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生物物理学报 2011年第1期27卷 5-17页

作者：曲卫敏孙宇许奇黄志力复旦大学上海医学院药理学系上海200032 复旦大学脑科学研究院上海200032 复旦大学医学神经生物学国家重点实验室上海200032

腺苷作为神经调质,调节多种神经生物学功能。随觉醒时间延长,动物脑内腺苷水平逐渐增高,在睡眠期显著降低。因此,腺苷被认为是调节睡眠的内稳态因子之一。腺苷受体(receptor,R)有A1R、A2AR、A2BR和A3R四种亚型,其中A1R和A2AR与诱导睡眠... 详细信息

腺苷作为神经调质,调节多种神经生物学功能。随觉醒时间延长,动物脑内腺苷水平逐渐增高,在睡眠期显著降低。因此,腺苷被认为是调节睡眠的内稳态因子之一。腺苷受体(receptor,R)有A1R、A2AR、A2BR和A3R四种亚型,其中A1R和A2AR与诱导睡眠相关。激活A1R可抑制促觉醒神经元诱导睡眠,也可抑制促眠神经元导致觉醒,其作用存在脑区依赖性。A2AR介导内源性前列素D2的促眠作用,A2AR激动剂具有最强的促眠效应,阻断A2AR引起觉醒,在睡眠觉醒调节中扮演重要角色。本文综述腺苷调节睡眠和觉醒的研究进展,讨论腺苷受体激动剂和拮抗剂在睡眠疾病治疗中的潜在价值及存在问题。

关键词：腺苷前列腺素D2 受体睡眠觉醒

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大鼠坐骨神经挤压损伤导致脊髓单突触反射回返性抑制的长时程减弱

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生理学报 2011年第4期63卷 291-299页

作者：舒良董幼镕严为宏翟宇王云李威上海交通大学医学院附属第九人民医院上海200011 复旦大学脑科学研究院医学神经生物学国家重点实验室上海200032

坐骨神经损伤是临床常见的周围神经疾病。神经损伤后再生肌肉和运动神经元会出现各种功能障碍,虽然其中一部分因素已被阐明,但多局限于受损神经局部,而对于再生后脊髓运动神经元的回返性抑制(recurrent inhibition,RI)通路的功能变化却... 详细信息

坐骨神经损伤是临床常见的周围神经疾病。神经损伤后再生肌肉和运动神经元会出现各种功能障碍,虽然其中一部分因素已被阐明,但多局限于受损神经局部,而对于再生后脊髓运动神经元的回返性抑制(recurrent inhibition,RI)通路的功能变化却很少被报道。本文研究大鼠短暂坐骨神经损伤后,恢复神经再支配(reinnervation)情况下,脊髓RI通路的功能变化。在正常或坐骨神经挤压(crush)受损后的成年大鼠上,通过刺激离断的脊髓背根(L5),在外侧腓肠肌-比目鱼肌(lateral gas-trocnemius-soleus,LG-S)神经或内侧腓肠肌(medial gastrocnemius,MG)神经记录单突触反射(monosynaptic reflex,MSR),并同时在另一神经给予条件性刺激,以检测LG-S和MG运动神经元间RI的变化。结果显示:(1)脊髓运动神经元的RI在坐骨神经挤压受损后即基本丢失(<5周),至损伤6周后部分恢复至正常的50%,并至少维持至损伤14周后;(2)一侧的坐骨神经损伤对对侧的RI没有影响;(3)外周神经损伤后,免疫组织化学方法显示脊髓运动神经元数目本身并不发生减少。以上结果表明,外周神经损伤即使在神经再支配后仍会引起脊髓运动神经元RI的长时程减弱,RI的减弱使运动神经元通过增强其功能来补偿损伤后外周肌肉力量上的减弱,提示外周神经损伤会导致中枢脊髓运动环路的可塑性变化。

关键词：坐骨神经神经挤压脊髓回返性抑制

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采用核磁共振观察白藜芦醇预处理对大鼠脑缺血急性期的保护作用

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中国运动医学杂志 2011年第4期30卷 359-364页

