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中国微生态学杂志 2018年第5期30卷 603-607,612页

作者：李诗元周娇锐刘曼胡雨奇许尧张利龙袁杰利李明大连医科大学附属第一医院检验科辽宁大连116011 大连医科大学基础医学院微生态学教研室辽宁大连116044

母乳是新生儿最理想的营养来源。母乳喂养不仅维持婴儿的发育,也促进有益的肠道微生物增殖。母乳中的糖复合物,包括游离的低聚糖、糖蛋白和糖脂,因在肠道健康和菌群调节方面起着重要作用而被越来越多的人所重视。这些糖类物质不仅能预... 详细信息

母乳是新生儿最理想的营养来源。母乳喂养不仅维持婴儿的发育,也促进有益的肠道微生物增殖。母乳中的糖复合物,包括游离的低聚糖、糖蛋白和糖脂,因在肠道健康和菌群调节方面起着重要作用而被越来越多的人所重视。这些糖类物质不仅能预防传染病,也可作为益生元调节肠道微生态。新生儿出生时肠道是不成熟的,复杂的母乳成分确保了肠道微环境成熟。婴儿的肠道微生物群的构成在出生后会发生连续变化。出生后的细菌定植是肠道发育和免疫系统成熟的必要条件。本文将母乳中糖物质及对婴儿肠道菌群的影响作一综述。

关键词：母乳糖类物质低聚糖新生儿微生物菌群

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蛋白质糖基化修饰在胚胎发育及着床调控中的作用

蛋白质糖基化修饰在胚胎发育及着床调控中的作用

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第八届泛环渤海生物化学与分子生物学会2018年学术交流会

作者：孙倩男李晓雪刘欢隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生物化学教研室

研究背景:试管婴儿自1978年诞生至今已超百万,先天异常比率与自然妊娠机率相当逐渐被需求者选择。辅助生殖(IVF-ET)胚胎体外受精成功率已达90%,而移植胚胎着床率仅30%,为提高着床成功率通常同时移植2～5个胚胎,这无疑增加患者多胎妊娠... 详细信息

研究背景:试管婴儿自1978年诞生至今已超百万,先天异常比率与自然妊娠机率相当逐渐被需求者选择。辅助生殖(IVF-ET)胚胎体外受精成功率已达90%,而移植胚胎着床率仅30%,为提高着床成功率通常同时移植2～5个胚胎,这无疑增加患者多胎妊娠的风险。胚胎质量判断与选择成为IVF-ET关键。"着床窗口期"特异黏附分子的出现、促炎症因子瞬时分泌、母胎免疫调节相对抑制、胎盘血管生成(重塑)调控胚胎着床分子机制研究成为生殖医学的研究热点。为寻找移植胚胎质量评价办法,本研究从"侵入能力胚泡形成"及"接受态子宫内膜建立"两方面入手,从糖生物学和生殖生物学学科交叉的角度,探讨糖基化修饰蛋白在胚胎发育、母胎识别、黏附、信息传递过程中的作用。实验方法:利用各种小鼠着床模型(早孕模型、假孕模型、延迟着床模型)及临床不同分泌期宫内膜,以分子生物学基因表达、蛋白分析技术探讨糖蛋白表达、糖基转移酶对糖蛋白修饰及与胚胎发育、着床调控机制;建立体外着床模型,构建调控质粒调控糖基转移酶影响糖蛋白合成分析对胚胎发育及着床的影响;逐步揭示蛋白质糖基化修饰在调控胚胎发育及着床分子机制。实验结果:1.证实"侵入能力胚泡"及"接受状态子宫内膜"表面糖基化蛋白持续高表达。"着床窗口期"胚泡及子宫内膜表达特异黏附分子、促炎因子调控母、胎识别,黏附。蛋白被糖基化修饰可赋予其参与调控生理活动和病理变化的功能。我们选择了岩藻糖化蛋白-LeY glycan、N-糖基化蛋白OPN、O-GlcNAc糖基化蛋白FOXM1;证实着床窗口期胚胎与子宫内膜糖基化蛋白持续高表达;封闭胚胎表面糖蛋白可阻断母、胎识别、降低着床率,并影响着床因子MMPs、EGF、LIF表达,为后续以糖蛋白作为调控胚胎着床的信息分子提供扎实基础。2.阐明调控子宫内膜特异性糖基转移酶基因表达影响糖蛋白合成,并进一步影响胚胎在子宫内膜上的黏附力。构建糖基转移酶(FUT、β1,4-GalTⅠ、OGT)调控质粒(或SiR NA)转染子宫内膜细胞,体内外功能研究显示子宫内膜细胞糖基化蛋白Le Y glycan、OPN、FOXM1的合成量发生同步变化并影响胚胎在子宫内膜黏附力。3.建立检测单个胚胎微量培养液蛋白分泌量的免疫印记技术结合化学发光(2004年获国自然立项),首次发现镜下发育时期、状态相同的单个胚胎着床因子LeY glycan、MMPs等的分泌水平并不同;且高糖蛋白LeY glycan分泌胚泡具有较强发育速度及着床潜能;提示糖蛋白作为评价胚胎质量的潜在意义。4.证实临床IVF-ET体外胚胎培养液糖蛋白表达水平有不同,移植胚胎的LeY glycan分泌水平较高;提出:LeY glycan分泌水平可辅助判断胚胎发育及其着床潜能,为IVF移植胚胎早期质量鉴定提供了除形态学之外的不损伤受检胚胎的方法。

