检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2022年第11期49卷 2087-2098页

作者：赵晓初罗兆莉杨菲李纤首都医科大学基础医学院北京100069 首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学学系北京100069 首都医科大学基础医学院神经生物学学系北京100069

细胞转分化是通过基因重编程,诱导某种细胞直接转变为另一种细胞,而不经过其他中间状态的过程。神经元丢失是神经系统疾病中常见的病理过程,神经元丢失通常不可逆转,且造成运动、感觉、精神症状。而由于人中枢神经系统神经元再生能力十... 详细信息

细胞转分化是通过基因重编程,诱导某种细胞直接转变为另一种细胞,而不经过其他中间状态的过程。神经元丢失是神经系统疾病中常见的病理过程,神经元丢失通常不可逆转,且造成运动、感觉、精神症状。而由于人中枢神经系统神经元再生能力十分有限,仅有部分区域在神经损伤的刺激下能够新生少量神经元。在这样的背景下,将神经胶质细胞(星形胶质细胞、小胶质细胞和少突胶质前体细胞)在神经元丢失处原位转分化为功能性神经元并整合进神经网络的治疗性策略,受到了广泛关注。近年来,学者通过在神经胶质细胞中将神经元命运决定的重要转录因子过表达或敲减等手段,成功实现其向神经元的转分化,取得多项重大进展,但由于目前研究手段的局限性、判断标准的分歧性、结果和结论间较难自洽等问题,部分研究成果的结论仍存在很大的争议。本文系统地回顾了神经胶质细胞转分化为神经元的发现与发展历程,总结了神经胶质细胞转分化为神经元的重要发现,并进行讨论与展望。

关键词：神经胶质细胞神经元转分化神经再生神经修复

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犬博卡病毒结构基因VP2多克隆抗体的制备与应用

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第2期32卷 253-257页

作者：张茜闫琰马婧李建宁张薇黄菱孙玉宁宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系宁夏银川750004

目的构建犬博卡病毒(CBV)结构蛋白VP2的兔抗VP2多克隆抗体并进行特异性鉴定。方法应用PCR方法扩增获得CBV结构蛋白VP2 C末端区域300个氨基酸所对应的基因片段。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体p ET-32a(+),构建重组质粒p ET-32... 详细信息

目的构建犬博卡病毒(CBV)结构蛋白VP2的兔抗VP2多克隆抗体并进行特异性鉴定。方法应用PCR方法扩增获得CBV结构蛋白VP2 C末端区域300个氨基酸所对应的基因片段。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体p ET-32a(+),构建重组质粒p ET-32a(+)-VP2,转化至*** BL21中,异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物SDS-PAGE分析鉴定;纯化融合蛋白后免疫新西兰家兔,制备多克隆抗体,检测抗体效价及特异性。结果通过酶切和测序证实成功构建原核表达载体p ET-32a(+)-VP2,转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;制备的多克隆抗体经ELISA检测效价达到1∶6 400 000,Western blot法及免疫荧光染色鉴定抗体的特异性。结论成功制备了抗CBV结构蛋白VP2的多克隆抗体。

关键词：犬博卡病毒(CBV) 结构基因VP2 多克隆抗体

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成果导向理念下创新融合项目式团队学习的医学分子生物学课程思政教学模式探索

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第11期40卷 1636-1648页

作者：王雅梅孔璐张静周妍卢雅彬牛静秦琼首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学学系北京100069

结合专业课特点全面推进课程思政建设,提升课程思政教育的实效性,是新时期高等教育改革的重点。分子生物学作为高等院校医学专业学生重要的基础课程,与基础医学各学科和临床医学之间有着密切的联系,是一门发展迅速的前沿学科,具备作为... 详细信息

