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中国防痨协会2023年第34届全国学术大会暨结核病诊防治新技术推广应用论坛

作者：柏银兰宁唤唤康健路延之韩文东孙志平张琳娜高晓菁康亚莉空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室复旦大学医学院三级生物安全防护实验室宁夏医科大学基础医学院

结核病(tuberculosis,TB)是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的、危害严重的慢性传染病。抗TB药物和疫苗研究均需要稳定、可靠的感染动物模型。大多数研究采用Mtb H37Rv毒株感染动物,但需要生物安全三级实验室的... 详细信息

结核病(tuberculosis,TB)是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的、危害严重的慢性传染病。抗TB药物和疫苗研究均需要稳定、可靠的感染动物模型。大多数研究采用Mtb H37Rv毒株感染动物,但需要生物安全三级实验室的实验条件,限制了模型的制备和使用。目的以慢速生长的Mtb标准毒株H37Rv和减毒株H37Ra经静脉感染24w建立小鼠慢性感染模型,比较不同菌株慢性感染小鼠模型诱导的免疫应答特点。方法分别以5×104CFU/只H37Rv、H37Ra经尾静脉注射感染BALB/c小鼠。感染24w后,分别检测Mtb感染诱导的特异抗原抗体水平、脾淋巴细胞Th1/Th2细胞因子分泌水平;制备病理切片观察脾、肺组织病理改变;平板计数法计脾、肺脏荷菌数CFUs。结果 2种Mtb菌株感染24w后,小鼠体重增长与正常对照组无差异;2组感染小鼠血清中Mtb及免疫优势抗原Ag85B特异性的抗体增加,且水平相当。感染24w后,感染小鼠脾细胞Th1/Th2细胞因子均增加,且H37Rv感染组高于H37Ra。感染组小鼠脾脏和肺脏均肿大,病理变化均为炎症性反应;平板计数法结果显示,H37Rv和H37Ra感染小鼠脏器荷菌数相当。结论成功建立了Mtb慢性感染小鼠模型,减毒株H37Ra感染小鼠后诱导的免疫应答水平及荷菌数与毒株H37Rv株相比均无显著差异,因此H37Ra慢性小鼠感染模型可用于抗TB疫苗和药物的初步评价研究。

关键词：结核分枝杆菌小鼠模型慢性感染

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医院获得性铜绿假单胞菌肺炎病人CypA及其受体CD147表达与意义

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青岛大学学报（医学版） 2023年第2期59卷 250-253页

作者：李永伟王嘉艺刘冬梅胡玥刘玉春刘心伟河南省中医院(河南中医药大学第二附属医院)医学检验中心河南省临床病原微生物检测工程技术研究中心郑州市病原微生物与细菌耐药重点实验室河南郑州450002 遵义医科大学基础医学院免疫教研室

目的探讨亲环素A(CypA)及其受体CD147在医院获得性铜绿假单胞菌(PA)肺炎病人中的表达及意义。方法收集2021年1—12月在河南省中医院住院的罹患PA肺炎和肺炎克雷伯菌(KP)肺炎病人的临床资料。将病人分为PA组和KP组,对两组EDTA抗凝血进行... 详细信息

目的探讨亲环素A(CypA)及其受体CD147在医院获得性铜绿假单胞菌(PA)肺炎病人中的表达及意义。方法收集2021年1—12月在河南省中医院住院的罹患PA肺炎和肺炎克雷伯菌(KP)肺炎病人的临床资料。将病人分为PA组和KP组,对两组EDTA抗凝血进行血常规、降钙素原和C-反应蛋白分析,并测定两组血清和支气管肺泡灌洗液中CypA和CD147水平。结果PA组住院时长和抗菌药物使用时长显著高于KP组(t=7.332、9.919,P<0.05),而两组发病年龄和性别差异无显著性(P>0.05)。与KP组相比,PA组白细胞总数、中性粒细胞和C-反应蛋白水平显著降低(t=4.438、3.982,Z=4.010,P<0.05),而两组降钙素原水平差异无显著性(P>0.05)。与KP组相比,PA组支气管肺泡灌洗液中CypA水平显著降低(Z=2.818,P<0.05),而两组血清CypA和CD147及支气管肺泡灌洗液CD147水平差异无显著性(P>0.05)。结论PA肺炎病人支气管肺泡灌洗液中CypA相对低表达,与该菌感染慢性化存在关联,可能是其实现免疫逃逸的重要机制。

