检索结果-内蒙古大学图书馆

中国食品学报 2020年第8期20卷 237-247页

作者：郑宇程程刘静刘小菁谢晓琳徐迎宋佳王敏食品营养与安全国家重点实验室工业发酵微生物教育部重点实验室天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心天津科技大学生物工程学院天津300457

我国传统食醋历史悠久,工艺独特。由于原料、工艺等方面的差异,所以山西老陈醋、镇江香醋和四川麸醋等传统固态发酵食醋的风味各具特色。本文分析3个地区的37种食醋样品,并结合原料、工艺等对其主要风味物质组成进行分析,再用单位酸度... 详细信息

我国传统食醋历史悠久,工艺独特。由于原料、工艺等方面的差异,所以山西老陈醋、镇江香醋和四川麸醋等传统固态发酵食醋的风味各具特色。本文分析3个地区的37种食醋样品,并结合原料、工艺等对其主要风味物质组成进行分析,再用单位酸度下主要风味物质的滋味活度值表征不同地区食醋的风味物质组成特征。结果表明,乙酸和乳酸是传统食醋中含量最高且风味贡献最大的主体有机酸,其含量占总有机酸含量的80%以上,其中四川麸醋的乙酸/乳酸值较小(1.19±0.15),山西老陈醋的乙酸/乳酸值较高(1.88±0.06);葡萄糖和甘露糖是传统食醋中含量较高的单糖;四川麸醋中单位酸度的氨基酸总浓度最高[(0.34±0.038)g/L/Titer],其中风味贡献最大的为组氨酸。筛选出单位酸度条件下的乙酸、乳酸、谷氨酸、组氨酸、丙氨酸、胱氨酸、甘露糖和乙酸/乳酸值8个指标作为主要特征,根据这8个指标,利用聚类分析方法可有效区分山西老陈醋、镇江香醋和四川麸醋3类固态发酵食醋,3者的类内相似性高于90%,类间相似性低于70%。

关键词：中国传统食醋固态发酵有机酸氨基酸糖类聚类分析

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透明颤菌胞外多糖发酵优化及抗肿瘤活性评价

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中国新药杂志 2020年第19期29卷 2229-2238页

作者：耿晓琦范冰倩丁钦然杜鹏郑宇宋佳天津科技大学生物工程学院天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心工业发酵微生物教育部重点实验室

目的:提高透明颤菌胞外多糖（extracellular polysaccharides of Vitreoscilla,VEPS）的产量,初步研究VEPS的抗肿瘤活性。方法:采用了单因素实验、Plackett-Burman实验、最陡爬坡路径实验、Box-Behnken实验设计以及噻唑蓝MTT法。结果:... 详细信息

目的:提高透明颤菌胞外多糖（extracellular polysaccharides of Vitreoscilla,VEPS）的产量,初步研究VEPS的抗肿瘤活性。方法:采用了单因素实验、Plackett-Burman实验、最陡爬坡路径实验、Box-Behnken实验设计以及噻唑蓝MTT法。结果:确定影响透明颤菌产胞外多糖的培养基的成分及最佳配比,并初步研究VEPS的抗肿瘤活性。优化得到的最佳培养基配方为蛋白胨5 g·L;、乳糖39 g·L;、KH;PO;0.17 g·L;、K;HPO;0.46 g·L;、（NH;）;SO;0.2 g·L;、复合盐溶液1 mL·L;(MgSO;19.5 g·L;,MnSO;5 g·L;,FeSO;1.4 g·L;,CaCl;0.05 g·L;),此时透明颤菌胞外多糖产量为（583.6±6.3） mg·L;,与初始培养基培养条件下的产量相比提高了364.3%,与预测值误差为1.3%。结论:体外抗肿瘤实验表明VEPS有良好的抗肿瘤活性。

关键词：透明颤菌胞外多糖培养基优化响应面设计抗肿瘤活

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高产聚苹果酸黑色素短梗霉CGMCC18996全基因组组装注释及关键蛋白分析

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食品科学 2023年第16期44卷 213-219页

作者：王舸楠李佳谦李雨桐陈世伟王淑贤赵廷彬贾士儒乔长晟天津科技大学生物工程学院天津300457 工业发酵微生物教育部重点实验室暨天津市工业微生物重点实验室天津300457 天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心天津300457 天津慧智百川生物工程有限公司天津300457

通过PacBio Sequel II及Illumina NovaSeq 6000测序平台对高产聚苹果酸(polymalic acid,PMLA)产黑色素短梗霉(Aureobasidium melanogenum)基因组进行测序,对测序得到的下机文件进行组装,并结合转录组数据进行基因结构注释。结果表明,产... 详细信息