作者：曹瑞吴毅张峰贾杰胡永善范明霞李建奇复旦大学附属华山医院康复医学科上海200040 复旦大学医学神经生物学国家重点实验室上海市磁共振重点实验室华东师范大学物理系

目的:采用核磁共振(MRI)动态观测白藜芦醇预处理对大鼠局部脑缺血4h和24h时脑水肿和梗死脑组织体积的影响。方法:20只SD大鼠随机分为白藜芦醇预处理组(简称预处理组,n=10)和对照组(n=10)。预处理组手术前10天,每日按照30 mg/kg腹腔注射... 详细信息

目的:采用核磁共振(MRI)动态观测白藜芦醇预处理对大鼠局部脑缺血4h和24h时脑水肿和梗死脑组织体积的影响。方法:20只SD大鼠随机分为白藜芦醇预处理组(简称预处理组,n=10)和对照组(n=10)。预处理组手术前10天,每日按照30 mg/kg腹腔注射白藜芦醇溶液。对照组给予同等体积的白藜芦醇溶剂注射10天。10日后行左侧大脑中动脉永久缺血术(MCAO)。术后4 h和24 h分别采用MRI对大鼠纹状体区和顶颞叶区进行T1-SE、T2-TSE、T2-map-SE以及DW-EPI序列的扫描。采用ImageJ软件分析扫描图像中4个感兴趣区域(左侧纹状体、顶颞叶,右侧纹状体、顶颞叶)的表观弥散系数(ADC)值、T2横向弛豫时间(T2-relaxation time,T2RT)值的变化。术后24 h处死大鼠,TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)染色脑片,UTHSCSA Image Tool软件计算梗死脑组织体积的比例。结果:①预处理组大鼠缺血4 h时纹状体和顶颞叶相对ADC值较对照组显著增加(P<0.01),左侧T2RT值显著减小(P<0.05)。②预处理组大鼠缺血24 h时纹状体和顶颞叶相对ADC值较对照组均显著增加(P<0.01),左侧T2RT值也显著减小(P<0.05)。③预处理组大鼠梗死组织脑体积比例为0.313±0.047,对照组为0.396±0.021。两组相比有显著性差异(P<0.01)。结论:白藜芦醇预处理对大鼠脑缺血后4 h和24 h时均有减轻脑水肿的作用,并且可以有效减少脑梗死体积,从而起到神经保护作用。

关键词：白藜芦醇脑缺血 DWI ADC T2RT

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PC12细胞中持续性氧糖剥夺模型的建立

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军事医学 2011年第3期35卷 189-192页

作者：吴艳范礼斌张成岗安徽医科大学生命科学学院生物学教研室合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室医学神经生物学国家重点实验室北京100850

目的在PC12细胞中建立模拟永久性局部脑梗死的持续性氧糖剥夺模型。方法按照常规细胞培养方法,制备PC12细胞不同时间(5 min、10 min、15 min、30 min、45 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h和48 h)持续性氧糖剥夺模型,采用MTT法检测细胞... 详细信息

目的在PC12细胞中建立模拟永久性局部脑梗死的持续性氧糖剥夺模型。方法按照常规细胞培养方法,制备PC12细胞不同时间(5 min、10 min、15 min、30 min、45 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h和48 h)持续性氧糖剥夺模型,采用MTT法检测细胞的存活率,以评估持续性氧糖剥夺对PC12细胞的损伤作用。继而进行氧、血清和葡萄糖3种因素分别交叉缺失5 min后的损伤效应研究,同样采用MTT法分析细胞的存活率。结果 PC12细胞在持续性氧糖剥夺模型条件下的半数存活时间为10.3 min,进而发现低氧和缺乏血清对细胞存活率影响不大,而培养基中葡萄糖浓度对细胞的存活率影响较大,且呈一定的浓度相关性。结论在建立持续性氧糖剥夺模型的基础上确定了PC12细胞的半数存活时间,并明确了氧、血清和葡萄糖对细胞存活率的影响,为揭示局部脑缺血低氧损伤相关疾病的机制提供了重要参考资料。

