检索结果-内蒙古大学图书馆

生理学报 2013年第1期65卷 77-82页

作者：石莹高景霞彭刚姜民复旦大学脑科学研究院、医学神经生物学国家重点实验室上海200032

随着标记蛋白光转换等实验技术在生物科研领域的开展,对激光共聚焦取图技术也提出了越来越高的要求。本文旨在以斑马鱼前脑神经发育为研究对象,建立应用激光共聚焦同步双扫描系统的实验模式。本实验将36～48h的转基因Tg(lhx5:kaede)斑... 详细信息

随着标记蛋白光转换等实验技术在生物科研领域的开展,对激光共聚焦取图技术也提出了越来越高的要求。本文旨在以斑马鱼前脑神经发育为研究对象,建立应用激光共聚焦同步双扫描系统的实验模式。本实验将36～48h的转基因Tg(lhx5:kaede)斑马鱼胚胎麻醉固定后,以光诱导变色荧光蛋白kaede标记的前脑神经元作为实验观察目标,使用激光共聚焦同步双扫描系统的405nm紫外激光刺激扫描感兴趣区域的同时,进行488nm和559nm激光刺激取图,实时观察kaede蛋白光学信号的转换状态,并在光转换后记录紫外激光刺激区域神经元的投射形态图像。结果显示,激光刺激引起kaede蛋白从绿色转变为红色,其在感兴趣区域的分布变化指示出目标神经元的胞体位置及其轴突投射路径。由上述结果可见,激光共聚焦同步双扫描技术的应用满足了kaede蛋白光转换实验的刺激和扫描同步的要求,该技术在斑马鱼胚胎特定神经元形态发育研究中的应用,可作为神经发育研究的一种实验模式在很多实验设计中进行延伸,也为激光共聚焦双扫描技术的推广提供了一个很好的平台。

关键词：激光共聚焦同步双扫描技术斑马鱼光转换 kaede 神经发育

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脑缺血后谷氨酸通路及其调控的研究进展

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复旦学报（医学版） 2016年第6期43卷 724-731页

作者：胡捷先陈献华复旦大学脑科学研究院医学神经生物学国家重点实验室上海200032

谷氨酸作为主要的兴奋性神经递质,在脑内正常生理状态下有重要作用,但在脑缺血等多种病理状态下,谷氨酸在脑内大量释放和堆积,导致对神经元的过度刺激,引起兴奋性毒性,并成为缺血性神经元损伤的主要诱发因素。谷氨酸的兴奋性毒性主要通... 详细信息

谷氨酸作为主要的兴奋性神经递质,在脑内正常生理状态下有重要作用,但在脑缺血等多种病理状态下,谷氨酸在脑内大量释放和堆积,导致对神经元的过度刺激,引起兴奋性毒性,并成为缺血性神经元损伤的主要诱发因素。谷氨酸的兴奋性毒性主要通过与神经元细胞膜上的受体结合,引起细胞内Na+和Ca2+增加。胞内Ca2+浓度增加会引起线粒体功能异常、蛋白酶激活、活性氧增加及NO的释放,从而引起神经元的死亡;胞内Na+增加将引起过量水分进入细胞,造成神经细胞毒性水肿和细胞死亡。因此,深入了解脑缺血后上述谷氨酸通路的调控机制,并针对该通路的不同环节进行干预,将为阻止或减轻缺血性神经元损伤提供有效途径。多种针对谷氨酸通路的脑缺血治疗策略正在积极探索中,如抑制谷氨酸合成或释放、增加谷氨酸清除、阻断谷氨酸受体或抑制细胞内Ca2+浓度增加等。本文将对缺血性脑中风后,谷氨酸引起兴奋性毒性的机制以及该系统的调控机制、相应干预策略的研究进展进行综述。

关键词：脑缺血谷氨酸受体转运体兴奋性毒性神经保护

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细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5在中枢神经系统发育和神经退行性疾病中的作用

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生理学报 2010年第4期62卷 295-308页

作者：陈洁王中峰复旦大学脑科学研究院神经生物学研究所医学神经生物学国家重点实验室上海200032

脯氨酸引导的丝/苏氨酸蛋白酶——细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase5,Cdk5)是细胞周期素依赖的蛋白酶家族中一个特殊成员。Cdk5不参与细胞周期调控,其活化需要与神经元内广泛表达的激活因子——p35或p39相结合。正... 详细信息

