检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2023年第9期39卷 3827-3837页

作者：徐思悦狄玉昌迟明哲胡酉炜张潇张雪莲复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200433 复旦大学上海工业菌株工程技术研究中心上海200433

分枝菌酸(mycolic acid,MA)是存在于分枝杆菌细胞壁中的独特长链脂肪酸,与分枝杆菌(mycobacterium)抵御不利环境、耐受抗生素和逃避宿主免疫密切相关,是较热门的抗结核药物筛选的靶点。MA的检测方法主要有放射性薄层层析(thin-layer chr... 详细信息

分枝菌酸(mycolic acid,MA)是存在于分枝杆菌细胞壁中的独特长链脂肪酸,与分枝杆菌(mycobacterium)抵御不利环境、耐受抗生素和逃避宿主免疫密切相关,是较热门的抗结核药物筛选的靶点。MA的检测方法主要有放射性薄层层析(thin-layer chromatography,TLC)和液相色谱-质谱(liquid chromatograph mass spectrometer,LC-MS),受放射性元素使用资质和标准品等的限制,MA分析是分枝杆菌相关研究的一个难点。本研究采用一种普通薄层层析技术,并对使用四丁基氢氧化铵溶液水解酯化的分枝菌酸,将其甲酯化后再用无水乙醚萃取分枝菌酸甲酯的操作步骤进行改良,使分枝杆菌的MA提取及分析可在常规生物实验室中开展。研究通过比较不同分枝杆菌及不同生长时期的MA成分与亚型特征、检测靶向分枝菌酸合成通路的抗结核药物对细菌MA合成影响以及分枝杆菌突变株对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)H37Ra分枝菌酸合成影响等基础和应用研究的3个方面,进一步验证该方法在分枝杆菌MA分析中的实用性。结果表明该方法在不使用放射性元素和缺少标准品情况下可简便快速地分析MA及亚型特征,可广泛用于新型抗分枝杆菌药物筛选靶向分枝菌酸合成通路机制及基础研究中MA相关的分析和应用。

关键词：分枝杆菌分枝菌酸薄层层析

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马克斯克鲁维酵母发酵苹果酒的化学成分与抗氧化活性

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食品与发酵工业 2023年第7期49卷 80-89页

作者：兰青张志勇余垚周峻岗吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

近年来,由于非酿酒酵母属酵母发酵能够产生更多的风味物质,备受酿酒师的青睐。马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种食品安全级的非常规酵母,可用于生产生物酶、木糖醇和芳香化合物等。该研究以Saccharomyces bayanus SAF... 详细信息

近年来,由于非酿酒酵母属酵母发酵能够产生更多的风味物质,备受酿酒师的青睐。马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种食品安全级的非常规酵母,可用于生产生物酶、木糖醇和芳香化合物等。该研究以Saccharomyces bayanus SAF作为对照,通过发酵苹果酒的化学成分和抗氧化活性对比分析,研究了***酿造苹果酒的特征。在25~35℃条件下,***能够在96 h内完成乙醇发酵,产量约56.8 g/L。顶空固相微萃取-气相色谱-质谱(head space-solid phase micro-extraction gas chromatography-mass spectrometry,HS-SPME-GC-MS)分析结果表明,***发酵产生的乙酸-3-甲基-1-丁酯、辛酸乙酯、己酸乙酯等酯类物质的均高于***。2种苹果酒液相色谱-质谱联用仪(liquid chromatograph mass spectrometer,LC-MS)分析鉴定出41种抗氧化成分,其中***苹果酒的总多酚含量比SAF苹果酒高出约17.5%。

关键词：马克斯克鲁维酵母苹果酒挥发性成分抗氧化性

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基于文献和专利分析非葡萄酒类果酒技术领域发展现状

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食品与发酵工业 2023年第23期49卷 332-337,346页

作者：陈莹张志勇余垚周峻岗吕红国家知识产权局专利审查协作北京中心北京100070 复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

为了解非葡萄酒类果酒领域的研究现状与发展趋势,该文检索了Web of Science数据库和incoPat专利平台2000—2021年非葡萄酒类果酒相关的文献和专利,并进行了文献和专利数据的可视化分析。非葡萄酒类果酒研究文献中,苹果酒文献发表量居第... 详细信息