结合专业课特点全面推进课程思政建设,提升课程思政教育的实效性,是新时期高等教育改革的重点。分子生物学作为高等院校医学专业学生重要的基础课程,与基础医学各学科和临床医学之间有着密切的联系,是一门发展迅速的前沿学科,具备作为课程思政载体的天然优势。本研究以立德树人为成果导向(OBE),创新性融合基于项目的团队学习(PBGS)教学模式,应用于医学分子生物学课程思政教学中,二者的有机融合为提升课程思政教学的实效性和科学性做了有益的探索。以学生为中心,通过完善教学目标,创新教学设计,深入挖掘思政案例,引入多种教学方法、强化教学实践管理和优化评价模式,构建线上线下相结合的医学分子生物学课程思政教学体系。经过2年的教学实践,该教学模式有效提升了医学分子生物学课程的教学效果,实践组学生的学习成绩有明显提高,师生评价优秀。课前及课后的调查问卷结果显示,80%~90%的学生认为通过学习拓展了视野,增长了学识,50%~70%的学生认为提升了学习能力和创新意识,坚定了医学专业学习的自信。通过强化学生科研创新能力的培养,指导学生参加学科竞赛获多项国家级奖。证明该教学模式拓展了课程思政教育的广度和深度,将科学精神、创新能力、道德修养、人文素质的培育贯穿在教学过程中,为培养德才兼备和高素质的医学人才提供了经验。

关键词：成果导向理念融合基于项目的团队学习教学模式医学分子生物学课程思政

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沉默信息调节因子1慢病毒表达载体的构建及其在视网膜神经节细胞中的表达

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中华眼底病杂志 2016年第1期32卷 66-69页

作者：姚青张继荣杨怡张茜李建宁孙玉宁宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系银川750004

目的构建沉默信息调节因子1（sirtl）过表达慢病毒载体，观察其在体外培养的视网膜神经节细胞（RGC）中的表达。方法构建大鼠sirtl cDNA的过表达慢病毒载体，采用PCR鉴定其是否构建成功。同时将其与OenBank 上 sirtl cDNA标准序列进行... 详细信息

目的构建沉默信息调节因子1（sirtl）过表达慢病毒载体，观察其在体外培养的视网膜神经节细胞（RGC）中的表达。方法构建大鼠sirtl cDNA的过表达慢病毒载体，采用PCR鉴定其是否构建成功。同时将其与OenBank 上 sirtl cDNA标准序列进行对比分析。将鉴定后的慢病毒重组表达质粒pLV5 sirtl与包装质粒共转染293T细胞，制备携带siftl的慢病毒pLV5-sirtl。体外培养Sprague-Dawley大鼠的RGC，应用pLV5-sirtI感染细胞设为sirtl过表达慢病毒组，同时设未感染组和空载体感染组。采用荧光显微镜观察细胞感染效率，实时PCR和蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测sirtlmRNA和蛋白表达水平。结果PCR鉴定结果显示，在1680碱基对处有扩增条带，表达的DNA条带与sirtl目的片段大小一致。与GenBank上sirtlcDNA标准序列进行对比分析，测序结果显示其含有与设计相同的靶序列。荧光显微镜观察发现，空载体感染组和sirtl过表达慢病毒组均可看到绿色荧光，感染效率在90％以上。实时PCR检测结果显示，sirtl过表达慢病毒组sirtlmRNA表达水平较未感染组、空载体感染组均明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。Westernblot检测结果显示，sirtl过表达慢病毒组sirtl蛋白表达水平较未感染组、空载体感染组均明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论成功构建的大鼠sirtl过表达慢病毒载体能够在体外有效感染大鼠RGC，提高sirtl在RGC中的表达水平。

关键词：沉默信息调节蛋白质类酿酒酵母视网膜神经节细胞慢病毒感染细胞培养的

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新型冠状病毒感染的免疫记忆性

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第7期42卷 527-534页

作者：李一唯刘歌赵巍王浩宁夏医科大学基础医学院宁夏常见传染病防治重点实验室银川750004 宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系银川750004

COVID-19已成为严重的全球公共卫生事件,截至2022年6月25日,全球有超过5.4亿人确诊感染,累计死亡人数超过632万。了解COVID-19患者恢复后是否能获得持久免疫保护力是疫苗制备、疾病防控及判断疫情走向的关键。持久免疫保护力的产生核心... 详细信息

COVID-19已成为严重的全球公共卫生事件,截至2022年6月25日,全球有超过5.4亿人确诊感染,累计死亡人数超过632万。了解COVID-19患者恢复后是否能获得持久免疫保护力是疫苗制备、疾病防控及判断疫情走向的关键。持久免疫保护力的产生核心是免疫记忆性,即针对新型冠状病毒产生有效免疫记忆。本文将围绕新型冠状病毒感染免疫记忆的生成与维持进行综述。