脯氨酸引导的丝/苏氨酸蛋白酶——细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase5,Cdk5)是细胞周期素依赖的蛋白酶家族中一个特殊成员。Cdk5不参与细胞周期调控,其活化需要与神经元内广泛表达的激活因子——p35或p39相结合。正常情况下,Cdk5的转录及活性受到体内相关机制的严格调控。在神经系统发育及成熟阶段,Cdk5通过磷酸化细胞骨架蛋白、信号分子以及调节蛋白等众多底物蛋白的特异性丝/苏氨酸位点,在神经元的迁移分化、存活和突触的发生、信息传递、可塑性等诸多方面发挥重要的作用。此外,在一些病理条件下,p35的病理性剪切和Cdk5/p25的形成所导致的Cdk5活性失调及其亚细胞分布改变则促进了神经元的凋亡或死亡,参与了阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease,AD)、帕金森氏病(Parkinson’s disease,PD)、亨廷顿氏病(Huntington’s disease,HD)以及脊髓侧索硬化症(amyotrophiclateralsclerosis,ALS)等众多神经退行性疾病的发生发展过程。本文综述了Cdk5在中枢神经系统发育和神经退行性疾病中的作用研究方面的进展。

关键词：细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5 p35 p25 突触传递突触可塑性神经元存活神经元死亡神经退行性疾病

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多巴胺D1、D2受体在大鼠前扣带皮层钙结合蛋白阳性中间神经元的分布（英文）

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生理学报 2015年第2期67卷 163-172页

作者：徐蕾张雪寒复旦大学神经生物学研究所脑科学研究院医学神经生物学国家重点实验室上海200032

大量研究表明多巴胺在行为决策、注意力调控和学习记忆等与前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)密切相关的认知功能中发挥重要作用。但是,多巴胺受体在ACC神经元上的分布还不清楚,尤其是在中间神经元上的分布。本研究旨在采用免... 详细信息

大量研究表明多巴胺在行为决策、注意力调控和学习记忆等与前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)密切相关的认知功能中发挥重要作用。但是,多巴胺受体在ACC神经元上的分布还不清楚,尤其是在中间神经元上的分布。本研究旨在采用免疫组织化学和激光共聚焦扫描显微镜技术,研究多巴胺D1和D2受体在大鼠ACC一类主要类型的中间神经元,即表达钙结合蛋白的中间神经元上的分布。结果显示,D1和D2受体在ACC的小清蛋白(parvalbumin,PV),钙结合蛋白(calbindin D-28k,CB)及钙视网膜蛋白(calretinin,CR)阳性的中间神经元均有分布。其中,D1和D2受体在PV阳性中间神经元上表达较多,在CR阳性中间神经元上表达最少;D1和D2受体在ACC深层PV神经元上的表达比例显著高于浅层。此外,CR阳性中间神经元上D2受体分布比D1受体多。D1和D2受体的这种区域和中间神经元类型特异性的表达,为了解多巴胺对ACC功能的复杂调控提供了形态学基础。

关键词： D1-多巴胺受体 D2-多巴胺受体中间神经元前扣带皮层大鼠

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大麻素CB1受体对大鼠视网膜神经节细胞诱发动作电位的作用(英文)

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生理学报 2013年第4期65卷 355-362页

作者：蒋淑霞李倩王霄汉李芳王中峰复旦大学脑科学研究院、神经生物学研究所、医学神经生物学国家重点实验室上海200032

激活大麻素CB1受体(CB1Rs)通过调控多种离子通道,从而调节脊椎动物视网膜的功能。本文旨在利用膜片钳全细胞记录技术,在大鼠视网膜薄片上研究CB1Rs对神经节细胞兴奋性的作用。结果显示,在电流钳制状态下,灌流CB1R激动剂WIN55212-2(WIN,5... 详细信息

激活大麻素CB1受体(CB1Rs)通过调控多种离子通道,从而调节脊椎动物视网膜的功能。本文旨在利用膜片钳全细胞记录技术,在大鼠视网膜薄片上研究CB1Rs对神经节细胞兴奋性的作用。结果显示,在电流钳制状态下,灌流CB1R激动剂WIN55212-2(WIN,5μmol/L)对神经节细胞的自发动作电位发放频率和静息膜电位均没有显著影响。在灌流液中加入CNQX,D-APV,bicuculline和strychnine以阻断神经节细胞的兴奋性和抑制性输入,灌流5μmol/L WIN对正向电流注入(+10pA到+100pA)诱发的动作电位的频率也没有显著影响。位相分析结果显示,触发动作电位的阈值电位和触发第一个动作电位的延迟时间在加入WIN前后也没有显著改变;然而,WIN显著降低动作电位的上升和下降相速率(±dV/dtmax),而且该作用可被CB1R拮抗剂SR141716所阻断。此外,在阻断突触输入的情况下,WIN对神经节细胞的膜电位也没有显著影响。以上结果提示,激活大麻素CB1Rs通过调控诱发动作电位,从而调节大鼠视网膜神经节细胞的兴奋性。

