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第八届泛环渤海生物化学与分子生物学会2018年学术交流会

作者：陈万方齐佳刘欢孙倩男隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

研究背景:蛋白质的糖基化修饰是一种常见的蛋白质翻译后修饰方式,蛋白质组学和基因组学的研究表明,哺乳动物中50%的蛋白质发生糖基化修饰。骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种N-结合糖蛋白家族的分泌型磷酸化糖蛋白,结构中包含N-糖基化位... 详细信息

研究背景:蛋白质的糖基化修饰是一种常见的蛋白质翻译后修饰方式,蛋白质组学和基因组学的研究表明,哺乳动物中50%的蛋白质发生糖基化修饰。骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种N-结合糖蛋白家族的分泌型磷酸化糖蛋白,结构中包含N-糖基化位点和O-糖基化位点。OPN通过与细胞表面的整合素受体相互作用可调节细胞之间的黏附、细胞迁移、细胞基质间相互作用,参与机体发育及某些病理过程,与肿瘤细胞的增殖及迁移侵袭密切相关,而这些功能在很大程度上依赖于蛋白的翻译后修饰过程。实验方法:本研究选择人子宫内膜癌细胞系(RL95-2细胞、HEC-1A细胞)分别模拟高低接受状态的子宫内膜,以绒毛膜肿瘤的细胞系(Jar细胞)模拟侵入性胚胎,作为稳定的体外着床模型系统。用衣霉素处理RL95-2细胞、HEC-1A细胞,模拟去N糖基化修饰模型,用质谱的方法确定OPN上包含的N糖基化位点数目及位置,构建OPN-N糖基化突变质粒后转染上述两种子宫内膜癌细胞系,通过细胞免疫荧光及western blot实验,确定N糖基化修饰对蛋白定位及本身性质的影响;通过CCK-8实验、克隆形成实验、细胞划痕实验和Transwell小室实验检测N糖基化修饰对细胞的增殖、迁移及侵袭能力的影响;通过与Jar细胞共培养,检测N糖基化修饰对细胞黏附能力的影响。通过RT-PCR及western blot实验进一步研究OPN-N糖基化修饰对子宫内膜接受状态调控的分子机制。实验结果:用衣霉素处理RL95-2细胞、HEC-1A细胞,检测RL95-2、HEC-1A细胞的迁移及侵袭能力发生了改变;发生N糖基化修饰后,OPN分子量发生改变。N糖基化修饰促进RL95-2细胞、HEC-1A细胞的迁移能力及侵袭能力,并且对高接受状态的RL95-2细胞的促进作用比低接受状态的HEC-1A细胞明显。将转染后RL95-2细胞、HEC-1A细胞分别与Jar细胞共培养,发现N糖基化修饰能分别促进RL95-2、HEC-1A细胞与Jar细胞的黏附能力;应用免疫沉淀纯化技术纯化RL95-2细胞、HEC-1A细胞中的OPN蛋白,采用凝集素印迹方法分析比较OPN在高低接受状态的子宫内膜的聚糖结构变化,初步结果显示,高接受态RL95-2细胞对伴刀豆蛋白A(Con A)的亲和能力明显高于低接受态HEC-1A细胞,提示OPN-N糖基化修饰可调控子宫内膜容受性。Western结果显示,发生N糖基化修饰后,细胞内ERK、p38、AKT的活化增强,MMP2,MMP9的表达水平上升,采用特异性抑制剂来抑制AKT和ERK的表达,结果 OPN糖基化修饰对MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin、E-cadherin的调控作用受到不同程度的抑制。因此,OPNN-糖基化修饰可能通过AKT和ERK的活化来调节MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白表达,进而影响肿瘤细胞的侵袭及转移。由于胚胎着床过程与肿瘤侵袭转移过程的相似性,所以参与肿瘤侵袭转移的分子机制在胚胎着床过程中也可能发挥重要作用。

关键词： OPN 子宫内膜糖基转移酶侵袭迁移

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子宫内膜容受性建立中O-GlcNAc修饰的作用机制研究

子宫内膜容受性建立中O-GlcNAc修饰的作用机制研究

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2018年全国糖生物学会议

作者：韩笑李晓雪陈万方李奥赢隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生化教研室辽宁省大连市旅顺南路西段9号