关键词：脑梗死 PC12细胞氧糖剥夺模型存活率再灌注损伤葡萄糖

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健康成年人手部主动及被动运动时大脑功能区的功能性磁共振成像研究

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中华物理医学与康复杂志 2011年第1期33卷 20-24页

作者：蔡伟森吴毅吴军发朱王连赵小虎范明霞李建奇胡永善复旦大学附属华山医院康复医学科复旦大学医学神经生物学国家重点实验室上海200040 同济大学附属同济医院放射科上海市磁共振重点实验室华东师范大学物理系

目的利用血氧水平依赖性功能性磁共振成像技术探讨健康成年人手部主动、被动对掌运动时的脑激活区的特点,为运动疗法治疗脑卒中提供理论依据.方法 9名健康成年人参加实验.以右手主动及被动对掌运动作为刺激模式,采用区块设计,利用SPM5... 详细信息

目的利用血氧水平依赖性功能性磁共振成像技术探讨健康成年人手部主动、被动对掌运动时的脑激活区的特点,为运动疗法治疗脑卒中提供理论依据.方法 9名健康成年人参加实验.以右手主动及被动对掌运动作为刺激模式,采用区块设计,利用SPM5软件进行数据处理.测量位于对侧感觉运动区及运动前区的脑激活区的中点,并统计各脑区出现激活的频数.结果主动及被动手对掌运动时主要激活的脑区包括：对侧感觉运动皮质（SMC）区、对侧运动前皮质（PMC）区、双侧辅助运动区（SMA）及同侧小脑,其中对侧SMC区的激活频率最高;被动运动时所激活的对侧SMC和PMC区的几何中心较主动运动时偏后.结论主动和被动对掌运动均可引起运动相关脑区激活,两种运动模式所激活脑区在分布上无明显差别,但被动运动所激活的对侧SMC和PMC区几何中心较主动运动偏后.

关键词：血氧水平依赖性功能性磁共振成像主动运动被动运动感觉运动区运动前区辅助运动区

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内源性睡眠促进物质研究进展

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中国临床药理学与治疗学 2011年第6期16卷 672-678页

作者：岳小芳邱梅红曲卫敏黄志力复旦大学医学神经生物学国家重点实验室上海医学院药理系上海200032 上海医学院脑科学研究院上海200032

睡眠和觉醒的发生及转换可能是脑内神经递质和内源性睡眠促进物质共同作用的结果,同时受昼夜节律调控。Ishimori和Piéron首次发现犬睡眠剥夺后,脑脊液中某种化学物质增多,诱发睡眠,并将其命名为促眠素,即内源性睡眠促进物质。目前... 详细信息

睡眠和觉醒的发生及转换可能是脑内神经递质和内源性睡眠促进物质共同作用的结果,同时受昼夜节律调控。Ishimori和Piéron首次发现犬睡眠剥夺后,脑脊液中某种化学物质增多,诱发睡眠,并将其命名为促眠素,即内源性睡眠促进物质。目前已发现前列腺素D2、核苷、细胞因子、神经肽、激素、胺类衍生物及一氧化氮等二十多种内源性睡眠促进物质。本文综述前列腺素D2、腺苷、白细胞介素1和肿瘤坏死因子等调节睡眠的作用机制研究进展。

关键词：内源性睡眠促进物质前列腺素D2 腺苷细胞因子

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西红花有效成分的神经药理学研究进展

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时珍国医国药 2011年第5期22卷 1202-1204页

作者：刘正郭凌鸿徐昕红曲卫敏黄志力复旦大学医学神经生物学国家重点实验室上海200032 绍兴文理学院.医学院浙江绍兴312000 复旦大学上海医学院上海200032

名贵中药材西红花用于治疗多种疾病,历史悠久。西红花主要活性成分有西红花酸、西红花素、西红花醛等。近年来研究发现:西红花有效成分在中枢神经系统具有广泛的生物学活性,对脑缺血再灌注损伤、失眠、焦虑、抑郁症、学习记忆障碍、帕... 详细信息