为了解非葡萄酒类果酒领域的研究现状与发展趋势,该文检索了Web of Science数据库和incoPat专利平台2000—2021年非葡萄酒类果酒相关的文献和专利,并进行了文献和专利数据的可视化分析。非葡萄酒类果酒研究文献中,苹果酒文献发表量居第一位,主要研究方向为苹果品系、发酵菌株、成分和功能性的探究。发酵对非葡萄酒类果酒感官品质的影响是最新的研究热点。专利可视化分析结果表明,苹果酒、桑葚酒和蓝莓酒的专利申请量分列前3位;中国非葡萄酒类果酒专利的申请量居全球首位,占比超过75%。非葡萄酒类果酒生产技术研究方向主要集中于酿造工艺和微生物菌株。

关键词：文献计量专利技术可视化非葡萄酒类果酒

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微生物与发酵工艺对苹果酒品质影响的研究概述

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食品与发酵工业 2022年第19期48卷 287-294页

作者：张志勇刘震周峻岗吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

苹果酒是世界第二大发酵果酒品类。中国作为世界第一大苹果生产国,苹果酒市场潜力巨大,但苹果原料、发酵菌种和生产工艺的标准体系还有待完善。文章综述了苹果品种、成熟度、发酵菌种和发酵工艺对苹果酒品质的影响。挥发性香气物质和非... 详细信息

苹果酒是世界第二大发酵果酒品类。中国作为世界第一大苹果生产国,苹果酒市场潜力巨大,但苹果原料、发酵菌种和生产工艺的标准体系还有待完善。文章综述了苹果品种、成熟度、发酵菌种和发酵工艺对苹果酒品质的影响。挥发性香气物质和非挥发性的糖、有机酸和多酚类物质是苹果酒的主要成分。酯类是苹果酒的主要香气成分,多酚对苹果酒的口感起重要作用。苹果原料、酵母菌种、发酵温度等对苹果酒的品质有显著影响。通过酿酒苹果品种的筛选、非酿酒酵母属酵母的开发和多菌种的混合发酵来提升苹果酒的风味多样性,将是苹果酒的研究热点。

关键词：苹果酒成分香气酵母发酵工艺

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马克斯克鲁维酵母FIM1基因组分析

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复旦学报（自然科学版） 2022年第3期61卷 303-312,316页

作者：罗通宇曾俊源吕奕琳周峻岗余垚吕红复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种富有潜力的新型细胞工厂宿主菌。*** FIM1(CGMCC No.10621)基因组组装与注释已于2019年完成并在NCBI上公布(GCA_001854445.2),但在应用该基因组信息时发现其仍不完善。所以本研究使用... 详细信息

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种富有潜力的新型细胞工厂宿主菌。*** FIM1(CGMCC No.10621)基因组组装与注释已于2019年完成并在NCBI上公布(GCA_001854445.2),但在应用该基因组信息时发现其仍不完善。所以本研究使用重测序的DNA-seq数据校验了*** FIM1的基因组序列,随后补充了*** FIM1的注释,并使用比较基因组学的方法进一步完善了*** FIM1的基因组信息。根据重测序比对结果,删除了测序数据无法覆盖的位点61处,共4910bp。*** FIM1新序列总长为10909543bp,可覆盖酵母目保守基因库中99.5%的基因。同时对*** FIM1的非编码RNA、次级代谢产物基因簇的也进行了补充注释。进一步,我们使用基因组共线性分析的方法分析了*** FIM1在物种分化过程中基因排列顺序保守的区域,并将*** FIM1与NCBI公布的11株***进行了种内基因组比较。发现12株***早在约180万年前分化为两个亚型,它们共有的同源基因家族有4009个,基因组中核心基因平均占比为79.88%,预测***为闭合型泛基因组,核心基因数为3760个,为*** FIM1遗传学的研究与遗传工程的改造提供了数据支持。

关键词：马克斯克鲁维酵母基因组校验基因组注释比较基因组学

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马克斯克鲁维酵母重组蛋白高产突变株的转录组分析

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复旦学报(自然科学版) 2025年第2期64卷 148-159页

作者：吴若男尹安琪余垚周峻岗吕红复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

马克斯克鲁维酵母是一种生长速度快、蛋白质合成能力强的食品级酵母,具有研究价值与工业应用潜力。本研究以豆血红蛋白A(Leghemoglobin A,Lba)为靶蛋白,通过H 2O 2和UV联合诱变筛选获得马克斯克鲁维酵母重组蛋白高产突变株F6-30,其Lba... 详细信息