O-GlcNAc糖基化修饰是指单个的N乙酰葡糖胺通过O糖苷键连接在蛋白质的丝氨酸或苏氨酸的羟基氧原子上.O-GlcNAc修饰基团的添加和去除分别是由 O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)和N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(O-GlcNAcase,OGA)完成.蛋白质糖基化修饰在... 详细信息

O-GlcNAc糖基化修饰是指单个的N乙酰葡糖胺通过O糖苷键连接在蛋白质的丝氨酸或苏氨酸的羟基氧原子上.O-GlcNAc修饰基团的添加和去除分别是由 O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)和N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(O-GlcNAcase,OGA)完成.蛋白质糖基化修饰在胚胎着床中起重要作用,但O-GlcNAc修饰在着床调控中的作用研究尚属空白.

关键词： O-GlcNAc 子宫内膜容受性胚胎着床

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O-GlcNAc糖基化修饰影响Sp1活性调控胚胎滋养层细胞与子宫内膜浸润

O-GlcNAc糖基化修饰影响Sp1活性调控胚胎滋养层细胞与子宫内膜浸润

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2018年全国糖生物学会议

作者：李晓雪廖杨优韩笑张宏硕隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生化教研室辽宁省大连市旅顺南路西段9号

哺乳动物"母—胎"界面高增殖的滋养层细胞分泌激素、细胞因子、生长因子、黏附分子，介导滋养层细胞形成"锚钉于子宫壁"的绒毛，分化成绒毛外滋养层细胞(EVT)并浸润子宫内膜基质;蛋白水解酶调控基质细胞增殖、分化... 详细信息

哺乳动物"母—胎"界面高增殖的滋养层细胞分泌激素、细胞因子、生长因子、黏附分子，介导滋养层细胞形成"锚钉于子宫壁"的绒毛，分化成绒毛外滋养层细胞(EVT)并浸润子宫内膜基质;蛋白水解酶调控基质细胞增殖、分化与降解，协同控制蜕膜化来限制滋养层细胞在子宫内膜的过度侵润;黏附分子调节上皮向间质转化(EMT);部分绒毛外滋养层细胞获得血管内皮细胞样特征，促进胎盘形成及子宫螺旋动脉的重塑，从而建立有效的"母—胎"循环系统间的营养物质交换，维持胎儿宫内正常发育。如果滋养层细胞浸润过浅、血管内皮功能障碍及重塑受阻，会引起子痫前期和胎儿宫内生长受限;如浸润过度则易引起滋养细胞肿瘤等重大妊娠疾病。

关键词： O-GlcNAc 转录因子Sp1 胚胎滋养层细胞子宫内膜容受性

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白细胞介素-34对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞前列腺素E2／环氧化酶2表达的影响

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中华风湿病学杂志 2017年第1期21卷 37-41页

作者：汤亚微王冰孙晓彤马梓健李霞张彦大连医科大学基础医学院免疫学教研室 116023 大连医科大学附属第二医院风湿免疫科

目的探讨IL．34对RA患者成纤维样滑膜细胞（FLS）前列腺素E2（PGE2）／环氧化酶2（COX-2）表达的影响。方法分离培养6例RA患者FLS，分别用IL-34（50ng／m1）、IL-34受体拮抗剂（25ng／m1）加IL-34（50ng／m1）、信号通路抑制剂（10μmol... 详细信息

