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第八届泛环渤海生物化学与分子生物学会2018年学术交流会

作者：于新新董明李真孙倩男隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

研究目的:骨桥蛋白(Osteopontion,OPN)属于小整合素结合配体N-连接糖蛋白,广泛的分布于多种组织和细胞中,能够参与组织修复,自身代谢等功能。近年研究证实OPN在肿瘤发生、发展各个阶段以及增殖、侵袭和转移等生物学行为中都有重要作用,... 详细信息

研究目的:骨桥蛋白(Osteopontion,OPN)属于小整合素结合配体N-连接糖蛋白,广泛的分布于多种组织和细胞中,能够参与组织修复,自身代谢等功能。近年研究证实OPN在肿瘤发生、发展各个阶段以及增殖、侵袭和转移等生物学行为中都有重要作用,被认为是一种肿瘤标志物。头颈部癌(Hand Neck Cancer,HNC)是常见恶性肿瘤,包括起源于鼻窦、鼻腔、口腔、咽、喉等部位的上皮性恶性肿瘤,全球每年新发病约50万,占性恶性肿瘤6%,病理类型几乎为鳞癌。p38MAPK信号转导通路是MAPK通路分支之一,通过转录因子磷酸化而改变基因表达水平,参与多种胞内信息传递,能对广泛细胞外刺激发生反应。为明确头颈部鳞癌(HNSCC)中OPN的表达及作用,本研究利用临床头颈部鳞状细胞癌样本及头颈部鳞癌细胞系,检测OPN表达差异,分析OPN与头颈部鳞癌细胞增殖、侵袭的关系,并分析参与调控细胞增殖的信号通路。实验方法:利用Real-time PCR及Western-blot检测临床样本头颈部鳞癌组织及相邻癌旁组织OPN表达情况。选取口腔鳞癌细胞(UM-SCC6)及鼻咽癌细胞(CNE-2),以OPN-siR NA、Over-OPN分别下调和上调OPN的表达,通过CCK8实验和克隆形成实验检测OPN对细胞增殖的影响;通过Transwell实验检测OPN对细胞侵袭的影响,Western-blot实验检测侵袭相关标志因子MMP2、MMP9表达情况。将UM-SCC6及CNE-2分为空白组及p38抑制剂组(SB203580),每组分为Mock亚组、OPN-siRNA亚组、Over-OPN亚组,采用Western-blot检测p38及p-p38表达情况,并通过免疫荧光实验检测各组p38、p-p38核内外表达情况。实验结果:Western-blot及Real-time PCR实验结果显示头颈部鳞癌组织中的OPN表达高于癌旁组织,结果有统计学差异。在UM-SCC6细胞及CNE-2细胞中转染Over-OPN载体,CCK8实验、克隆形成实验及Transwell实验结果显示,与对照组相比Over-OPN组增殖及侵袭能力显著提高,Western-blot结果显示OPN-over组MMP2及MMP9表达升高;在UM-SCC6细胞及CNE-2细胞中转染OPN-siR NA,CCK8实验、克隆形成实验及Transwell实验结果显示,与对照组相比OPN-siRNA组增殖及侵袭能力显著降低,Western-blot结果显示OPN-siRNA组MMP2及MMP9表达降低。在加入p-38抑制剂(SB203580)后,Western-blot结果显示,与空白组相比,OPN-siRNA亚组、SB203580亚组、OPN-siRNA+SB203580亚组p-p38表达降低;Over-OPN亚组p-p38表达升高;细胞免疫荧光结果显示,与空白组相比,OPN-siRNA亚组、SB203580亚组、OPN-siRNA+SB203580亚组细胞核内p-p38表达降低,Over-OPN亚组细胞核内p-p38表达升高。实验结论:OPN在头颈部鳞癌中表达水平升高,上调OPN的表达能够促进头颈部鳞癌细胞(UM-SCC6、CNE-2)的增殖及侵袭,下调OPN的表达能够抑制头颈部鳞癌细胞(UM-SCC6、CNE-2)的增殖及侵袭。OPN可能是通过激活p38信号通路调控不同HNSCC细胞系的增殖、侵袭能力。

关键词：骨桥蛋白头颈部鳞癌 p38

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调控骨桥蛋白糖基化修饰对子宫内膜接受状态的影响

调控骨桥蛋白糖基化修饰对子宫内膜接受状态的影响

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第八届泛环渤海生物化学与分子生物学会2018年学术交流会

