检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病毒病杂志 2022年第1期12卷 35-41页

作者：袁军鸿王晓辉吴萍萍冯昌增周峻岗褚嘉祐吕红杨昭庆昆明医科大学云南昆明650500 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所医学遗传学研究室云南昆明650118 国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量控制与评价重点实验室四川成都610097 复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438 复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438

目的使用马克斯克鲁维酵母表达系统对GII.17型诺如病毒病毒样颗粒(VLPs)进行表达并对该蛋白纯化方式进行初步探讨。方法对诺如病毒VP1序列进行密码子优化,使用双酶切构建重组质粒,通过醋酸锂转化法筛选获得重组阳性克隆KM-NOV-GII.17... 详细信息

目的使用马克斯克鲁维酵母表达系统对GII.17型诺如病毒病毒样颗粒(VLPs)进行表达并对该蛋白纯化方式进行初步探讨。方法对诺如病毒VP1序列进行密码子优化,使用双酶切构建重组质粒,通过醋酸锂转化法筛选获得重组阳性克隆KM-NOV-GII.17。摇瓶培养72 h后对菌体进行破碎,使用层析柱对目的蛋白进行纯化,并通过电镜观察颗粒形态。结果成功筛选出高表达量KM-NOV-GII.17,通过Q柱及分子筛串联纯化的方式获得了纯度较高的病毒样颗粒,产量约为0.26 g/L,电镜观察结果显示该VP1序列可自组装为大小均一的病毒样颗粒并且与天然病毒颗粒形态相似。结论本研究证实了GII.17型诺如病毒VP1蛋白可通过马克斯克鲁维酵母表达系统获得产量高、均一性好的病毒样颗粒,这为诺如病毒基因重组疫苗的研发提供了新的蛋白表达系统。

关键词：诺如病毒病毒样颗粒马克斯克鲁维酵母表达纯化

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CSFV E2蛋白主要抗原区域在马克斯克鲁维酵母中的表达及小鼠免疫

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复旦学报（自然科学版） 2019年第1期58卷 43-51页

作者：朱培霞陈蕾段进坤刘洋莫文娟周峻岗余垚吕红复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438 复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438

猪瘟是一种由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的高度接触传染性和致死性疾病.疫苗预防接种是控制猪瘟病毒传播的重要措施,目前我国使用的弱毒疫苗均为1.1亚型猪瘟病毒兔化弱毒株.随着病毒的不断变异,2.1亚型猪瘟病毒已... 详细信息

猪瘟是一种由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的高度接触传染性和致死性疾病.疫苗预防接种是控制猪瘟病毒传播的重要措施,目前我国使用的弱毒疫苗均为1.1亚型猪瘟病毒兔化弱毒株.随着病毒的不断变异,2.1亚型猪瘟病毒已经逐渐成为我国的主要流行毒株.本研究利用马克斯克鲁维酵母研究了2.1b型CSFV E2蛋白及其截短体mE2(690-916aa)在马克斯克鲁维酵母中的重组表达,发现去除E2蛋白跨膜区域可以显著提高E2蛋白表达水平,mE2的表达量在5L发酵罐中达1.25～2.5g/L.经分子筛纯化,mE2蛋白纯度达90%.纯化的mE2作为抗原蛋白,注射免疫小鼠28d后,可诱导小鼠产生抗CSFV的IgG特异性抗体,表明马克斯克鲁维酵母重组表达的mE2蛋白具有较好的免疫原性.

