检索结果-内蒙古大学图书馆

复旦学报(自然科学版) 2025年第2期64卷 148-159页

作者：吴若男尹安琪余垚周峻岗吕红复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

马克斯克鲁维酵母是一种生长速度快、蛋白质合成能力强的食品级酵母,具有研究价值与工业应用潜力。本研究以豆血红蛋白A(Leghemoglobin A,Lba)为靶蛋白,通过H 2O 2和UV联合诱变筛选获得马克斯克鲁维酵母重组蛋白高产突变株F6-30,其Lba... 详细信息

马克斯克鲁维酵母是一种生长速度快、蛋白质合成能力强的食品级酵母,具有研究价值与工业应用潜力。本研究以豆血红蛋白A(Leghemoglobin A,Lba)为靶蛋白,通过H 2O 2和UV联合诱变筛选获得马克斯克鲁维酵母重组蛋白高产突变株F6-30,其Lba产量提高67%。F6-30表现出高产通用性,表达其他异源蛋白如阿魏酸酯酶、甘露聚糖酶和木聚糖酶时产量分别提升111%、119%和39.4%。转录组测序分析显示在表达Lba的情况下F6-30与出发菌株相比在发酵24 h和60 h分别有1629个和1841个基因有显著差异,上调基因分别有604个和540个,下调基因分别有1025个和1301个。GO富集分析显示显著差异基因富集在翻译过程、RNA加工以及溶酶体和自噬相关GO条目;KEGG富集分析显示富集通路主要为核糖体生物发生、氨基酸合成代谢、核苷酸代谢等,表明突变株中蛋白质翻译途径显著加强,自噬途径及蛋白酶体途径以及氨基酸合成代谢被削弱。

关键词：马克斯克鲁维酵母转录组重组蛋白表达豆血红蛋白A

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保留型与反转型β-木糖苷酶活性位点的分子动力学模拟

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物理化学学报 2015年第6期31卷 1169-1178页

作者：张俊威周峻岗吕红黄强复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海工业菌株工程技术研究中心上海200433 上海生物制造技术协同创新中心上海200237

木聚糖是潜在的重要可再生能源,如何提高其降解效率已成为近年来的研究热点.β-木糖苷酶是木聚糖降解过程中的关键酶之一,按其水解机制可分为保留型与反转型酶.目前虽然对于这两种催化机制的研究不断深入,但很少有工作从溶液环境的角度... 详细信息

木聚糖是潜在的重要可再生能源,如何提高其降解效率已成为近年来的研究热点.β-木糖苷酶是木聚糖降解过程中的关键酶之一,按其水解机制可分为保留型与反转型酶.目前虽然对于这两种催化机制的研究不断深入,但很少有工作从溶液环境的角度出发探究它们的差异.本文采用分子动力学模拟方法,对4个典型的β-木糖苷酶进行了显式溶剂模拟研究,详细分析了酶的催化氨基酸间的距离和质子供体氨基酸p Ka值的动态变化.结果显示,反转型酶催化氨基酸间的距离约为0.8-1.0 nm,大于保留型的0.5-0.6 nm,与先前对糖苷酶晶体结构的统计分析结果一致.令人意外的是,保留型酶的质子供体通过与其附近组氨酸的相互作用,其p Ka在两个不同的高、低值之间交替变换,使保留型酶的双取代反应得以发生;而反转型酶的质子供体则由附近的天冬氨酸调节,其p Ka稳定在某个较高值,这可能有利于其在反应p H值下获得水溶液中的氢离子,进行反转型酶特有的单取代反应.因此,本工作加深了人们对β-木糖苷酶保留型与反转型水解机制的认识,并为后续酶的理性改造与高效利用提供具有指导价值的结构与机理信息.

