检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 2009年第15期54卷 1534-1540页

作者：葛新董杰陈锦英姚萍谷超杨东靖天津医科大学医学微生物学教研室天津300070

致肾盂肾炎大肠埃希菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)与尿路上皮细胞之间的相互作用对阐明泌尿道感染的发病机制具有重要意义.本研究利用UPEC132感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)、人肾癌细胞(Ketr-3细胞)和膀胱癌细胞(EJ细胞),比... 详细信息

致肾盂肾炎大肠埃希菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)与尿路上皮细胞之间的相互作用对阐明泌尿道感染的发病机制具有重要意义.本研究利用UPEC132感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)、人肾癌细胞(Ketr-3细胞)和膀胱癌细胞(EJ细胞),比较细菌对3种细胞的黏附和侵袭能力.结果表明,UPEC132对上述3种细胞均能黏附与侵袭,其黏附率分别为(49.20±7.55)%,(55.22±4.09)%和(73.20±5.26)%,侵袭指数分别为(2.61±0.32)×10-3,(3.00±0.34)×10-3和(3.25±0.20)×***132对EJ细胞的黏附率高于另外2种细胞(P<0.05),对EJ细胞的侵袭指数与Ketr-3细胞无显著性差异(P>0.05),但高于Vero细胞(P<0.05).用间接免疫荧光法检测细胞表面P血型抗原物质,表明3种细胞均存在P菌毛受体,以EJ细胞表面的受体分布最多.激光共聚焦显微镜可直接观察到表达绿色荧光蛋白的UPEC132/pSELECT-GFP对EJ细胞的侵袭.由于UPEC132对EJ细胞的黏附能力最强,并直接证明具有侵袭性,因此选择EJ细胞作为研究对象为进一步研究UPEC致病机制奠定基础.

关键词：致肾盂肾炎大肠埃希菌 EJ细胞黏附侵袭

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尿道致病性大肠埃希菌感染对人膀胱上皮细胞基因表达谱的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第11期30卷 998-1003页

作者：葛新陈锦英姚萍谷超赵凤玲天津医科大学基础医学院微生物学教研室 300070 武警医学院微生物学教研室天津300162

目的研究尿道致病性大肠埃希菌（UPEC）菌株132与人膀胱上皮EJ细胞的相互作用,分析该菌株感染对EJ细胞基因表达谱的改变.方法 UPEC132感染EJ细胞,用倒置显微镜观察细菌与细胞的黏附,计算黏附率,并通过激光共聚焦显微镜观察UPEC132对细... 详细信息

目的研究尿道致病性大肠埃希菌（UPEC）菌株132与人膀胱上皮EJ细胞的相互作用,分析该菌株感染对EJ细胞基因表达谱的改变.方法 UPEC132感染EJ细胞,用倒置显微镜观察细菌与细胞的黏附,计算黏附率,并通过激光共聚焦显微镜观察UPEC132对细胞的侵袭.感染UPEC132的EJ细胞与未经细菌感染的细胞提取总RNA,用人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片分析差异表达基因,并采用RT-PCR对基因芯片数据进行验证.结果 UPEC132能够黏附于EJ细胞表面,黏附率为（73.20±5.26）% 激光共聚焦显微镜观察发现部分细菌位于细胞内部,证实该菌对EJ细胞具有侵袭性.UPEC132感染后的EJ细胞与未经感染的细胞相比,共有28个基因上调,1个基因下调,主要涉及细胞增殖、炎症反应、细胞凋亡等相关基因.结论 UPEC与尿路上皮细胞的相互作用激活宿主细胞内部多种应答反应与信号转导途径,本研究为深入探索UPEC致病机制奠定基础.

