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第十一届全国免疫学学术大会

作者：梁锦屏张艳丽摆茹王大军王浩王丽宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医学免疫学系宁夏回族自治区临床病原微生物重点实验室

研究背景:结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,***)引起的结核病(tuberculosis,TB)是导致成人死亡的第二大传染病。结核分枝杆菌经呼吸道感染机体后,与机体免疫系统相互作用、相互调控决定着结核病的发展与转归。***气溶胶感染小... 详细信息

研究背景:结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,***)引起的结核病(tuberculosis,TB)是导致成人死亡的第二大传染病。结核分枝杆菌经呼吸道感染机体后,与机体免疫系统相互作用、相互调控决定着结核病的发展与转归。***气溶胶感染小鼠模型证实,除了巨噬细胞和树突状细胞外,还可以感染中性粒细胞、非吞噬细胞如肺泡上皮细胞等,尚不完全清楚分枝杆菌与这些细胞的相互作用及致病机理。其中肺泡上皮细胞和巨噬细胞是***感染早期免疫应答的重要物质基础,除了具有机械屏障作用外,也可表达多种跨膜和胞内模式识别受体,不但作为病原体的重要识别系统激活天然免疫产生炎症因子,同时还作为前哨细胞向抗原递呈细胞发出预警信号,从而启动随后的特异性免疫应答。研究目的:阐明肺泡上皮细胞与巨噬细胞在体外模型中的交互抗菌免疫机制,为揭示***致病的分子机制和临床免疫治疗及设计新型疫苗提供新的思路和靶标。研究方法:选用人肺泡上皮细胞肺腺癌A549细胞系与人单核细胞系U937细胞,建立体外气液相模型,分别或同时感染人型分枝杆菌弱毒株H37Ra,利用实时荧光定量PCR、Western-blot和ELISA检测细胞中NOD2信号分子及下游炎症因子的表达。研究结果:单独感染毒株的上皮细胞分泌细胞因子水平IL-2,TNF-a降低,其炎症反应被抑制;当下层巨噬细胞感染后炎症因子升高时,上层培养的上皮细胞炎症反应也随之升高。进一步检测了上皮细胞中NOD2的mRNA与蛋白水平,发现单独感染的上皮细胞中NOD2的基因与蛋白表达水平高于巨噬细胞,其中下层巨噬细胞单独感染H37Ra后,可诱导上皮细胞中NOD2表达升高。两种细胞同时感染后,上皮细胞中NOD2表达最高。结论:人肺泡上皮细胞与单核巨噬细胞在感染人结核分枝杆菌H37Ra菌株后,存在以NOD2介导的协同调控抗菌感染免疫机制。

关键词：结核分枝杆菌肺泡上皮细胞肺泡巨噬细胞 NOD2

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呼吸道合胞病毒的分离鉴定及其致病力的初步评价

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免疫学杂志 2015年第4期31卷 322-325页

作者：朱萍谷宏静谢正德周娅杨鹏辉王希良宁夏医科大学基础医学院病原生物学教研室银川750004 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北京儿童医院病毒研究室 100045 解放军第302医院肝胆外科北京100039

目的分离鉴定临床呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV),评价其致病力,为疫苗评价及致病机制的研究提供实验材料。方法收集临床呼吸道感染重症患儿的鼻咽分泌物样本进行RT-PCR初步鉴定,通过病毒培养,空斑纯化,电镜观察及病... 详细信息