关键词：糖基化修饰糖蛋白胚胎着床,功能指标

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miR30a-5p靶向B3GNT5对葡萄胎的影响及其作用机制

miR30a-5p靶向B3GNT5对葡萄胎的影响及其作用机制

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第八届泛环渤海生物化学与分子生物学会2018年学术交流会

作者：郭珍珍孙倩男隋琳琳李晓雪孔英大连医科大学基础医学院生物化学教研室

研究背景:妊娠滋养细胞疾病是一组与妊娠有关的、来自绒毛或绒毛外滋养细胞的异常妊娠或肿瘤。葡萄胎是其中最常见的形式,是以胎盘绒毛水肿和滋养细胞增生为特征的异常妊娠;葡萄胎具有很高的发展成癌症的潜能。miRNA是一组在真核生物中... 详细信息

研究背景:妊娠滋养细胞疾病是一组与妊娠有关的、来自绒毛或绒毛外滋养细胞的异常妊娠或肿瘤。葡萄胎是其中最常见的形式,是以胎盘绒毛水肿和滋养细胞增生为特征的异常妊娠;葡萄胎具有很高的发展成癌症的潜能。miRNA是一组在真核生物中广泛存在的、长约21～25个核苷酸的非编码RNA。通过与其靶基因mRNA分子的3’端非编码区域(3’-UTR)互补配对导致该mRNA分子被降解或者是翻译抑制,是一种天然的RNAi诱导分子。已有很多文献报道,miRNA分子参与肿瘤的发生发展。B3GNT5(β1,3-N-Acetylglucosaminyltransferase 5)属于β1,3糖基转移酶,是Lc3的合成酶,B3GNT5能把GlcNAc加到乳糖神经酰胺上,负责合成lacto/neolacto-series鞘糖脂。鞘糖脂在白血病、卵巢癌、脑胶质瘤存在异常表达。已有研究表明,B3GNT5可以影响细胞膜上的鞘糖脂富集区中的蛋白分子,例如Src分子。本研究拟探讨miR-30a是否靶向B3GNT5,是否通过影响B3GNT5来影响细胞膜上的蛋白分子EGFR及其信号通路,材料与方法:研究采用RT-PCR、免疫组织化技术分析临床葡萄胎样本和正常胎盘组织中miRNA-30a、B3GNT5的表达差异;体外以绒毛或绒毛外滋养细胞(人绒毛膜癌细胞JAR、BEWO细胞系)为研究模型,以miR-30a mimics、miR-30a inhibitor转染调控JAR、Be Wo细胞mi RNA-30a基因表达,CCK8实验及克隆形成实验检测调控miRNA-30a对JAR、Be Wo细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测调控miR NA-30a对JAR、BeWo细胞周期及其凋亡的影响;Transwell实验检测调控miRNA-30a对JAR、BeWo细胞迁移、侵袭能力的影响;运用生物学软件预测miR-30a靶基因,通过RT-PCR、western blot双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a与B3GNT5基因的靶向关系。脂质体共转染miR-30a mimics和B3GNT5过表达、或共转染miR-30a inhibitor和siB 3GNT5,分析对JAR、BeW o细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移、侵袭能力的影响。RT-PCR、western blot检测调控miR NA-30a、B3GNT5对EGFR/PI3K/AKT信号通路影响,逐步揭示miR-30a-5p靶向B3GNT5对葡萄胎的影响及其作用机制。实验结果:临床样本葡萄胎与正常胎盘组织对比miR-30a表达降低且差异显著,B3GNT5表达升高且差异显著;生物学软件预测结果 miR-30a与B3GNT5存在靶向关系,双荧光素酶报告基因实验和western blots实验进一步验证miR-30a与B3GNT5存在靶向关系。miR-30a mimics上调JAR、Be Wo细胞中miR-30a的表达且抑制细胞的增殖、细胞周期、迁移及侵袭,并促进细胞凋亡;miR-30a inhibitor下调JAR、BeWo细胞中miR-30a的表达且促进细胞的增殖、细胞周期、迁移及侵袭,并抑制细胞凋亡;上调miR-30a,其靶蛋白B3GNT5的表达呈下降趋势;下调miR-30a,其靶蛋白B3GNT5的表达呈上升趋势。共转染miR-30a mimics和B3GNT5过表达之后,共转染组的细胞增殖、迁移、侵袭能力均较miR-30a mimics组具有回调上升现象且具有统计学差异,共转染组B3GNT5蛋白表达较miR-30a mimics组呈上升趋势;共转染miR-30a inhibitor和B3GNT5干扰之后,共转染组的细胞增殖、迁移、侵袭能力均较miR-30a inhibitor组具有回调下降现象且具有统计学差异,共转染组B3GNT5蛋白表达较miR-30a inhibitor组呈下降趋势;上调miR-30a,western blot检测EGFR表达下调;同样,下调B3GNT5之后,EGFR表达也降低。以上结果初步揭示miR-30a与B3GNT5在葡萄胎中均表达异常,且存在靶向关系;miR-30a通过靶向B3GNT5影响EGFR的表达进而影响EGFR/PI3K/AKT信号通路。

