检索结果-内蒙古大学图书馆

中国临床药理学与治疗学 2008年第4期13卷 425-430页

作者：李越王琦林原成军李康李华大连医科大学药学院药理教研室大连医科大学医学微生物学教研室北京地坛医院传染病研究所北京100011

目的:构建丙型肝炎病毒核心抗原结合蛋白12(HCVCore binding protein,HCBP12)原核表达载体,在大肠埃希菌中进行表达、纯化HCBP12融合蛋白并制备兔抗HCBP12多克隆抗体。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以提取的HepG2细胞mRNA为模板... 详细信息

目的:构建丙型肝炎病毒核心抗原结合蛋白12(HCVCore binding protein,HCBP12)原核表达载体,在大肠埃希菌中进行表达、纯化HCBP12融合蛋白并制备兔抗HCBP12多克隆抗体。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以提取的HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得HCBP12基因片段,插入至原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a(+)-HCBP12,转化大肠埃希菌BL21,以异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,获得HCBP12融合蛋白的可诱导性表达,并通过SDS-PAGE电泳、Western Blot免疫印迹分析和证实融合蛋白表达的特异性。利用Ni+亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。纯化蛋白免疫新西兰兔,获得抗HCBP12多克隆抗体。以纯化HCBP12为抗原,利用Western blot和ELISA法对多克隆抗体进行特异性和效价检测。结果:HCBP12融合蛋白表达成功。SDS-PAGE分析表明其为包涵体表达。成功获得了融合蛋白纯品及兔抗HCBP12多克隆抗体。ELISA法表明多克隆抗体效价>1512000,Western blot检测证明多克隆抗体的特异性良好。结论:成功表达、纯化HCBP12融合蛋白,并获得高特异性、高效价兔抗HCBP12多克隆抗体,为研究HCBP12蛋白的生物学功能及丙肝的临床治疗提供了重要的实验工具。

关键词： HCBP12 融合蛋白蛋白纯化多克隆抗体

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人乳头瘤病毒HPV16L1-E7C重组腺病毒载体的构建

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山东医科大学学报 1999年第1期37卷 1-5页

作者：王芸于修平卞继锋赵蔚明董杰德贾继辉周亚滨栾怡齐眉陈华波山东医科大学医学微生物学教研室

采用ＰＣＲ方法，从ＨＰＶ１６型野毒株质粒中分离出ＨＰＶ１６Ｌ１（５５５９７１５１ｂｐ）、ＨＰＶ１６Ｅ７Ｃ（６８２８５５ｂｐ）基因片段，采用ＰＣＲ产物的ＴＡ克隆法，将Ｌ１、Ｅ７Ｃ分别插入ｐＧＥＭＴＥａｓｙ载体，... 详细信息

采用ＰＣＲ方法，从ＨＰＶ１６型野毒株质粒中分离出ＨＰＶ１６Ｌ１（５５５９７１５１ｂｐ）、ＨＰＶ１６Ｅ７Ｃ（６８２８５５ｂｐ）基因片段，采用ＰＣＲ产物的ＴＡ克隆法，将Ｌ１、Ｅ７Ｃ分别插入ｐＧＥＭＴＥａｓｙ载体，构建克隆载体ｐＴＡＬ１、ｐＴＡＥ７Ｃ。ＢａｍＨⅠ、ＨｉｎｄⅢ酶切ｐＴＡＥ７Ｃ，Ｂｇ１Ⅱ、ＣｌａⅠ酶切ｐＴＡＬ１，回收Ｌ１、Ｅ７Ｃ片段，利用ＢａｍＨⅠ、Ｂｇ１Ⅱ酶切产生相同粘末端的特点，产生Ｌ１Ｅ７Ｃ重组基因片段，将其克隆入质粒ｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔｓｋ，构建了ｐＢＳＬ１Ｅ７Ｃ重组克隆质粒，ＨｉｎｄⅢ、ＸｈｏⅠ酶切ｐＢＳＬ１Ｅ７Ｃ，释放Ｌ１Ｅ７Ｃ基因片段，定向重组入ｐＣＡ１４腺病毒载体，成功构建真核表达载体ＨＰＶ１６Ｌ１Ｅ７Ｃ重组腺病毒载体：ｐＣＡ１４Ｌ１Ｅ７Ｃ。

关键词：乳头瘤病毒 E7基因 L1基因腺病毒载体疫苗

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3种鸡蛋清过敏原提取方法的评价

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临床检验杂志 2010年第4期28卷 305-307页

作者：王萍陈寅穆晓燕孙静杨庆红李会强天津医科大学免疫学教研室天津300203 皖南医学院微生物学与免疫学教研室安徽芜湖241002 天津人民医院检验科天津300121

