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miR-144-3p参与高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠的肝细胞自噬

中国组织工程研究 2024年第8期28卷 1289-1294页

作者：盛思琪谢琳赵翔宇姜怡邓吴凯熊建团杨安宁郝银菊焦运宁夏医科大学基础医学院宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院宁夏回族自治区银川市750004

背景:高蛋氨酸饮食可导致Cbs^(+/-)小鼠发生肝损伤,高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关。微小RNA(miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程,具有重要意义。目... 详细信息

背景:高蛋氨酸饮食可导致Cbs^(+/-)小鼠发生肝损伤,高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关。微小RNA(miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程,具有重要意义。目的:探讨miR-144-3p在高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠肝细胞自噬中的关键作用。方法:①选取4周龄体质量相近的雄性胱硫醚β-合成酶基因正常(Cbs^(+/+))小鼠和单基因敲除(Cbs^(+/-))小鼠各10只,均饲以高蛋氨酸饮食,12周后处死,留取肝脏组织。②体外培养人源肝细胞(HL-7702),分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)、同型半胱氨酸组(100μmol/L同型半胱氨酸)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、mimic-NC+同型半胱氨酸组(转染mimic-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p mimic组(转染miR-144-3p mimic)、miR-144-3p mimic+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p mimic+100μmol/L同型半胱氨酸)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、inhibitor-NC+同型半胱氨酸组(转染inhibitor-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p inhibitor组(转染miR-144-3p inhibitor)、miR-144-3p inhibitor+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p inhibitor+100μmol/L同型半胱氨酸)。采用荧光定量PCR检测肝组织和肝细胞中miR-144-3p的表达水平;转染miR-144-3p模拟物或抑制剂后,采用荧光定量PCR和Western blot分别检测miR-144-3p的转染效率及其对LC3B和p62蛋白表达的影响;酶联免疫法检测肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的表达情况;Pearson相关性分析肝细胞miR-144-3p表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶含量的相关性。结果与结论:①与Cbs^(+/+)组比较,Cbs^(+/-)组小鼠肝组织和同型半胱氨酸组肝细胞中miR-144-3p的表达水平降低(P<0.01);②转染miR-144-3p模拟物后,与mimic-NC比较,miR-144-3p mimic组中LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平降低,p62蛋白的表达水平升高(P<0.01);转染miR-144-3p inhibitor后,得到相反的结果(P<0.01);③与mimic-NC组相比,miR-144-3p mimic组肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的含量降低(P<0.01);与inhibitor-NC组比较,得到相反的结果(P<0.01);④肝细胞中miR-144-3p的表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.8876)和门冬氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.8299)的含量呈负相关;⑤结果表明,同型半胱氨酸通过抑制miR-144-3p的表达促进肝细胞的自噬,进而加重肝损伤。

关键词：微小RNA miR-144-3p 同型半胱氨酸细胞自噬肝损伤高蛋氨酸饮食

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FoxO1/p38 MAPK信号通路在LPS致急性肺损伤中的作用研究

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中国药理学通报 2023年第1期39卷 36-42页

作者：杨亚丽田荣袁茵王艳佳杨晓玲宁夏医科大学基础医学院国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏银川750004

目的探讨叉头状转录因子O1(forkhead transcription factors of O class1,FoxO1)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中的作用及其调控机制。方法采用LPS模拟诱导ALI模型。HE染色法观察肺组织的病理变化;ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量;免疫组化染色观察FoxO1在小鼠肺组织的表达;Western blot检测FoxO1、DNA甲基转移酶和p38 MAPK的磷酸化水平;qRT-PCR检测FoxO1、IL-6、TNF-α和DNA甲基转移酶的mRNA水平;巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测肺组织中FoxO1启动子区DNA甲基化的水平变化;培养肺血管内皮细胞(pulmonary vascular endothelial cells,PVECs)并转染FoxO1 siRNA,Western blot检测p38 MAPK的磷酸化水平;采用Pearson方法分析FoxO1甲基化水平与炎症因子的相关性。结果与Control组相比,LPS组小鼠肺泡炎性细胞明显增多,肺组织水肿、充血明显;TNF-α和IL-6的水平分别升高52.2%和150.4%(P<0.05);p38 MAPK磷酸化水平及FoxO1表达分别增加134.1%和61.8%(P<0.05),而FoxO1启动子区DNA甲基化水平降低17.2%(P<0.05),体外转染FoxO1 siRNA后,p38磷酸化水平降低,Pearson分析显示,FoxO1甲基化水平与炎症因子成负相关。结论FoxO1启动子区低甲基化调控FoxO1/p38 MAPK信号通路是LPS诱导急性肺损伤的重要机制。