关键词：尿道致病性大肠埃希菌基因表达膀胱上皮细胞基因芯片

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仙台病毒 Tianjin 株缺陷干扰颗粒体内外诱导大鼠脑胶质瘤细胞凋亡的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2013年第9期33卷 677-682页

作者：韩哲周洪经赵杰贾浩波陈曦腾石立莹天津医科大学基础医学院微生物学教研室 300070

目的探讨仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒（ defective interfering particles ，DI颗粒）体内外诱导大鼠脑胶质瘤细胞C6凋亡的作用。方法将不同滴度仙台病毒Tianjin株DI颗粒分别与大鼠脑胶质瘤细胞C6作用不同时间，以培养基作为阴性对... 详细信息

目的探讨仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒（ defective interfering particles ，DI颗粒）体内外诱导大鼠脑胶质瘤细胞C6凋亡的作用。方法将不同滴度仙台病毒Tianjin株DI颗粒分别与大鼠脑胶质瘤细胞C6作用不同时间，以培养基作为阴性对照、完整病毒作为阳性对照，通过DNA片段琼脂糖凝胶电泳、TUNEL染色、AnnexinⅤ-FITC/PI标记流式细胞仪分析等检测细胞凋亡情况。建立大鼠皮下胶质瘤模型，通过测量肿瘤大小观察DI颗粒抑瘤作用，病理切片HE染色观察肿瘤组织病理变化，TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况。结果 C6细胞在体外经DI颗粒诱导后， DNA片段琼脂糖凝胶电泳呈阶梯状；流式细胞仪及TUNEL检测显示，DI颗粒组与完整病毒组细胞凋亡率明显增高，且呈时间-剂量依赖型。动物实验结果显示，DI颗粒和完整病毒均可明显抑制肿瘤生长；肿瘤组织病理切片HE染色显示DI颗粒组和完整病毒组瘤结节内瘤细胞较少；TUNEL原位细胞凋亡检测显示DI颗粒组和完整病毒组凋亡细胞明显增加，以上结果与阴性对照组比较差异均有统计学意义（P＜0．01）。结论仙台病毒Tianjin株DI颗粒在体内外均能引起大鼠脑胶质瘤C6细胞凋亡，且呈时间-剂量依赖型，提示DI颗粒有辅助治疗脑胶质瘤的可能性。

关键词：仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒大鼠脑胶质瘤细胞C6 凋亡

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副粘病毒Tianjin株F基因克隆及序列分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第8期27卷 751-757页

作者：石立莹李晓眠李梅何健民袁立军天津医科大学基础医学院微生物学教研室 300070

目的探索副粘病毒Tianjin株的来源和种系进化地位。方法以副粘病毒Tianjin株基因组RNA为模板,通过RT-PCR方法获得包括F基因全长的两个质粒克隆,分别进行序列测定。将拼接得到的F基因核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中公布的15... 详细信息

目的探索副粘病毒Tianjin株的来源和种系进化地位。方法以副粘病毒Tianjin株基因组RNA为模板,通过RT-PCR方法获得包括F基因全长的两个质粒克隆,分别进行序列测定。将拼接得到的F基因核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中公布的15株仙台病毒相应序列进行同源性比较,并构建系统进化树。结果副粘病毒Tianjin株与15株仙台病毒F基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别在85.3%～94.5%和90.4%～95.4%之间。进化树分析表明,Tianjin株与仙台病毒BB1株亲缘关系较近,但仍有一定差距,与其他仙台病毒株关系较远。结论副粘病毒Tianjin株很可能不属于仙台病毒现有的Ohita株、Z株及BB1株所代表的3个进化分支,而是独立于这3个分支之外。

关键词：副粘病毒仙台病毒 F基因系统进化树

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仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒对荷瘤小鼠的抑瘤作用

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中华肿瘤杂志 2014年第3期36卷 177-182页

作者：石立莹陈骏钟启平耿鹏何建民天津医科大学基础医学院微生物学教研室 300070

目的通过小鼠结肠癌动物模型探讨仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒（DIP）的抗肿瘤作用及其机制。方法将CT26细胞悬液0．1ml皮下注射BalB／c小鼠背部，建立小鼠结肠癌模型，将小鼠随机分为Tianjin株DIP组（注射CT26后第4、7、10和13天，... 详细信息