目的分离鉴定临床呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV),评价其致病力,为疫苗评价及致病机制的研究提供实验材料。方法收集临床呼吸道感染重症患儿的鼻咽分泌物样本进行RT-PCR初步鉴定,通过病毒培养,空斑纯化,电镜观察及病毒滴度测定,筛选出1株呼吸道合胞病毒候选株,经全基因组测序后命名为BJ016。选用14日龄C57乳鼠,每组26只,采用BJ016为实验组,PBS为对照组,分别对小鼠滴鼻感染,30μl/只。连续14日监测2组小鼠体质量变化及死亡率,肺组织的病毒载量、湿干比,HE染色观察肺病理变化并计数炎性细胞总量,同时采用CBA测定血清中细胞因子的变化。结果 100份临床呼吸道感染重症患儿鼻咽分泌物样本中,RT-PCR鉴定为RSV A亚型阳性共21例,经病毒分离培养、空斑纯化、电镜观察及RT-PCR鉴定后得到16株RSV临床分离株,通过TCID50测定病毒滴度筛选出1株滴度为106.5TCID50/ml的候选株,基因组序列分析显示其为NA1基因型,命名为BJ016。BJ016感染14日龄C57乳鼠后造成肺损伤,在第5日达到发病高峰时测定病载、湿干比、病理检测并计数炎性细胞,实验组较对照组具有明显统计学差异,血清中MCP-1、IL-6、G-CSF及MIP-1α均显著性升高。结论成功分离出1株能致死14日龄C57乳鼠的RSV病毒株并初步评价了其致病力,为疫苗评价及RSV致病机制的研究提供了良好的实验材料。

关键词： RSV 病毒分离 C57乳鼠致病力

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无针皮内注射免疫甲型H7N9流感裂解疫苗的免疫效果评价

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免疫学杂志 2015年第5期31卷 386-390页

作者：任天宇张肖邢丽张良艳于姝孙溢张爱军周娅王希良宁夏医科大学基础医学院病原生物学和免疫学教研室银川750004 军事医学科学院微生物流行病研究所病源微生物生物安全实验室北京100071 江苏丞宇米特医疗器械有限公司泰州225300 北京老年医院内分泌科 100095

目的开展无针皮内注射免疫甲型H7N9裂解流感疫苗的安全性及有效性评价,为无针注射免疫疫苗提供实验依据。方法采用无针皮内注射H7N9裂解流感疫苗免疫小鼠和大鼠,并用有针肌肉注射免疫做对照,通过活体成像技术观察疫苗的分布情况,并采用... 详细信息

目的开展无针皮内注射免疫甲型H7N9裂解流感疫苗的安全性及有效性评价,为无针注射免疫疫苗提供实验依据。方法采用无针皮内注射H7N9裂解流感疫苗免疫小鼠和大鼠,并用有针肌肉注射免疫做对照,通过活体成像技术观察疫苗的分布情况,并采用血疑抑制试验测定疫苗免疫后的血清中和抗体效价、滴鼻攻毒评价免疫保护及DRAIZE评分与病理检测注射损伤情况。结果无针皮内注射免疫疫苗在真皮内呈池状分布,且疫苗驻留时间明显长于在肌肉层的驻留时间。无针皮内免疫3μg抗原的甲型H7N9流感裂解疫苗可起到肌肉免疫15μg抗原的同样血清学保护水平及免疫保护效果。结论无针皮内注射免疫甲型H7N9裂解流感疫苗安全、有效,且抗原用量是有针肌肉注射免疫抗原用量的1/5量,将为流感疫苗免疫防控提供新的技术策略。

关键词：无针皮内免疫 H7N9流感裂解疫苗免疫有效性安全性

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幼年大鼠脑膜炎脑水肿模型中水通道蛋白4的表达变化及内化

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第三军医大学学报 2014年第16期36卷 1647-1650页

作者：黄娟陆蔚天杨致邦徐进甘胜伟邱国平孙善全重庆医科大学基础医学院重庆400016 重庆医科大学人体解剖学教研室重庆400016 重庆医科大学病原微生物与免疫学实验室重庆400016

目的观察在幼年大鼠脑膜炎脑水肿模型中水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)的表达变化及内化现象,探讨AQP4及其内化在脑膜炎脑水肿发生中的作用。方法采用幼鼠延髓小脑池注入B族溶血性链球菌建立细菌性脑膜炎模型,采用干湿质量法、伊文思蓝... 详细信息

