检索结果-内蒙古大学图书馆

复旦学报（自然科学版） 2003年第4期42卷 584-587页

作者：李继喜冯从经季朝能李晔华杨歧生田亮谢毅毛裕民复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433 浙江大学生命科学学院杭州310027

克隆到脂肪芽孢杆菌Bacillusstearothermophilus中的对硝基酚磷酸酶(p nitrophenylphosphatase,pNPPase)基因,将其编码区cDNA连接到pQE30表达载体中,在***15中经IPTG诱导得到高效表达.用Ni NTASuperflow层析柱对表达产物进行了分离纯化,初步测定了pNPPase的酶学性质.发现它的反应最适pH是10.0,最适反应温度是55℃,热稳定性Tm值为52℃,Mg2+、Mn2+和Co2+对pNPPase的活性有一定的促进作用,而Zn2+和Ni2+对pNPPase没有影响.纯化后其比活为120U/mg.

关键词： pNPPase 表达纯化酶学性质

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复旦学报（自然科学版） 2016年第5期55卷 632-641页

作者：鲜孟君张双双刘建祥陆孙杰复旦大学生命科学学院植物学研究所遗传工程国家重点实验室上海200438

膜相关转录因子在调控植物生长发育、逆境响应中发挥重要作用.拟南芥膜相关转录因子bZIP60在响应生物和非生物胁迫中发挥功能.本研究发现bZIP60的非常规剪接受ABA诱导,bZIP60的突变体zip60在ABA处理后绿色子叶率显著降低,说明bZIP60负调... 详细信息

膜相关转录因子在调控植物生长发育、逆境响应中发挥重要作用.拟南芥膜相关转录因子bZIP60在响应生物和非生物胁迫中发挥功能.本研究发现bZIP60的非常规剪接受ABA诱导,bZIP60的突变体zip60在ABA处理后绿色子叶率显著降低,说明bZIP60负调控ABA诱导的种子休眠,促进种子萌发.为了进一步研究bZIP60在其中的作用,以bZIP60Δ为诱饵蛋白对cDNA文库进行筛选,最后筛选到24个可能与bZIP60Δ相互作用的蛋白.体外pull-down实验证明bZIP60Δ蛋白与其中一个MYB7蛋白有直接相互作用,荧光素酶互补实验和双分子荧光互补实验(BiFC)证明bZIP60Δ蛋白与MYB7蛋白在烟草细胞中具有相互作用.MYB7之前报道在种子萌发过程中通过抑制ABI5的表达来解除ABA对种子萌发的抑制.这些实验表明bZIP60活化后可能通过与MYB7相互作用协同拮抗ABA信号,促进种子萌发.

关键词： ABA bZIP60 MYB7 蛋白-蛋白相互作用种子萌发

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hTERT基因片段的克隆、表达和抗hTERT抗体用于端粒酶及hTERT检测的研究

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实验生物学报 2000年第3期33卷 229-235页

作者： SAID A.Saleh 孙建龙陈昭黄建生沈先荣张伯生任大明复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

端粒酶是一种重要的肿瘤生物学标志,其活性在生殖细胞、绝大多数肿瘤细胞和体外培养的永生细胞可以测知,但在大多数体细胞中不易测出。人端粒酶由两部分组成,包括hTERC和hTERT,hTERC在正常细胞和肿瘤细胞中均有表达,而hTERT的表达似乎... 详细信息

端粒酶是一种重要的肿瘤生物学标志,其活性在生殖细胞、绝大多数肿瘤细胞和体外培养的永生细胞可以测知,但在大多数体细胞中不易测出。人端粒酶由两部分组成,包括hTERC和hTERT,hTERC在正常细胞和肿瘤细胞中均有表达,而hTERT的表达似乎受到严格的调控且和端粒酶活性一致。为了检测肿瘤细胞中端粒酶及hTERT的表达,我们制备了抗hTERT蛋白的特异性多克隆抗体。首先用RT-PCR方法克隆了hTERT cDNA的一个片段,将其连接到GST融合表达载体pGEX-5X-3后在大肠杆菌中融合表达。将纯化的融合蛋白抗原免疫动物,制备抗hTERT蛋白的多克隆抗体。不同的细胞抽提物用该抗体进行了Western blot分析,结果表明该抗体可特异识别端粒酶阳性细胞株中的hTERT及端粒酶,为端粒酶及hTERT的检测初步提供了一个简单有效的检测手段。