目的通过小鼠结肠癌动物模型探讨仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒（DIP）的抗肿瘤作用及其机制。方法将CT26细胞悬液0．1ml皮下注射BalB／c小鼠背部，建立小鼠结肠癌模型，将小鼠随机分为Tianjin株DIP组（注射CT26后第4、7、10和13天，每天瘤内注射1次Tianjin株DIP0．1m1）和生理盐水对照组（瘤内注射生理盐水0．1ml），每组10只。通过测量肿瘤大小和观察小鼠存活率确定DIP的抑瘤作用。采用流式细胞仪和酶联免疫吸附（ELISA）法检测DIP在体外对小鼠树突状细胞（DCs）成熟及分泌白细胞介素6（IL-6）、干扰素Q（IFN-α）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的促进作用。采用realtimeRT—PCR和免疫组化法检测DIP对小鼠肿瘤组织中CD4＋、CD8＋T细胞及CD11c＋DCs表达的影响。结果至注射CT26后第22天，Tianjin株DIP组小鼠的肿瘤体积为（33．2±2．0）mm3，与生理盐水对照组[（2376．0±130．8）mm3]比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。至注射CT26后第50天，Tianjin株DIP组小鼠的存活率为90．0％，明显高于生理盐水对照组（30．0％，P〈0．01）。流式细胞仪检测显示，小鼠DCs表面CIM0、CD80和CD86标志分子的表达率随病毒剂量的升高而升高，且Tianjin株DIP组和完整病毒组之间的差异无统计学意义（均P〉0．05）。ELISA法检测显示，DIP能够促进小鼠DCs分泌IL-6、IFN-α和TNF-α，且呈剂量依赖性。realtimeRT-PCR检测结果显示，停止给药后24、48和120h取得的小鼠肿瘤组织中CD4、CD8和CDllcmRNA的表达水平均有所升高，且在120h表达达高峰。免疫组化检测结果显示，Tianjin株DIP组肿瘤组织中CD4＋T细胞、CD8＋T细胞和CD11c＋DCs占总细胞的百分比分别为（21．60±1．49）％、（22．12±2．84）％和（23．05±2．91）％，而生理盐水对照组分别为（2．62±0．60）％、（4．05±0．12）％和（3．10±0．09）％，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论Tianjin株DIP可以在小鼠体内发挥抗肿瘤作用，其作用机制与激活DCs和T细胞诱导的抗肿瘤免疫有关。

关键词：仙台病毒Tianjin株缺损干扰颗粒树突状细胞 T淋巴细胞免疫小鼠

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高效化学转化菌内同源重组法构建重组腺病毒

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天津医药 2005年第7期33卷 437-440页

作者：尹冰楠李冬田李秋香佟惠春李光明天津医科大学医学微生物学教研室 300070

目的:对细菌内同源重组法构建重组腺病毒AdEasy系统加以改进,为制备具有更高抗肿瘤疗效的生物治疗制剂奠定基础。方法:将自杀基因CD和HSV-TK插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中,PmeⅠ酶切后,用酚∶氯仿抽提、乙醇沉淀或切胶回收纯化;分别采用... 详细信息

目的:对细菌内同源重组法构建重组腺病毒AdEasy系统加以改进,为制备具有更高抗肿瘤疗效的生物治疗制剂奠定基础。方法:将自杀基因CD和HSV-TK插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中,PmeⅠ酶切后,用酚∶氯仿抽提、乙醇沉淀或切胶回收纯化;分别采用电穿孔转化法和化学转化法将线性穿梭质粒(pAdTrackCMV-CDglyTK)与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌内实现同源重组;将重组腺病毒质粒rpAdEasyGFP-CDglyTK以脂质体介导至293细胞中进行包装、扩增。结果:采用切胶回收化学转化法获得阳性重组率最高(100%)。经PCR、酶切以及测序等方法鉴定,证实融合自杀基因已成功插入腺病毒中。结论:对细菌内同源重组法构建重组腺病毒的方法进行了改进,在降低实验成本的同时获得了较原法更高的阳性重组率,并成功构建了复制缺陷性重组腺病毒rAd-CDglyTK。

