检索结果-内蒙古大学图书馆

中华结核和呼吸杂志 2004年第10期27卷 687-689页

作者：乐军刘丽蓉谢建平雷建强梁莉王洪海国家遗传工程重点实验室复旦大学生命科学学院遗传学研究所上海200433 上海市肺科医院

目的鉴定结核分枝杆菌异烟肼耐药菌株分泌蛋白中异烟肼耐药相关蛋白。方法应用二乙胺基乙基纤维素(DEAE)亲和凝胶层析,去除结核分枝杆菌7H9培养上清液中牛血清白蛋白。应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳(SDSPAGE)和疏水高效液相色谱技术... 详细信息

目的鉴定结核分枝杆菌异烟肼耐药菌株分泌蛋白中异烟肼耐药相关蛋白。方法应用二乙胺基乙基纤维素(DEAE)亲和凝胶层析,去除结核分枝杆菌7H9培养上清液中牛血清白蛋白。应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳(SDSPAGE)和疏水高效液相色谱技术,分离异烟肼耐药菌株特异蛋白,通过基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪进行质谱分析,获得肽质量指纹谱,通过蛋白质数据库进行检索分析。结果从3株异烟肼耐药菌株分泌蛋白中可重复检测出一种特异性分泌蛋白,经鉴定为海藻糖磷酸磷酸酶(TPP),分子量为46000,等电点为53。结论海藻糖磷酸磷酸酶可作为一种快速检测异烟肼耐药结核分枝杆菌的血清学标志物和抗结核药物的靶位。

关键词：异烟肼结核分枝杆菌分泌蛋白耐药菌株磷酸酶鉴定靶位质数结论检索

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人Rab蛋白cDNA的克隆和表达

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复旦学报（自然科学版） 2000年第6期39卷 688-691页

作者：陈宣茂孙朝辉王兆杨泉胜应康谢毅毛裕民复旦大学生命科学学院遗传学研究所上海200433 浙江大学生物系浙江杭州310027

从人胎脑cDNA文库中克隆到一种新的RabcDNA ,全长 92 0bp ,拟编码 2 13个氨基酸残基 ,该蛋白预测的分子质量为 2 45 6 7u ,等电点 7.34,经同源比较 ,该cDNA与GenBank数据库中登录号为X1496 4的Rab蛋白有 83 %的相似性和 76 %的相同性 .... 详细信息

从人胎脑cDNA文库中克隆到一种新的RabcDNA ,全长 92 0bp ,拟编码 2 13个氨基酸残基 ,该蛋白预测的分子质量为 2 45 6 7u ,等电点 7.34,经同源比较 ,该cDNA与GenBank数据库中登录号为X1496 4的Rab蛋白有 83 %的相似性和 76 %的相同性 .将该cDNA克隆到经改造的PBV2 2 0表达质粒 ,转化DH5α菌株诱导表达出该蛋白 .取 2 4种不同组织的总cDNA各 10 0ng ,用该基因序列设计引物作PCR ,结果在胎肝组织中检测到有明显条带 ,表明该Rab基因相对在胎肝有高表达 .

关键词： RAB基因 CDNA克隆原核表达表达谱分析人类克隆表达

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锌指结构基因ZNF302序列的克隆与表达谱分析

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复旦学报（自然科学版） 2000年第6期39卷 667-670页

作者：夏放杨泉胜应康戴建凉顾少华谢毅毛裕民复旦大学生命科学学院遗传学研究所上海200433 浙江大学生物系浙江杭州310027

从人胎脑cDNA文库中克隆到 1条 16 85nt的锌指蛋白新基因cDNA序列 ,命名为ZNF30 2 ;生物信息学分析表明 ,ZNF30 2的C末端含有 13个保守的C2 H2 锌指结构 ;Northern blot结果提示这一基因可能存在 3 .0kb和 4.2kb的 2种转录本 ;Unigene... 详细信息

从人胎脑cDNA文库中克隆到 1条 16 85nt的锌指蛋白新基因cDNA序列 ,命名为ZNF30 2 ;生物信息学分析表明 ,ZNF30 2的C末端含有 13个保守的C2 H2 锌指结构 ;Northern blot结果提示这一基因可能存在 3 .0kb和 4.2kb的 2种转录本 ;Unigene软件包分析 ,该基因定位于 19号染色体 19q13 .2 13 .3 ;cDNA基因芯片检测显示疤痕成纤维细胞经TGFβ1刺激和ECV30 4细胞经PMA ,LPS刺激后 ,ZNF30 2基因表达明显升高 ,提示其与细胞增殖的正调控有关 .