关键词： miR30a-5p B3GNT5 葡萄胎细胞增殖,迁移

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转录因子Sp1调控AQP3表达影响细胞迁移、侵袭分子机制研究

转录因子Sp1调控AQP3表达影响细胞迁移、侵袭分子机制研究

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第八届泛环渤海生物化学与分子生物学会2018年学术交流会

作者：齐佳张漫刘欢隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生物化学教研室

研究目的:水通道蛋白(AQPs)是一种很小的、固有的膜蛋白,它能促进水在细胞浆膜上的运输,并且涉及许多生理和病理过程。AQP3在着床窗口期的人子宫内膜中高表达,并能促进人子宫内膜癌细胞的迁移和侵袭,促进胚胎着床的顺利进行,但调控AQP3... 详细信息

研究目的:水通道蛋白(AQPs)是一种很小的、固有的膜蛋白,它能促进水在细胞浆膜上的运输,并且涉及许多生理和病理过程。AQP3在着床窗口期的人子宫内膜中高表达,并能促进人子宫内膜癌细胞的迁移和侵袭,促进胚胎着床的顺利进行,但调控AQP3转录的研究较少。Sp1作为在哺乳动物细胞中发现的第一个转录因子,通过调节基因转录,介导肿瘤生长和转移。本文拟预测与AQP3启动子结合的转录因子,分析转录因子Sp1是否结合到AQP3启动子上,激活AQP3的转录,探讨转录因子Sp1调控AQP3表达及影响人子宫内膜癌细胞迁移和侵袭能力的分子机制。实验方法:通过生物信息学方法预测与AQP3启动子结合的转录因子,结合文献将转录因子Sp1作为初步研究对象;利用脂质体转染法将si-Sp1转染到Hela细胞中,RT-PCR确定激活AQP3转录的转录因子;预测AQP3启动子上Sp1的结合位点,将S1(-615/+22)分别构建到pG L3-basic载体上;转染到Hela细胞中,通过双荧光素酶报告基因实验分析转录因子Sp1是否结合到AQP3启动子上;染色质免疫共沉淀实验和PCR实验,验证转录因子Sp1特异性结合到AQP3启动子上的位置;在人子宫内膜癌细胞系Ishikawa和HEC-1A细胞中,通过Western blot、实时定量PCR及免疫荧光实验,检测转录因子Sp1在两种人子宫内膜癌细胞中的表达与分布情况;将Sp1过表达质粒、si-Sp1、si-E2F1转染到人子宫内膜癌细胞系Ishikawa和HEC-1A细胞中;通过Western blot实验,实时定量PCR实验,检测转录因子Sp1对AQP3表达的影响;Transwell、细胞划痕实验,检测转录因子Sp1对人子宫内膜癌细胞迁移和侵袭能力的影响。实验结果:转录因子Sp1特异性结合到AQP3启动子上,激活AQP3的转录;Sp1在人子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞中的表达高于Ishikawa细胞,表达位置都在细胞核;随着Mith A浓度的增加,Sp1表达逐渐减少;下调HEC-1A细胞Sp1,AQP3表达减少,细胞的迁移和侵袭能力降低;上调Sp1,AQP3表达增加,细胞的迁移和侵袭增强;提示转录因子Sp1调控AQP3表达影响细胞迁移、侵袭。

