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大连医科大学学报 2017年第6期39卷 527-531页

作者：房宇坤宁安红刘磊钟民涛周绍正黄敏大连医科大学基础医学院微生物教研室辽宁大连116044

目的提取山慈菇多糖,测定其总糖含量并对其体外抗氧化能力进行初步研究。方法采用热水浸提法提取山慈菇多糖,并通过脱蛋白,醇沉等方法分离纯化山慈菇多糖。采用苯酚-硫酸法测定山慈菇多糖的含量。通过邻苯三酚自氧化法、Fenton法和DPPH... 详细信息

目的提取山慈菇多糖,测定其总糖含量并对其体外抗氧化能力进行初步研究。方法采用热水浸提法提取山慈菇多糖,并通过脱蛋白,醇沉等方法分离纯化山慈菇多糖。采用苯酚-硫酸法测定山慈菇多糖的含量。通过邻苯三酚自氧化法、Fenton法和DPPH法测定山慈菇多糖溶液及对照组VC溶液在浓度分别为0.5mg/mL,1 mg/mL,2 mg/mL,4 mg/mL时对超氧阴离子、DPPH自由基及羟自由基的清除率。结果苯酚-硫酸法测得分离纯化后的山慈菇多糖的浓度为30 mg/mL。山慈菇多糖溶液及VC清除超氧阴离子,DPPH自由基及羟自由基的效率随浓度的增加而增强,两组内差异具有显著性意义(P<0.05,P<0.001)。结论山慈菇多糖在体外具有明显清除超氧阴离子、羟自由基和DPPH自由基的作用,并且在体外的抗氧化作用均随其浓度的增大而增大。

关键词：山慈菇多糖多糖含量的测定体外抗氧化

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调控子宫内膜癌细胞miR-21-5p表达对增殖、迁移、侵袭的影响

调控子宫内膜癌细胞miR-21-5p表达对增殖、迁移、侵袭的影响

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2017第七届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会

作者：马艳妮张漫陈万方韩笑谢云鹏隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生化教研室

目的:探讨miR-21-5p在不同子宫内膜癌细胞Ishikawa及HEC-1A中的表达差异,上调或下调miR-21-5p对细胞增殖、迁移及侵袭的影响。探寻miR-21-5p的直接靶标分子,为子宫内膜癌的诊断及治疗提供新的靶点。方法:Real-time PCR检测不同子宫内膜... 详细信息

目的:探讨miR-21-5p在不同子宫内膜癌细胞Ishikawa及HEC-1A中的表达差异,上调或下调miR-21-5p对细胞增殖、迁移及侵袭的影响。探寻miR-21-5p的直接靶标分子,为子宫内膜癌的诊断及治疗提供新的靶点。方法:Real-time PCR检测不同子宫内膜癌细胞Ishikawa及HEC-1A中miR-21-5p的表达差异;在Ishikawa及HEC-1A细胞利用脂质体转染法分别转染miR-21-5p mimics(上调miR-21-5p)及其对照(Negative control)或miR-21-5p inhibitor(下调miR-21-5p)及其对照(Inhibitor NC),Real-time PCR检测miR-21-5p表达变化,CCK8、Transwell及细胞划痕实验分别检测上调/下调miR-21-5p对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;利用靶基因预测软件筛选与侵袭转移相关的miR-21-5p靶基因;上调Ishikawa和HEC-1A细胞中miR-21-5p表达检测靶基因mRNA及蛋白表达变化;构建miR-21-5p靶基因3'UTR野生型克隆载体和双荧光素酶重组载体分析miR-21-5p与预测基因的靶向关系。结果:miR-21-5p在HEC-IA细胞中的表达高于Ishikawa细胞;miR-21-5p mimics上调Ishikawa及HEC-1A细胞miR-21-5p表达能够促进细胞的增殖、迁移及侵袭能力能力;miR-21-5pinhibitor下调Ishikawa及HEC-1A细胞miR-21-5p的表达下降能抑制细胞的迁移及侵袭能力;TargetscanHuman7.1预测显示miR-21-5p"种子"区"UAUUCGA",筛选出与侵袭转移相关的miR-21-5p的靶基因PITX2、VCL、JAG1和FBXO11;上调HEC-1A细胞miR-21-5p表达靶基因PTTX2、VCL、JAG1和FBXO11mRNA与对照组相比呈显著降低趋势,PITX2及VCL蛋白的表达降低;下调miR-21-5p表达可促进PITX2和VCL蛋白表达;靶基因3'UTR区克隆载体、野生型及突变型重组载体测序结果与预想一致;双荧光素酶结果显示,PITX2、VCL、JAG1和FBXO17是miR-21-5p的直接靶基因。