关键词：动作电位大麻素CB1受体膜片钳神经节细胞自发动作电位发放 WIN55212-2

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原代神经元与星形胶质细胞的混合培养方法

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生理学报 2013年第1期65卷 72-76页

作者：石莹周密姜民复旦大学脑科学研究院、医学神经生物学国家重点实验室上海200032

原代培养的海马神经元是研究神经细胞中蛋白运输与亚细胞空间定位的有效研究工具。本文旨在建立海马神经元与皮层胶质细胞混合培养的方法,以期提供状态良好的神经元供研究用。新生2～3 d Sprague-Dawley(SD)大鼠断头处死,从大脑半球表... 详细信息

原代培养的海马神经元是研究神经细胞中蛋白运输与亚细胞空间定位的有效研究工具。本文旨在建立海马神经元与皮层胶质细胞混合培养的方法,以期提供状态良好的神经元供研究用。新生2～3 d Sprague-Dawley(SD)大鼠断头处死,从大脑半球表面片取2～3片皮层组织,切碎后用胰蛋白酶消化成单细胞悬液,种植于25cm2培养瓶内。种植后第四天,采用剧烈敲击培养瓶的方法去除非星形胶质细胞的杂质细胞,继续培养贴壁细胞直至细胞接近铺满瓶底,改用含阿糖胞苷的神经细胞培养液。原代培养的大鼠海马神经元种植在这种预先培养好的皮层星形胶质细胞层上。镜下观察结果显示,本方法培养的原代星形胶质细胞纯度较高,共培养的神经元状态较佳,存活时间长,突触前结构发育良好,可以耐受转染操作。以上结果提示,本文所建立的原代神经元与星形胶质细胞的混合培养方法操作简单,能够可靠地培养出健康的神经元。

关键词：神经元胶质细胞共培养

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光纤式在体荧光显微成像系统在动态观测活体动物脑内神经元中的应用

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生理学报 2012年第6期64卷 695-699页

作者：石莹陈露岚姜民复旦大学脑科学研究院医学神经生物学国家重点实验室上海200032

本文旨在利用光纤式在体荧光显微成像系统,建立大鼠脑内神经元的在体显微荧光连续观察的实验方法。将含有绿色荧光蛋白的重组病毒载体(Ubi-GFP)微注射到Sprague Dawley(SD)大鼠大脑皮层区,7天后用微创手术将光纤探头植入动物脑内目标位... 详细信息

本文旨在利用光纤式在体荧光显微成像系统,建立大鼠脑内神经元的在体显微荧光连续观察的实验方法。将含有绿色荧光蛋白的重组病毒载体(Ubi-GFP)微注射到Sprague Dawley(SD)大鼠大脑皮层区,7天后用微创手术将光纤探头植入动物脑内目标位置,使用在体荧光显微成像技术观察到微注射区GFP标记神经元的特异性荧光信号。随后对大鼠脑组织行冰冻切片,荧光显微镜对切片的观察结果验证了在体荧光显微成像实验中观察到的荧光信号。该方法既保证了在体实验中动物处于生理状态,又满足了体内神经组织荧光显微水平成像的要求,可以用于动物脑内神经元荧光信号的在体追踪记录,为在体神经科学实验提供了有效的技术保障。

关键词：在体荧光成像技术绿色荧光蛋白神经元

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SRp38基因在小鼠视网膜细胞中的表达以及对GluR-B小基因可变剪接的调控

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生物化学与生物物理进展 2008年第7期35卷 772-777页

作者：彭正羽李淑贞张薇陈献华复旦大学医学院医学神经生物学国家重点实验室上海200032 复旦大学脑科学研究院神经生物学研究所上海200032 浙江大学城市学院药学系杭州310015

SR蛋白在前体mRNA可变剪接调控中发挥重要作用.SRp38作为一种新近发现的具有神经及生殖组织特异性的SR蛋白,能够调控一些在神经组织中起重要作用的基因(如GluR-B,Trk-C,NCAML1等)的前体mRNA可变剪接,同时还可以在有丝分裂M期及热休克时... 详细信息

SR蛋白在前体mRNA可变剪接调控中发挥重要作用.SRp38作为一种新近发现的具有神经及生殖组织特异性的SR蛋白,能够调控一些在神经组织中起重要作用的基因(如GluR-B,Trk-C,NCAML1等)的前体mRNA可变剪接,同时还可以在有丝分裂M期及热休克时抑制前体mRNA剪接的发生.利用Western blot以及免疫组织化学方法研究了SRp38蛋白在小鼠视网膜中的表达以及分布情况,结果显示,SRp38蛋白在视网膜中的表达具有区域特异性,在外网层、内核层、内网层以及节细胞层中均有表达,而在外核层无表达.对分离培养的小鼠视网膜细胞进行免疫双标记分析的结果表明,SRp38蛋白在视杆-双极细胞的胞体、轴突、树突中表达.通过瞬时共转染以及RT-PCR分析,发现在R28细胞中,SRp38过表达可以促进GluR-B小基因Flip亚型的剪接.结果提示SRp38蛋白可能通过调控小鼠视网膜内前体mRNA可变剪接、进而在小鼠视网膜功能中发挥重要作用.