关键词：锌指蛋白生物信息学基因芯片锌指结构基因 ZNF302 序列分析表达谱

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水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白基因的克隆、表达及检测

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复旦学报（自然科学版） 2005年第4期44卷 528-533页

作者：路群明凤娄玉霞张珊珊周根余沈大棱上海师范大学生命与环境科学学院上海200234 复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室

以水稻(粳稻)cDNA为模板,设计一对特异性引物,获得编码水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白基因的全序列,ORF区编码含535个氨基酸的蛋白,具有磷酸盐转运蛋白保守的蛋白激酶C作用位点、N端糖基化位点与酪蛋白激酶Ⅱ作用位点.Southernblot分析显... 详细信息

以水稻(粳稻)cDNA为模板,设计一对特异性引物,获得编码水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白基因的全序列,ORF区编码含535个氨基酸的蛋白,具有磷酸盐转运蛋白保守的蛋白激酶C作用位点、N端糖基化位点与酪蛋白激酶Ⅱ作用位点.Southernblot分析显示此基因在水稻基因组中具有多个拷贝,与水稻基因组序列分析结果一致.Westernblot预测目的基因表达的蛋白大小约为57.7ku.该基因的真核表达研究正在进行中.

关键词：高亲和力磷酸盐转运蛋白水稻 Southern blot,Western blot

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甲硫氨酸合成酶还原酶基因多态性与肿瘤易感性关系的Meta分析

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复旦学报（自然科学版） 2009年第5期48卷 640-647页

作者：余科顾少华谢毅毛裕民季朝能复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

利用Meta分析方法系统性的评价甲硫氨酸合成酶还原酶基因（MTRR）A66G多态性与肿瘤易感性的关系.通过文献检索,收集国内外相关的病例对照研究文献,并对符合条件的研究结果进行Meta分析,包括亚组分析、敏感性检验,异质性检验,发表偏倚评... 详细信息

利用Meta分析方法系统性的评价甲硫氨酸合成酶还原酶基因（MTRR）A66G多态性与肿瘤易感性的关系.通过文献检索,收集国内外相关的病例对照研究文献,并对符合条件的研究结果进行Meta分析,包括亚组分析、敏感性检验,异质性检验,发表偏倚评估.最终纳入25篇文献,总共38项独立研究,累计13 901例肿瘤患者和20 385例对照个体.Meta分析结果显示,MTRR基因A66G多态性G等位基因能显著性提高肿瘤易感性（OR,1.05;P=0.006;95%CI,1.011.08;Pheterogeneity=0.193）.敏感性分析表明此关联不受单个研究或单种肿瘤的影响,说明了结果的可靠性.亚组分析和Meta回归分析揭示人群起源和研究设计都不是异质性来源,只有肿瘤类型是异质性来源.因此MTRR基因可能是肿瘤的一个易感微效基因,尤其对于淋巴细胞白血病和脑膜瘤.

关键词： MTRR 肿瘤基因多态性 Meta分析

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人类超氧化物歧化酶在酿酒酵母系统中的高效表达

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复旦学报（自然科学版） 2004年第2期43卷 156-162页

作者：何炜袁汉英高卜渝陈向岭李育阳复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

超氧化物歧化酶 (SOD)是一种在生物界广泛存在的抗氧化酶 ,在抗衰老、抗肿瘤、抗免疫疾病和电磁辐射上都起着重要的作用 .对一从人类胎肝cDNA文库中筛到的SOD基因片段进行重组、克隆 ,并得到带有启动子PADH2 GAPDH和终止子TADH1的高效... 详细信息