关键词：猪瘟病毒 2.1b亚型马克斯克鲁维酵母 E2蛋白重组表达

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犬细小病毒病毒样颗粒在马克斯克鲁维酵母中的表达及免疫原性研究

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复旦学报（自然科学版） 2018年第6期57卷 732-739页

作者：陈蕾段进坤朱培霞周峻岗余垚吕红复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438 复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438

犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的一种急性、高度接触性传染病,是目前影响犬类健康的最严重的传染病之一.疫苗免疫是预防并控制CPV传播的重要措施.本研究以马克斯克鲁维酵母作为表达宿主进行犬细小病毒VP2蛋白... 详细信息

犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的一种急性、高度接触性传染病,是目前影响犬类健康的最严重的传染病之一.疫苗免疫是预防并控制CPV传播的重要措施.本研究以马克斯克鲁维酵母作为表达宿主进行犬细小病毒VP2蛋白的重组表达.犬细小病毒VP2蛋白经密码子优化后,在马克斯克鲁维酵母中获得高效表达,表达量可达到2.4g/L.重组表达的VP2蛋白自我组装形成大小为20nm的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),经分子筛凝胶层析纯化的VLPs制成疫苗,注射免疫小鼠进49天后抗体滴度可达10 000以上,并诱导小鼠产生血凝抑制抗体,表明利用马克斯克鲁维酵母制备的VLPs疫苗具有较高的免疫原性.

关键词：犬细小病毒病毒样颗粒衣壳蛋白马克斯克鲁维酵母

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马克斯克鲁维酵母表达系统菊粉酶启动子的改造及活性研究

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复旦学报（自然科学版） 2017年第4期56卷 438-445,454页

作者：胡晓悦周峻岗余垚吕红 HU Xiaoyu 复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)作为一种食品安全级酵母,具有生长快,生物量高等特点,是一种新型的重组蛋白表达的宿主系统.启动子是供RNA聚合酶识别和结合的DNA序列,调控着转录的起始过程,直接影响基因的表达水平.本文通过... 详细信息

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)作为一种食品安全级酵母,具有生长快,生物量高等特点,是一种新型的重组蛋白表达的宿主系统.启动子是供RNA聚合酶识别和结合的DNA序列,调控着转录的起始过程,直接影响基因的表达水平.本文通过易错PCR技术对马克斯克鲁维酵母菊粉酶启动子Pinu进行两轮突变,以阿魏酸酯酶(Est1E)作为报告基因,经筛选、鉴定获得了5个可以显著提高外源蛋白表达量的突变型启动子Pm1D81、Pm1F138、Pm2Q89、Pm2M73、Pm2X47,报告蛋白Est1E的酶活性是启动子改造前的2.31,2.65,5.01,5.40,5.43倍.随后测试了启动子Pm2X47对外源蛋白甘露聚糖酶和赤霉烯酮降解酶表达的影响,结果显示这两种酶的表达量均有提高,分别是启动子改造前的3.57倍和4.13倍.上述结果提示,改造后的菊粉酶启动子在提高外源蛋白表达水平方面具有一定的通用性,可作为新型候选表达元件,以提升马克斯克鲁维酵母重组表达外源蛋白的能力.

关键词：马克斯克鲁维酵母表达系统启动子优化改造

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信号肽对木聚糖酶在马克斯克鲁维酵母中分泌表达的影响

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复旦学报（自然科学版） 2017年第4期56卷 446-454页

作者：吴玥周峻岗吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种新型的非常规酵母,具有生长快、分泌能力强、安全性高等优势.在酵母表达系统中,分泌信号肽不仅介导了外源蛋白沿着正确途径分泌到胞外,也在蛋白质翻译后加工等方面发挥了重要作用.本文... 详细信息

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种新型的非常规酵母,具有生长快、分泌能力强、安全性高等优势.在酵母表达系统中,分泌信号肽不仅介导了外源蛋白沿着正确途径分泌到胞外,也在蛋白质翻译后加工等方面发挥了重要作用.本文分别研究了酿酒酵母α-Factor信号肽和克鲁维酵母菊粉酶信号肽对耐热木聚糖酶在马克斯克鲁维酵母中的分泌表达影响.工程菌摇瓶发酵72h后,在含有菊粉酶信号肽和α-Factor信号肽的工程菌株的发酵上清中,木聚糖酶酶活分别为318.91U/mL和117.90U/mL,表明马克斯克鲁维酵母表达木聚糖酶时,菊粉酶信号肽介导的蛋白分泌表达效果优于α-Factor信号肽.重组表达木聚糖酶最适反应条件是pH5.5和65℃,在75℃处理1h后,该酶的剩余酶活保留73%以上.在5L发酵罐中,重组菌高密度发酵72h,木聚糖酶酶活高达157 757U/mL,结果表明,马克斯克鲁维酵母表达系统在工业酶领域中应用具有非常广阔的前景.