关键词： β-木糖苷酶催化机制分子建模质子供体 p Ka值

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一种改良的分枝菌酸提取及其非放射性TLC检测方法

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生物工程学报 2023年第9期39卷 3827-3837页

作者：徐思悦狄玉昌迟明哲胡酉炜张潇张雪莲复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200433 复旦大学上海工业菌株工程技术研究中心上海200433

分枝菌酸(mycolic acid,MA)是存在于分枝杆菌细胞壁中的独特长链脂肪酸,与分枝杆菌(mycobacterium)抵御不利环境、耐受抗生素和逃避宿主免疫密切相关,是较热门的抗结核药物筛选的靶点。MA的检测方法主要有放射性薄层层析(thin-layer chr... 详细信息

分枝菌酸(mycolic acid,MA)是存在于分枝杆菌细胞壁中的独特长链脂肪酸,与分枝杆菌(mycobacterium)抵御不利环境、耐受抗生素和逃避宿主免疫密切相关,是较热门的抗结核药物筛选的靶点。MA的检测方法主要有放射性薄层层析(thin-layer chromatography,TLC)和液相色谱-质谱(liquid chromatograph mass spectrometer,LC-MS),受放射性元素使用资质和标准品等的限制,MA分析是分枝杆菌相关研究的一个难点。本研究采用一种普通薄层层析技术,并对使用四丁基氢氧化铵溶液水解酯化的分枝菌酸,将其甲酯化后再用无水乙醚萃取分枝菌酸甲酯的操作步骤进行改良,使分枝杆菌的MA提取及分析可在常规生物实验室中开展。研究通过比较不同分枝杆菌及不同生长时期的MA成分与亚型特征、检测靶向分枝菌酸合成通路的抗结核药物对细菌MA合成影响以及分枝杆菌突变株对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)H37Ra分枝菌酸合成影响等基础和应用研究的3个方面,进一步验证该方法在分枝杆菌MA分析中的实用性。结果表明该方法在不使用放射性元素和缺少标准品情况下可简便快速地分析MA及亚型特征,可广泛用于新型抗分枝杆菌药物筛选靶向分枝菌酸合成通路机制及基础研究中MA相关的分析和应用。

关键词：分枝杆菌分枝菌酸薄层层析

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马克斯克鲁维酵母发酵苹果酒的化学成分与抗氧化活性

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食品与发酵工业 2023年第7期49卷 80-89页

作者：兰青张志勇余垚周峻岗吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

近年来,由于非酿酒酵母属酵母发酵能够产生更多的风味物质,备受酿酒师的青睐。马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种食品安全级的非常规酵母,可用于生产生物酶、木糖醇和芳香化合物等。该研究以Saccharomyces bayanus SAF... 详细信息

近年来,由于非酿酒酵母属酵母发酵能够产生更多的风味物质,备受酿酒师的青睐。马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种食品安全级的非常规酵母,可用于生产生物酶、木糖醇和芳香化合物等。该研究以Saccharomyces bayanus SAF作为对照,通过发酵苹果酒的化学成分和抗氧化活性对比分析,研究了***酿造苹果酒的特征。在25~35℃条件下,***能够在96 h内完成乙醇发酵,产量约56.8 g/L。顶空固相微萃取-气相色谱-质谱(head space-solid phase micro-extraction gas chromatography-mass spectrometry,HS-SPME-GC-MS)分析结果表明,***发酵产生的乙酸-3-甲基-1-丁酯、辛酸乙酯、己酸乙酯等酯类物质的均高于***。2种苹果酒液相色谱-质谱联用仪(liquid chromatograph mass spectrometer,LC-MS)分析鉴定出41种抗氧化成分,其中***苹果酒的总多酚含量比SAF苹果酒高出约17.5%。

关键词：马克斯克鲁维酵母苹果酒挥发性成分抗氧化性

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微生物与发酵工艺对苹果酒品质影响的研究概述

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食品与发酵工业 2022年第19期48卷 287-294页

作者：张志勇刘震周峻岗吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

苹果酒是世界第二大发酵果酒品类。中国作为世界第一大苹果生产国,苹果酒市场潜力巨大,但苹果原料、发酵菌种和生产工艺的标准体系还有待完善。文章综述了苹果品种、成熟度、发酵菌种和发酵工艺对苹果酒品质的影响。挥发性香气物质和非... 详细信息