关键词：转录因子Sp1 AQP3 细胞迁移侵袭

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鼻咽癌患者鼻咽灌洗液菌群检测及结果分析

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中国微生态学杂志 2018年第2期30卷 137-140页

作者：于湛邓晓琴邹杨吕秀鹏金肃年郭艳杰李龙婕大连医科大学附属第一医院肿瘤放疗科辽宁大连116021 大连医科大学基础医学院微生态学教研室辽宁大连116044

目的采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,通过观察鼻咽癌患者与健康对照者鼻咽灌洗液菌群的变化,初步探讨菌群异常在鼻咽癌发生中的作用。方法以7例明确诊断且尚未治疗的鼻咽鳞癌患者和5例健康对照者为研究对象,提取鼻... 详细信息

目的采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,通过观察鼻咽癌患者与健康对照者鼻咽灌洗液菌群的变化,初步探讨菌群异常在鼻咽癌发生中的作用。方法以7例明确诊断且尚未治疗的鼻咽鳞癌患者和5例健康对照者为研究对象,提取鼻咽灌洗液DNA,观察两组研究对象菌群分布差异,进行相似性、多样性分析。结果鼻咽癌患者与健康对照者之间鼻咽灌洗液的菌群分布存在差异,与健康对照者比较,咽颊炎链球菌和不动杆菌数量增加,但嗜热链球菌数量减少。结论鼻咽癌患者鼻咽灌洗液菌群分布与健康对照者比较出现明显差异,可为鼻咽癌预防及治疗提供实验依据。

关键词：鼻咽癌菌群多样性

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初探肠道菌群对导盲犬筛选及培训的影响

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中国工作犬业 2018年第5期 21-24页

作者：许尧张利龙胡雨奇龙尚琴孙露丹王靖宇李明董建一大连医科大学第二临床学院 116044 大连医科大学实验动物中心 116044 大连医科大学基础医学院微生态学教研室 116044

导盲犬是辅助视障人士出行的工作犬。目前,我国的导盲犬培训成功率低、成本高、周期长,因此,如何更有效地辅助导盲犬筛选及培训是科研工作者一直在探索的问题。导盲犬培训成功与否主要是通过动物行为学对犬的兴奋性、焦虑、应激反应和... 详细信息

导盲犬是辅助视障人士出行的工作犬。目前,我国的导盲犬培训成功率低、成本高、周期长,因此,如何更有效地辅助导盲犬筛选及培训是科研工作者一直在探索的问题。导盲犬培训成功与否主要是通过动物行为学对犬的兴奋性、焦虑、应激反应和认知功能等行为和情绪进行评判。近年来的研究显示,肠道菌群是人体重要的＂微生态器官＂。

关键词：肠道菌群导盲犬培训筛选动物行为学科研工作者认知功能应激反应

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糖尿病大鼠心肌组织中自噬相关基因Atg7和Atg12-Atg5表达降低

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基础医学与临床 2018年第5期38卷 664-668页

作者：王艺王瑞张帅邓蕊胡峰陈睿琦张秀冰刘晓健锦州医科大学第一临床学院辽宁锦州121001 锦州医科大学基础医学院药理学教研室辽宁锦州121001

目的探讨链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠心肌组织中自噬相关基因的蛋白表达情况。方法将大鼠分为对照组(NC)、糖尿病模型组(DM,采用尾静脉注射STZ制备糖尿病模型)。在造模后10、20、30、40、60、80和100 d时,检测大鼠的左心质量指数;Western... 详细信息

目的探讨链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠心肌组织中自噬相关基因的蛋白表达情况。方法将大鼠分为对照组(NC)、糖尿病模型组(DM,采用尾静脉注射STZ制备糖尿病模型)。在造模后10、20、30、40、60、80和100 d时,检测大鼠的左心质量指数;Western blot检测Atg7和Atg12-Atg5蛋白表达;透射电镜观察心肌超微结构和自噬小体。结果与对照组相比,DM组的左心质量指数在40 d开始增加;Atg7和Atg12-Atg5蛋白表达20 d时稍增多,在80 d时蛋白表达显著降低(P<0.01);超微结构改变和自噬小体明显减少。结论随着病情发展,DM组大鼠心肌组织中自噬现象最终表现为减少。