关键词：重组腺病毒细菌内同源重组法 AdEasy系统化学转化法高效生物治疗制剂融合自杀基因穿梭质粒 293细胞脂质体介导肿瘤疗效基因CD 氯仿抽提乙醇沉淀骨架质粒实验成本 CMV HSV Pme 电穿孔 PCR 插入酶切回收阳性

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小鼠对仙台病毒Tianjin株易感性研究

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病毒学报 2012年第2期28卷 103-107页

作者：赵桂金李梅天津医科大学基础医学院微生物学教研室天津300070

研究129Sv、DBA/2、Kunming、BALB/c四种小鼠对仙台病毒Tianjin株的感染特点,并通过观察易感性的不同,确定适于研究此病毒致病性及疫苗的小型啮齿类实验动物。用9～11d龄鸡胚接种仙台病毒Tianjin株,72h后收集尿囊腔内效价为1:1 280病毒... 详细信息

研究129Sv、DBA/2、Kunming、BALB/c四种小鼠对仙台病毒Tianjin株的感染特点,并通过观察易感性的不同,确定适于研究此病毒致病性及疫苗的小型啮齿类实验动物。用9～11d龄鸡胚接种仙台病毒Tianjin株,72h后收集尿囊腔内效价为1:1 280病毒液,用5μl和6倍稀释的30μl病毒液分别接种129Sv、DBA/2、Kunming、BALB/c小鼠,观查12d小鼠体重变化,计算生存率。用6倍稀释的30μl病毒液接种Kunming、BALB/c小鼠,于接种前第1天以及接种后第4、7天断颈处死,取左肺制成切片,HE染色观察病理改变,综合判断仙台病毒Tianjin株对四种鼠感染的易感性的不同。129Sv、DBA/2小鼠在接种仙台病毒Tianjin株5μl后,最高平均体重下降分别为13.0%、4.7%,四种鼠12d生存率均为100%;接种稀释的30μl病毒液,129Sv、DBA/2、Kunming、BALB/c最高平均体重下降21.7%、30.3%、16.7%、9.6%;12d生存率分别为20%、0%、80%、100%。Kunming鼠在感染后第4、7d的肺组织病理改变较BALB/c严重,表现为大量炎细胞渗出,粘膜下层实质性增厚。以上实验结果表明DBA/2对仙台病毒Tianjin株感染最易感,BALB/c耐受性最强,易感顺序为DBA/2>129Sv>Kunming>BALB/c。DBA/2和129Sv小鼠可作为仙台病毒Tianjin株致病性及疫苗研究的首选实验动物。

关键词：仙台病毒 Tianjin株体重下降生存率易感性

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小鼠MIP-1α真核表达质粒的构建及在HSV-II核酸疫苗中的应用

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 286-289页

作者：邵文爱李晓眠汕头大学医学院微生物与免疫学教研室广东汕头515031 天津医科大学微生物学教研室天津300070

目的构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的真核表达质粒,观察其作为分子佐剂对单纯疱疹病毒II型(HSV-II)DNA疫苗免疫效果的影响。方法以LPS刺激RAW264.7细胞提取总RNA。采用RT-PCR扩增出MIP-1α基因的全部编码序列,利用克隆载体pUCm... 详细信息