超氧化物歧化酶 (SOD)是一种在生物界广泛存在的抗氧化酶 ,在抗衰老、抗肿瘤、抗免疫疾病和电磁辐射上都起着重要的作用 .对一从人类胎肝cDNA文库中筛到的SOD基因片段进行重组、克隆 ,并得到带有启动子PADH2 GAPDH和终止子TADH1的高效稳定的酿酒酵母表达载体 pHC11 hSOD .转化酿酒酵母DCO4后获得工程菌DCO4 /pHC11 hSOD .表达产物经破壁后SDS PAGE电泳检测为 2 0ku的条带 ;酶活性测定结果表明发酵液有 4 0万U/L的hSOD活性 .此外 ,还研究了工程菌的发酵条件和hSOD产物的纯化方法 .纯化产物在SDS PAGE上和Superdex分子筛检测显示 ,所得产物的纯度已达 95

关键词：超氧化物歧化酶酿酒酵母高效表达

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利用双向电泳技术研究异烟肼耐药MTB感染U937引致的差异表达蛋白

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中国生物化学与分子生物学报 2006年第2期22卷 142-150页

作者：刘丽蓉乐军王洪海复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

利用双向电泳技术对结核分枝杆菌(MTB)异烟肼(INH)耐药株和敏感株感染人源巨噬细胞(U937)后的全细胞蛋白表达图谱进行差异比较和分析,发现其中产生差异的有86个蛋白质斑点.利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱技术对其中8个差异表达... 详细信息

利用双向电泳技术对结核分枝杆菌(MTB)异烟肼(INH)耐药株和敏感株感染人源巨噬细胞(U937)后的全细胞蛋白表达图谱进行差异比较和分析,发现其中产生差异的有86个蛋白质斑点.利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱技术对其中8个差异表达蛋白质斑点进行分析鉴定,获得8个明确的肽质量指纹图谱.通过在蛋白质数据库中进行检索分析,确定这8个蛋白质中的2个为在INH耐药株感染的U937中差异表达的干细胞生长因子和主要组织相容性复合物Ⅰ类抗原,6个为在敏感株感染的U937中差异表达的微管蛋白4β、信号转导和转录激活子3、延长因子-2激酶、环指蛋白29、锌指蛋白193和SNARE Vti1a-β蛋白.实验结果显示,INH耐药株和敏感株感染后的U937表达蛋白有差异,这有助于分析解释临床中观察到的受INH耐药株感染的病例出现毒力下降、致病性下降、传染性降低以及潜伏期延长的现象.结果为针对INH耐药株进行的新疫苗的设计提供了探索方向.

关键词：结核分枝杆菌异烟肼耐药巨噬细胞双向电泳差异表达

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BRMS1过表达促进肝癌SK-HEP-1细胞凋亡

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复旦学报（自然科学版） 2009年第5期48卷 633-639页

作者：方晓王英明乔守怡复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

BRMS1基因和多种肿瘤的转移有关,但其在肝癌发生和转移中的作用及机制仍有待研究.Westernblot的结果显示在SK-HEP-1细胞中检测到差异剪接体2的表达,Hep G2细胞仅检测到差异剪接体1,而L-02和Hep 3B细胞两种差异剪接体都表达,而且在表达... 详细信息

BRMS1基因和多种肿瘤的转移有关,但其在肝癌发生和转移中的作用及机制仍有待研究.Westernblot的结果显示在SK-HEP-1细胞中检测到差异剪接体2的表达,Hep G2细胞仅检测到差异剪接体1,而L-02和Hep 3B细胞两种差异剪接体都表达,而且在表达差异剪接体1的3株细胞中,Hep 3B细胞差异剪接体1的表达量较高,另两个较低.实时定量PCR对BRMS1基因差异剪接体1的表达进一步检测,发现SK-HEP-1细胞的表达水平最低,Hep 3B最高,L-02和Hep G2介于两者之间.随后以Hep G2细胞的mRNA为模板,扩增人的BRMS1基因差异剪接体1,构建pEGFP-BRMS1质粒,在SK-HEP-1细胞株进行过表达,并用Annexin V-PE和7-AAD双染的流式细胞术研究BRMS1对SK-HEP-1细胞凋亡的影响,结果显示:pEGFP-BRMS1转染组两种染料双阳性,即处于凋亡后期的细胞数目显著高于pEGFP-N2对照组;用PI单染检测存活率,发现pEGFP-BRMS1转染组与pEGFP-N2对照组相比存活率显著降低.上述实验结果表明,BRMS1基因的过表达能够促进SK-HEP-1细胞的凋亡,抑制细胞生存,从而为BRMS1基因抑制肝癌转移机制的阐明提供思路.