通过PacBio Sequel II及Illumina NovaSeq 6000测序平台对高产聚苹果酸(polymalic acid,PMLA)产黑色素短梗霉(Aureobasidium melanogenum)基因组进行测序,对测序得到的下机文件进行组装,并结合转录组数据进行基因结构注释。结果表明,产黑色素短梗霉基因组中共有6202个基因,主要参与碳水化合物转运及代谢、氨基酸转运代谢、转录后修饰、RNA加工及修饰等生物活动。功能注释结果显示基因组中有大部分基因与过氧化物体有关,进而对菌株进行透射电镜拍摄,发现菌体中存在圆形的类过氧化物体(乙醛酸体)结构,提示菌体可通过乙醛酸循环途径生成苹果酸。最后,对可能与PMLA合成有关的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶激酶和苹果酸合成酶进行了蛋白质结构预测,发现这两种蛋白可能具备合成苹果酸的能力。本研究结果可为产黑色短梗霉菌株的PMLA代谢提供一定的参考,同时,组装的基因组文件已上传至相关数据库,为后续的菌株开发利用提供基础。

关键词：聚苹果酸产黑色素短梗霉基因组测序基因组组装蛋白质预测

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萜类合成酶定向进化的新思路

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微生物学报 2019年第4期59卷 591-600页

作者：胡智慧翁彦如谌柄旭于爱群肖冬光天津科技大学生物工程学院教育部工业发酵微生物重点实验室微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心天津300457

萜类化合物是天然产物中种类最多且主要存在于植物和微生物体内的一类化合物。随着越来越多具有应用价值的萜类化合物被挖掘,其应用前景引起了人们的关注,但由于含量低、提取成本高等缺点,因此制约了萜类化合物的广泛应用。合成生物学... 详细信息

萜类化合物是天然产物中种类最多且主要存在于植物和微生物体内的一类化合物。随着越来越多具有应用价值的萜类化合物被挖掘,其应用前景引起了人们的关注,但由于含量低、提取成本高等缺点,因此制约了萜类化合物的广泛应用。合成生物学的兴起,为异源合成具有应用价值的萜类化合物提供了新思路,使构建定向、高效的微生物细胞工厂成为现实。萜类合成酶常作为萜类化合物异源合成代谢调控的靶酶,但天然的萜类合成酶存在催化效率低、底物专一性差、立体/区域选择性差、稳定性差等问题,严重影响萜类化合物的产量。萜类合成酶的定向进化可以有效地解决上述问题,为实现微生物细胞工厂异源、高效合成萜类化合物奠定基础。本文综述了近年来酶的定向进化技术的最新进展及应用,并提出了萜类合成酶定向进化的策略。

关键词：萜类化合物萜类合成酶合成生物学定向进化

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定点饱和突变提高赭曲霉11α羟化酶的催化性能

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生物技术通报 2024年第1期40卷 322-331页

作者：史京辉陈文慧陆坤郑婷婷任志远鲍国庆王敏骆健美工业发酵微生物教育部重点实验室(天津科技大学) 天津市工业微生物重点实验室天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心天津科技大学生物工程学院天津300457

【目的】11α,17α-双羟基黄体酮是重要的甾体激素类药物中间体,应用价值大。赭曲霉(Aspergillus ochraceus)CICC 41473的11α羟化酶CYP68J5是转化17α-羟基黄体酮生成11α,17α-双羟基黄体酮的关键酶,但其催化性能有待于提升。【方法... 详细信息

【目的】11α,17α-双羟基黄体酮是重要的甾体激素类药物中间体,应用价值大。赭曲霉(Aspergillus ochraceus)CICC 41473的11α羟化酶CYP68J5是转化17α-羟基黄体酮生成11α,17α-双羟基黄体酮的关键酶,但其催化性能有待于提升。【方法】在课题组前期确定的关键氨基酸位点D118、F216和M488基础上,通过定点饱和突变和底物转化实验进行优良突变体的筛选;使用AutoDock进行酶与底物的分子对接,并通过Discovery Studio和Gromacs分别研究分子间相互作用力和分子动力学模拟。【结果】突变体D118V、F216W、M488L和M488W具有催化性能,其中,优良突变体D118V的活性最高,其在底物浓度0.5 g/L时,生产强度为431.66 mg/(L·d),较野生型提高了2.12倍,这可能是因为当118位的天冬氨酸突变为缬氨酸后,该位点与底物之间产生了新的疏水相互作用,增强了酶的底物结合口袋的疏水性。分子动力学模拟结果表明酶的整体构象更稳定,酶与底物的结合更紧密。【结论】通过定点饱和突变获得了催化性能显著提升的优良突变体D118V,研究结果为甾体11α羟化酶的改造提供了应用案例和理论指导。

关键词： 11α,17α-双羟基黄体酮 11α羟化酶定点饱和突变分子对接分子动力学模拟

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微生物酸胁迫耐受性能强化的研究进展

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生物技术通报 2023年第11期39卷 137-149页