关键词： miR-21-5p 子宫内膜癌增殖迁移侵袭

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OPN在慢性根尖周炎的表达及作用机制研究

OPN在慢性根尖周炎的表达及作用机制研究

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2017第七届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会

作者：董明于新新赵文杰李奥赢隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生化教研室

慢性根尖周炎是发生在牙齿根尖区组织的慢性炎性疾病,主要表现为牙槽骨的破坏和炎症性肉芽组织的形成。骨桥蛋白(osteopontin OPN)是一种分泌型蛋白,它与骨吸收、加速血管生成,甚至还与动脉粥样硬化,自身免疫性疾病和其它炎症性疾病有... 详细信息

慢性根尖周炎是发生在牙齿根尖区组织的慢性炎性疾病,主要表现为牙槽骨的破坏和炎症性肉芽组织的形成。骨桥蛋白(osteopontin OPN)是一种分泌型蛋白,它与骨吸收、加速血管生成,甚至还与动脉粥样硬化,自身免疫性疾病和其它炎症性疾病有关。由于OPN与骨代谢有着紧密的联系,因此它与慢性根尖周炎的发病可能有着一定的关系。收集人慢性根尖周炎病损组织18例,健康牙周膜组织5例,采用实时荧光定量PCR和Western Blot的方法检测OPN表达情况,并进行统计学分析。选取MC3T3-El(前成骨细胞)及RAW264.7(前破骨细胞)通过RT-PCR及Westen-blot实验检测OPN在不同的两细胞株的基因及蛋白表达情况;研究不同浓度LPS对体外培养的两种的影响,进而探讨不同表达水平的OPN在LPS介导炎症微环境调控骨细胞分化的作用,为感染所根尖周炎的发病机制提供实验依据。结果:健康根尖周组织中仅可检测到少量Btk表达,而18例人慢性根尖周炎病损组织中OPN均有表达,并且OPN在人慢性根尖周炎病损组织中表达较健康组织明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达OPN可以提高RAW264.7细胞的增殖能力及分化能力,降低MC3T3-El的增殖能力及分化能力,干扰OPN可降低RAW264.7细胞的增殖能力及分化能力,提高MC3T3-El的增殖能力及分化能力。

关键词： OPN 成骨细胞前破骨细胞

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OPN调控骨破坏相关CathepsinK及MMP9表达及信号通路分析

OPN调控骨破坏相关CathepsinK及MMP9表达及信号通路分析

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2017第七届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会

作者：董明于新新刘超关莹隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生化教研室

根尖周炎是口腔中的病原刺激物引起的细菌感染性进行性疾病,其慢性期的主要表现为根尖区牙骨质和牙槽骨发生不同程度的吸收,被炎症性肉芽组织所取代。机体组织细胞受到致病菌的侵袭后,将引发一系列炎症反应。免疫炎症反应长期持续性作... 详细信息