作者：陈万方齐佳刘欢孙倩男隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

研究背景:蛋白质的糖基化修饰是一种常见的蛋白质翻译后修饰方式,蛋白质组学和基因组学的研究表明,哺乳动物中50%的蛋白质发生糖基化修饰。骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种N-结合糖蛋白家族的分泌型磷酸化糖蛋白,结构中包含N-糖基化位... 详细信息

研究背景:蛋白质的糖基化修饰是一种常见的蛋白质翻译后修饰方式,蛋白质组学和基因组学的研究表明,哺乳动物中50%的蛋白质发生糖基化修饰。骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种N-结合糖蛋白家族的分泌型磷酸化糖蛋白,结构中包含N-糖基化位点和O-糖基化位点。OPN通过与细胞表面的整合素受体相互作用可调节细胞之间的黏附、细胞迁移、细胞基质间相互作用,参与机体发育及某些病理过程,与肿瘤细胞的增殖及迁移侵袭密切相关,而这些功能在很大程度上依赖于蛋白的翻译后修饰过程。实验方法:本研究选择人子宫内膜癌细胞系(RL95-2细胞、HEC-1A细胞)分别模拟高低接受状态的子宫内膜,以绒毛膜肿瘤的细胞系(Jar细胞)模拟侵入性胚胎,作为稳定的体外着床模型系统。用衣霉素处理RL95-2细胞、HEC-1A细胞,模拟去N糖基化修饰模型,用质谱的方法确定OPN上包含的N糖基化位点数目及位置,构建OPN-N糖基化突变质粒后转染上述两种子宫内膜癌细胞系,通过细胞免疫荧光及western blot实验,确定N糖基化修饰对蛋白定位及本身性质的影响;通过CCK-8实验、克隆形成实验、细胞划痕实验和Transwell小室实验检测N糖基化修饰对细胞的增殖、迁移及侵袭能力的影响;通过与Jar细胞共培养,检测N糖基化修饰对细胞黏附能力的影响。通过RT-PCR及western blot实验进一步研究OPN-N糖基化修饰对子宫内膜接受状态调控的分子机制。实验结果:用衣霉素处理RL95-2细胞、HEC-1A细胞,检测RL95-2、HEC-1A细胞的迁移及侵袭能力发生了改变;发生N糖基化修饰后,OPN分子量发生改变。N糖基化修饰促进RL95-2细胞、HEC-1A细胞的迁移能力及侵袭能力,并且对高接受状态的RL95-2细胞的促进作用比低接受状态的HEC-1A细胞明显。将转染后RL95-2细胞、HEC-1A细胞分别与Jar细胞共培养,发现N糖基化修饰能分别促进RL95-2、HEC-1A细胞与Jar细胞的黏附能力;应用免疫沉淀纯化技术纯化RL95-2细胞、HEC-1A细胞中的OPN蛋白,采用凝集素印迹方法分析比较OPN在高低接受状态的子宫内膜的聚糖结构变化,初步结果显示,高接受态RL95-2细胞对伴刀豆蛋白A(Con A)的亲和能力明显高于低接受态HEC-1A细胞,提示OPN-N糖基化修饰可调控子宫内膜容受性。Western结果显示,发生N糖基化修饰后,细胞内ERK、p38、AKT的活化增强,MMP2,MMP9的表达水平上升,采用特异性抑制剂来抑制AKT和ERK的表达,结果 OPN糖基化修饰对MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin、E-cadherin的调控作用受到不同程度的抑制。因此,OPNN-糖基化修饰可能通过AKT和ERK的活化来调节MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白表达,进而影响肿瘤细胞的侵袭及转移。由于胚胎着床过程与肿瘤侵袭转移过程的相似性,所以参与肿瘤侵袭转移的分子机制在胚胎着床过程中也可能发挥重要作用。

关键词： OPN 子宫内膜糖基转移酶侵袭迁移

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知难行易:以科研训练培养医学本科生的创新思维

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教育教学论坛 2018年第12期 123-124页

作者：陈建交杨钰婷赵杰李韶辽宁省脑疾病神经保护与损伤修复重点实验室辽宁大连116044 大连医科大学基础医学院生理学教研室辽宁大连116044

在医学教育改革中,培养学生的创新思维能力已成为基础医学教学改革的重点内容。树立以科研结合教学为核心的现阶段临床医学本科人才创新能力培养模式,把创新思维的培养放到突出位置上,通过科研活动以拓宽学术视野,提升创新能力,对于促... 详细信息