关键词：木聚糖酶马克斯克鲁维酵母信号肽高效表达

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玉米赤霉烯酮降解酶在马克斯克鲁维酵母中的表达及高产菌株的诱变筛选

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复旦学报（自然科学版） 2017年第4期56卷 431-437页

作者：王壬丰周峻岗胡小健徐天宇吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 上海工业菌株工程技术研究中心上海200438 上海天复生物科技有限公司上海200438

玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是镰刀菌属霉菌产生的一种霉菌毒素,常见于霉变的玉米、小麦等谷物中.研究发现,来源于粉红黏帚霉(Gliocladium roseum)的α/β水解酶ZHD101能够断裂ZEN的内酯键,破坏ZEN的毒性.本文利用食品安全级的马克... 详细信息

玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是镰刀菌属霉菌产生的一种霉菌毒素,常见于霉变的玉米、小麦等谷物中.研究发现,来源于粉红黏帚霉(Gliocladium roseum)的α/β水解酶ZHD101能够断裂ZEN的内酯键,破坏ZEN的毒性.本文利用食品安全级的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)重组分泌表达了ZHD101,发酵液上清中的表达产物具有水解ZEN的活性.利用UV和^(60)Co-γ联合诱变方法,提高了ZHD101在马克斯克鲁维酵母中的表达水平.高效液相色谱(HPLC)分析表明,重组菌株分泌表达的ZHD101酶蛋白既能水解标准品ZEN,又能在较温和的条件下水解发霉玉米样本中的ZEN,结果表明该重组菌株表达的玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101,可应用于发霉玉米的脱毒处理.

关键词：玉米赤霉烯酮玉米赤霉烯酮降解酶马克斯克鲁维酵母

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马克斯克鲁维酵母的遗传与生理特征

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中国科学：生命科学 2016年第4期46卷 413-419页

作者：莫文娟郭超吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)广泛存在于酸奶、水果、酸乳酒等环境中,是食品安全级酵母,在一个多世纪前被分离获得.近20年来,由于该酵母表现出的食品安全性、高生长速率、高生物量、耐高温等特征,得到生产应用领域的关注... 详细信息

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)广泛存在于酸奶、水果、酸乳酒等环境中,是食品安全级酵母,在一个多世纪前被分离获得.近20年来,由于该酵母表现出的食品安全性、高生长速率、高生物量、耐高温等特征,得到生产应用领域的关注.本文从***的基因组遗传特征、分类以及细胞生长、细胞壁组成、糖基化修饰等方面进行了综述,以期系统认识和了解***酵母.

关键词：马克斯克鲁维酵母基因组性别转换糖基化工业应用

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一种针对马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)的无痕基因组改造方法

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复旦学报（自然科学版） 2016年第5期55卷 576-586页

作者：郭超陈勇毅周峻岗余垚吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

马克斯克鲁维酵母位于酵母科克鲁维属,具有高分泌能力、高生长速率、多底物利用以及耐高温等特点,具有工业应用前景.因此,建立马克斯克鲁维酵母的基因工程改造技术十分重要.本文以马克斯克鲁维酵母URA3基因缺陷菌株为出发菌株,依据同源... 详细信息