关键词：新型冠状病毒 COVID-19 感染免疫记忆性

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犬博卡病毒非结构基因NP1多克隆抗体的制备与鉴定

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吉林大学学报（医学版） 2015年第4期41卷 864-869,I0006页

作者：闫琰张茜马婧李建宁张薇孙玉宁宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系宁夏银川750004

目的:制备犬博卡病毒(MVC)的非结构基因NP1的兔多克隆抗体,并进行特异性鉴定。方法:以MVC的感染性克隆pI-MVC为模板,构建NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,转化大肠杆菌BL21后,在异巯基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG)诱导下,表达谷胱甘... 详细信息

目的:制备犬博卡病毒(MVC)的非结构基因NP1的兔多克隆抗体,并进行特异性鉴定。方法:以MVC的感染性克隆pI-MVC为模板,构建NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,转化大肠杆菌BL21后,在异巯基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG)诱导下,表达谷胱甘肽S-转移酶(GST)-NP1蛋白。用亲和层析纯化的融合蛋白免疫大白兔,制备NP1抗血清并用ELISA法测定抗血清效价。采用Western blotting和免疫荧光法检测NP1抗血清的特性。结果:成功构建MVC NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物经亲和层析纯化后得到高纯度的NP1融合蛋白,以其免疫大白兔获得NP1多抗血清,ELISA法检测效价达到1∶400 000。Western blotting法及免疫荧光检测,所得抗血清具有较高的效价及特异性。结论:本研究利用原核表达的MVC GST-NP1融合蛋白制备的NP1抗血清效价高、特异性高,为进一步深入研究NP1在MVC感染及致病分子机制中的作用奠定了基础。

关键词：犬博卡病毒 NP1基因多克隆抗体

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铜绿假单胞菌PAO1中c-di-GMP代谢相关基因PA2072的生物学分析

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微生物学通报 2023年第5期50卷 2113-2126页

作者：席那仁海娥张小敏郭嘉义黄卫东宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系宁夏银川750000 宁夏医科大学科技中心宁夏银川750000

【背景】铜绿假单胞菌为革兰氏阴性杆菌,是医院感染的常见条件致病菌之一。广泛存在于细菌中的第二信使分子环鸟苷二磷酸(cyclic-di-guanosine monophosphate,c-di-GMP)对细菌生理生化功能具有重要的调节作用。铜绿假单胞菌PAO1中存在参... 详细信息

【背景】铜绿假单胞菌为革兰氏阴性杆菌,是医院感染的常见条件致病菌之一。广泛存在于细菌中的第二信使分子环鸟苷二磷酸(cyclic-di-guanosine monophosphate,c-di-GMP)对细菌生理生化功能具有重要的调节作用。铜绿假单胞菌PAO1中存在参与c-di-GMP代谢的基因PA2072。【目的】探讨铜绿假单胞菌PAO1中c-di-GMP代谢相关基因PA2072的生物学功能。【方法】运用PCR及分子克隆技术构建PA2072基因及各结构域的自杀载体,运用基因敲除方法获取PA2072基因的3个突变株;利用泳动性(swimming)、蜂群运动(swarming)、蹭行运动(twitching)和生物膜定量实验对细菌进行初步的表型分析,进一步通过刚果红染色法对菌株进行分析。【结果】成功构建PA2072基因敲除突变菌株及回补菌株;生物膜定量结果发现基因PA2072的敲除会影响细菌生物膜的形成,PA2072蛋白的不同结构域对生物膜的合成也起到了重要作用;细菌运动能力检测中发现PA2072相关基因的敲除对细菌运动能力也有一定影响。刚果红平板检测结果显示,与野生型PAO1菌株相比,PA2072敲除菌株菌苔呈红色,提示其胞内c-di-GMP含量升高。【结论】基因PA2072的敲除影响了铜绿假单胞菌胞的表型,可能由于铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP水平变化引起,该结果为进一步研究基因PA2072的生物学功能奠定了基础。

关键词：铜绿假单胞菌PAO1 环鸟苷二磷酸 PA2072敲除突变菌株

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高糖对人晶状体上皮细胞沉默信号调节蛋白6(SIRT6)表达的影响