目的探讨IL．34对RA患者成纤维样滑膜细胞（FLS）前列腺素E2（PGE2）／环氧化酶2（COX-2）表达的影响。方法分离培养6例RA患者FLS，分别用IL-34（50ng／m1）、IL-34受体拮抗剂（25ng／m1）加IL-34（50ng／m1）、信号通路抑制剂（10μmol／L）加IL．34（50ng／m1）刺激。采用反转录（RT）-PCR检测FLSCox2mRNA表达；用ELISA检测细胞培养上清中PGE，水平。2组间比较采用t检验。结果与未刺激组相比，IL-34刺激FLS后COX-2和PGE：水平增高，以48h最为明显[（139±24）pg／ml和（201±8）pg／ml，t=-6．177，P〈0．01]；且加入IL-34受体拮抗剂刺激FLS24、48、74h，均可使IL-34刺激的RAFLS分泌PGE2水平降低[（250±58）pg／ml和（100±28）pg／ml，t=5．742，P〈0．01；（375±24）pg／ml和（97±23）pg／ml，t=20．564，P〈***；（357＋21）pg／ml和（94±18）pg／ml，拉22．353，P〈0．01]；此外，细胞培养体系中加入NF-kB和P38MAPK抑制剂后，IL-34刺激RAFLS产生PGE2水平明显下降[（279±37）pg／ml和（63±17）pg／ml，t=12．806，P〈O．01；（279±37）pg／ml和（77±16）pg／ml，t=6．177，P〈0．0130结论IL-34与其受体结合可能通过NF-KB和P38MAPK信号通路促进RAFLS分泌PGE2，提示其可能参与RA的发病。

关键词：关节炎,类风湿白细胞介素类地诺前列酮环氧化合物成纤维样滑膜细胞

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知难行易:以科研训练培养医学本科生的创新思维

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教育教学论坛 2018年第12期 123-124页

作者：陈建交杨钰婷赵杰李韶辽宁省脑疾病神经保护与损伤修复重点实验室辽宁大连116044 大连医科大学基础医学院生理学教研室辽宁大连116044

在医学教育改革中,培养学生的创新思维能力已成为基础医学教学改革的重点内容。树立以科研结合教学为核心的现阶段临床医学本科人才创新能力培养模式,把创新思维的培养放到突出位置上,通过科研活动以拓宽学术视野,提升创新能力,对于促... 详细信息

在医学教育改革中,培养学生的创新思维能力已成为基础医学教学改革的重点内容。树立以科研结合教学为核心的现阶段临床医学本科人才创新能力培养模式,把创新思维的培养放到突出位置上,通过科研活动以拓宽学术视野,提升创新能力,对于促进科研优势资源转化为教学优势资源,全面提升创新人才培养质量有着重要意义。

关键词：医学教育科研训练创新思维

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广东汉族人群 RXRG rs1467664位点与2型糖尿病遗传易感性的关联研究

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国际遗传学杂志 2018年第6期41卷 439-444页

作者：于海兵王姝胡维何小艺闫妍潘海燕何玉清孔丹莉林子牛王燕丁元林东莞广东医科大学流行病与卫生统计学教研室东莞广东医科大学系统生物研究所 518000 深圳中迈数字医疗技术有限公司东莞广东医科大学基础医学院微生物与免疫学教研室

目的对维甲酸X受体γ(retinoid X receptor gamma, RXRG)基因rs1467664位点的单核苷酸多态性与2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)遗传易感性的关联性进行研究。方法采用病例-对照研究, 利用SNPscan?分型技术检测1092例2型糖尿... 详细信息

目的对维甲酸X受体γ(retinoid X receptor gamma, RXRG)基因rs1467664位点的单核苷酸多态性与2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)遗传易感性的关联性进行研究。方法采用病例-对照研究, 利用SNPscan?分型技术检测1092例2型糖尿病患者和1092名正常对照者RXRG rs1467664位点的基因型, 运用SPSS 20.0软件对该位点基因型及等位基因频率在两组中的分布进行分析。结果 RXRG rs1467664位点基因型和等位基因在两组间的分布差异无统计学意义。在调整年龄、体质指数(body mass index, BMI)、性别前后, 两组间rs1467664位点的各遗传模型差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 RXRG rs1467664位点单核苷酸多态性与广东地区汉族人群2型糖尿病患者遗传易感性不存在明显相关性。

关键词： 2型糖尿病单核苷酸多态性 RXRG基因

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社会隔离对BALB／c小鼠认知功能和海马5-HT2CR、ADAR1表达的影响

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中华行为医学与脑科学杂志 2017年第5期26卷 385-389页