目的观察在幼年大鼠脑膜炎脑水肿模型中水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)的表达变化及内化现象,探讨AQP4及其内化在脑膜炎脑水肿发生中的作用。方法采用幼鼠延髓小脑池注入B族溶血性链球菌建立细菌性脑膜炎模型,采用干湿质量法、伊文思蓝含量测定法、免疫印迹法分别检测脑膜炎幼年大鼠脑含水量、血脑屏障通透性以及AQP4的表达水平,运用免疫荧光双标的方法检测AQP4分别与早期内涵体标记物EEA1和晚期内涵体标记物MPR的共表达。结果 1实验组脑含水量(81.4±2.3)%较对照组(77.3±1.6)%明显增加(P<0.05);2实验组AQP4表达水平(57.41±7.00)%较对照组(44.50±7.45)%明显增加(P<0.05);3实验组依文思蓝含量(4.35±0.21)μg/g较对照组(4.27±0.33)μg/g无统计学差异(P>0.05);4脑膜炎模型中,AQP4分别与EEA1和MPR共表达。结论在幼年大鼠脑膜炎脑水肿模型中,脑内AQP4表达上调,同时存在AQP4内化的现象。

关键词：脑膜炎脑水肿水通道蛋白4 内化内涵体

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嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗候选株构建及免疫效果研究

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免疫学杂志 2014年第5期30卷 375-381页

作者：刘娜卞成蓉陈锐段跃强邢丽周娅王希良杨鹏辉宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学教研室银川750004 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军第302医院医疗科北京100039 解放军第302医院临床检验中心北京100039

目的构建、拯救以PR8流感病毒为载体嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的疫苗候选株,对其免疫原性及免疫保护性进行评价。方法应用反向遗传学技术,以流感病毒PR8为载体,将HAdV六邻体蛋白抗原表位的基因插入流感病毒非结构蛋白NS基因,构建重组... 详细信息

目的构建、拯救以PR8流感病毒为载体嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的疫苗候选株,对其免疫原性及免疫保护性进行评价。方法应用反向遗传学技术,以流感病毒PR8为载体,将HAdV六邻体蛋白抗原表位的基因插入流感病毒非结构蛋白NS基因,构建重组质粒NS1-Hexon,将重组质粒与PR8流感病毒其他7个基因组质粒共转染COS-1/MDCK共培养细胞,成功拯救嵌合HAdV六邻体抗原表位重组疫苗候选株,命名为rFLU/HAdV/Hexon,通过HA、RT-PCR、IFA、Western blotting和电镜等方法对rFLU/HAdV/Hexon进行鉴定。rFLU/HAdV/Hexon经鸡胚培养、浓缩纯化后滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价小鼠机体产生的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫应答,进一步采用PR8流感病毒和HAdV-3病毒攻击小鼠评价其免疫保护性。结果成功拯救出基于PR8流感病毒为载体嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗候选株。rFLU/HAdV/Hexon疫苗株形态符合流感病毒典型特征,能够诱导小鼠机体产生高效价的针对PR8和HAdV-3的特异性抗体,肺鼻灌洗液可检测到高效价的sIgA抗体;攻毒实验结果显示,rFLU/HAdV/Hexon疫苗株免疫小鼠可明显减轻感染症状、有效降低肺鼻的病毒载量、显著改善肺组织的病理病变情况。结论研制的嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗株是有发展前景的腺病毒候选疫苗株,为腺病毒疫苗的研究提供了新思路。

关键词：腺病毒 PR8流感病毒载体六邻体蛋白抗原表位免疫应答免疫保护

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甲型H7N9流感裂解疫苗制备及免疫保护效果的评价

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免疫学杂志 2014年第7期30卷 608-611页

作者：陈锐段跃强赵忠鹏张良艳邢丽刘娜张立周娅王希良杨鹏辉宁夏医科大学基础医学院病原生物学和免疫学教研室银川750004 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军第302医院医疗部北京100039 总参警卫局卫生保健处北京100071

目的构建、拯救重配甲型H7N9流感病毒疫苗候选株并制备甲型H7N9流感裂解疫苗,动物实验评价甲型H7N9流感裂解疫苗的免疫原性及免疫保护性效果。方法采用反向遗传学技术将A/Anhui/1/2013(H7N9)疫苗株的HA、NA基因和A/Puerto Rico/8/34(PR8... 详细信息