关键词： hTERT基因片段 hTERT抗体免疫检测端粒酶

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通过启动子同源重组研究人凝血因子Ⅸ的组成型表达

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中国科学（C辑） 2000年第5期30卷 535-540页

作者：杨晓青王飞王颖卢大儒邱信芳薛京伦复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

为了探索定点整合基因治疗血友病B的可行性, 开展了在HeLa细胞中的hFIX组成型表达研究. 同源重组载体p921构建后, 电穿孔转入细胞, 经过GCV和G418克隆选择, 通过特异性的PCR证实了同源重组的发生, hCMV启动子定点替换hFIX基因在非肝细... 详细信息

为了探索定点整合基因治疗血友病B的可行性, 开展了在HeLa细胞中的hFIX组成型表达研究. 同源重组载体p921构建后, 电穿孔转入细胞, 经过GCV和G418克隆选择, 通过特异性的PCR证实了同源重组的发生, hCMV启动子定点替换hFIX基因在非肝细胞中可以被启动子hCMV转录表达, 显示人为进行基因表达调控的可行性.

关键词：同源重组启动子组成型表达凝血因子 DNA

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神经元素3蛋白(Ngn3)诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素表达细胞分化的初步研究

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复旦学报（自然科学版） 2008年第5期47卷 585-592,F0003页

作者：毋慧玲李戈陈静范薇薇沈坤堂卢大儒复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433 复旦大学附属中山医院普外科上海200032

胰腺发育相关基因神经元素3(neurogenin3,Ngn3),属于碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,bHLH)家族的转录因子,对胰腺内分泌细胞的发育及分化至关重要,且被认为是胰腺祖细胞的标志蛋白质.之前的研究发现,全长Ngn3蛋白具有蛋白质... 详细信息

胰腺发育相关基因神经元素3(neurogenin3,Ngn3),属于碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,bHLH)家族的转录因子,对胰腺内分泌细胞的发育及分化至关重要,且被认为是胰腺祖细胞的标志蛋白质.之前的研究发现,全长Ngn3蛋白具有蛋白质转导功能,可以高效进入多种真核细胞系.近年来多项研究显示,骨髓间充质干细胞是一种具有多向分化潜能的多能干细胞.利用蛋白质转导技术,将体外表达纯化的胰腺发育重要因子Ngn3蛋白导入体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞中,诱导其向胰岛素表达细胞分化.结果显示,经Ngn3蛋白诱导的大鼠骨髓间充质干细胞出现细胞聚集生长现象,并有形状类似胰岛的细胞团出现.RT-PCR结果显示经Ngn3蛋白诱导的大鼠骨髓间充质干细胞可以有效表达胰岛素,并且一些β细胞相关基因如胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic-duodenal homeobox 1,Pdx-1),神经分化因子(neurogenic differentiation,NeuroD),同源结构域基因4(paired box gene 4,Pax4),葡萄糖转运体-2(glucose transporter 2,Glut-2)都有表达.细胞免疫荧光也可检测到胰岛素的表达.通过Ngn3蛋白质诱导分化大鼠骨髓间充质干细胞的初步研究,探索了应用骨髓间充质干细胞体外诱导分化获得胰岛素表达细胞的可行性,为糖尿病治疗提供一定的实验依据.

