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现代免疫学 2017年第5期37卷 360-365页

作者：孙雅贺银燕李明清李大金邵珺复旦大学上海医学院附属妇产科医院暨妇产科研究所生殖免疫教研室上海200011 上海交通大学附属上海市第一人民医院妇产科上海200080

探索人早孕绒毛组织和滋养细胞中白细胞介素25(interleukin 25,IL-25)及其受体的表达,以及IL-25对滋养细胞的促增殖作用。免疫组织化学法检测IL-25在正常早孕期绒毛组织的表达;流式细胞术检测IL-25及其受体在正常妊娠和自然流产绒毛组... 详细信息

探索人早孕绒毛组织和滋养细胞中白细胞介素25(interleukin 25,IL-25)及其受体的表达,以及IL-25对滋养细胞的促增殖作用。免疫组织化学法检测IL-25在正常早孕期绒毛组织的表达;流式细胞术检测IL-25及其受体在正常妊娠和自然流产绒毛组织的滋养细胞中的表达;CCK-8实验分析重组IL-25(rhIL-25)及其中和性抗体对人绒毛膜滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞活力的影响。结果显示IL-25在正常绒毛组织滋养细胞中呈阳性表达,自然流产患者绒毛滋养细胞的IL-25及其受体的表达均低于正常妊娠(P<0.001);重组IL-25处理后,HTR-8/SVneo细胞活力以时间依赖和剂量依赖方式显著增强(P<0.001或P<0.000 1);相反,IL-25中和性抗体明显抑制其细胞活力(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结果表明人早孕母-胎界面滋养细胞表达IL-25,以自分泌方式促进自身增殖,IL-25异常低表达可能参与反复自然流产的发病机制。

关键词： IL-25 滋养细胞 HTR-8/SVneo细胞细胞活力自然流产

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人早孕滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养对外周NK细胞的影响

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现代免疫学 2017年第1期37卷 1-6页

作者：朴海兰陶昱王松存杜美蓉李大金复旦大学附属妇产科医院暨妇产科研究所生殖免疫教研室上海200011 中国福利会国际和平妇幼保健院上海200031 海南医学院附属医院海口570102

为了分析人早孕母-胎界面功能细胞对外周NK细胞表型及功能的调节作用,我们模拟母-胎界面微环境,建立滋养细胞和蜕膜基质细胞共培养系统,并将此共培养体系与外周NK细胞共培养,采用流式细胞术分析NK细胞的表型和细胞因子的表达,用细胞毒... 详细信息

为了分析人早孕母-胎界面功能细胞对外周NK细胞表型及功能的调节作用,我们模拟母-胎界面微环境,建立滋养细胞和蜕膜基质细胞共培养系统,并将此共培养体系与外周NK细胞共培养,采用流式细胞术分析NK细胞的表型和细胞因子的表达,用细胞毒检测试剂盒检测NK细胞的细胞毒活性。研究发现,母-胎界面滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养体系能够显著上调外周NK细胞抑制型受体KIR2DL1的表达,下调外周NK细胞杀伤性受体NKp44的表达;显著上调Th2型细胞因子IL-10的表达水平,下调外周NK细胞穿孔素perforin表达及其细胞毒活性。结果表明,母-胎界面功能细胞能够诱导外周NK细胞的耐受表型及Th2型优势,下调外周及蜕膜NK细胞的细胞毒活性,从而有利于形成母-胎界面免疫耐受微环境。

关键词：人早孕滋养细胞蜕膜基质细胞外周NK细胞

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CCL2通过抑制白细胞介素-24表达增强人绒毛膜滋养细胞株的细胞活力

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中华生殖与避孕杂志 2017年第8期37卷 648-653页

作者：邵珺贺银燕李大金李明清复旦大学附属妇产科医院研究所生殖免疫教研室上海200011 上海交通大学附属第一人民医院妇产科 200080 国家人口计生委计划生育药具重点实验室上海200032

目的探讨白细胞介素-24(interleukin-24,IL-24)对人滋养细胞活力的调节作用。方法免疫组织化学法检测IL-24及其受体(IL-20R1、IL-20R2和IL-22R1)在正常早孕期绒毛组织的表达;In-cell Western法分析重组胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic st... 详细信息