关键词：医疗相关肺炎铜绿假单胞菌亲环素A basigin

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弓形虫Ⅰ、Ⅱ型虫株ROP16基因重组表达载体的构建及其对A549细胞STAT3/6磷酸化水平的影响

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中国病原生物学杂志 2018年第3期13卷 239-243页

作者：赵志军董辉苏雅静钟利王云杰汪涛宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学研究生学院宁夏银川750004 九江学院基础医学院病原生物学教研室江西九江332000

目的探索弓形虫Ⅰ、Ⅱ型虫株ROP16在A549细胞中的功能。方法提取弓形虫Ⅰ(RH)、Ⅱ(ME49)型虫株总RNA,PCR扩增ROP16基因全长序列后克隆至真核表达载体pEGFP-N1,转染A549细胞,采用Western blot方法检测细胞中STAT3/6磷酸水平,采用实时荧... 详细信息

目的探索弓形虫Ⅰ、Ⅱ型虫株ROP16在A549细胞中的功能。方法提取弓形虫Ⅰ(RH)、Ⅱ(ME49)型虫株总RNA,PCR扩增ROP16基因全长序列后克隆至真核表达载体pEGFP-N1,转染A549细胞,采用Western blot方法检测细胞中STAT3/6磷酸水平,采用实时荧光定量PCR检测IL-12、iNOS、ARG1mRNA表达水平。结果 PCR扩增Ⅰ、Ⅱ型虫株ROP16基因全长为2148bp。双酶切和测序验证重组载体构建正确,pEGFP-N1-RH ROP16和pEGFP-N1-ME49ROP16过表达载体转染A549细胞后ROP16mRNA表达水平较未转染组上调(P<0.05,F=824.184,270.904),pEGFP-N1-ME49ROP16转染A549细胞p-STAT3/6表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05,F=1.051,1.203),IL-12、iNOS mRNA与对照组表比呈高表达(P<0.01,F=157.705,173.623)。pEGFP-N1-RH ROP16转染组相比A549细胞对照组p-STAT3/6表达水平上调(P<0.05,F=121.227,68.324),IL-12mRNA表达下调(P<0.01,F=186.397),ARG1mRNA表达上调(P<0.01,F=126.236)。结论弓形虫Ⅰ型RH株ROP16蛋白具有激活p-STAT3/6作用,且能使ARG1 mRNA的表达上调,IL-12 mRNA的表达下调,而弓形虫Ⅱ型ME49虫株ROP16蛋白则无激活p-STAT3/6作用,但能使IL-12mRNA和iNOS mRNA的表达上调。

关键词：弓形虫 ROP16 A549人肺腺癌细胞重组质粒

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重型肝炎CD4～+及CD8～+淋巴细胞亚群变化及对疾病预后的影响

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养生保健指南 2019年第14期 2-2页

作者：李晓茹白婧韩梅宁夏医科大学附属石嘴山市第二人民医院检验科宁夏石嘴山753000 宁夏医科大学基础医学院免疫与病原微生物教研室宁夏银川750001

目的:探究重型肝炎CD4～+及CD8～+淋巴细胞亚群变化及对疾病预后的影响.方法:选取我院2017年2月～2018年5月期间接收的29例重症肝炎患者为观察组,以33例健康体检者为对照组,检测两组的淋巴细胞亚群并进行对比分析.结果:观察组CD4+、CD8... 详细信息

目的:探究重型肝炎CD4～+及CD8～+淋巴细胞亚群变化及对疾病预后的影响.方法:选取我院2017年2月～2018年5月期间接收的29例重症肝炎患者为观察组,以33例健康体检者为对照组,检测两组的淋巴细胞亚群并进行对比分析.结果:观察组CD4+、CD8+低于对照组,CD4+/CD8+值高于对照组,组间存在统计学差异(P<0.05);观察组患者经治疗后,死亡9例,存活20例,其中死亡病例CD4+、CD8+低于存活病例,其差异有统计学意义(P<0.05);死亡病例和存活病例的CD4+/CD8+值差异无统计学意义(P>0.05).结论:在重型肝炎患者中,其淋巴细胞亚群变化具有一定的临床价值,尤其是CD4+和CD8+对病情治疗及预后效果具有很大的参考意义.