目的评价3种鸡蛋清过敏原提取方法,为临床检测sIgE提供最佳抗原提取方案。方法分别用丙酮沉淀法、硫酸铵盐析法、碳酸氢钠溶解法粗提鸡蛋清蛋白,用BCA法测定蛋白质浓度,并通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹方法分别鉴定... 详细信息

目的评价3种鸡蛋清过敏原提取方法,为临床检测sIgE提供最佳抗原提取方案。方法分别用丙酮沉淀法、硫酸铵盐析法、碳酸氢钠溶解法粗提鸡蛋清蛋白,用BCA法测定蛋白质浓度,并通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹方法分别鉴定分离蛋清的蛋白质组分和免疫活性,并进行20例鸡蛋过敏患者血清的分析。结果每100 ml蛋清用3种方法提取的蛋白质总量分别为1.5 g、1.8 g、5.2 g。免疫印迹法检测显示,蛋清与鸡蛋过敏患者的阳性血清有2条反应条带,分子量接近72 000和17 000。碳酸氢钠溶解法提取的蛋清蛋白质与20例阳性病人血清反应均出现2条反应带,其他方法提取的蛋白质在部分病例中未出现反应带。结论 3种提取方法各有特点,碳酸氢钠溶解法操作简单、收获量高,蛋白质组分完全,能够满足临床检测蛋清sIgE的实验要求。

关键词：鸡蛋过敏原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳免疫印迹

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反义硫代寡核苷酸抗乙肝病毒作用机理的探讨

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山东医科大学学报 1999年第1期37卷 6-9页

作者：丁培芳孙汶生马春红刘素侠曹英林张利宁宋静山东医科大学医学微生物学教研室

为了探讨反义寡核苷酸（ＡＳＯＮ）进行抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因治疗的可行性及ＡＳＯＮ抗ＨＢＶ作用机理，设计合成了针对ＨＢＶ不同基因位点的ＡＳＯＮ〔ＰｒｅＳ２翻译起始位点、ＨＢＶ调节成份顺向重复序列（ＤＲ２）和增强... 详细信息

为了探讨反义寡核苷酸（ＡＳＯＮ）进行抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因治疗的可行性及ＡＳＯＮ抗ＨＢＶ作用机理，设计合成了针对ＨＢＶ不同基因位点的ＡＳＯＮ〔ＰｒｅＳ２翻译起始位点、ＨＢＶ调节成份顺向重复序列（ＤＲ２）和增强子Ⅱ〕。以ＨｅｐＧ２·２·１５细胞为细胞模型，动态观察了这三种ＡＳＯＮ不同浓度不同时间的抗ＨＢＶ作用。结果表明：这三种ＡＳＯＮ对ＨＢｅＡｇ的抑制率分别为９１．１％、４４９％和５６４％，对ＨＢｓＡｇ的抑制率分别为６５７％、６０１％和５１５％，无关序列无明显抑制作用。应用反义寡核苷酸技术，为研制新一代抗ＨＢＶ基因治疗药物奠定了基础，探讨了特异性阻断ＨＢＶ基因表达的可能途径。

关键词：反义寡核苷酸类 ASON 乙型肝炎基因治疗

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GBV-C和HCV共同感染的研究

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浙江大学学报（医学版） 1999年第3期28卷 101-106页

作者：严杰 Dennin RH 浙江医科大学微生物学教研室德国吕贝克医科大学医学微生物学研究所

目的：了解ＧＢＶＣ和ＨＣＶ的共同感染率，及不同引物和自制ＤＩＧ标记探针检测ＧＢＶＣ的效果。方法：定量ＲＴＰＣＲ检测肝炎患者血清标本中的ＨＣＶ，ＲＴｎｅｓｔｅｄＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ阳性标本中的ＧＢＶＣ，分析... 详细信息

目的：了解ＧＢＶＣ和ＨＣＶ的共同感染率，及不同引物和自制ＤＩＧ标记探针检测ＧＢＶＣ的效果。方法：定量ＲＴＰＣＲ检测肝炎患者血清标本中的ＨＣＶ，ＲＴｎｅｓｔｅｄＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ阳性标本中的ＧＢＶＣ，分析部分标本扩增产物的核苷酸和氨基酸序列，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定ＧＢＶＣ扩增产物的特异性。结果：２１１例丙型肝炎病人血清标本中，ＧＢＶＣ５’ＮＣＲ和ＧＢＶＣＮＳ３区检出率分别为３１．８％和２２．８％，总阳性率为３５．１％。部分标本扩增产物的核苷酸序列分析证实，ＲＴｎｅｓｔｅｄＰＣＲ获得的检测结果可靠，但序列中存在较高频率的随机突变。自制的ＧＢＶＣ５’ＮＣＲ和ＮＳ３ＤＩＧ标记探针有较高的特异性，可用于检测相应的扩增产物。结论：ＧＢＶＣ５’ＮＣＲ引物的检测效果优于ＧＢＶＣＮＳ３，ＧＢＶＣ与ＨＣＶ有较高的共同感染率。