目的探讨白细胞介素-24(interleukin-24,IL-24)对人滋养细胞活力的调节作用。方法免疫组织化学法检测IL-24及其受体(IL-20R1、IL-20R2和IL-22R1)在正常早孕期绒毛组织的表达;In-cell Western法分析重组胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和趋化因子CCL2对人绒毛膜滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞中IL-24表达的影响;MTT法分析重组IL-24和CCL2对HTR-8/SVneo细胞活力的影响。结果 IL-24及其受体均在正常早孕期绒毛组织滋养细胞中强阳性表达。与对照组相比,重组CCL2体外刺激后HTR-8/SVneo细胞IL-24表达水平显著下降(P<0.001)。重组IL-24处理后,HTR-8/SVneo细胞活力显著降低(P<0.05或P<0.001);相反,IL-24中和性抗体明显促进其细胞活力(P<0.05或P<0.01),重组CCL2(100 ng/mL)可体外增强HTR-8/SVneo细胞活力(P<0.01),但这一作用可被重组IL-24所抑制。结论 CCL2通过抑制IL-24分泌增强人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞的体外活力,从而可能利于囊胚植入和胎盘发育。

关键词：白细胞介素-24(IL-24) CCL2 滋养细胞 HTR-8/SVneo细胞细胞活力

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人早孕滋养细胞与蜕膜基质细胞协同调节外周NK细胞的表型及功能

人早孕滋养细胞与蜕膜基质细胞协同调节外周NK细胞的表型及功能

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2016第十一届全国免疫学学术大会

作者：朴海兰陶昱杜美蓉复旦大学附属妇产科医院暨妇产科研究所生殖免疫教研室中国福利会国际和平妇幼保健院

目的：解析人早孕母-胎界面功能细胞对外周NK细胞表型及功能的调节作用。方法：模拟母-胎界面微环境，建立滋养细胞和蜕膜基质细胞共培养系统，并将滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养体系与外周NK细胞共培养，流式细胞术分析NK细胞的表型和... 详细信息

目的：解析人早孕母-胎界面功能细胞对外周NK细胞表型及功能的调节作用。方法：模拟母-胎界面微环境，建立滋养细胞和蜕膜基质细胞共培养系统，并将滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养体系与外周NK细胞共培养，流式细胞术分析NK细胞的表型和细胞因子的表达，细胞毒性检测试剂盒检测NK细胞的细胞毒活性。

关键词：人早孕滋养细胞蜕膜基质细胞外周NK细胞

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人早孕滋养细胞与蜕膜基质细胞协同调节外周NK细胞的表型及功能

人早孕滋养细胞与蜕膜基质细胞协同调节外周NK细胞的表型及功能

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第十一届全国免疫学学术大会

作者：朴海兰陶昱杜美蓉复旦大学附属妇产科医院暨妇产科研究所生殖免疫教研室中国福利会国际和平妇幼保健院

目的:解析人早孕母-胎界面功能细胞对外周NK细胞表型及功能的调节作用。方法:模拟母-胎界面微环境,建立滋养细胞和蜕膜基质细胞共培养系统,并将滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养体系与外周NK细胞共培养,流式细胞术分析NK细胞的表型和细胞... 详细信息

目的:解析人早孕母-胎界面功能细胞对外周NK细胞表型及功能的调节作用。方法:模拟母-胎界面微环境,建立滋养细胞和蜕膜基质细胞共培养系统,并将滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养体系与外周NK细胞共培养,流式细胞术分析NK细胞的表型和细胞因子的表达,细胞毒性检测试剂盒检测NK细胞的细胞毒活性。结果:研究发现,母-胎界面滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养体系能够显著上调外周NK细胞抑制型受体KIR2DL1的表达,下调外周NK细胞杀伤性受体NKp44的表达。母-胎界面滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养体系能够显著上调Th2型细胞因子IL-10的表达水平,并能够降调节外周NK细胞穿孔素perforin表达与其细胞毒活性。结论:母-胎界面功能细胞能够诱导外周NK细胞的耐受表型及Th2型优势,下调外周及蜕膜NK细胞的细胞毒活性,从而有利于形成母-胎界面免疫耐受微环境。

关键词：人早孕滋养细胞蜕膜基质细胞外周NK细胞

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宫颈癌细胞通过分泌TSLP促进自身细胞活力

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中国免疫学杂志 2012年第10期28卷 918-921页

作者：谢锋孟玉菡李明清李大金复旦大学附属妇产科医院暨妇产科研究所生殖免疫教研室上海200011

目的:探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对宫颈癌细胞活力的自分泌调节作用。方法:体外培养宫颈癌细胞株HeLa和CasKi,分别收集培养24、48和72小时的培养上清,ELISA法检测培养上清中TSLP的分泌水平;流式细胞术分析HeLa和CasKi细胞表面TSL... 详细信息