马克斯克鲁维酵母是一种生长速度快、蛋白质合成能力强的食品级酵母,具有研究价值与工业应用潜力。本研究以豆血红蛋白A(Leghemoglobin A,Lba)为靶蛋白,通过H 2O 2和UV联合诱变筛选获得马克斯克鲁维酵母重组蛋白高产突变株F6-30,其Lba产量提高67%。F6-30表现出高产通用性,表达其他异源蛋白如阿魏酸酯酶、甘露聚糖酶和木聚糖酶时产量分别提升111%、119%和39.4%。转录组测序分析显示在表达Lba的情况下F6-30与出发菌株相比在发酵24 h和60 h分别有1629个和1841个基因有显著差异,上调基因分别有604个和540个,下调基因分别有1025个和1301个。GO富集分析显示显著差异基因富集在翻译过程、RNA加工以及溶酶体和自噬相关GO条目;KEGG富集分析显示富集通路主要为核糖体生物发生、氨基酸合成代谢、核苷酸代谢等,表明突变株中蛋白质翻译途径显著加强,自噬途径及蛋白酶体途径以及氨基酸合成代谢被削弱。

关键词：马克斯克鲁维酵母转录组重组蛋白表达豆血红蛋白A

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GH43家族β-D-木糖苷酶RuXyn1在马克斯克鲁维酵母中的表达及其应用

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复旦学报（自然科学版） 2020年第5期59卷 599-607页

作者：段懿桐李雪莹周峻岗余垚吕红复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

木聚糖的降解需要内切β-木聚糖酶和β-D-木糖苷酶的协同作用,β-D-木糖苷酶能将β-木聚糖酶的水解产物木寡糖降解为木糖,因此在半纤维素的利用中具有重要的意义.本研究将中国牦牛瘤胃微生物来源的糖基水解酶GH43家族β-D-木糖苷酶基因R... 详细信息

木聚糖的降解需要内切β-木聚糖酶和β-D-木糖苷酶的协同作用,β-D-木糖苷酶能将β-木聚糖酶的水解产物木寡糖降解为木糖,因此在半纤维素的利用中具有重要的意义.本研究将中国牦牛瘤胃微生物来源的糖基水解酶GH43家族β-D-木糖苷酶基因RuXyn1克隆到含两种不同分泌信号肽(菊粉酶信号肽和α-factor信号肽)的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)分泌表达载体(pUKDN132和pUKDN129)中,转化*** Fim-1 ura3Δ,通过筛选获得两株分泌表达β-D-木糖苷酶基因RuXyn1的重组菌株Fim-1/pUKDN132-RuXyn1和Fim-1/pUKDN129-RuXyn1.重组菌株摇瓶培养72h后,上清液中β-D-木糖苷酶酶活分别为0.304U/mL和0.045U/mL.在5L发酵罐高密度发酵中,Fim-1/pUKDN132-RuXyn1分泌表达的β-D-木糖苷酶酶活为1.75U/mL,而Fim-1/pUKDN129-RuXyn1的酶活为1.6U/mL,表明在表达β-D-木糖苷酶RuXyn1时,菊粉酶信号肽介导的分泌效率优于α-factor信号肽.以玉米芯为底物,我们测试了***重组表达的β-D-木糖苷酶RuXyn1的降解效果,发现在商业化的β-木聚糖酶和纤维素酶CTec2中,添加β-D-木糖苷酶RuXyn1能够显著提升玉米芯的降解效率,还原糖产量提高7%,木糖和葡萄糖的产量分别提高12.4%和6.1%.

关键词：木聚糖 β-D-木糖苷酶表达载体马克斯克鲁维酵母重组表达

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基因组整合与游离质粒联合应用介导阿魏酸酯酶A在马克斯克鲁维酵母中高效分泌表达

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复旦学报（自然科学版） 2020年第5期59卷 608-617页

作者：李雪莹段懿桐吴丽莫文娟周峻岗余垚吕红复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

阿魏酸是植物中广泛存在的酚类化学物质,具有抗氧化活性.阿魏酸酯酶能够水解植物细胞壁半纤维素和阿魏酸之间的酯键,释放阿魏酸,在食品、医药、饲料加工等领域具有广泛的应用价值.马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种生长... 详细信息

阿魏酸是植物中广泛存在的酚类化学物质,具有抗氧化活性.阿魏酸酯酶能够水解植物细胞壁半纤维素和阿魏酸之间的酯键,释放阿魏酸,在食品、医药、饲料加工等领域具有广泛的应用价值.马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种生长迅速、蛋白分泌能力强的新型食品安全级酵母,具有高效分泌表达菊粉酶的能力,本研究利用基因组菊粉酶位点INU1整合与游离质粒联合应用的方式,在马克斯克鲁维酵母中实现了黑曲霉(Aspergillus niger)阿魏酸酯酶AnFaeA的高效表达,发酵液上清中的酶活达到164.4U/mL.利用马克斯克鲁维酵母重组表达的阿魏酸酯酶能够高效降解玉米芯释放阿魏酸,释放量可达1.81mg/g,并且在β-木聚糖酶的协助下可进一步提高阿魏酸的释放量,达到2.8mg/g.