关键词： GBV-C感染 HCV感染共同感染率乙型肝炎病毒性肝炎

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苏木乙酸乙酯提取物对溃疡性结肠炎大鼠T淋巴细胞亚群的影响

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黑龙江畜牧兽医 2011年第1期 114-116页

作者：于艳房勇华北煤炭医学院秦皇岛分院免疫学教研室河北秦皇岛066000 哈尔滨医科大学医学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

为了观察苏木乙酸乙酯提取物对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠T淋巴细胞亚群的影响,试验采用兔黏膜免疫法造模,将Wistar大鼠随机分成正常对照组、模型组、苏木低剂量组、苏木中剂量组、苏木高剂量组、柳氮磺胺吡啶组(SASP组)... 详细信息

为了观察苏木乙酸乙酯提取物对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠T淋巴细胞亚群的影响,试验采用兔黏膜免疫法造模,将Wistar大鼠随机分成正常对照组、模型组、苏木低剂量组、苏木中剂量组、苏木高剂量组、柳氮磺胺吡啶组(SASP组),除正常对照组外,其余各组均造模。造模后各组分别以生理盐水、苏木乙酸乙酯提取物、SASP灌胃给药21 d,运用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的表达。结果表明:模型组CD4+及CD4+/CD8+升高,与正常对照组相比差异均有统计学意义;苏木高、中、低剂量组、SASP组CD4+及CD4+/CD8+降低,与模型组相比差异均有统计学意义;苏木高、中、低剂量组与SASP组相比无统计学差异。说明苏木乙酸乙酯提取物通过调节UC大鼠的细胞免疫功能发挥对UC大鼠的保护作用。

关键词：苏木乙酸乙酯提取物溃疡性结肠炎 T淋巴细胞亚群

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甲型N9亚型流感病毒神经氨酸酶基因进化分析

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病毒学报 2015年第2期31卷 139-144页

作者：万勇汤华天津医科大学生命科学中心实验室、基础医学院微生物学教研室天津300070 天津市和平区疾病预防控制中心天津300070

通过对甲型N9亚型流感病毒神经氨酸酶(NA)核苷酸进化趋势的研究,进而探寻2013年新型H7N9亚型禽流感病毒产生的根源。本次研究选取美国国立生物技术信息中心(NCBI)的甲型N9亚型流感病毒的NA序列,采用生物软件ClustalX 2.0和MEGA 6.0建立... 详细信息

通过对甲型N9亚型流感病毒神经氨酸酶(NA)核苷酸进化趋势的研究,进而探寻2013年新型H7N9亚型禽流感病毒产生的根源。本次研究选取美国国立生物技术信息中心(NCBI)的甲型N9亚型流感病毒的NA序列,采用生物软件ClustalX 2.0和MEGA 6.0建立进化树形图。对其欧亚分支,采用BEAST软件2.1.2和Datamonkey interface在线软件,计算和分析选择压力和进化速率。采用Bioedit软件对NA的氨基酸置换熵值计算并分析。系统进化树表明2013年新型H7N9亚型禽流感病毒可划分至现代欧亚分支之内,并且该分支的每位点每年核苷酸置换速率均值为3.8354×10-3,选择压力dN/dS均值为0.140413。16、19、40、53、81、84、112、256、335、359和401的氨基酸变异位点熵值>0.5。研究分析表明2013年新型H7N9亚型禽流感病毒的NA片段基因可能来自甲型N9亚型流感病毒逐步进化的结果,最早可追溯到1996年的A/duck/Siberia/700/1996(H11N9)流感毒株,新型H7N9亚型禽流感病毒来源不是来自外界环境压力引起突变的结果。

关键词：流感病毒神经氨酸酶基因进化

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环维黄杨星D对大鼠在体回肠的作用及其机制

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第四军医大学学报 2007年第23期28卷 2156-2159页

作者：张惠勤陈森洲刘晓杰陈爱芳侯娟崔志清桂林医学院药理教研室广西桂林541004 桂林医学院微生物学与免疫学教研室广西桂林541004 天津医科大学药理教研室天津300070