在医学教育改革中,培养学生的创新思维能力已成为基础医学教学改革的重点内容。树立以科研结合教学为核心的现阶段临床医学本科人才创新能力培养模式,把创新思维的培养放到突出位置上,通过科研活动以拓宽学术视野,提升创新能力,对于促进科研优势资源转化为教学优势资源,全面提升创新人才培养质量有着重要意义。

关键词：医学教育科研训练创新思维

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医学留学生教学中基于QQ的“阶梯式小组学习”教学法的构建

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中国继续医学教育 2018年第7期10卷 19-21页

作者：刘晓健赵明崔秀玲锦州医科大学基础医学院药理学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学外语教研部辽宁锦州121001 锦州医科大学附属第三医院内分泌科辽宁锦州121001

留学生教育已经成为我国高等医学院校的重要组成部分。因而,采取哪些教学方法保证和提高留学生教学质量的研究已成为从事留学生教育教学工作者的重要课题。由于信息技术的快速发展,教学活动借助各种软件与网络得到日新月异的发展。结合... 详细信息

留学生教育已经成为我国高等医学院校的重要组成部分。因而,采取哪些教学方法保证和提高留学生教学质量的研究已成为从事留学生教育教学工作者的重要课题。由于信息技术的快速发展,教学活动借助各种软件与网络得到日新月异的发展。结合多年的留学生教学经验,基于QQ聊天软件构建一种新的教学方法,即"阶梯式小组学习"教学法。从建立年级学科QQ群、聊天区域的监管与联系、群共享区的应用和学生小组内QQ学习几方面阐述QQ网络空间在本教学法中的应用。

关键词：留学生 QQ软件教学法阶梯式小组学习

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槲皮素PLGA-TPGS纳米粒在荷HCa-F细胞小鼠体内肝靶向性的研究

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中国医科大学学报 2017年第7期46卷 613-618页

作者：徐红高萌关欣董浩刘颖涵金小涵张成鸿田燕大连医科大学基础医学院机能学实验室辽宁大连116044 大连医科大学药学院药剂学教研室辽宁大连116044 大连医科大学2015级八年制临床医学专业辽宁大连116044

目的评价槲皮素(QT)/香豆素6(C6)乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E纳米粒(QCPTN)在荷肝癌细胞HCa-F异位实体瘤小鼠体内的分布及对小鼠肝脏的靶向性。方法建立RP-HPLC法测定QT在荷肝癌细胞HCa-F异位实体瘤小鼠血浆及肝、实体瘤、脾、肺... 详细信息

目的评价槲皮素(QT)/香豆素6(C6)乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E纳米粒(QCPTN)在荷肝癌细胞HCa-F异位实体瘤小鼠体内的分布及对小鼠肝脏的靶向性。方法建立RP-HPLC法测定QT在荷肝癌细胞HCa-F异位实体瘤小鼠血浆及肝、实体瘤、脾、肺、肾和心的浓度。将QCPTN和QT溶液(QTS)经小鼠尾静脉注射后,测定不同给药时间后小鼠血浆及各组织中的QT浓度。采用相对靶向效率(Re)和靶向效率(Te),同时通过对各组织进行冰冻切片、荧光倒置显微镜下观察荧光纳米粒QCPTN在各组织的分布,定性、定量地全面评价QCPTN对肝脏的靶向性。结果 QCPTN在血浆、实体瘤、脾、肺、肾、心中的Te均>3,表明QT在肝脏比血浆和其他组织匀浆中的曲线下面积(AUC)高3倍以上。冰冻切片图可见在1 h的QCPTN组小鼠各组织中,肝中荧光分布面积最大。结论 QCPTN对荷肝癌细胞HCa-F异位实体瘤小鼠肝脏有良好的靶向作用。

关键词：槲皮素/香豆素6乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E纳米粒小鼠实体瘤体内肝靶向性

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槲皮素PLGA-TPGS纳米粒对小鼠肝癌异位实体瘤治疗效果的研究

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中国医科大学学报 2017年第9期46卷 791-795页

作者：徐红张成鸿关欣董浩徐荣谦陈雨高萌田燕大连医科大学基础医学院机能学实验室辽宁大连116044 大连医科大学药学院药剂学教研室辽宁大连116044 大连医科大学八年制2016级临床医学专业辽宁大连116044