关键词：重型肝炎 CD4+ CD8+ 淋巴细胞亚群

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SLE患者中ENA抗体检验和血清体液免疫检验的应用研究

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母婴世界 2019年第4期 67-67页

作者：李晓茹白婧韩梅宁夏医科大学附属石嘴山市第二人民医院检验科宁夏石嘴山753000 宁夏医科大学基础医学院免疫与病原微生物教研室宁夏银川750001

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者中ENA抗体检验和血清体液免疫检验的应用价值.方法:在医院2016年5月至2018年8月期间诊治的SLE患者中选取47例作研究组样本,同期选取47例健康体检者作为对照组样本,对2组受检者进行ENA抗体检验和血清体... 详细信息

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者中ENA抗体检验和血清体液免疫检验的应用价值.方法:在医院2016年5月至2018年8月期间诊治的SLE患者中选取47例作研究组样本,同期选取47例健康体检者作为对照组样本,对2组受检者进行ENA抗体检验和血清体液免疫检验,并对比两组病例的检验结果差异.结果:①研究组受检者的六项抗体指标阳性率均高于对照组(均P<0.05);②研究组受检者的血清体液免疫指标IgA、IgG、IgM水平均高于对照组(均P<0.05).结论:ENA抗体检验和血清体液免疫检验在SLE诊断中的临床价值均较高,推荐应用.

关键词： SLE ENA抗体检验血清体液免疫检验健康体检人群

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流感病毒灭活疫苗可溶性微针制备及评价

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免疫学杂志 2017年第6期33卷 477-481,487页

作者：李明辉邱玉琴杨国忠刘思齐邢丽张良艳周娅杨鹏辉高云华王希良宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学教研室银川750004 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国科学院理化技术研究所北京100190

目的初步研究负载流感全病毒灭活疫苗可溶性微针体外评价方法和经皮免疫效果。方法将流感全病毒灭活疫苗溶液与微针基质材料混匀干燥后复溶,体外血凝试验检测疫苗血凝素活性,透射电镜和动态光散射分析疫苗微针复溶后流感全病毒疫苗变化... 详细信息

目的初步研究负载流感全病毒灭活疫苗可溶性微针体外评价方法和经皮免疫效果。方法将流感全病毒灭活疫苗溶液与微针基质材料混匀干燥后复溶,体外血凝试验检测疫苗血凝素活性,透射电镜和动态光散射分析疫苗微针复溶后流感全病毒疫苗变化情况;选择筛选的材料羧甲基纤维素和硫酸软骨素作为主要基质与疫苗混匀制备微针溶液,滴加到微针制作模具上,抽真空使疫苗基质溶液填充针体,室温干燥、脱模,贴于猪皮肤检测微针硬度,将Cy7标记流感疫苗可溶性微针贴于小鼠腹部后活体成像检测流感疫苗皮内存留时间,动物免疫试验第2次免疫后14 d检测血抑效价。结果通过血凝试验筛选出硫酸软骨素和羧甲基纤维素为主要基质,贴片疫苗血凝活性为96%和86%,显著高于其它3种材料贴片疫苗活性;透射电镜显示PBS对照组中流感灭活病毒颗粒多呈单个散在分布,罕见聚团,2种贴片复溶后流感灭活病毒多呈聚团,罕见单个病毒颗粒;动态光散射分析显示疫苗贴片复溶后病毒颗粒粒径明显增大,高于对照组中病毒粒径;皮肤组织病理显示2种疫苗微针均可刺穿猪皮肤;活体成像显示疫苗微针刺穿小鼠皮肤并溶解于皮内,疫苗存留时间较肌肉长;Balb/c小鼠免疫后分离血清,血凝抑制试验显示2种微针均产生血抑效价且硫酸软骨素微针血抑效价高于羧甲基纤维素微针。结论可溶性疫苗微针可刺穿皮肤溶于皮内产生免疫应答,为微针疫苗的研究提供了思路。