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眼科新进展 2020年第10期40卷 920-924页

作者：蔡莲君李欢徐丽珲郭玉芦晓红罗明秀张茜姚青宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系宁夏回族自治区银川市750004

目的观察高浓度葡萄糖对人晶状体上皮细胞(SRA01/04)活性及沉默信号调节蛋白6(SIRT6)表达的影响。方法将SRA01/04细胞在不同葡萄糖浓度(5.5 mmol·L^-1、15.5 mmol·L^-1、25.5 mmol·L^-1、35.5 mmol·L^-1、45.5 mmol... 详细信息

目的观察高浓度葡萄糖对人晶状体上皮细胞(SRA01/04)活性及沉默信号调节蛋白6(SIRT6)表达的影响。方法将SRA01/04细胞在不同葡萄糖浓度(5.5 mmol·L^-1、15.5 mmol·L^-1、25.5 mmol·L^-1、35.5 mmol·L^-1、45.5 mmol·L^-1、55.5 mmol·L^-1、75.5 mmol·L^-1)培养基中培养48 h后,用光镜观察SRA01/04细胞形态;CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性;Western blot检测各组细胞SIRT6蛋白的表达水平。然后将SRA01/04细胞用55.5 mmol·L^-1葡萄糖干预,培养不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h)后,Western blot检测不同时间SRA01/04细胞SIRT6蛋白表达水平。免疫荧光技术检测对照组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖)和高糖组(55.5 mmol·L^-1葡萄糖)细胞的SIRT6蛋白表达情况。结果随着葡萄糖浓度增加,SRA01/04细胞的数量逐渐降低。CCK-8检测结果显示,与5.5 mmol·L^-1葡萄糖组相比,随着葡萄糖浓度增加,SRA01/04细胞的活性逐渐降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,SRA01/04细胞的SIRT6蛋白表达与葡萄糖呈浓度和时间依赖性,45.5 mmol·L^-1、55.5 mmol·L^-1、75.5 mmol·L^-1葡萄糖组与5.5 mmol·L^-1葡萄糖组比较,以及24 h组、48 h组和72 h组与0 h组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。细胞免疫荧光结果显示,SRA01/04细胞中的SIRT6蛋白主要在细胞核表达,高糖组SRA01/04细胞中SIRT6蛋白表达较对照组显著降低(P<0.05),且高糖组细胞核出现明显的核固缩和核碎裂现象。结论高浓度葡萄糖可以降低SRA01/04细胞的增殖活性,降低SIRT6蛋白的表达水平。

关键词：高浓度葡萄糖晶状体上皮细胞沉默信号调节蛋白6

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葡萄糖转运蛋白GLUT1/4和Sirtuins在糖尿病大鼠视网膜中的表达

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眼科新进展 2024年第4期44卷 270-274页

作者：白文帆郭玉伏等弟罗明秀芦晓红姚青宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系宁夏回族自治区银川市750004

目的探讨葡萄糖转运蛋白GLUT1/4和Sirtuins在糖尿病大鼠视网膜中的表达。方法取8周龄健康雄性SD大鼠20只随机分为正常对照组和糖尿病组,糖尿病组大鼠按照60 mg·kg^(-1)的剂量采用一次性腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型,正常对... 详细信息