目的:探讨中药单体环维黄杨星D(CVB-D)对大鼠在体回肠的作用及其机制.方法:经十二指肠插管给予不同浓度的CVB-D,观察CVB-D对回肠收缩的影响,并分离培养大鼠回肠平滑肌细胞,应用钙敏感的荧光指示剂Fura-2,于荧光分光光度计上测定平滑肌... 详细信息

目的:探讨中药单体环维黄杨星D(CVB-D)对大鼠在体回肠的作用及其机制.方法:经十二指肠插管给予不同浓度的CVB-D,观察CVB-D对回肠收缩的影响,并分离培养大鼠回肠平滑肌细胞,应用钙敏感的荧光指示剂Fura-2,于荧光分光光度计上测定平滑肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i).结果:给药组在给予CVB-D110min以后大鼠回肠的收缩幅度增强,而预先给予钙通道阻滞药硝苯地平可拮抗其对回肠的收缩作用.当回肠平滑肌细胞悬液细胞外钙([Ca2+]o)为1.5mmol/L时,CVB-D可诱发静息期[Ca2+]i升高,而预先给予维拉帕米可以抑制[Ca2+]i的升高,抑制率为17.9%;当[Ca2+]o为零时,CVB-D仍可使[Ca2+]i升高,而普鲁卡因对[Ca2+]i升高的抑制率达29.2%.结论:大鼠回肠平滑肌受CVB-D刺激后,回肠的收缩幅度明显增加,作用机制可能与增加肠平滑肌细胞[Ca2+]i有关,而[Ca2+]i增加主要来源于细胞外Ca2+经电压依赖性钙离子通道内流及肌浆网雷诺定(ryanodine)敏感的贮存Ca2+释放.

关键词：环维黄杨星D 回肠平滑肌细胞 IP3受体

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医学微生物学实验教学中创新型人才培养探析

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中华医学教育杂志 2009年第3期29卷 121-123页

作者：李晓霞钟启平訾自强天津医科大学基础医学院医学微生物学教研室 300070

实验教学是培养学生创新意识、动手能力及科研能力的有效手段。近几年来，天津医科大学医学微生物学教研室在建设国家精品课程和国家双语教学示范课程的过程中，依托学科优势，实施实验教学体系改革，建立了创新型人才培养教学模式。本... 详细信息

实验教学是培养学生创新意识、动手能力及科研能力的有效手段。近几年来，天津医科大学医学微生物学教研室在建设国家精品课程和国家双语教学示范课程的过程中，依托学科优势，实施实验教学体系改革，建立了创新型人才培养教学模式。本文从优化教学方式、改革教学内容、加强实践能力、评价教学效果等方面，对医学微生物学实验教学进行了探讨与总结。

关键词：医学微生物学实验教学创新型人才培养

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大肠埃希菌脂多糖脂质体的制备及对肿瘤的抑制作用

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中华肿瘤防治杂志 2010年第12期17卷 916-918页

作者：李晓霞陆书华徐建设游洋钟启平天津医科大学基础医学院微生物学教研室天津300070 济宁医学院附属医院检验科山东济宁272000

目的:制备临床分离的多重耐药大肠埃希菌TH1、TH2、TH6、TH7和TH10的脂多糖(LPS)脂质体并观察其对肿瘤的抑制作用。方法:采用逆向蒸发法制备大肠埃希菌LPS脂质体,通过电镜、粒径测定仪,鲎试验法(LAL)测定LPS脂质体的包封率。LPS脂质体... 详细信息

目的:制备临床分离的多重耐药大肠埃希菌TH1、TH2、TH6、TH7和TH10的脂多糖(LPS)脂质体并观察其对肿瘤的抑制作用。方法:采用逆向蒸发法制备大肠埃希菌LPS脂质体,通过电镜、粒径测定仪,鲎试验法(LAL)测定LPS脂质体的包封率。LPS脂质体免疫小鼠后将单肿瘤细胞悬液分别接种于小鼠腹腔和腓肠肌内,观察LPS脂质体对腹水瘤和实体肿瘤的作用。结果:大肠埃希菌LPS脂质体均为乳白色悬液,镜下可见LPS脂质体均呈规则的球形,粒径分布均匀。LAL结果推算包封率为99.0%～99.9%。TH1、TH2、TH6、TH7和TH10LPS脂质体免疫小鼠与对照组相比,腹水量和细胞总数明显减少且体质量增加,P<0.05,小鼠腓肠肌瘤体的体积均小于对照组,P<0.05。结论:所制备的大肠埃希菌LPS脂质体对肿瘤具有抑制作用。

关键词：埃希氏菌属脂多糖类脂质体肿瘤

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