关键词：微针可溶性流感疫苗

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慢性乙型肝炎患者免疫球蛋白检验的价值研究

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健康必读 2018年第34期 15-15页

作者：李晓茹白婧韩梅宁夏医科大学附属石嘴山市第二人民医院宁夏石嘴山 753000 宁夏医科大学基础医学院免疫与病原微生物教研室宁夏银川 750001

目的:探究慢性乙型肝炎患者免疫球蛋白检验意义.方法:选取我院2017年7月至2 018年11月收治的重型慢性乙型肝炎26例、一般慢性乙型肝炎患者38例,并随机选取同期健康体检患者30例,均进行血清免疫球蛋白检测,并在对全体慢性乙型肝炎患者开... 详细信息

目的:探究慢性乙型肝炎患者免疫球蛋白检验意义.方法:选取我院2017年7月至2 018年11月收治的重型慢性乙型肝炎26例、一般慢性乙型肝炎患者38例,并随机选取同期健康体检患者30例,均进行血清免疫球蛋白检测,并在对全体慢性乙型肝炎患者开展相关治疗,根据治疗效果比较患者免疫球蛋白水平.结果:健康者、一般慢性乙型肝炎患者、重型慢性乙型肝炎患者IgA、IgG、IgM水平依次升高,且组间数据比较差异均具鲜明性(P＜0.05);经治疗后,病情改善患者以上指标与恶化组相比,差异具鲜明性(P＜0.05).结论:免疫球蛋白含量,可作为慢性乙型肝炎严重程度及预后情况的判断标准.

关键词：慢性乙型肝炎免疫球蛋白诊断

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大鼠巨噬细胞感染弓形虫的基因表达谱分析

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中国人兽共患病学报 2016年第4期32卷 371-375页

作者：赵志军董辉汪涛郭雅琪钟利王姝殷国民林茹宁夏医科大学总医院医学实验中心银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室银川750004 九江学院基础医学院病原生物学教研室九江332000 宁夏医科大学检验学院银川750004

目的分析大鼠腹腔和肺泡巨噬细胞感染弓形虫RH株的基因表达谱差异。方法以弓形虫RH株速殖子感染SD大鼠腹腔和肺泡巨噬细胞0h、6h后提取细胞总RNA,采用NimbleGen 12x135K微阵列基因表达分析芯片检测差异表达基因,并对部分表达变化的基因... 详细信息

目的分析大鼠腹腔和肺泡巨噬细胞感染弓形虫RH株的基因表达谱差异。方法以弓形虫RH株速殖子感染SD大鼠腹腔和肺泡巨噬细胞0h、6h后提取细胞总RNA,采用NimbleGen 12x135K微阵列基因表达分析芯片检测差异表达基因,并对部分表达变化的基因进行Real time PCR验证。结果表达分析芯片涵盖大鼠26 419个基因,对差异表达基因(Fold Change≥4.0)进行聚类分析显示,经弓形虫RH株作用6h和0h的RNA表达谱相比,大鼠肺泡巨噬细胞上调的基因有49个(主要包括Zfp90,Map4k4,Mrpl42等),下调的基因有130个(主要包括Pitx1,Chpt1,Chd6等)。大鼠腹腔巨噬细胞上调的基因有136个(主要包括Map2k3,Il17b,Phka2等),下调的272个(主要包括Tlr2,Tgfb2,Wnt2等)。GO、Pathway分析差异表达的基因,大鼠腹腔巨噬细胞能够引发更多和弓形虫有关的信号通路变化,其肺泡巨噬细胞则不能引起这一效应。Real time PCR和基因芯片检测结果一致。结论大鼠腹腔和肺泡巨噬细胞感染弓形虫不同的表现型,可能和其基因表达差异引起的信号通路变化有关。

关键词：大鼠巨噬细胞弓形虫基因表达谱

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肺泡上皮细胞与巨噬细胞互作抗分枝杆菌感染的免疫机制研究

肺泡上皮细胞与巨噬细胞互作抗分枝杆菌感染的免疫机制研究

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2016第十一届全国免疫学学术大会

作者：梁锦屏张艳丽摆茹王大军王浩王丽宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医学免疫学系宁夏回族自治区临床病原微生物重点实验室宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医学免疫学系