作者：胡锦超沈文琦徐超业樊雅祺卢浩宇蒋雯杰李世龙晋洪晨骆健美王敏工业发酵微生物教育部重点实验室(天津科技大学)天津市工业微生物重点实验室天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心天津科技大学生物工程学院天津300457

微生物在发酵生产中常面临各种酸性物质的累积,由此造成的酸胁迫严重抑制了菌株的发酵活力和生产性能。因此,微生物在长期进化过程中,通过协调胞内的多个生理系统、代谢途径和调控网络形成了复杂的响应机制以应对低pH胁迫。工业微生物... 详细信息

微生物在发酵生产中常面临各种酸性物质的累积,由此造成的酸胁迫严重抑制了菌株的发酵活力和生产性能。因此,微生物在长期进化过程中,通过协调胞内的多个生理系统、代谢途径和调控网络形成了复杂的响应机制以应对低pH胁迫。工业微生物酸胁迫耐受性能的强化是提高其生产效率的关键手段。本文概述了近年来利用适应性实验室进化、预适应、基因组重排、基因工程、全局转录机制工程、系统生物学和合成生物学等方法提高微生物耐酸性能的研究进展,并讨论了相关研究面临的挑战和未来的发展方向。

关键词：微生物酸胁迫耐受性强化菌株改造基因线路

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赭曲霉11α羟化酶的克隆表达及关键氨基酸位点分析

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生物技术通报 2023年第4期39卷 114-123页

作者：艾露陈文慧史京辉任志远沈文琦杨嘉凝骆健美王敏工业发酵微生物教育部重点实验室(天津科技大学)、天津市工业微生物重点实验室、天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心、天津科技大学生物工程学院天津300457

11α,17α-双羟基黄体酮是甾体激素类药物的重要中间体,工业上主要利用霉菌对17α-羟基黄体酮的11α羟化反应制备。对赭曲霉的11α羟化酶及其关键氨基酸位点展开研究,为深入解析酶的催化机理提供基础数据。利用底物转化实验探究了10个... 详细信息

11α,17α-双羟基黄体酮是甾体激素类药物的重要中间体,工业上主要利用霉菌对17α-羟基黄体酮的11α羟化反应制备。对赭曲霉的11α羟化酶及其关键氨基酸位点展开研究,为深入解析酶的催化机理提供基础数据。利用底物转化实验探究了10个羟化反应常用霉菌对17α-羟基黄体酮的转化能力,考察了赭曲霉来源的11α羟化酶CYP68J5在不同表达系统中的活性,借助结构预测、分子对接和定点突变等手段对CYP68J5的关键氨基酸位点进行解析。结果表明,赭曲霉的转化能力最强,转化时间60 h的摩尔产率达到最大值,为78.55%;其羟化酶CYP68J5在酿酒酵母中的表达活性最高;位于底物结合口袋附近的D118、F216、M488是CYP68J5的关键氨基酸位点,这些位点在维持酶的结构稳定性上发挥重要作用,是后续分子改造的潜在重要靶点。

关键词： 11α 17α-双羟基黄体酮 17α-羟基黄体酮赭曲霉 11α羟化酶关键氨基酸位点

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植物乳杆菌CGMCC8198 β-羟脂酰-ACP脱水酶启动子的克隆及其冷激调节作用分析

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食品与发酵工业 2021年第15期47卷 9-14页

作者：周成慧赵阳王德行席茂盛罗学刚天津科技大学生物工程学院工业发酵微生物教育部重点实验室暨天津市工业微生物重点实验室天津300457 天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心天津300457

温度对乳酸菌储存和应用有重要影响,为挖掘乳酸菌温控启动子以及探索冷激反应的分子机制,对植物乳杆菌CGMCC8198经4和37℃处理后的转录组测序数据进行了分析,并对其中的差异基因β-羟脂酰-ACP脱水酶编码的fabZ基因表达情况进行验证,进... 详细信息

温度对乳酸菌储存和应用有重要影响,为挖掘乳酸菌温控启动子以及探索冷激反应的分子机制,对植物乳杆菌CGMCC8198经4和37℃处理后的转录组测序数据进行了分析,并对其中的差异基因β-羟脂酰-ACP脱水酶编码的fabZ基因表达情况进行验证,进一步应用MEGA 7.0软件分析其进化亲缘关系。再通过BPROM、BDGP、IPSW以及WebLogo 3.0对基因上游区域进行预测,最后克隆启动子,构建绿色荧光蛋白启动子报告分析质粒,并转化大肠杆菌进行低温诱导分析。结果发现fabZ基因低温刺激后上调,生物信息学结果也显示此基因与低温应答有关系;在基因上游500 bp区域有强启动子,且启动子中的-10区(TGTAAC)和-35区(TTACCG)6个核苷酸的位置与经典的-10区、-35区相似;大肠杆菌低温诱导实验表明在14℃刺激20、40、60 min后,含fabZ启动子菌株的荧光相对强度分别是37℃时的1.30、2.38和1.42倍。该研究发现植物乳杆菌的fabZ基因具有低温上调特性,为探究乳酸菌冷激应答与fabZ基因功能机理,以及构建乳酸菌低温诱导表达载体奠定一定的基础。