作者：徐红余伟志薛莹安冬陈薇梁金邢悦肖昭扬孙艺平唐一源殷盛明大连医科大学基础医学院机能实验室大连116044 大连医科大学基础医学院生理学教研室大连116044 大连医科大学研究生大连116044 大连医科大学附属第二医院麻醉科大连116027 德克萨斯理工大学脑成像研究院 79409美国

目的探讨社会隔离对BALB／c小鼠认知功能及5羟色胺2c受体（5-HT2Creceptor，5-HT2CR）和RNA腺苷脱氨酶1（adenosinedeaminasethatactOnRNA1，ADARl）表达的影响。方法选取健康BALB／c小鼠，按照随机原则（随机数字表法）分组，分别自生... 详细信息

目的探讨社会隔离对BALB／c小鼠认知功能及5羟色胺2c受体（5-HT2Creceptor，5-HT2CR）和RNA腺苷脱氨酶1（adenosinedeaminasethatactOnRNA1，ADARl）表达的影响。方法选取健康BALB／c小鼠，按照随机原则（随机数字表法）分组，分别自生后21d起单笼饲养2周、4周和8周，建立社会隔离模型。对应的相同年龄正常群居饲养BALB／c小鼠作为相应对照组。采用新物体定位和新物体识别实验评估小鼠空间和非空间认知功能的改变，采用免疫蛋白印迹实验检测小鼠脑海马区5-HT2CR和ADARl表达的改变。结果新物体定位和新物体识别实验结果显示，与相应对照组相比，隔离2周组BALB／c小鼠的空间辨别指数明显降低[对照组为（0．075＋0．340），隔离组为（一0．653＋0．308），P〈O．05]，隔离2周和4周组BALB／c小鼠空间辨别指数无明显差异；隔离2周和4周组BALB／c小鼠非空间辨别指数明显降低[对照2周组为（0．088＋-0．210），隔离2周组为（-0．945＋-0．194），P〈0．05；对照4周组为（0．105＋0．267），隔离4周组为（-0．506＋-0．215），P〈0．05]，隔离8周组没有明显的改变；Westernblot结果显示，在海马区，与相应对照组相比，隔离2周BALB／c小鼠的5-HT2CR和ADARl蛋白表达明显减少[5-HT2CR：对照组为（1．025＋-0．144），隔离组为（0．891＋-0．026），P〈0．05][ADARl：对照组为（0．839--0．120），隔离组为（O．629＋-0．094），P〈0．05]。结论2周社会隔离可导致BALB／c小鼠的空间和非空间认知功能降低，同时引起BALB／c小鼠海马区5-HT2CR和ADARl蛋白表达的降低。

关键词：社会隔离认知功能 5羟色胺2c受体 RNA腺苷脱氨酶1

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槲皮素PLGA-TPGS纳米粒在荷HCa-F细胞小鼠体内肝靶向性的研究

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中国医科大学学报 2017年第7期46卷 613-618页

作者：徐红高萌关欣董浩刘颖涵金小涵张成鸿田燕大连医科大学基础医学院机能学实验室辽宁大连116044 大连医科大学药学院药剂学教研室辽宁大连116044 大连医科大学2015级八年制临床医学专业辽宁大连116044

目的评价槲皮素(QT)/香豆素6(C6)乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E纳米粒(QCPTN)在荷肝癌细胞HCa-F异位实体瘤小鼠体内的分布及对小鼠肝脏的靶向性。方法建立RP-HPLC法测定QT在荷肝癌细胞HCa-F异位实体瘤小鼠血浆及肝、实体瘤、脾、肺... 详细信息

目的评价槲皮素(QT)/香豆素6(C6)乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E纳米粒(QCPTN)在荷肝癌细胞HCa-F异位实体瘤小鼠体内的分布及对小鼠肝脏的靶向性。方法建立RP-HPLC法测定QT在荷肝癌细胞HCa-F异位实体瘤小鼠血浆及肝、实体瘤、脾、肺、肾和心的浓度。将QCPTN和QT溶液(QTS)经小鼠尾静脉注射后,测定不同给药时间后小鼠血浆及各组织中的QT浓度。采用相对靶向效率(Re)和靶向效率(Te),同时通过对各组织进行冰冻切片、荧光倒置显微镜下观察荧光纳米粒QCPTN在各组织的分布,定性、定量地全面评价QCPTN对肝脏的靶向性。结果 QCPTN在血浆、实体瘤、脾、肺、肾、心中的Te均>3,表明QT在肝脏比血浆和其他组织匀浆中的曲线下面积(AUC)高3倍以上。冰冻切片图可见在1 h的QCPTN组小鼠各组织中,肝中荧光分布面积最大。结论 QCPTN对荷肝癌细胞HCa-F异位实体瘤小鼠肝脏有良好的靶向作用。