关键词：质粒表达基因组整合阿魏酸酯酶马克斯克鲁维酵母

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结核分枝杆菌核糖体蛋白丙氨酸乙酰转移酶过表达菌株的构建及分析

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微生物与感染 2021年第1期16卷 37-44页

作者：陈润白嘉诚狄玉昌钱嘉宁毕静张雪莲复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200433 复旦大学上海工业菌株工程技术研究中心上海200433

rim I基因编码的核糖体蛋白丙氨酸乙酰转移酶(ribosomal-protein-alanine acetyltransferase,RimI)为结核分枝杆菌GCN5相关N-乙酰转移酶家族成员,其在结核分枝杆菌中的生物学功能尚不十分清楚。为探索RimI的生物学特性及其对结核分枝杆... 详细信息

rim I基因编码的核糖体蛋白丙氨酸乙酰转移酶(ribosomal-protein-alanine acetyltransferase,RimI)为结核分枝杆菌GCN5相关N-乙酰转移酶家族成员,其在结核分枝杆菌中的生物学功能尚不十分清楚。为探索RimI的生物学特性及其对结核分枝杆菌致病性的影响,本研究以耻垢分枝杆菌为模式菌,构建过表达结核分枝杆菌rimI基因的重组菌株Msm∷pMV261-rimI。分别培养Msm∷pMV261-rimI菌株和对照Msm∷pMV261菌株,分析两者生长速率、菌落形态和生物膜形成的差异,以及耐受低氧、低pH值、H 2O 2、二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)和0.05%~1%十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)等逆环境的能力;并将两种菌株分别接种于鼠巨噬细胞RAW264.7,观察两者在巨噬细胞内的存活能力。结果表明,相较于对照菌株,过表达rimI的菌株在生长前中期速率降低,生物膜早期成膜变缓,但不影响生物膜的后期成熟。同时,过表达rimI的菌株抵抗低氧、低pH值、H 2O 2等逆环境的能力增强,在巨噬细胞内的存活能力增强。结果提示,rimI基因对分枝杆菌的生物膜形成、抗逆性及细胞内生存具有重要作用,可能与结核分枝杆菌的毒力密切相关。

关键词：结核分枝杆菌 rimI基因乙酰转移酶抗逆性毒力

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酵母重组表达PCV2病毒样颗粒的纯化工艺

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复旦学报（自然科学版） 2020年第6期59卷 685-694页

作者：谢晋杨德强周峻岗李翊峰吕红复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438 无锡药明生物技术有限公司江苏无锡214092 复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438 上海药明生物技术有限公司上海200131

猪圆环病毒(PCV)是一种引起断奶仔猪多系统衰竭综合征、呼吸道综合征及繁殖障碍的病毒,已经成为危害养猪业最主要的病原之一,而接种猪圆环病毒2型(PCV2)疫苗是控制猪圆环病毒相关疾病最有效的措施.利用马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces m... 详细信息

猪圆环病毒(PCV)是一种引起断奶仔猪多系统衰竭综合征、呼吸道综合征及繁殖障碍的病毒,已经成为危害养猪业最主要的病原之一,而接种猪圆环病毒2型(PCV2)疫苗是控制猪圆环病毒相关疾病最有效的措施.利用马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus,KM)表达猪圆环病毒PCV2 Cap的产量可达2g/L,高于其他表达系统的产量,并且重组表达的Cap蛋白在胞内能高效自组装成病毒样颗粒(Virus-Like Particles,VLPs).酵母细胞破碎之后样品中含有大量的微小的细胞碎片,高速离心澄清难以分离,影响了VLPs的得率、纯度以及澄清度.本研究考察了超声波破碎、玻璃珠研磨破碎以及高压均质破碎等不同破碎方法,发现1300bar高压均质法对重组表达PCV Cap蛋白的马克斯克鲁维酵母破碎效果最佳.在此基础上,检测添加有机溶剂、表面活性剂和化学絮凝剂的处理效果,发现添加1%(质量分数)Triton X-100对酵母破碎菌液具有65%以上的浊度降低率,处理后样品可直接用于离子交换层析,得率大于92%,HPLC纯度大于85%.

关键词：马克斯克鲁维酵母猪圆环病毒病毒样颗粒浊度纯化

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