目的构建、拯救重配甲型H7N9流感病毒疫苗候选株并制备甲型H7N9流感裂解疫苗,动物实验评价甲型H7N9流感裂解疫苗的免疫原性及免疫保护性效果。方法采用反向遗传学技术将A/Anhui/1/2013(H7N9)疫苗株的HA、NA基因和A/Puerto Rico/8/34(PR8)毒株的PB2、PB1、PA、NP、M、NS基因进行重配,转染细胞后筛选拯救甲型H7N9流感病毒疫苗候选株,制备rgPR8-H7N9流感裂解疫苗抗原。腹腔注射免疫Balb/c小鼠,检测血清IgG、IgG1、IgG2a、HI效价,进一步用野生株攻毒,评价rgPR8-H7N9流感裂解疫苗的免疫保护效果。结果成功拯救甲型H7N9流感病毒疫苗候选株rgPR8-H7N9。制备的重配甲型H7N9流感裂解疫苗对小鼠产生较高的HI抗体效价。IgG1/IgG2a亚型检测结果表明小鼠体内以诱导体液免疫为主。攻毒实验显示甲型H7N9流感裂解疫苗能够有效降低肺部的病毒载量,肺组织病变显著减轻、体质量下降后趋于稳定,疫苗剂量达到15μg即可全部存活。A/Anhui/1/2013(H7N9)野生株流感病毒攻毒,甲型H7N9流感裂解疫苗能够达到保护小鼠效果。结论成功拯救重配甲型H7N9流感病毒疫苗候选株rgPR8-H7N9,制备的甲型H7N9流感裂解疫苗具有较好的免疫原性及免疫保护性,为H7N9流感裂解疫苗的研发及进入临床研究提供了实验依据。

关键词：反向遗传学 H7N9流感病毒裂解疫苗免疫保护性

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重组EV71和CVA16型手足口病双价VLP疫苗构建及免疫保护效果评价

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免疫学杂志 2014年第6期30卷 469-473页

作者：袁媛刘鑫周娅段跃强杨晓岚张立赵忠鹏王希良宁夏医科大学基础医学院病原生物学和免疫学教研室银川750004 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军第302医院临床检验中心北京100039 总参警卫局卫生保健处北京100017

目的运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达EV71和CVA16的病毒样颗粒，并对纯化的重组EV71、CVA16双价病毒样颗粒疫苗进行免疫效果评价。方法构建重组杆状病毒Bacmid-P1-3CD，转染Sf9昆虫细胞，纯化EV71、CVA16的病毒样颗粒并检测其形态... 详细信息

目的运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达EV71和CVA16的病毒样颗粒，并对纯化的重组EV71、CVA16双价病毒样颗粒疫苗进行免疫效果评价。方法构建重组杆状病毒Bacmid-P1-3CD，转染Sf9昆虫细胞，纯化EV71、CVA16的病毒样颗粒并检测其形态和生物特性；通过EV71、CVA16的病毒样颗粒免疫ICR雌鼠后，以EV71、CVA16强毒株腹腔攻击5日龄乳鼠，对重组EV71、CVA16型双价VLP免疫保护性进行评价。结果利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功构建并表达EV71和CVA16病毒样颗粒，颗粒大小约为23-30nm，存在Mr约39000VP1特异性蛋白表达。重组EV71、CVA16双价VLP疫苗免疫接种能够诱导小鼠机体产生高效价的特异性抗体（EV71中和抗体效价为1：960，CVA16中和抗体效价为1：624）并发挥优于单价VLP疫苗的有效免疫保护效果。结论重组EV71、CVA16型双价VLP疫苗免疫原性和保护性显著高于单价疫苗，为手足口病疫苗的研发提供了新的思路及实验基础。。

关键词： EV71 CVA16 双价疫苗病毒样颗粒

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新型水包油佐剂SP01的安全性评价

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中国生物制品学杂志 2014年第7期27卷 885-889页

作者：姜佳琪于姝邢丽段跃强孟和宝力高牛燕王希良额尔敦内蒙古医科大学基础医学院免疫学教研室内蒙古呼和浩特010021 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军第253医院免疫中心内蒙古呼和浩特010021

目的通过动物实验评价新型水包油佐剂SP01的安全性。方法通过昆明小鼠安全药理试验、昆明小鼠急性毒性试验、Hartley豚鼠过敏反应试验、溶血性试验、日本大白兔局部刺激性试验、SD大鼠长期毒性试验及BALB/c小鼠致突变、致畸、致瘤试验,... 详细信息