苹果酒是世界第二大发酵果酒品类。中国作为世界第一大苹果生产国,苹果酒市场潜力巨大,但苹果原料、发酵菌种和生产工艺的标准体系还有待完善。文章综述了苹果品种、成熟度、发酵菌种和发酵工艺对苹果酒品质的影响。挥发性香气物质和非挥发性的糖、有机酸和多酚类物质是苹果酒的主要成分。酯类是苹果酒的主要香气成分,多酚对苹果酒的口感起重要作用。苹果原料、酵母菌种、发酵温度等对苹果酒的品质有显著影响。通过酿酒苹果品种的筛选、非酿酒酵母属酵母的开发和多菌种的混合发酵来提升苹果酒的风味多样性,将是苹果酒的研究热点。

关键词：苹果酒成分香气酵母发酵工艺

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组蛋白H3K4甲基转移酶复合物亚基Ash2参与裂殖酵母产孢

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遗传 2014年第9期36卷 943-951页

作者：王文超周欢余垚吕红复旦大学生命科学学院、遗传工程国家重点实验室上海200433 上海市工业菌株工程技术研究中心上海200433

在氮源缺乏及信息素存在的条件下,裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)进行减数分裂并完成产孢。在此过程中,信息素介导的MAPK(Mitogen-activated protein kinases)信号通路调控减数分裂相关基因的表达。Spk1是MAPK通路的核心成员,通... 详细信息

在氮源缺乏及信息素存在的条件下,裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)进行减数分裂并完成产孢。在此过程中,信息素介导的MAPK(Mitogen-activated protein kinases)信号通路调控减数分裂相关基因的表达。Spk1是MAPK通路的核心成员,通过蛋白磷酸化的方式激活转录因子Ste11,从而激活mei2+、mam2+和map3+等减数分裂相关基因的表达。尽管组蛋白H3K4甲基化参与基因转录激活、染色质重塑等诸多生物学过程,但其在裂殖酵母产孢过程中的作用并不清楚。文章通过序列比对,发现裂殖酵母Ash2作为H3K4甲基转移酶复合物COMPASS的亚基具有两个保守的结构域,定位于细胞核内参与H3K4的甲基化修饰。ash2+的缺失引起裂殖酵母在氮源缺乏时产孢过程的延迟及产孢率下降。ChIP、定量PCR分析结果显示,ash2+的缺失降低了spk1+编码区H3K4的二甲基化水平,造成spk1+mRNA水平的明显下调。在ash2Δ细胞中,虽然ste11+的转录水平没有变化,但Ste11的靶基因mei2+、mam2+和map3+的转录水平明显下降。在裂殖酵母中,组蛋白H3K4甲基转移酶复合物COMPASS的亚基Ash2通过调控二甲基化水平修饰从而调节MAPK信号通路,参与裂殖酵母的有性生殖,为建立表观遗传修饰与减数分裂之间的联系提供了新的线索。

关键词：裂殖酵母 H3K4甲基化 Ash2 产孢 MAPK

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新型α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶RuAra1的表达与鉴定

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复旦学报（自然科学版） 2014年第1期53卷 99-106页

作者：夏婷颖周峻岗吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海工业菌株工程技术研究中心上海200433

随着能源问题的日益突出,半纤维素资源的利用逐渐受到人们的重视.α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-Larabinofuranosidase,EC 3.2.1.55)属于半纤维素酶系,能水解以α-1,3、α-1,2或α-1,5键连在木聚糖主链上的阿拉伯糖单体或低聚阿拉伯糖侧支.... 详细信息

随着能源问题的日益突出,半纤维素资源的利用逐渐受到人们的重视.α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-Larabinofuranosidase,EC 3.2.1.55)属于半纤维素酶系,能水解以α-1,3、α-1,2或α-1,5键连在木聚糖主链上的阿拉伯糖单体或低聚阿拉伯糖侧支.本实验室将克隆得到的α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基因RuAral在大肠杆菌中重组表达,得到的重组阿拉伯呋喃糖苷酶RuAral能够水解4-硝基酚-α-L-阿拉伯糖苷(4-Nitrophenyl-α-Larabinofuranoside,pNPA)、4-硝基酚-β-D-吡喃木糖苷(4-Nitrophenyl-β-D-xylopyranoside,pNPX)以及从小麦阿拉伯木聚糖中水解释放阿拉伯单糖.以pNPX为底物时,该酶的最适反应pH为6.0,最适反应温度为50℃.RuAral与瘤胃真菌(Neocallimastix patriciarum)内切木聚糖酶XynCIDBFV、瘤胃细菌木糖苷酶RuXynl的组合使用可以实现对小麦阿拉伯木聚糖的协同降解,且降解效率优于德国AB酶制剂公司的商品酶ROHALASE WP.