关键词：槲皮素/香豆素6乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E纳米粒小鼠实体瘤体内肝靶向性

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槲皮素PLGA-TPGS纳米粒对小鼠肝癌异位实体瘤治疗效果的研究

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中国医科大学学报 2017年第9期46卷 791-795页

作者：徐红张成鸿关欣董浩徐荣谦陈雨高萌田燕大连医科大学基础医学院机能学实验室辽宁大连116044 大连医科大学药学院药剂学教研室辽宁大连116044 大连医科大学八年制2016级临床医学专业辽宁大连116044

目的考察槲皮素PLGA-TPGS纳米粒(QPTN)在体内对荷腹水型肝癌高淋巴道转移细胞HCa-F小鼠异位移植实体瘤的治疗效果。方法建立荷HCa-F肝癌细胞小鼠模型后,随机分为阴性对照组、空白纳米粒组、5-氟尿嘧啶溶液(FS)组、槲皮素溶液(QTS)组、... 详细信息

目的考察槲皮素PLGA-TPGS纳米粒(QPTN)在体内对荷腹水型肝癌高淋巴道转移细胞HCa-F小鼠异位移植实体瘤的治疗效果。方法建立荷HCa-F肝癌细胞小鼠模型后,随机分为阴性对照组、空白纳米粒组、5-氟尿嘧啶溶液(FS)组、槲皮素溶液(QTS)组、槲皮素PLGA纳米粒(QPN)组和QPTN组。尾静脉给药,每2 d 1次,连续给药20 d后处死小鼠,剥离肿瘤,称质量,测量肿瘤体积,根据公式计算肿瘤体积增长量和抑瘤率;行HE染色观察肿瘤,全面评价QPTN对荷瘤小鼠的治疗效果。结果小鼠体内给药10次后,QPTN组、QPN组、FS组的肿瘤体积增长量与阴性对照组相比明显减小(P<0.05或P<0.01),QPTN组抑瘤率(59.07%)明显高于QTS组(23.94%)、FS组(35.14%)和QPN组(46.14%)。HE染色结果也显示QPTN组对小鼠肿瘤的治疗效果最明显。结论与QPN、QTS和FS相比,QPTN对荷HCa-F肝癌细胞小鼠异位实体瘤具有较好的治疗效果。

关键词：槲皮素纳米粒小鼠肿瘤 HCa-F肝癌细胞抑瘤率

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微课在口腔组织病理学教学模式中的应用探索

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课程教育研究 2019年第20期 232页

作者：夏士林肖晶朱蕾刘超李楠刘涵大连医科大学附属第一医院中西医结合临床重点学科实验室大连医科大学口腔医学院病理教研室大连市口腔基础研究重点实验室

移动互联网时代的到来,现代口腔医学的教学方式有了很大的变化。其中微课教学模式被广泛应用口腔医学的教学中,其模式不仅能优化基础医学与临床医学两者之间的形态学课程,还能提升学生早期临床思维的能力,更能弥补传统教学模式带来的不... 详细信息

移动互联网时代的到来,现代口腔医学的教学方式有了很大的变化。其中微课教学模式被广泛应用口腔医学的教学中,其模式不仅能优化基础医学与临床医学两者之间的形态学课程,还能提升学生早期临床思维的能力,更能弥补传统教学模式带来的不足。因此,将微课教学理念深入到口腔组织病理学这一基础医学教学中具有较为深远的意义,可在促使口腔医学教育革新中发挥重要作用。本文就微课在口腔组织病理学教学中的应用进行探究和分析。

关键词：微课口腔组织病理学信息化教学

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