研究背景：结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,***)引起的结核病(tuberculosis,TB)是导致成人死亡的第二大传染病.结核分枝杆菌经呼吸道感染机体后,与机体免疫系统相互作用、相互调控决定着结核病的发展与转归.***气溶胶感染小... 详细信息

研究背景：结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,***)引起的结核病(tuberculosis,TB)是导致成人死亡的第二大传染病.结核分枝杆菌经呼吸道感染机体后,与机体免疫系统相互作用、相互调控决定着结核病的发展与转归.***气溶胶感染小鼠模型证实,除了巨噬细胞和树突状细胞外,还可以感染中性粒细胞、非吞噬细胞如肺泡上皮细胞等,尚不完全清楚分枝杆菌与这些细胞的相互作用及致病机理.其中肺泡上皮细胞和巨噬细胞是***感染早期免疫应答的重要物质基础,除了具有机械屏障作用外,也可表达多种跨膜和胞内模式识别受体,不但作为病原体的重要识别系统激活天然免疫产生炎症因子,同时还作为前哨细胞向抗原递呈细胞发出预警信号,从而启动随后的特异性免疫应答.

关键词：结核分枝杆菌肺泡上皮细胞肺泡巨噬细胞 NOD2

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肺泡上皮细胞与巨噬细胞互作抗分枝杆菌感染的免疫机制研究

肺泡上皮细胞与巨噬细胞互作抗分枝杆菌感染的免疫机制研究

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第十一届全国免疫学学术大会

作者：梁锦屏张艳丽摆茹王大军王浩王丽宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医学免疫学系宁夏回族自治区临床病原微生物重点实验室

研究背景:结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,***)引起的结核病(tuberculosis,TB)是导致成人死亡的第二大传染病。结核分枝杆菌经呼吸道感染机体后,与机体免疫系统相互作用、相互调控决定着结核病的发展与转归。***气溶胶感染小... 详细信息

研究背景:结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,***)引起的结核病(tuberculosis,TB)是导致成人死亡的第二大传染病。结核分枝杆菌经呼吸道感染机体后,与机体免疫系统相互作用、相互调控决定着结核病的发展与转归。***气溶胶感染小鼠模型证实,除了巨噬细胞和树突状细胞外,还可以感染中性粒细胞、非吞噬细胞如肺泡上皮细胞等,尚不完全清楚分枝杆菌与这些细胞的相互作用及致病机理。其中肺泡上皮细胞和巨噬细胞是***感染早期免疫应答的重要物质基础,除了具有机械屏障作用外,也可表达多种跨膜和胞内模式识别受体,不但作为病原体的重要识别系统激活天然免疫产生炎症因子,同时还作为前哨细胞向抗原递呈细胞发出预警信号,从而启动随后的特异性免疫应答。研究目的:阐明肺泡上皮细胞与巨噬细胞在体外模型中的交互抗菌免疫机制,为揭示***致病的分子机制和临床免疫治疗及设计新型疫苗提供新的思路和靶标。研究方法:选用人肺泡上皮细胞肺腺癌A549细胞系与人单核细胞系U937细胞,建立体外气液相模型,分别或同时感染人型分枝杆菌弱毒株H37Ra,利用实时荧光定量PCR、Western-blot和ELISA检测细胞中NOD2信号分子及下游炎症因子的表达。研究结果:单独感染毒株的上皮细胞分泌细胞因子水平IL-2,TNF-a降低,其炎症反应被抑制;当下层巨噬细胞感染后炎症因子升高时,上层培养的上皮细胞炎症反应也随之升高。进一步检测了上皮细胞中NOD2的mRNA与蛋白水平,发现单独感染的上皮细胞中NOD2的基因与蛋白表达水平高于巨噬细胞,其中下层巨噬细胞单独感染H37Ra后,可诱导上皮细胞中NOD2表达升高。两种细胞同时感染后,上皮细胞中NOD2表达最高。结论:人肺泡上皮细胞与单核巨噬细胞在感染人结核分枝杆菌H37Ra菌株后,存在以NOD2介导的协同调控抗菌感染免疫机制。

关键词：结核分枝杆菌肺泡上皮细胞肺泡巨噬细胞 NOD2

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