关键词：蛋白质转导碱性螺旋-环-螺旋家族神经元素3 大鼠骨髓间充质干细胞胰岛素表达细胞

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α1-抗糜蛋白酶信号肽基因及载脂蛋白E基因多态性与帕金森病的关系

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中华医学杂志 2001年第19期81卷 1172-1175页

作者：郝怡鑫谢惠君郑惠民徐凌吴奇涵汪晓华林大宇汤国梅任大明第二军医大学附属长海医院神经内科复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室

目的　探讨α1 抗糜蛋白酶 (AACT)信号肽基因多态、载脂蛋白E(ApoE)基因多态与帕金森病 (PD)发病风险间的关系。方法　采用聚合酶链式反应限制性片断长度多态性方法 (PCR RFLP) ,在 6 4例PD患者、10 1例健康老人对照中观察AACT信号肽基... 详细信息

目的　探讨α1 抗糜蛋白酶 (AACT)信号肽基因多态、载脂蛋白E(ApoE)基因多态与帕金森病 (PD)发病风险间的关系。方法　采用聚合酶链式反应限制性片断长度多态性方法 (PCR RFLP) ,在 6 4例PD患者、10 1例健康老人对照中观察AACT信号肽基因多态、ApoE基因多态的分布 ,并通过比值比 (OR)对AACT多态、ApoE多态与PD作相关分析。结果　 (1)PD患者与正常老人间不存在AACT各等位基因多态分布的差异 (χ2 =0 83P =0 36 3>0 0 5 ) ,但PD患者AACT AA纯合子基因型与PD正关联 (OR =2 6 8,χ2 =4 31P =0 0 38<0 0 5 )。 (2 )ApoE基因多态性与PD之间不存在任何关联(等位基因 :χ2 =2 85P =0 2 41>0 0 5 ;基因型 :χ2 =9 2 5P =0 0 99>0 0 5 )。 (3)非ApoEε4型AACT AT杂合子基因型与PD负关联 (OR =0 47,χ2 =4 10P =0 0 43 <0 0 5 )。 (4)AACT AT杂合子型PD与ApoEε4等位基因正关联 (OR =3 2 6 ,χ2 =5 5 3P =0 0 19<0 0 5 )。结论　AACT AA纯合子基因型、ApoEε4型AACT AT杂合子基因型均可能是PD发病的风险因子。

关键词：帕金森病 α1-抗糜蛋白酶载脂蛋白E 基因多态性

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Bim蛋白促凋亡活性必需核心元件的识别与研究(英文)

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复旦学报（自然科学版） 2012年第3期51卷 307-314,321,F0003页

作者：夏鹏王瑧瑧刘凌峰黄强陈金中复旦大学生命科学学院、遗传学研究所、遗传工程国家重点实验室上海200433 长江大学医学院荆州434023

在之前的研究中,我们寻找并克隆到了一个新的Bim异构体Bimβ5,其转录从开放阅读框的第2个ATG起始,并编码一个包含BH3结构域的36个氨基酸的蛋白质.BH3结构域被认为是Bim蛋白及其他Bcl-2家族蛋白发挥作用的充分必要条件,因此有必要探寻其... 详细信息

在之前的研究中,我们寻找并克隆到了一个新的Bim异构体Bimβ5,其转录从开放阅读框的第2个ATG起始,并编码一个包含BH3结构域的36个氨基酸的蛋白质.BH3结构域被认为是Bim蛋白及其他Bcl-2家族蛋白发挥作用的充分必要条件,因此有必要探寻其序列中对Bim蛋白功能起决定作用的核心区域.通过设计并构建基于Bimβ5的开放阅读框的一系列截断体,检测不同截断体的促凋亡能力,最终得到了Bim蛋白发挥功能所需的最短保守序列,即包含17个氨基酸的序列QELRRIGDEFNAYYARR,并将其命名为Bim核心元件.此外,通过对只包含Bim核心元件的截断体Bimβ5A3进行计算机分子建模,进一步揭示了Bim核心元件促凋亡的作用机理.Bim核心元件在介导Bak/Bax形成同源或异源二聚体时发挥着重要作用.