根尖周炎是口腔中的病原刺激物引起的细菌感染性进行性疾病,其慢性期的主要表现为根尖区牙骨质和牙槽骨发生不同程度的吸收,被炎症性肉芽组织所取代。机体组织细胞受到致病菌的侵袭后,将引发一系列炎症反应。免疫炎症反应长期持续性作用于机体,会引发骨代谢相关信号传导通路的变化,使骨改建的平衡失调,造成根尖周软硬组织的损伤和丧失。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是由成及破骨细胞分泌的一种高度磷酸化的糖蛋白,可以沉积到骨基质中促进破骨细胞黏附或者类骨质矿化,主要作为非胶原性的细胞外基质蛋白分布在矿物组织中。本研究选取MC3T3-E1(前成骨细胞)及RAW264.7(前破骨细胞),分为空白对照组及NF-κB抑制剂组每组再分为Mock亚组、OPN-siRNA亚组、Over-OPN亚组,采用免疫荧光技术检测各组NF-κB核内外的表达情况;采用Western blot检测骨破坏经典标志物CathepsinK及MMP9的蛋白表达情况;采用RT-PCR检测肿瘤经典标志物CathepsinK及MMP9的基因表达情况;采用CCK8实验及ALP验检测OPN是否是通过NF-kb信号通路调控不同成骨细胞及破骨细胞的增殖、分化能力。结果:OPN可上调成骨及破骨细胞中骨破坏经典因子的表达。OPN可加速成骨及破骨细胞NF-kb核内移,上调NF-kb的表达。OPN激活NF-kb信号通路,上调CathepsinK及MMP9蛋白及基因的表达。OPN激活NF-kb信号通路调控成骨细胞破骨及细胞的增殖、分化能力。

关键词： OPN CathepsinK MMP9 NF-kb

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Mir223调控靶基因E2F1对子宫内膜癌细胞的影响及机制研究

Mir223调控靶基因E2F1对子宫内膜癌细胞的影响及机制研究

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2017第七届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会

作者：韩笑朱晨阳董明陈万方韩笑隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生化教研室

子宫内膜癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一,且近年来发病率有逐年升高的趋势,其发病机制尚未完全阐明。MicroRNAs(miRNA)是一类保守的、长度约22nt的内源性单链非编码小分子RNA,其参与细胞分化、凋亡、增殖,并与肿瘤发生密切相关... 详细信息

子宫内膜癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一,且近年来发病率有逐年升高的趋势,其发病机制尚未完全阐明。MicroRNAs(miRNA)是一类保守的、长度约22nt的内源性单链非编码小分子RNA,其参与细胞分化、凋亡、增殖,并与肿瘤发生密切相关。细胞周期相关转录因子E2F1的活化可将信号传至核内,推动细胞周期由G1期进入到S期,调控细胞周期进程。近年研究发现,E2F1也参与肿瘤细胞代谢重编程,在肿瘤的发生、发展中起到重要作用。根据文献提示E2F1是mir223的靶点,mir223缺失的小鼠中E2F1蛋白表达上调。本研究以子宫内膜癌临床样本及人子宫内膜癌细胞系,检测mir223的差异表达,分析mir223与子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移的关系。检测mir223与E2F1之间靶向关系,揭示mir223与子宫内膜癌细胞发生的相关性。研究结果显示:应用Real-time检测临床子宫内膜癌手术样本与癌旁组织对比miR-223表达降低且差异表达显著,免疫组化及Real-time检测E2F1在子宫内膜癌中异常高表达。TargetScan5.1获得miR-223的潜在靶基因信息,构建miR-223过表达慢病毒载体,转染人子宫内膜癌细胞RL95-2细胞,应用western blot、RT-PCR、免疫组化加测上调RL95-2上皮细胞系中miR-223,预测靶基因IGF-1R、FOX01、E2F1的mRNA和蛋白表达水平,荧光素酶报告实验明确miR-223在子宫内膜上皮细胞中与IGF-1R、E2F1存在靶向基因关系;CCK8、Transwell及细胞划痕实验检测上调RL95-上皮细胞系中miR-223可抑制子宫内膜癌细胞的增殖能力、迁移及侵袭能力,分子机制进一步研究中。