目的探讨葡萄糖转运蛋白GLUT1/4和Sirtuins在糖尿病大鼠视网膜中的表达。方法取8周龄健康雄性SD大鼠20只随机分为正常对照组和糖尿病组,糖尿病组大鼠按照60 mg·kg^(-1)的剂量采用一次性腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型,正常对照组大鼠注射等量的溶剂。每隔2周检测大鼠体重和血糖。造模后12周,应用彩色多普勒超声检测大鼠视网膜中央动脉(CRA)血流参数;使用戊巴比妥钠麻醉大鼠后摘取眼球,采用HE染色观察大鼠视网膜组织的病理变化,免疫组织化学染色、Western blot和qRT-PCR分别检测大鼠视网膜中GLUT1/4和Sirtuins mRNA的表达情况。结果造模后12周,与正常对照组相比,糖尿病组大鼠CRA的收缩期峰值流速和舒张末期流速均显著降低(均为P<0.001);阻力指数和搏动指数无明显改变(均为P>0.05)。造模后12周HE染色结果显示,正常对照组大鼠视网膜组织各层结构清晰,细胞排列紧密、规则,未发现明显的病理改变;糖尿病组大鼠视网膜组织厚度变薄,各层界限模糊,结构紊乱,细胞数量减少。造模后12周免疫组织化学染色结果显示,在大鼠视网膜中,GLUT1主要位于视网膜色素上皮层,GLUT4位于神经节细胞层、内丛状层及光感受器层;Western blot检测结果显示,糖尿病组大鼠视网膜中GLUT1及GLUT4蛋白相对表达量均低于正常对照组(均为P<0.05),糖尿病组大鼠视网膜中SIRT1-SIRT7蛋白相对表达量均低于正常对照组(均为P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,与正常对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜中的SIRT1-SIRT7 mRNA相对表达量均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。结论糖尿病可引起大鼠视网膜组织中GLUT1/4和Sirtuins的表达发生改变,GLUT1/4和Sirtuins可能参与了DR的发生与发展。

关键词：糖尿病视网膜病变葡萄糖转运蛋白 Sirtuins 视网膜中央动脉

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铜绿假单胞菌PAO1中环二鸟苷单磷酸代谢蛋白PA0285感应环境因素的研究

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中国病原生物学杂志 2024年第6期19卷 653-658页

作者：海娥张慧敏高晓菁张小敏郭嘉义黄卫东宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系宁夏银川750000 宁夏疾病预防控制中心宁夏医科大学科技中心

目的分析铜绿假单胞菌中环二鸟苷单磷酸(c-di-GMP)代谢蛋白PA0285感应环境因素的作用,探讨其参与c-di-GMP信号转导的机制。方法通过PCR技术对pa0285转座子突变菌株进行遗传背景确认;以铜绿假单胞菌野生型PAO1和2株PA0285插入失活突变菌... 详细信息

目的分析铜绿假单胞菌中环二鸟苷单磷酸(c-di-GMP)代谢蛋白PA0285感应环境因素的作用,探讨其参与c-di-GMP信号转导的机制。方法通过PCR技术对pa0285转座子突变菌株进行遗传背景确认;以铜绿假单胞菌野生型PAO1和2株PA0285插入失活突变菌株为研究对象,选定24种化合物,利用绿色荧光蛋白(GFP)报告基因融合法及刚果红结合试验,检测细菌胞内c-di-GMP水平;通过生物膜定量试验分析特定环境因素对细菌生物膜形成的影响;使用CAS平板法进一步分析PA0285在特定环境条件下对细菌分泌嗜铁素的调控。结果细菌基因组PCR结果表明转座子插入致pa0285基因失活;GFP报告基因融合法、刚果红结合试验及生物膜定量检测结果显示,与野生型PAO1相比,突变菌Δpa0285胞内c-di-GMP水平升高(F=88.92,P<0.01),生物膜合成增加(F=15.82,P<0.01);将异亮氨酸(Ile)或缬氨酸(Val)添加至培养基时,突变菌Δpa0285胞内c-di-GMP水平与PAO1相比降低(F=15.17,60.17,P<0.01),生物膜合成与PAO1比较差异无统计学意义(F=3.462,0.5018,P=0.10001,0.6287)。CAS定量检测结果显示,与野生型PAO1相比,突变菌Δpa0285分泌嗜铁素含量下降(F=58.22,P<0.01);CAS平板观察结果显示,无外源化合物添加时,突变菌Δpa0285菌落的螯合圈与野生型PAO1相比偏小,将精氨酸(Arg)、MgCl2、CaCl2添加至培养基时,突变菌Δpa0285的菌落螯合圈与PAO1相比大小相近;将Val和Ile添加至培养基时,突变菌Δpa0285的菌落螯合圈与野生型PAO1相比偏大。结论铜绿假单胞菌PAO1中代谢蛋白PA0285具有磷酸二酯酶(PDE)的活性;PA0285通过调控胞内c-di-GMP水平,进而影响生物膜合成及嗜铁素的分泌,以感应环境中氨基酸Val和Ile。

关键词：铜绿假单胞菌PAO1 PA0285蛋白环二鸟苷单磷酸环境信号

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