马克斯克鲁维酵母位于酵母科克鲁维属,具有高分泌能力、高生长速率、多底物利用以及耐高温等特点,具有工业应用前景.因此,建立马克斯克鲁维酵母的基因工程改造技术十分重要.本文以马克斯克鲁维酵母URA3基因缺陷菌株为出发菌株,依据同源重组原理,选用KmURA3作为可循环使用的筛选标签基因,建立了一种针对马克斯克鲁维酵母的无残留多基因敲除技术,以满足其遗传工程改造的需求.本研究利用这种技术成功构建了Kmhis3Δ、Kmura3Δhis3Δ、Kmura3Δade2Δ、Kmura3Δhis3Δade2Δ、Kmhis3Δade2Δ等5株营养缺陷型菌株,为马克斯克鲁维酵母的分子遗传学研究以及工业应用研究提供了遗传材料.

关键词：马克斯克鲁维酵母多基因敲除 KmURA3基因 KmHIS3基因 KmADE2基因

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微杆菌Microbacterium ***1538降解赤霉烯酮的活性研究

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复旦学报（自然科学版） 2016年第2期55卷 223-231页

作者：徐天宇胡苏莹周峻岗吕红复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 上海工业菌株工程技术研究中心上海200438

赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)主要是由镰刀菌属(Fusarium sp.)的某些种,如禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)等通过聚酮类合成代谢途径生成并分泌的一种真菌毒素,具有类雌激素的性质.ZEN能引起家禽家畜和人的雌激素过多症,造成生殖紊乱、... 详细信息

赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)主要是由镰刀菌属(Fusarium sp.)的某些种,如禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)等通过聚酮类合成代谢途径生成并分泌的一种真菌毒素,具有类雌激素的性质.ZEN能引起家禽家畜和人的雌激素过多症,造成生殖紊乱、肝肾损伤,严重时可以致癌.本研究用环戊酮作为唯一碳源,从土壤中筛选获得一株可以有效降解ZEN的微杆菌(命名为Microbacterium ***1538).该微杆菌在添加甲醇的LB培养基中发酵所得的上清液具有降解ZEN的活性.进一步的分析证明了FY1538培养液上清中含有能够降解ZEN的酶.经高效液相色谱分析,发现了ZEN生物降解的初步产物.

关键词：赤霉烯酮微杆菌生物降解

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深海耐盐杆菌来源酯酶PE8的表达纯化、结晶和晶体X-ray衍射研究（英文）

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复旦学报（自然科学版） 2016年第4期55卷 534-537页

作者：纪锐匡思运霍颖异黄静兰星洋许学伟李继喜复旦大学生命科学学院上海市工业菌株工程技术研究中心上海200438 复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438 国家海洋局第二海洋研究所海洋生态系统和生物地球化学重点实验室浙江杭州310012

从深海耐盐杆菌Pelagibacterium halotolerans B2T中分离鉴定的酯酶PE8隶属于酯酶第六家族.因具有耐盐、较高的热稳定性、高手性选择性,PE8是工业上高效生产手性药物前体(R)-3-(4-氟苯基)戊二酸单甲酯((R)-3-MFG)很有开发潜力的催化剂,... 详细信息

从深海耐盐杆菌Pelagibacterium halotolerans B2T中分离鉴定的酯酶PE8隶属于酯酶第六家族.因具有耐盐、较高的热稳定性、高手性选择性,PE8是工业上高效生产手性药物前体(R)-3-(4-氟苯基)戊二酸单甲酯((R)-3-MFG)很有开发潜力的催化剂,但其分子催化机理并不清楚.PE8在大肠杆菌中体外表达,并通过镍柱亲和层析,以及凝胶过滤层析纯化,最终通过悬滴结晶方法获得了PE8蛋白晶体.晶体经过X-ray衍射分析获得1.66的分辨率,属于空间群P21,晶胞参数为a=41.772,b=73.398,c=66.403,β=102.37°.一个异构单元包含2个蛋白分子,溶剂(水)含量为35%.

关键词：酯酶 PE8 结晶

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