目的构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的真核表达质粒,观察其作为分子佐剂对单纯疱疹病毒II型(HSV-II)DNA疫苗免疫效果的影响。方法以LPS刺激RAW264.7细胞提取总RNA。采用RT-PCR扩增出MIP-1α基因的全部编码序列,利用克隆载体pUCm-T,将其亚克隆入pcDNA3中,构建出小鼠MIP-1α的真核表达质粒Pm;将其转染COS-7细胞,并用Boyden趋化小室法检测MIP-1α的生物学活性。然后用其与HSV-IIgD的DNA疫苗一起免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠的特异性抗体、脾T细胞增殖反应及病毒攻击小鼠后对小鼠的保护率,观察MIP-1α对HSV-IIDNA疫苗免疫效果的影响。结果成功构建了小鼠MIP-1α的重组真核表达质粒;免疫BALB/c小鼠发现,其作为分子佐剂可加强HSV-IIgDDNA疫苗的免疫效果。结论小鼠MIP-1α可作为HSV-IIgDDNA疫苗的分子佐剂,为研制新型有效的HSV-IIDNA疫苗提供一定的依据。

关键词：小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α) 单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)DNA疫苗分子佐剂

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抗生素对小鼠肺等多器官鼠衣原体感染及肠道细菌的影响

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中华结核和呼吸杂志 2025年第05期

作者：马璟玥朱翠明田畦张天援刘全忠钟光明刘原君天津医科大学总医院皮肤性病科天津性传播疾病研究所天津南华大学衡阳医学院病原生物学研究所衡阳湖南省妇幼保健院妇产科长沙上海交通大学医学院上海市病毒研究院上海美国德州大学圣安东尼奥健康医学中心微生物免疫教研室德克萨斯州TX

目的初步探索抗生素对小鼠肺等多器官鼠衣原体感染的变化、免疫反应及肠道细菌的影响。方法将C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为抗生素组和对照组, 对照组给予饮用水, 抗生素组给予灌胃2次并饮用含万古霉素和庆大霉素水溶液2周。两组小... 详细信息

目的初步探索抗生素对小鼠肺等多器官鼠衣原体感染的变化、免疫反应及肠道细菌的影响。方法将C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为抗生素组和对照组, 对照组给予饮用水, 抗生素组给予灌胃2次并饮用含万古霉素和庆大霉素水溶液2周。两组小鼠均鼻内感染鼠衣原体, 并持续监测其体重变化。在感染后的第10天, 对小鼠实施安乐死, 随后检测多个器官中的鼠衣原体载量, 并对肺组织进行免疫荧光染色及病理损伤评分。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中鼠衣原体特异性IgG及其分型, 流式细胞术分析脾脏细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、IL-5、IL-13水平。留取小鼠粪便样本qPCR检测肠道细菌组成。应用SPSS26.0软件进行数据统计, 组间比较采用方差分析。结果鼻内感染鼠衣原体后两组小鼠体重从第2天开始下降, 对照组下降迅速并于第6天开始恢复, 抗生素组下降稍慢并于第8天开始恢复。抗生素组小鼠肺、心、肝、脾、肾中鼠衣原体载量高于对照组(均P<0.05), 而下消化道(空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠)鼠衣原体载量低于对照组(均P<0.01)。肺组织免疫荧光染色抗生素组鼠衣原体数为(8.94±4.13)IFU/低倍镜视野, 高于对照组的(3.73±1.49)IFU/低倍镜视野(F=7.06, P<0.05);炎症细胞浸润且病理损伤评分为(3.12±0.59)分, 也高于对照组的(1.80±0.69)分(F=10.47, P<0.05)。抗生素组血清鼠衣原体特异性IgG抗体水平低于对照组(F=5.95, P<0.05), 脾脏CD4+和CD8+T细胞的细胞因子TNF-α水平高于对照组(均P<0.05), 而IL-13水平低于对照组(均P<0.05)。抗生素处理后小鼠肠道细菌中拟杆菌比例显著降低(F=97.57, P<0.01), 而厚壁菌比例升高(F=154.51, P<0.01)。鼠衣原体感染后对照组拟杆菌、α-变形菌和产气荚膜梭菌比例降低(均P<0.05), 阿克曼菌比例升高(F=9.58, P<0.01);抗生素组拟杆菌和厚壁菌比例降低(F=4.85, P<0.05;F=25.35, P<0.01), 疣微菌和阿克曼菌比例升高(F=11.44、F=15.46, P<0.01)。结论抗生素导致小鼠肺等实质脏器鼠衣原体感染和肺组织病理损伤加重, 血清IgG减少、脾脏TNF-α增加和IL-13减少, 并引发肠道细菌组成变化。