关键词： α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶半纤维素降解酶系小麦阿拉伯木聚糖宏基因组

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马克斯克鲁维酵母的遗传与生理特征

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中国科学：生命科学 2016年第4期46卷 413-419页

作者：莫文娟郭超吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)广泛存在于酸奶、水果、酸乳酒等环境中,是食品安全级酵母,在一个多世纪前被分离获得.近20年来,由于该酵母表现出的食品安全性、高生长速率、高生物量、耐高温等特征,得到生产应用领域的关注... 详细信息

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)广泛存在于酸奶、水果、酸乳酒等环境中,是食品安全级酵母,在一个多世纪前被分离获得.近20年来,由于该酵母表现出的食品安全性、高生长速率、高生物量、耐高温等特征,得到生产应用领域的关注.本文从***的基因组遗传特征、分类以及细胞生长、细胞壁组成、糖基化修饰等方面进行了综述,以期系统认识和了解***酵母.

关键词：马克斯克鲁维酵母基因组性别转换糖基化工业应用

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犬细小病毒病毒样颗粒在马克斯克鲁维酵母中的表达及免疫原性研究

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复旦学报（自然科学版） 2018年第6期57卷 732-739页

作者：陈蕾段进坤朱培霞周峻岗余垚吕红复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438 复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438

犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的一种急性、高度接触性传染病,是目前影响犬类健康的最严重的传染病之一.疫苗免疫是预防并控制CPV传播的重要措施.本研究以马克斯克鲁维酵母作为表达宿主进行犬细小病毒VP2蛋白... 详细信息

犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的一种急性、高度接触性传染病,是目前影响犬类健康的最严重的传染病之一.疫苗免疫是预防并控制CPV传播的重要措施.本研究以马克斯克鲁维酵母作为表达宿主进行犬细小病毒VP2蛋白的重组表达.犬细小病毒VP2蛋白经密码子优化后,在马克斯克鲁维酵母中获得高效表达,表达量可达到2.4g/L.重组表达的VP2蛋白自我组装形成大小为20nm的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),经分子筛凝胶层析纯化的VLPs制成疫苗,注射免疫小鼠进49天后抗体滴度可达10 000以上,并诱导小鼠产生血凝抑制抗体,表明利用马克斯克鲁维酵母制备的VLPs疫苗具有较高的免疫原性.

关键词：犬细小病毒病毒样颗粒衣壳蛋白马克斯克鲁维酵母

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一种针对马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)的无痕基因组改造方法

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复旦学报（自然科学版） 2016年第5期55卷 576-586页

作者：郭超陈勇毅周峻岗余垚吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

马克斯克鲁维酵母位于酵母科克鲁维属,具有高分泌能力、高生长速率、多底物利用以及耐高温等特点,具有工业应用前景.因此,建立马克斯克鲁维酵母的基因工程改造技术十分重要.本文以马克斯克鲁维酵母URA3基因缺陷菌株为出发菌株,依据同源... 详细信息

马克斯克鲁维酵母位于酵母科克鲁维属,具有高分泌能力、高生长速率、多底物利用以及耐高温等特点,具有工业应用前景.因此,建立马克斯克鲁维酵母的基因工程改造技术十分重要.本文以马克斯克鲁维酵母URA3基因缺陷菌株为出发菌株,依据同源重组原理,选用KmURA3作为可循环使用的筛选标签基因,建立了一种针对马克斯克鲁维酵母的无残留多基因敲除技术,以满足其遗传工程改造的需求.本研究利用这种技术成功构建了Kmhis3Δ、Kmura3Δhis3Δ、Kmura3Δade2Δ、Kmura3Δhis3Δade2Δ、Kmhis3Δade2Δ等5株营养缺陷型菌株,为马克斯克鲁维酵母的分子遗传学研究以及工业应用研究提供了遗传材料.

关键词：马克斯克鲁维酵母多基因敲除 KmURA3基因 KmHIS3基因 KmADE2基因

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