目的考察槲皮素PLGA-TPGS纳米粒(QPTN)在体内对荷腹水型肝癌高淋巴道转移细胞HCa-F小鼠异位移植实体瘤的治疗效果。方法建立荷HCa-F肝癌细胞小鼠模型后,随机分为阴性对照组、空白纳米粒组、5-氟尿嘧啶溶液(FS)组、槲皮素溶液(QTS)组、... 详细信息

目的考察槲皮素PLGA-TPGS纳米粒(QPTN)在体内对荷腹水型肝癌高淋巴道转移细胞HCa-F小鼠异位移植实体瘤的治疗效果。方法建立荷HCa-F肝癌细胞小鼠模型后,随机分为阴性对照组、空白纳米粒组、5-氟尿嘧啶溶液(FS)组、槲皮素溶液(QTS)组、槲皮素PLGA纳米粒(QPN)组和QPTN组。尾静脉给药,每2 d 1次,连续给药20 d后处死小鼠,剥离肿瘤,称质量,测量肿瘤体积,根据公式计算肿瘤体积增长量和抑瘤率;行HE染色观察肿瘤,全面评价QPTN对荷瘤小鼠的治疗效果。结果小鼠体内给药10次后,QPTN组、QPN组、FS组的肿瘤体积增长量与阴性对照组相比明显减小(P<0.05或P<0.01),QPTN组抑瘤率(59.07%)明显高于QTS组(23.94%)、FS组(35.14%)和QPN组(46.14%)。HE染色结果也显示QPTN组对小鼠肿瘤的治疗效果最明显。结论与QPN、QTS和FS相比,QPTN对荷HCa-F肝癌细胞小鼠异位实体瘤具有较好的治疗效果。

关键词：槲皮素纳米粒小鼠肿瘤 HCa-F肝癌细胞抑瘤率

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社会隔离对BALB／c小鼠认知功能和海马5-HT2CR、ADAR1表达的影响

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中华行为医学与脑科学杂志 2017年第5期26卷 385-389页

作者：徐红余伟志薛莹安冬陈薇梁金邢悦肖昭扬孙艺平唐一源殷盛明大连医科大学基础医学院机能实验室大连116044 大连医科大学基础医学院生理学教研室大连116044 大连医科大学研究生大连116044 大连医科大学附属第二医院麻醉科大连116027 德克萨斯理工大学脑成像研究院 79409美国

目的探讨社会隔离对BALB／c小鼠认知功能及5羟色胺2c受体（5-HT2Creceptor，5-HT2CR）和RNA腺苷脱氨酶1（adenosinedeaminasethatactOnRNA1，ADARl）表达的影响。方法选取健康BALB／c小鼠，按照随机原则（随机数字表法）分组，分别自生... 详细信息

目的探讨社会隔离对BALB／c小鼠认知功能及5羟色胺2c受体（5-HT2Creceptor，5-HT2CR）和RNA腺苷脱氨酶1（adenosinedeaminasethatactOnRNA1，ADARl）表达的影响。方法选取健康BALB／c小鼠，按照随机原则（随机数字表法）分组，分别自生后21d起单笼饲养2周、4周和8周，建立社会隔离模型。对应的相同年龄正常群居饲养BALB／c小鼠作为相应对照组。采用新物体定位和新物体识别实验评估小鼠空间和非空间认知功能的改变，采用免疫蛋白印迹实验检测小鼠脑海马区5-HT2CR和ADARl表达的改变。结果新物体定位和新物体识别实验结果显示，与相应对照组相比，隔离2周组BALB／c小鼠的空间辨别指数明显降低[对照组为（0．075＋0．340），隔离组为（一0．653＋0．308），P〈O．05]，隔离2周和4周组BALB／c小鼠空间辨别指数无明显差异；隔离2周和4周组BALB／c小鼠非空间辨别指数明显降低[对照2周组为（0．088＋-0．210），隔离2周组为（-0．945＋-0．194），P〈0．05；对照4周组为（0．105＋0．267），隔离4周组为（-0．506＋-0．215），P〈0．05]，隔离8周组没有明显的改变；Westernblot结果显示，在海马区，与相应对照组相比，隔离2周BALB／c小鼠的5-HT2CR和ADARl蛋白表达明显减少[5-HT2CR：对照组为（1．025＋-0．144），隔离组为（0．891＋-0．026），P〈0．05][ADARl：对照组为（0．839--0．120），隔离组为（O．629＋-0．094），P〈0．05]。结论2周社会隔离可导致BALB／c小鼠的空间和非空间认知功能降低，同时引起BALB／c小鼠海马区5-HT2CR和ADARl蛋白表达的降低。