关键词： miR-223 子宫内膜上皮细胞 E2F1

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头颈部鳞癌OPN的表达及分子机制研究

头颈部鳞癌OPN的表达及分子机制研究

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2017第七届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会

作者：于新新董明陈万方关莹隋琳琳孔英大连医科大学基础医学院生化教研室

头颈部癌(Hand Neck Cancer,HNC)是常见恶性肿瘤,包括起源于鼻窦、鼻腔、口腔、咽、喉等部位的上皮性恶性肿瘤,全球每年新发病例约50万,占全部恶性肿瘤的6%,病理类型几乎均为鳞癌。骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种具有多种生物学功能... 详细信息

头颈部癌(Hand Neck Cancer,HNC)是常见恶性肿瘤,包括起源于鼻窦、鼻腔、口腔、咽、喉等部位的上皮性恶性肿瘤,全球每年新发病例约50万,占全部恶性肿瘤的6%,病理类型几乎均为鳞癌。骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种具有多种生物学功能的钙结合磷酸化糖蛋白,广泛存于各组织及体液中,与肿瘤细胞生长增殖及侵袭转移密切相关,被认为是一种新的肿瘤标志物。本研究检测了5例头颈部鳞癌组织及相邻的癌旁组织OPN表达情况。通过RT-PCR及Westen-blot实验检测OPN在头颈部鳞癌组织的表达情况;选取二株头颈部鳞癌细胞,UM-SCC6细胞(高分化)及CNE-2细胞(低分化)通过RT-PCR及Westen-blot实验检测OPN在不同的HNSCC细胞株的基因及蛋白表达情况;利用划痕实验检测不同表达水平的OPN对HNSCC细胞株的侵袭能力的影响;以CCK8增殖实验检测不同表达水平的OPN对HNSCC细胞株增殖力的影响。实验结果:头颈部鳞癌组中的OPN表达高于癌旁组织。OPN在UM-SCC6细胞(高分化)的表达低于CNE-2细胞(低分化),结果有统计学差异。过表达OPN可以提高UM-SCC6细胞及CNE-2细胞的增殖能力及侵袭能力,干扰OPN后UM-SCC6细胞及CNE-2细胞的增殖能力及侵袭能力降低。

关键词： OPN HNC UM-SCC6细胞 CNE-2细胞

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基于耐酸性与抑菌性效果的益生菌候选菌株体外筛选

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中国微生态学杂志 2017年第8期29卷 874-877页

作者：潘浩宇宁凯婷李培培张瑾宋佳平唐立刘银辉袁杰力文姝大连医科大学基础医学院微生态学教研室辽宁大连116044

目的基于筛选耐酸性强和抑菌效果好的菌株为靶点,为益生菌研发提供优良的候选菌株。考察菌株耐酸性与抑菌性的相关性,为益生菌快速筛选探索新方法。方法选取62株不同乳杆菌、魏斯菌、粪肠球菌,在酸性程度不同的培养基中采用接种培养的... 详细信息

目的基于筛选耐酸性强和抑菌效果好的菌株为靶点,为益生菌研发提供优良的候选菌株。考察菌株耐酸性与抑菌性的相关性,为益生菌快速筛选探索新方法。方法选取62株不同乳杆菌、魏斯菌、粪肠球菌,在酸性程度不同的培养基中采用接种培养的方式研究受试菌株耐酸能力。用大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌作为指示菌,采用牛津杯法研究受试菌株的抑菌能力。分析同种细菌的耐酸能力和抑菌能力的相关关系。结果在酸性环境下,受试菌株存活率超过50%的有22株,耐酸性较强的菌株有DMLA16017、DMLA16116、DMLA16117、DMLA16118和DMLA16131。受试菌株对病原菌的抑菌力较强的有DMLA16017、DMLA16009、DMLA16118、DMLA16002和DMLA15015。结论鼠李糖乳杆菌DMLA16017和发酵乳杆菌DMLA16118在耐酸性和抑菌性上表现出优良性状。可以通过受试菌株对酸性耐受能力指示受试菌株对病原菌抑制能力,实现对受试菌株的快速筛选。