关键词：乳酸菌生物信息学分析启动子增强绿色荧光蛋白冷激应答

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一种海洋几丁质酶产生菌的筛选及酶学性质研究

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食品与发酵工业 2023年第13期49卷 40-48页

作者：严佳佳尤田张雪梅李欣格薛鲜丽王德培天津科技大学生物工程学院天津300457 教育部工业微生物重点实验室天津300457 天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心天津300457

海洋是自然界几丁质主要来源地,滋养出种类繁多可降解几丁质的微生物,因此从海洋中筛选产高活性几丁质酶的细菌,是获得高产几丁质酶微生物的有效途径。该文以胶体几丁质为唯一碳源,从渤海滩涂筛选到一株具有降解几丁质特性的细菌Y-8,对... 详细信息

海洋是自然界几丁质主要来源地,滋养出种类繁多可降解几丁质的微生物,因此从海洋中筛选产高活性几丁质酶的细菌,是获得高产几丁质酶微生物的有效途径。该文以胶体几丁质为唯一碳源,从渤海滩涂筛选到一株具有降解几丁质特性的细菌Y-8,对其进行鉴定并研究其几丁质酶酶学性质。Y-8菌株经分子鉴定为副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus),发酵上清液经SDS-PAGE及蛋白质谱分析,发现其存在2种几丁质酶,分别为Chi1几丁质外切酶,氨基酸残基数为848,理论分子质量为87.6 kDa;Chi2几丁质内切酶,氨基酸残基数为1054,理论分子质量为112.9 kDa。Y-8所产生的几丁质酶能够高效降解胶体几丁质,获得单一产物N-乙酰氨基葡萄糖,其最适反应温度为55℃,45℃保温1 h,仍能保持70%以上活性;最适pH为6.0,在pH 4.0~9.0、37℃保温1 h后相对酶活性保留55%以上,具有较好的稳定性。10 mmol/L的Mn 2+能使几丁质酶活性提高362%,而EDTA以及SDS、吐温-20、吐温-80对酶活力具有抑制作用。

关键词：菌株筛选副溶血性弧菌几丁质几丁质酶酶学性质

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过表达四碳二羧酸转运蛋白对黑曲霉发酵苹果酸的影响

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食品与发酵工业 2024年

作者：石冰冰吐鲁洪·托乎提韩天琦徐世杰薛鲜丽陈月王德培天津科技大学生物工程学院工业发酵微生物教育部重点实验室天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心

L-苹果酸作为一种重要的平台化学品，在食品、医药和农业等多个领域具有广泛应用，微生物发酵法生产L-苹果酸因其环境友好和可持续性受到重视。该研究旨在探究黑曲霉CGMCC 10142菌株中的5个四碳二羧酸转运蛋白DCT1～5对其L-苹果酸胞外... 详细信息

L-苹果酸作为一种重要的平台化学品，在食品、医药和农业等多个领域具有广泛应用，微生物发酵法生产L-苹果酸因其环境友好和可持续性受到重视。该研究旨在探究黑曲霉CGMCC 10142菌株中的5个四碳二羧酸转运蛋白DCT1～5对其L-苹果酸胞外分泌的影响，以黑曲霉CGMCC 10142为出发菌株，运用基因工程技术，构建过表达DCT1～5菌株C-pDCT1、C-pDCT2、C-pDCT3、C-pDCT4和C-pDCT5。通过摇瓶发酵，分析不同时间点L-苹果酸产量和关键酶转录水平，结果表明转化菌株较出发菌株的L-苹果酸产量均有显著提高，发酵60 h，C-pDCT2菌株的L-苹果酸产量最高，达14.48 g/L，较出发菌株提高了22.09%。dct2基因转录水平的显著增加，促进L-苹果酸的胞外转运能力，从而推动了糖酵解途径关键酶和柠檬酸合酶的表达，使乙醛酸途径关键酶，异柠檬酸裂解酶和苹果酸合酶编码基因的转录水平得到提升，推测增加的L-苹果酸产量是通过乙醛酸循环途径累积。该研究为进一步完善黑曲霉苹果酸的代谢途径优化奠定了基础。

关键词：黑曲霉 L-苹果酸四碳二羧酸转运蛋白转录分析

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