目的:探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对宫颈癌细胞活力的自分泌调节作用。方法:体外培养宫颈癌细胞株HeLa和CasKi,分别收集培养24、48和72小时的培养上清,ELISA法检测培养上清中TSLP的分泌水平;流式细胞术分析HeLa和CasKi细胞表面TSLP受体(TSLPR)的表达水平;再用MTT法分别检测HeLa和CasKi细胞经人重组细胞因子TSLP(1、10和100 ng/ml)处理24、48和72小时后细胞活力的水平变化。结果:HeLa和CasKi细胞均呈时间依赖性分泌TSLP(P<0.01),且HeLa细胞在24和48小时分泌TSLP的水平高于CasKi细胞(P<0.01或P<0.05);HeLa和CasKi细胞TSLPR阳性表达率分别为23.61±1.30和27.07±2.13,前者低于后者(P<0.05);此外,10或100 ng/ml TSLP作用HeLa和CasKi细胞48小时或72小时均能上调其细胞活力(P<0.05)。结论:宫颈癌细胞可能通过TSLP自分泌作用促进自身的活力,进而利于宫颈癌细胞的生长,因而参与宫颈癌的发病和进展。

关键词：胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP) 宫颈癌 HeLa CasKi 细胞活力

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IDO通过整合素αvβ3调控子宫内膜间质细胞黏附能力

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现代免疫学 2012年第6期32卷 468-473页

作者：梅洁李明清李大金朱晓勇复旦大学附属妇产科医院暨妇产科研究所生殖免疫教研室上海200011 海南医学院附属医院海口570102

探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)通过细胞外黏附分子整合素对子宫内膜间质细胞(ESC)与细胞外基质黏附能力的调控。收集非内异症患者健康内膜、内异症患者在位内膜及异位内膜样组织,体外分离、培养获得子宫内膜间质细胞,并鉴定细胞纯度;In-c... 详细信息

探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)通过细胞外黏附分子整合素对子宫内膜间质细胞(ESC)与细胞外基质黏附能力的调控。收集非内异症患者健康内膜、内异症患者在位内膜及异位内膜样组织,体外分离、培养获得子宫内膜间质细胞,并鉴定细胞纯度;In-cell Western比较分析健康、在位和异位ESC中IDO的表达水平,以及脂多糖(LPS)和1-甲基色氨酸(1-MT)单独或联合作用对IDO表达的影响;黏附试验分析LPS和(或)1-MT对ESC与细胞外基质laminin、collagen、fibrino-gen、fibronectin等黏附能力的影响;进一步应用流式细胞术分析LPS或/和1-MT对相应细胞外基质配体-整合素表达的调节。结果显示,IDO在子宫内膜异位症患者来源在位及异位ESC中高表达。炎症因子LPS可以促进ESC中IDO的表达,并通过上调整合素αvβ3增强ESC对细胞外基质collagen I、collagen IV、fibrinogen、fibronectin的黏附。IDO特异性抑制剂1-MT可以抑制ESC表达IDO,并且可以逆转LPS诱导的整合素αvβ3表达及ESC黏附能力。

关键词：子宫内膜间质细胞吲哚胺2 3-双加氧酶整合素脂多糖 1-甲基色氨酸

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人早孕期蜕膜基质细胞下调蜕膜NK细胞杀伤活性

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现代免疫学 2012年第4期32卷 303-307页

作者：杜美蓉徐冰朴海兰李大金复旦大学附属妇产科医院暨妇产科研究所生殖免疫教研室上海200011 海南医学院附属医院海口570102

通过分析人早孕期蜕膜基质细胞(decidual stromal cell,DSC)对蜕膜NK细胞(dNK)表面趋化因子受体CXCR4与细胞内颗粒酶B表达水平的影响,研究早孕蜕膜基质细胞对局部NK细胞的训导作用。收集早孕蜕膜组织,分离DSC及蜕膜免疫活性细胞,进一步... 详细信息

通过分析人早孕期蜕膜基质细胞(decidual stromal cell,DSC)对蜕膜NK细胞(dNK)表面趋化因子受体CXCR4与细胞内颗粒酶B表达水平的影响,研究早孕蜕膜基质细胞对局部NK细胞的训导作用。收集早孕蜕膜组织,分离DSC及蜕膜免疫活性细胞,进一步通过磁珠分选蜕膜CD3-CD56bright NK细胞,将分离的蜕膜NK细胞与DSC按1∶1比例共培养24h,收集蜕膜NK细胞,流式细胞仪检测其表面趋化因子受体CXCR4和细胞内颗粒酶B(granzyme B)的表达水平。结果显示,与对照组相比,在与DSC细胞共培养之后,趋化因子受体CXCR4+NK细胞的百分率明显上升,而蜕膜NK细胞内颗粒酶B阳性率显著下降(P<0.05)。结果表明,人早孕母-胎界面DSC细胞上调蜕膜NK细胞表面趋化因子受体CXCR4的表达,下调NK细胞内颗粒酶B的表达水平,可能抑制其杀伤活性。

