目的:心脏移植过程中的冷缺血损伤是一个重要的病理生理过程,与移植心脏功能恢复和远期预后密切相关.已有的研究表明缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其下游在缺血缺氧时能起到多种保护作用.通过初步阐述HIF-1α/miR-21/PDCD4信号通路在心脏移植冷保存损伤中的作用,为临床防治提供新的思路.方法:(1)动物实验:取220g-260g的健康成年wistar大鼠35只,分为正常对照组(Ctrl)和冷保存组(CP组)包括:CP0h,CP6h,CP12h,CP18h及CP24h组.正常对照组迅速取下心脏,其余各组经供体心脏手术后获取.(2)细胞实验:将H9C2心肌细胞分为正常对照组,冷保存组(0h,6h,12h,18h,24h)及冷保存+siHIF-1α组.HE染色、透射电镜观察大鼠心肌及H9C2心肌细胞形态和超微结构改变;免疫荧光检测connexin43蛋白的表达;TUNEL法检测细胞凋亡;western blot检测HIF-1α、PTEN、ATK/PI3K、caspase-3和PDCD4等关键蛋白不同时间点的表达量;Real Time PCR检测HIF-1α,miR-21,PDCD4及其他关键指标在不同时间点的表达量;ELISA检测不同时间点eNOS及NO的表达量.
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