名贵中药材西红花用于治疗多种疾病,历史悠久。西红花主要活性成分有西红花酸、西红花素、西红花醛等。近年来研究发现:西红花有效成分在中枢神经系统具有广泛的生物学活性,对脑缺血再灌注损伤、失眠、焦虑、抑郁症、学习记忆障碍、帕金森氏病、老年性痴呆等多种神经精神性疾病具有改善作用。文章综述西红花及活性成分的神经药理学研究进展。

关键词：西红花活性成分神经药理学

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兴奋性毒性对神经元胞核内Munc-18蛋白表达分布的影响

兴奋性毒性对神经元胞核内Munc-18蛋白表达分布的影响

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：王丹丹张彦平许玉霞王洪权赵红赵晓燕朱粹青复旦大学医学神经生物学国家重点实验室上海医学院神经生物学系

目的突触囊泡释放中Munc-18蛋白发挥着重要的调节作用。Munc-18基因病理突变可导致癫痫的发生,近年有一篇文献报道在神经元胞核分布有Munc-18并可与DNA片段紧密结合,但是神经系统疾病与神经元胞核内Munc-18分布变化的关系尚不清楚。本... 详细信息

目的突触囊泡释放中Munc-18蛋白发挥着重要的调节作用。Munc-18基因病理突变可导致癫痫的发生,近年有一篇文献报道在神经元胞核分布有Munc-18并可与DNA片段紧密结合,但是神经系统疾病与神经元胞核内Munc-18分布变化的关系尚不清楚。本实验在明确Munc-18的神经元胞核分布的基础上,探讨了海人藻酸(KA)诱导癫痫动物模型和谷氨酸处理的原代神经元中Munc-18的分布。方法通过免疫电镜、免疫组化和Western Blot等方法观察Munc-18在神经元胞核内的分布,进一步分离神经元胞核并进行不同的处理,免疫荧光染色研究其具体分布状况。以KA诱导癫痫动物模型和经谷氨酸作用的原代培养大鼠神经元为观察对象,通过组织化学和Western Blot等方法研究Munc-18受兴奋性毒性影响后神经元胞核内表达分布的变化。结果 (1)组化方法检测结果显示,Munc-18在动物脑内皮层、海马和丘脑均有分布,尤以海马内分布最明显;(2)神经元胞核内存在较多Munc-18,其中有聚集,呈现出较明显的点状,对提取的神经元胞核进行Western Blot检测,进一步证明Munc-18的存在;另外,神经元胞核内也有p35分布并与Munc-18共存,但CDK5在核内分布不明显。胶质细胞的胞核内Munc-18分布极少或没有;(3)分离的神经元胞核经不同处理后进行荧光染色的结果提示,Munc-18可与DNA结合,部分与核基质结合,而与RNA结合不明显;(4)KA诱导动物癫痫发作可使海马的CA区和齿状回门区与颗粒细胞Munc-18在细胞核内分布显著减少,同时伴有SNAP-25表达量增加;(4)经谷氨酸作用的原代培养神经元胞核中Munc-18分布减少,在胞浆以及神经突起中分布增加,同时也有SNAP-25表达量增加。结论 Munc-18主要在神经元胞核内而非胶质细胞的胞核内分布,Munc-18可与DNA结合,推测其可能参与基因表达的调控;Munc-18的神经元胞核内分布受神经元的兴奋状态调节,经兴奋性毒性影响后Munc-18核内分布减少。

关键词： Munc-18蛋白核内分布兴奋性毒性

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脑缺血损伤诱导VEGF表达的表观遗传学机制研究

脑缺血损伤诱导VEGF表达的表观遗传学机制研究

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：李攀张秋婉孙凤艳复旦大学上海医学院神经生物学系医学神经生物学国家重点实验室

目的脑缺血损伤可以促进成年哺乳动物脑内VEGF表达水平升高,甲基化CpG结合蛋白-2(MeCP2)可以通过与甲基化的DNA结合来调控基因表达,DNA脱甲基化可以诱导MeCP2从其目的基因序列释放,从而促进该基因的表达。本实验的目的是为了揭示DNA甲... 详细信息