关键词： SRp38 前体mRNA可变剪接视网膜双极细胞 GluR-B小基因

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CBA/CaJ小鼠的屈光发育及形觉剥夺所致近视性屈光变化

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生理学报 2016年第2期68卷 135-140页

作者：李允允钱康伟吴小华周伟钟咏梅翁史钧复旦大学神经生物学研究所脑科学研究院医学神经生物学国家重点实验室脑科学协同创新中心上海200032

小鼠因易于进行遗传学操作,成为近视机制研究中最为常用的哺乳类模式动物之一。然而,绝大多数品系的实验用小鼠不具备褪黑素合成能力,而这一神经激素在人类近视形成过程中可能起重要的作用。本工作研究了一种体内能合成褪黑素的小鼠品... 详细信息

小鼠因易于进行遗传学操作,成为近视机制研究中最为常用的哺乳类模式动物之一。然而,绝大多数品系的实验用小鼠不具备褪黑素合成能力,而这一神经激素在人类近视形成过程中可能起重要的作用。本工作研究了一种体内能合成褪黑素的小鼠品系——CBA/Ca J品系的屈光发育特征,并阐明了形觉剥夺是否影响屈光发育及其机制。使用红外偏心验光仪的连续观察显示,CBA/Ca J小鼠眼球屈光力可被稳定测量,且呈现明显的发育学变化:屈光力数值随日龄逐渐增大,直至出生后9周左右才渐趋稳定。其屈光力绝对值高于目前常用的C57BL/6小鼠同龄时的数值,但屈光力开始稳定的时间点则较为接近。给3周龄CBA/Ca J小鼠佩戴半透明眼罩,施加形觉剥夺5周后,剥夺眼屈光力相对对侧眼出现显著的近视性偏移,表明该品系小鼠可用于形觉剥夺性近视建模。

关键词：近视褪黑素形觉剥夺屈光力 CBA小鼠

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幼年期抑制NMDA受体GluN2B亚基功能结合成年后社交应激改变小鼠前额叶皮层神经元周围网络

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生理学报 2024年第1期76卷 1-11页

作者：梁亦睿张雪寒复旦大学脑科学研究院医学神经生物学国家重点实验室教育部脑科学前沿中心上海200032

神经元周围网络(perineuronal nets,PNNs)是一种细胞外基质(extracellular matrix,ECM),被认为是神经系统发育,尤其是皮层发育过程中重要的神经可塑性调节因子。大脑皮层中的PNNs富集在表达小清蛋白(parvalbumin,PV)的中间神经元周围。... 详细信息

神经元周围网络(perineuronal nets,PNNs)是一种细胞外基质(extracellular matrix,ECM),被认为是神经系统发育,尤其是皮层发育过程中重要的神经可塑性调节因子。大脑皮层中的PNNs富集在表达小清蛋白(parvalbumin,PV)的中间神经元周围。越来越多的证据表明,PV阳性神经元和PNNs的异常与多种精神疾病相关,特别是属于发育缺陷疾病的精神分裂症。NMDA受体在精神分裂症的病理生理学中发挥重要作用,NMDA受体的选择性拮抗剂常用于精神分裂症实验模型动物的造模。GluN2B亚基在神经系统发育中发挥至关重要的作用,但GluN2B在精神分裂症中的作用尚缺乏研究。本研究通过腹腔注射GluN2B选择性拮抗剂ifenprodil干扰幼年小鼠(3~4周龄)的GluN2B亚基功能,待小鼠长至成年(9周龄)时,给予小鼠社会应激。用免疫荧光染色方法研究前额叶皮层(prefrontal cortex,PFC)PNNs和PV阳性神经元的变化,用听觉惊吓和前脉冲抑制测试检测PV阳性细胞活性,用免疫印迹技术检测NMDA受体GluN2A和GluN2B亚基蛋白的表达。结果显示,在幼年期GluN2B拮抗剂注射和成年应激处理的小鼠PFC中有更多的PV阳性神经元被PNNs包裹;在需要感觉门控功能支持的前脉冲抑制测试中被激活的PV阳性神经元显著减少;NMDA受体GluN2A/GluN2B亚基蛋白表达比例显著降低。小鼠的这些由幼年期GluN2B拮抗剂注射和成年应激引起的异常,与精神分裂症患者和动物模型中观察到的现象相似。以上研究结果提示幼年GluN2B功能异常,甚至短暂的功能低下,可能是成年后出现精神分裂症症状的风险因素之一。

关键词： NMDA受体 PV阳性中间神经元神经发育精神分裂症前额叶皮层啮齿类动物

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