关键词：乳杆菌病原菌抑制能力酸性耐受能力

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肠道菌群与神经精神疾病

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中国微生态学杂志 2017年第7期29卷 850-854页

作者：刘丹丹刘银辉唐立大连医科大学第二临床学院辽宁大连116044 大连医科大学基础医学院微生态教研室辽宁大连116044

人体肠道中存在着数量庞大和种类繁多的细菌,这些细菌及其代谢产物在代谢、免疫、内分泌、神经等方面起着重要作用,对于人类的健康有着重要影响。近年来越来越多的研究表明,正常的肠道菌群在维持大脑的发育与功能方面扮演着重要角色,而... 详细信息

人体肠道中存在着数量庞大和种类繁多的细菌,这些细菌及其代谢产物在代谢、免疫、内分泌、神经等方面起着重要作用,对于人类的健康有着重要影响。近年来越来越多的研究表明,正常的肠道菌群在维持大脑的发育与功能方面扮演着重要角色,而肠道菌群的失调与一些神经精神疾病密切相关,例如帕金森症、多发性硬化、抑郁、自闭症等。本文就肠道菌群与神经精神疾病的关系作一综述。

关键词：肠道菌群帕金森症多发性硬化抑郁自闭症

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肠道菌群与免疫的相关性研究

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中国微生态学杂志 2017年第8期29卷 971-974页

作者：丁晓蕾张蓝方李明陈骏杨葆华大连医科大学附属第二医院辽宁大连116000 大连医科大学基础医学院微生态学教研室辽宁大连116044

由大量微生物构成的复杂微生物群落栖息在人体的肠道内,这些微生物统称作肠道菌群。肠道菌群在人体的消化吸收、免疫、生物拮抗、抗肿瘤等各项生命活动中发挥着重要的作用。近年来的许多研究提示,肠道内复杂的微生物群落和人体的免疫系... 详细信息

由大量微生物构成的复杂微生物群落栖息在人体的肠道内,这些微生物统称作肠道菌群。肠道菌群在人体的消化吸收、免疫、生物拮抗、抗肿瘤等各项生命活动中发挥着重要的作用。近年来的许多研究提示,肠道内复杂的微生物群落和人体的免疫系统间存在着极为密切的关系。免疫系统发挥正常的功能及建立免疫的稳态与肠道菌群的作用密不可分。研究表明肠道菌群能阻止致病微生物入侵从而影响肠道免疫系统,同时还能影响全身免疫系统,在人体的自身免疫性疾病中有较为重要的作用。

关键词：肠道菌群免疫疾病

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肠道菌群失衡诱发肠易激综合征的机制

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中国微生态学杂志 2017年第6期29卷 742-744,F0003页

作者：欧枢贾玉杰大连医科大学公共卫生学院辽宁大连116044 大连医科大学基础医学院病理生理学教研室辽宁大连116044

肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)是一种常见的功能性胃肠道疾病,严重地威胁着人类的健康与生存质量。最近的研究发现IBS的发病机制是复杂多样的,尽管其确切的发病原因尚不完全清楚,但有证据显示IBS可能与肠道菌群失衡有关... 详细信息

肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)是一种常见的功能性胃肠道疾病,严重地威胁着人类的健康与生存质量。最近的研究发现IBS的发病机制是复杂多样的,尽管其确切的发病原因尚不完全清楚,但有证据显示IBS可能与肠道菌群失衡有关。本文就有关肠道菌群的功能、IBS患者肠道菌群的特点、肠道菌群失衡导致IBS发病的可能机制的研究进展作一综述,旨在为IBS的早期诊断与有效治疗提供有价值的理论依据。

关键词：肠易激综合征肠道菌群失衡机制

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