关键词：社会隔离认知功能 5羟色胺2c受体 RNA腺苷脱氨酶1

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早期饮食如何影响婴儿肠道微生态

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中国微生态学杂志 2018年第4期30卷 484-488页

作者：潘善越周娇锐于蓉刘曼袁杰利李明大连市第二人民医院检验科辽宁大连116011 大连医科大学基础医学院微生态学教研室辽宁大连116044 大连市第二人民医院药剂科辽宁大连116011

母乳是一种多功能的生物液体,为婴儿提供一系列营养及多样化的非营养活性成分,如抗体、细菌和免疫调节蛋白。过去十年的研究已证实母乳中具有生物活性的成分在建立婴儿健康的肠道菌群结构过程中起重要作用。完全母乳喂养的婴儿其肠道菌... 详细信息

母乳是一种多功能的生物液体,为婴儿提供一系列营养及多样化的非营养活性成分,如抗体、细菌和免疫调节蛋白。过去十年的研究已证实母乳中具有生物活性的成分在建立婴儿健康的肠道菌群结构过程中起重要作用。完全母乳喂养的婴儿其肠道菌群以若干种双歧杆菌为主,起决定性作用,被称为母乳源型微生物(MOM)。MOM不但可以降低婴儿的感染风险,而且还能减少成年期某些慢性疾病患病风险。MOM的形成依赖于母乳中复杂的可以帮助婴儿消化的糖结构。本文主要阐述母乳中的多糖、糖基化蛋白以及母体表型对于肠道菌群形成的影响,从而来了解早期饮食中的各种因素是如何形影响婴儿肠道微生物的。

关键词：母乳双歧杆菌表型

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巨噬细胞极化表型与转录因子调节

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大连医科大学学报 2017年第1期39卷 1-7页

作者：马坚妹大连医科大学基础医学院解剖学教研室辽宁大连116044

巨噬细胞在不同环境因素刺激下可极化为M1和M2两种功能截然不同的表型,其机制是刺激信号通过膜受体启动胞内信号转导通路,通过激活转录因子启动不同基因表达以实现表型特征。巨噬细胞极化类型在炎症和免疫相关疾病的发展与转归方面具有... 详细信息

巨噬细胞在不同环境因素刺激下可极化为M1和M2两种功能截然不同的表型,其机制是刺激信号通过膜受体启动胞内信号转导通路,通过激活转录因子启动不同基因表达以实现表型特征。巨噬细胞极化类型在炎症和免疫相关疾病的发展与转归方面具有重要作用。深入了解与巨噬细胞极化相关的转录因子,以针对转录因子设计相应的干预策略,是控制炎症和免疫相关疾病的可能途径。

关键词：巨噬细胞极化炎症转录因子调控

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腕管的腔隙解剖学结构特征和临床研究进展

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大连医科大学学报 2017年第3期39卷 291-295页

作者：蔡琳杜美玲杨庸周怡然李菲菲葛宝健隋鸿锦付元山大连医科大学基础医学院解剖学教研室辽宁大连116044

人体腔隙学是从腔隙的角度研究人体结构,描述腔隙外壁的构成以及邻近结构,腔隙内容物的走行、分布特点与变异,并将解剖空间特点与临床紧密结合,分析疾病的发生发展,指导临床诊疗实践。腕管作为人体腔隙结构的一部分,其解剖结构特点与临... 详细信息

人体腔隙学是从腔隙的角度研究人体结构,描述腔隙外壁的构成以及邻近结构,腔隙内容物的走行、分布特点与变异,并将解剖空间特点与临床紧密结合,分析疾病的发生发展,指导临床诊疗实践。腕管作为人体腔隙结构的一部分,其解剖结构特点与临床疾病尤其是腕管综合征的进展、减压方法等密切相关,本文对腕管解剖结构,包括壁的构成和内容物特点,以及腕管综合征的病因、病理生理、临床表现和诊断及治疗等研究进展进行综述。

关键词：腕管人体腔隙解剖学腕管综合征

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