关键词：链脲佐菌素糖尿病心肌自噬

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子宫内膜容受性建立中O-GlcNAc修饰的作用机制研究

子宫内膜容受性建立中O-GlcNAc修饰的作用机制研究

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2018年全国糖生物学会议

作者：韩笑李晓雪陈万方李奥赢隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生化教研室辽宁省大连市旅顺南路西段9号

O-GlcNAc糖基化修饰是指单个的N乙酰葡糖胺通过O糖苷键连接在蛋白质的丝氨酸或苏氨酸的羟基氧原子上.O-GlcNAc修饰基团的添加和去除分别是由 O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)和N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(O-GlcNAcase,OGA)完成.蛋白质糖基化修饰在... 详细信息

O-GlcNAc糖基化修饰是指单个的N乙酰葡糖胺通过O糖苷键连接在蛋白质的丝氨酸或苏氨酸的羟基氧原子上.O-GlcNAc修饰基团的添加和去除分别是由 O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)和N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(O-GlcNAcase,OGA)完成.蛋白质糖基化修饰在胚胎着床中起重要作用,但O-GlcNAc修饰在着床调控中的作用研究尚属空白.

关键词： O-GlcNAc 子宫内膜容受性胚胎着床

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O-GlcNAc糖基化修饰影响Sp1活性调控胚胎滋养层细胞与子宫内膜浸润

O-GlcNAc糖基化修饰影响Sp1活性调控胚胎滋养层细胞与子宫内膜浸润

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2018年全国糖生物学会议

作者：李晓雪廖杨优韩笑张宏硕隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生化教研室辽宁省大连市旅顺南路西段9号

哺乳动物"母—胎"界面高增殖的滋养层细胞分泌激素、细胞因子、生长因子、黏附分子，介导滋养层细胞形成"锚钉于子宫壁"的绒毛，分化成绒毛外滋养层细胞(EVT)并浸润子宫内膜基质;蛋白水解酶调控基质细胞增殖、分化... 详细信息

哺乳动物"母—胎"界面高增殖的滋养层细胞分泌激素、细胞因子、生长因子、黏附分子，介导滋养层细胞形成"锚钉于子宫壁"的绒毛，分化成绒毛外滋养层细胞(EVT)并浸润子宫内膜基质;蛋白水解酶调控基质细胞增殖、分化与降解，协同控制蜕膜化来限制滋养层细胞在子宫内膜的过度侵润;黏附分子调节上皮向间质转化(EMT);部分绒毛外滋养层细胞获得血管内皮细胞样特征，促进胎盘形成及子宫螺旋动脉的重塑，从而建立有效的"母—胎"循环系统间的营养物质交换，维持胎儿宫内正常发育。如果滋养层细胞浸润过浅、血管内皮功能障碍及重塑受阻，会引起子痫前期和胎儿宫内生长受限;如浸润过度则易引起滋养细胞肿瘤等重大妊娠疾病。

关键词： O-GlcNAc 转录因子Sp1 胚胎滋养层细胞子宫内膜容受性

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人体解剖学英文版IEbook制作与医学生创新意识培养

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解剖学杂志 2017年第5期40卷 631-633页

作者：付元山隋鸿锦杨宏爱孔英周万春大连医科大学基础医学院解剖学教研室大连116044

高等教育中学生创新能力的培养,对提高学生素质和开发学生潜能非常关键.在教学实施过程中如何培养素质,如何通过系统教育使学生拥有适合当前和未来发展需要的、具有创新能力和解决实际问题能力,是医药院校教学的重要目标[1].人体解剖学... 详细信息

高等教育中学生创新能力的培养,对提高学生素质和开发学生潜能非常关键.在教学实施过程中如何培养素质,如何通过系统教育使学生拥有适合当前和未来发展需要的、具有创新能力和解决实际问题能力,是医药院校教学的重要目标[1].人体解剖学作为医学生最先接触的必修医学基础课程,其教学模式的探索不仅为新入学医学生打开兴趣之门,同时也将为其他桥梁课程和临床课程提供重要借鉴.IEbook是近年来广泛应用于电子媒体、融入互联网终端、手机移动终端和数字电视终端三维整合传播体系的专业电子杂志（商刊、画册）制作推广系统.该软件操作简单方便,可协助软件使用者轻松制作出集高清视频、音频、Flash 动画、图文等多媒体效果于一体的电子杂志,并且也可以应用于课件的制作[2].该软件已经在很多专业的教学中得以应用并取得了较佳的效果[3-5],但是在医学教学中的应用较少,因此探讨其在医学教育中的使用具有重要意义.

关键词：创新意识培养人体解剖学医学生制作医学基础课程教学模式英文创新能力

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