅对化疗药物CHO耐药的LY8-CHO与NU-DUL-1-CHO细胞株中膜蛋白CD20的表达水平无明显变化,补体膜调控蛋白CD46、CD55和CD59的表达水平均被下调(P值均<0.05)。蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法证实,CD20蛋白和m RNA的表达水平均明显降低(P值均<0.01和P值均<0.001)。亲本LY8和NU-DUL-1细胞中,过表达SOX2能明显降低CD20的表达水平(P值均<0.000 1),而在LY8-RCHO和NU-DUL-1-RCHO细胞中沉默SOX2表达后,CD20的表达水平明显上调(P值均<0.000 1)。免疫组织化学法检测结果提示,DLBCL患者经R-CHOP治疗后肿瘤组织中CD20的表达水平相对于治疗前明显下降(P <0.01),而SOX2的表达水平相对于治疗前明显升高(P <0.001),肿瘤组织中CD20与SOX2表达呈负相关性(r^2=0.523 3,P <0.000 1)。结论 :SOX2通过下调CD20的表达水平,诱导DLBCL细胞对利妥昔单抗治疗产生耐药。
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