关键词： Bim核心元件分子建模凋亡

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中国耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因突变特点

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Acta Genetica Sinica 2004年第12期31卷 1332-1336页

作者：乐军曾而良谢建平李瑶梁莉王洪海复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海市肺科医院上海200433 上海市肺科医院

为阐明中国耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因的突变特征 ,对 86株结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因两个区域 ,包括 81个碱基利福平抗药性决定区 (rifampinresistancedeterminingregion ,RRDR)和V176F区进行序列测定。其中 72株耐多... 详细信息

为阐明中国耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因的突变特征 ,对 86株结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因两个区域 ,包括 81个碱基利福平抗药性决定区 (rifampinresistancedeterminingregion ,RRDR)和V176F区进行序列测定。其中 72株耐多药分离株中的 6 5株rpoB基因的RRDR区存在 2 2种不同类型突变、2 1种点突变和一个插入突变。最常见的突变部位分别位于密码子 5 31(4 1% )、5 2 6 (4 0 % )和 5 16 (4 % ) ,10 %耐药分离株未检测到突变。鉴定了RRDR内 6个新的等位基因 ,以及RRDR外部区域 5个新的突变。

关键词：结核分枝杆菌耐药性 rpoB基因突变频率 DNA序列分析

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人端粒酶逆转录酶在大肠杆菌中表达的初步研究

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复旦学报（自然科学版） 2002年第6期41卷 621-625页

作者：吕韵哲孙建龙陈孟谦张伯生李景鹏任大明复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

端粒酶是迄今为止最为广谱的肿瘤标志物,是一种良好的肿瘤检测和治疗的靶分子.曾报道了人端粒酶逆转录酶(hTERT)一个基因片段的表达和相应的抗体用于端粒酶及hTERT检测的研究,为了获得更多针对hTERT不同表位的抗体,根据hTERT的抗原性进... 详细信息

端粒酶是迄今为止最为广谱的肿瘤标志物,是一种良好的肿瘤检测和治疗的靶分子.曾报道了人端粒酶逆转录酶(hTERT)一个基因片段的表达和相应的抗体用于端粒酶及hTERT检测的研究,为了获得更多针对hTERT不同表位的抗体,根据hTERT的抗原性进一步选取了hTERT的数个片段来制备抗体,这里初步探讨了这些抗原片段在大肠杆菌中的表达及各种因素对表达的影响.实验结果表明,位于hTERT蛋白中部和C末端的片段可在大肠杆菌中表达,但位于N末端的片段在各种条件下均不能表达.另外,就选取的hTERT各片段而言,诱导条件的优化只能在量上提高表达的水平,不能决定片段是否表达.而密码子偏好性,启动子强弱及mRNA二级结构的稳定性可能对片段的表达具有更大的决定作用.

关键词：大肠杆菌端粒酶人端粒酶逆转录酶表达肿瘤

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蝶呤型钼辅因子生物合成、运输及组装——潜在的药物靶标

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中国生物化学与分子生物学报 2011年第2期27卷 135-141页

作者：石廷玉王洪海谢建平西南大学生命科学学院现代生物医药研究所重庆400715 复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

钼辅因子作为氧化还原反应中的重要分子,参与硫、氮、碳的氧化还原代谢.钼辅因子主要分为两类:以铁硫簇为基础的铁钼辅因子和以亚钼蝶呤为基础的钼辅因子.钼-二-亚钼蝶呤-鸟苷二核苷钼辅因子(Mo-bis-MGD)是蝶呤型钼辅因子的重要成员之一... 详细信息

钼辅因子作为氧化还原反应中的重要分子,参与硫、氮、碳的氧化还原代谢.钼辅因子主要分为两类:以铁硫簇为基础的铁钼辅因子和以亚钼蝶呤为基础的钼辅因子.钼-二-亚钼蝶呤-鸟苷二核苷钼辅因子(Mo-bis-MGD)是蝶呤型钼辅因子的重要成员之一,是硝酸盐还原酶的重要辅因子.膜结合硝酸盐还原酶介导的硝酸盐还原为细菌提供了氮源和能源,与分枝杆菌的持留性感染相关.此外,膜结合硝酸盐还原酶能显著增加卡介苗在免疫缺陷鼠中的毒性.人与细菌中蝶呤型钼辅因子生物合成、运输和组装的差异提示,Mo-bis-MGD型钼辅因子的生物合成途径很可能作为新型药物靶标,有益于抗病原菌,尤其有利于抗多重耐药结核分枝杆菌新药的开发研究.

关键词：钼辅因子硝酸盐还原酶分枝杆菌

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