关键词： BRMSl基因细胞凋亡肝癌

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人SSX2IP与14-3-3η蛋白相互作用研究

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中国生物工程杂志 2010年第7期30卷 1-6页

作者：王佳琦李璞施慧莉霍克克复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

人类SSX2IP是SSX2蛋白的相互作用蛋白,它与肿瘤的发生、发展有着密切的相关性。为进一步阐明人类SSX2IP蛋白的潜在功能,以其作为诱饵蛋白对成人肝cDNA文库进行酵母双杂交筛选,结果筛到了SSX2IP的一个新相互作用蛋白14-3-3η。利用GSTPul... 详细信息

人类SSX2IP是SSX2蛋白的相互作用蛋白,它与肿瘤的发生、发展有着密切的相关性。为进一步阐明人类SSX2IP蛋白的潜在功能,以其作为诱饵蛋白对成人肝cDNA文库进行酵母双杂交筛选,结果筛到了SSX2IP的一个新相互作用蛋白14-3-3η。利用GSTPull-down实验和细胞内免疫共沉淀实验在体内外验证了该相互作用的真实性。通过免疫荧光共定位实验发现SSX2IP和14-3-3η共表达于HeLa细胞时,它们共定位于胞质及核周。利用CCK-8法检测SSX2IP和14-3-3η对HEK293T细胞增殖的影响,发现共转染SSX2IP和14-3-3η后,HEK293T细胞的增殖速度有所提高。这些结果为进一步深入研究SSX2IP与14-3-3η的相互作用及其生物学功能提供新的线索。

关键词： SSX21 14-3-3η 酵母双杂交肿瘤

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人蛋白激酶Bγ基因的cDNA克隆、组织表达谱分析及染色体定位

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科学通报 2000年第10期45卷 1009-1017页

作者：蓝斐余龙胡培蓉毛大芩李晓泉张民黄海赵寿元复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

蛋白激酶Ｂ（ＰＫＢ）是受第二信使调控的一类蛋白激酶，在细胞周期调控、葡萄糖吸收和促进细胞分化等生命活动中具有重要作用由于其活性在某些人类肿瘤组织中有明显提高，且参与了Ｒａｓ信号传导通路，提示其在某些肿瘤的形成过程中起... 详细信息

蛋白激酶Ｂ（ＰＫＢ）是受第二信使调控的一类蛋白激酶，在细胞周期调控、葡萄糖吸收和促进细胞分化等生命活动中具有重要作用由于其活性在某些人类肿瘤组织中有明显提高，且参与了Ｒａｓ信号传导通路，提示其在某些肿瘤的形成过程中起介导作用以小鼠Ｐｋｂγ基因的核苷酸序列为探针，用同源筛选方法，从人肝ｃＤＮＡ文库中步移获得一个长１９９８ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，包含一段长１４４０ｂｐ的ＯＲＦ，它编码了４７９个氨基酸残基．而后用“电子步移”筛选法，将该ｃＤＮＡ的３’端延伸至２７８８ｂｐ，并用ＰＣＲ扩增法予以证实．该基因与已知的人ＰＫＢα， β的氨基酸序列的同源度分别高达８３％和７８％．表达谱分析发现该基因有两个转录本，其表达丰度基本相同，大小分别为６．５和８．５ｋｂ．该基因在人脑组织中表达量最高，在另１５种组织也有不同量的表达．经过ＲＨ制图分析，发现人ＰＫＢγ基因位于染色体１ｑ４３区带的Ｄ１Ｓ３０４和Ｄ１Ｓ２６９３位标之间，这对于候选克隆已连锁定位于该区带的前列腺癌，右心室扩张性心肌病，ＮＫ细胞缺陷和甲状旁腺功能减退性身材矮小、智力低下及癫痫发作综合征等疾病基因亦将具有重要的参考价值。

关键词：蛋白激酶Bγ基因 cDNA克隆组织表达谱染色体

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