目的脑缺血损伤可以促进成年哺乳动物脑内VEGF表达水平升高,甲基化CpG结合蛋白-2(MeCP2)可以通过与甲基化的DNA结合来调控基因表达,DNA脱甲基化可以诱导MeCP2从其目的基因序列释放,从而促进该基因的表达。本实验的目的是为了揭示DNA甲基化及其与MeCP2的相互作用在脑缺血诱导的VEGF高表达过程中的调控机制。方法我们在进行短暂性大脑中动脉栓塞(MCAO)后的大鼠腹腔注射5-AZA-2'-脱氧胞苷(5-AZA-CdR)以降低基因组DNA的甲基化水平,采用Western-Blot技术检测相关蛋白的表达水平,染色质免疫共沉淀(ChIP)方法直接分析MeCP2对VEGF基因的调控作用,甲基化DNA免疫共沉淀(MeDIP)技术检测VEGF基因启动子的甲基化水平。结果 (1)缺血损伤可以诱导脑内VEGF表达水平升高,于缺血再灌3天后达到高峰;(2)腹腔注射5-AZA-CdR后可以进一步增加VEGF的蛋白表达水平,与注射生理盐水组比较,含量升高1.5倍以上;(3)缺血后MeCP2与VEGF基因启动子序列的相互作用降低,5-AZA-CdR处理可以进一步减弱二者的结合力;(4)甲基化水平分析发现,缺血后VEGF启动子序列的甲基化水平降低,5-AZA-CdR处理可以进一步降低该序列的甲基化水平。结论脑缺血损伤后,VEGF启动子调控序列的甲基化水平降低,促使MeCP2从该序列上的解离,二者共同参与了缺血诱导的VEGF表达上调过程。

关键词：脑缺血损伤血管内皮生长因子甲基化CpG结合蛋白-2 DNA甲基化

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受调控内分泌特异蛋白RESP18在帕金森病中的作用与机制

受调控内分泌特异蛋白RESP18在帕金森病中的作用与机制

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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者：黄玉芳梁敏黄芳复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室

受调控内分泌特异蛋白18(regulated endocrine-specific protein-18,RESP18)基因是1994年在大鼠垂体中叶内首次克隆的,RESP18分布于内质网上,它的表达受多巴胺能药物调节。尽管发现的时间较早,但目前对其功能的了解还不清楚。为了研究RE... 详细信息

受调控内分泌特异蛋白18(regulated endocrine-specific protein-18,RESP18)基因是1994年在大鼠垂体中叶内首次克隆的,RESP18分布于内质网上,它的表达受多巴胺能药物调节。尽管发现的时间较早,但目前对其功能的了解还不清楚。为了研究RESP18的生理功能,我们采用常规基因剔除的策略,分析表明该基因缺失后小鼠胚胎致死。研究中还发现RESP18及其一个新的剪接体RESP18-c(序列已登陆NCBI网站,编号:FJ621497.1)在黑质-纹状体内表达,我们推测RESP18与RESP18-c通过参与分泌途径和内质网应激(ERS)影响了中脑黑质多巴胺能神经元的突触传递与存活,从而对PD的发生与发展起一定的作用。小鼠多巴胺能细胞MN9D是体外PD研究中常用的细胞模型,MN9D细胞经6-OHDA和内质网应激诱导物衣霉素—mm处理后,内质网分子伴侣——受糖调节蛋白78(GRP78/Bip)和C/EBP家族成员-CHOP/GADD153表达均显著增高,而RESP18则呈现出不同的反应:150μM 6-OHDA处理MN9D细胞9小时,与对照组相比,检测发现RESP18在mRNA和蛋白水平上都有显著的增高,RESP18下游与细胞骨架相关的LIMK2分子的表达也明显上升;0.5μg/mLTm处理MN9D细胞8小时,整体的RESP18蛋白水平没有改变,而未修饰的RESP18蛋白下降了0.6倍。进一步,我们构建了过表达RESP18/RESP18-c和干扰RESP18/RESP18-c的质粒载体,与上海南方模式生物研究中心合作建立了RESP18条件剔除小鼠,RESP18的生物学功能及其在PD发病中的作用机制在深入研究之中。

关键词： RESP18 内质网应激 PD

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