目的通过动物实验评价新型水包油佐剂SP01的安全性。方法通过昆明小鼠安全药理试验、昆明小鼠急性毒性试验、Hartley豚鼠过敏反应试验、溶血性试验、日本大白兔局部刺激性试验、SD大鼠长期毒性试验及BALB/c小鼠致突变、致畸、致瘤试验,对水包油佐剂SP01的安全性进行全面评价。结果水包油佐剂SP01对昆明小鼠的自主活动无明显影响;急性毒性试验中可观察到水包油佐剂SP01组昆明小鼠给药后无死亡,体重明显增加,且各组织器官无病理变化;水包油佐剂SP01注射豚鼠未见任何过敏反应及症状;溶血性试验结果显示,水包油佐剂SP01在体外对兔红细胞无溶血作用,不引起红细胞凝聚;将水包油佐剂SP01经日本大白兔耳缘静脉注射连续刺激5 d后,佐剂组与氯化钠注射液组家兔耳缘静脉给药部位肉眼观察均无明显变化,病理切片显微镜观察均未见炎性浸润、血管周围组织出血及坏死等刺激现象;将水包油佐剂SP01经肌肉连续注射大鼠1个月,佐剂组大鼠体重明显增加,精神状态、食欲、睡眠情况与氯化钠注射液组无明显差异,停药后连续观察3个月,大鼠精神状态、食欲、睡眠情况均良好;将水包油佐剂SP01连续经BALB/c小鼠腿部肌肉注射14 d后,其肌肉组织病理切片显示,与氯化钠注射液组小鼠的肌肉组织无明显差异。结论水包油佐剂SP01对实验动物无急性毒性、过敏反应、局部性刺激、长期毒性及致突变、致畸、致瘤作用,是安全、可应用的油类佐剂,本研究为该系列水包油佐剂的临床应用提供了实验依据。

关键词：水包油佐剂动物实验安全性评价

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重组嵌合表达G蛋白中和表位的流感病毒载体RSV疫苗构建和免疫保护效果

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免疫学杂志 2013年第5期29卷 369-375页

作者：卞成蓉刘娜邢丽段跃强王希良周娅杨鹏辉宁夏医科大学基础医学院病原生物学和免疫学教研室银川750004 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军第302医院临床检验中心北京100039

目的构建和拯救重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株,并通过动物实验评价其免疫原性及免疫保护性。方法利用流感病毒反向遗传学技术,以流感病毒为载体,将RSV保护性抗原G蛋白表位的基因插入到流感病毒非结构蛋白NS1基因,拯救... 详细信息

目的构建和拯救重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株,并通过动物实验评价其免疫原性及免疫保护性。方法利用流感病毒反向遗传学技术,以流感病毒为载体,将RSV保护性抗原G蛋白表位的基因插入到流感病毒非结构蛋白NS1基因,拯救重组嵌合表达G蛋白中和表位的流感病毒载体RSV疫苗株rFLU/RSV/G,进而对rFLU/RSV/G的特性进行全面鉴定。rFLU/RSV/G滴鼻免疫Balb/c小鼠,通过检测中和抗体效价、血清抗体(IgG、IgG1、IgG2a)和黏膜抗体sIgA效价以及细胞因子(IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ和TNF-α)的分泌量来评价机体产生的体液、细胞和黏膜免疫反应。攻毒实验评价rFLU/RSV/G的免疫保护性,观测小鼠的体质量变化、病毒载量、存活情况以及肺病理变化。结果成功拯救出重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株rFLU/RSV/G。重组病毒rFLU/RSV/G与流感病毒颗粒形态和大小分布相符,并且表达针对RSV的特异性蛋白NS1-G。动物实验表明rFLU/RSV/G诱导小鼠机体产生较高的中和抗体、RSV特异性的Th1型细胞免疫反应以及黏膜免疫反应。攻毒实验显示rFLU/RSV/G对RSV A2株和PR8流感病毒野毒株具有一定免疫保护效果,能够有效降低肺鼻的病毒载量,肺组织病变情况明显减轻,且无小鼠死亡。结论重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株rFLU/RSV/G是一个有前景的RSV候选疫苗株,具有较高的免疫原性和免疫保护性,值得在棉鼠和猴子进行进一步研究。

关键词：流感病毒 RSV G蛋白表位病毒载体

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