关键词：抗生素肺炎鼠衣原体免疫反应肠道细菌

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HSV-1的microRNA-LAT基因修饰人骨髓间充质干细胞的体外研究

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科学通报 2008年第8期53卷 916-923页

作者：张晶李咏梅杜文才李光明李伟霞朱泽天津医科大学医学微生物学教研室天津市细胞与分子免疫学重点实验室天津300070

人骨髓间充质干细胞(HMSCs)具有强大的多向分化潜能,能为组织移植和体外基因传递载体.单纯疱疹病毒1型(HSV-1)不仅具有嗜神经元性,而且对HMSCs也具有很强亲嗜性,可作为HMSCs的基因修饰载体,主要通过其自身携带的microRNA-LAT发挥抑制凋... 详细信息

人骨髓间充质干细胞(HMSCs)具有强大的多向分化潜能,能为组织移植和体外基因传递载体.单纯疱疹病毒1型(HSV-1)不仅具有嗜神经元性,而且对HMSCs也具有很强亲嗜性,可作为HMSCs的基因修饰载体,主要通过其自身携带的microRNA-LAT发挥抑制凋亡作用.本研究构建针对microRNA-LAT的特异性茎环结构的逆转录引物,并用特殊探针的real-time RT-PCR方法检测HMSCs细胞质中成熟microRNA-LAT的相对定量水平.采用顺铂诱导对照法观察HSV-1对HMSCs的作用.通过观察HMSCs细胞形态和流式细胞仪检测细胞凋亡率,评测HSV-1引起的HMSCs抗凋亡功能;同时采用RNAi方法,化学合成TGF-β信号传导通路中SMAD3及TGF-β1靶点的siRNA和microRNA-LAT siRNA.从基因mRNA,microRNA和蛋白质水平,分别采用RT-PCR,real-time RT-PCR和Western blotting方法,检测HMSCs中microRNA-LAT和SMAD3及TGF-β1表达水平及其相互关系.结果表明,与单纯顺铂诱导对照组相比,HSV-1组和microRNA-LAT组HMSCs凋亡细胞数减少,细胞凋亡率降低(P<0.05),具有抗凋亡作用;在TGF-β信号传导通路中,HSV-1组和microRNA-LAT组TGF-β1与SMAD3靶点基因在mRNA水平及蛋白水平的表达量均观察到一定程度降低,且降低水平与采用RNAi法的SMAD3组和TGF-β1组相类似.Real-time RT-PCR结果显示,与空白对照组相比,顺铂组HMSCs细胞质中成熟microRNA-LAT mRNA水平有所降低(P<0.05).据此,HSV-1及其microRNA-LAT可敲除SMAD3和TGF-β1基因,下调TGF-β信号传导通路表达而对顺铂诱导的HMSCs凋亡有拮抗作用.本研究结果证明,HSV-1自身携带的microRNA-LAT对HMSCs细胞TGF-β信号传导通路中的SMAD3和TGF-β1具有精细调节和基因修饰作用,使HMSCs具有抗凋亡功能,并且HSV-1可作为针对HMSCs的特殊基因修饰候选载体.

关键词：人骨髓间充质干细胞单纯疱疹病毒 microRNA-LAT 基因调节抗凋亡

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