关键词：蜕膜基质细胞蜕膜NK细胞 CXCR4 颗粒酶B

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重组乳酸杆菌***β-C3d3经鼻腔免疫BALB/c小鼠的抗生育潜能

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中国免疫学杂志 2011年第7期27卷 616-619页

作者：王健理姚晓英李大金复旦大学附属妇产科医院暨妇产科研究所生殖免疫研究室上海200011

目的：探讨表达hCGβ-C3d3融合蛋白的重组乳酸杆菌避孕疫苗经鼻腔黏膜接种BALB/c小鼠及其抗生育潜能。方法：用野生型乳酸杆菌Lb.及重组乳酸杆菌***β和***β-C3d3以两种剂量（10^9个和10^10个）经鼻腔滴注接种68周龄雌性BALB/c小鼠。3... 详细信息

目的：探讨表达hCGβ-C3d3融合蛋白的重组乳酸杆菌避孕疫苗经鼻腔黏膜接种BALB/c小鼠及其抗生育潜能。方法：用野生型乳酸杆菌Lb.及重组乳酸杆菌***β和***β-C3d3以两种剂量（10^9个和10^10个）经鼻腔滴注接种68周龄雌性BALB/c小鼠。3周后用相同剂量加强免疫一次。于初次免疫后的第6、7、8周收集血清,分别培养MLTC-1、BeWo细胞;化学发光法检测培养上清中孕酮或hCGβ水平;免疫荧光观察抗血清处理后BeWo细胞的融合情况。结果：用10^10个***β-C3d3滴鼻免疫BALB/c小鼠产生的抗血清能显著抑制hCG刺激MLTC-1分泌孕酮,明显抑制BeWo细胞分泌hCGβ及细胞融合。结论：重组乳酸杆菌活疫苗***β-C3d3经鼻腔接种诱导的hCGβ抗体可拮抗hCGβ生物学功能,并干扰滋养细胞功能,因此具有抗生育潜能。

关键词：重组乳酸杆菌 hCGβ C3d3鼻腔接种

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环孢素A对人母-胎界面IL-10和IFN-γ细胞因子格局的调节作用

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现代免疫学 2011年第2期31卷 121-125页

作者：李明清杜美蓉周雯慧李大金复旦大学附属妇产科医院暨妇产科研究所生殖免疫教研室上海200011 海南医学院附属医院海口570102

本研究目的为了探讨环孢霉素A（CsA）对人早孕期母-胎界面主要组成细胞产生的IL-10与IFN-γ比率的调节作用,为治疗复发性自然流产等妊娠相关性疾病提供新线索。收集6~10周行人工流产术的正常妊娠妇女的绒毛和蜕膜组织;体外分离、培养获... 详细信息

本研究目的为了探讨环孢霉素A（CsA）对人早孕期母-胎界面主要组成细胞产生的IL-10与IFN-γ比率的调节作用,为治疗复发性自然流产等妊娠相关性疾病提供新线索。收集6~10周行人工流产术的正常妊娠妇女的绒毛和蜕膜组织;体外分离、培养获得蜕膜免疫细胞、蜕膜基质细胞与滋养细胞,建立三种细胞之间的两两共培养和三者共培养模型;ELISA法检测经环孢素A（0μmol/L、1μmol/L）处理48 h的共培养体系培养上清中IL-10与IFN-γ分泌水平。结果显示,（1）1μmol/L CsA可以明显促进两两共培养（P〈0.05）,尤其三种细胞共培养体系IL-10的分泌（P〈0.01）;相反,抑制蜕膜免疫细胞与滋养细胞或蜕膜基质细胞两两共培养（P〈0.05）,及三者共培养体系中IFN-γ的产生（P〈0.05）;（2）低剂量CsA升调两两共培养和三者共培养体系中IL-10与IFN-γ比率（P〈0.01）。结果表明,CsA通过促进母-胎界面IL-10/IFN-γ的比率,从而有利于母-胎界面Th2型免疫优势的维持。

关键词：环孢霉素A 母胎界面 IL-10 IFN-γ

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