关键词： FoxO1 LPS 急性肺损伤 DNA甲基化 p38 MAPK信号通路肺血管内皮细胞

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环状RNA BRAF_2在子痫前期胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用及其机制

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解放军医学杂志 2023年第4期48卷 374-382页

作者：张玉月朱亚飞高丽娜殷荷马朝霞吴玉珠王艳华吴凯张慧萍宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院产前诊断中心宁夏银川750004 国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室/宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004

目的探讨环状RNABRAF_2(circRNABRAF_2)在子痫前期(PE)胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法收集2018年1月-2019年2月宁夏医科大学总医院正常妊娠与PE孕妇的胎盘组织(n=21),采用qRTPCR检测两组胎盘组织中circRNABRAF_2的表... 详细信息

目的探讨环状RNABRAF_2(circRNABRAF_2)在子痫前期(PE)胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法收集2018年1月-2019年2月宁夏医科大学总医院正常妊娠与PE孕妇的胎盘组织(n=21),采用qRTPCR检测两组胎盘组织中circRNABRAF_2的表达水平,并分析circRNABRAF_2表达水平与血压的相关性。体外培养人源胎盘滋养细胞株(HTR8-S/Vneo):(1)将细胞分为对照组与缺氧组,采用qRT-PCR检测circRNA BRAF_2的表达;(2)在HTR8-S/Vneo中转染circRNABRAF_2慢病毒空载体和过表达慢病毒,分为对照组、circRNABRAF_2阴性对照组及circRNA BRAF_2过表达组,使用qRT-PCR对circRNA BRAF_2进行过表达验证;(3)在circRNA BRAF_2过表达慢病毒转染成功的基础上,将细胞分为对照组、circRNA BRAF_2阴性对照组、circRNA BRAF_2过表达组、缺氧组、缺氧+circRNABRAF_2阴性对照组与缺氧+circRNABRAF_2过表达组,采用EdU和CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bcl-2及Bax的表达。采用qRT-PCR检测circRNABRAF_2在HTR8-S/Vneo细胞质和细胞核中的表达水平,通过生物信息学分析筛选与circRNABRAF_2可能结合的miRNA并检测其在组织和细胞中的表达水平。结果与正常妊娠组比较,PE组孕妇胎盘组织中circRNA BRAF_2表达水平明显降低(P<0.001),且circRNA BRAF_2表达水平与收缩压、舒张压呈负相关(r=±0.4531,P<0.01;r=±0.4381,P<0.01)。qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,缺氧组circRNABR AF_2表达水平明显降低(P<0.01)。circRNA BRAF_2阴性对照组circRNA BRAF_2表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);与circRNA BRAF_2阴性对照组比较,circRNA BRAF_2过表达组circRNA BRAF_2表达水平明显升高(P<0.001)。EdU及CCK-8法检测结果显示,与对照组比较,缺氧组EdU阳性细胞百分比明显下降(P<0.001),滋养细胞增殖能力降低(P<0.001);与缺氧+circRNA BRAF_2阴性对照组比较,缺氧+circRNA BRAF_2过表达组滋养细胞EdU阳性细胞百分比明显升高(P<0.001),滋养细胞增殖能力明显增强(P<0.001)。流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,缺氧组细胞凋亡率明显增高(P<0.001);与缺氧+circRNABRAF_2阴性对照组比较,缺氧+circRNABRAF_2过表达组细胞凋亡率明显降低(P<0.001)。Westernblotting检测结果显示,与对照组比较,缺氧组caspase-3、caspase-9及Bax蛋白表达水平升高(P<0.01或P<0.001),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.01);与缺氧+circRNA BRAF_2阴性对照组比较,缺氧+circRNA BRAF_2过表达组caspase-3、caspase-9及Bax蛋白表达水平降低(P<0.001或P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,circRNA BRAF_2主要在细胞质中表达,生物信息学分析结果显示,circRNA BRAF_2与miR-7855-5p存在结合位点。qRT-PCR检测结果显示,与正常妊娠组比较,miR-7855-5p在PE胎盘组织中高表达(P<0.05);与对照组细胞比较,缺氧组miR-7855-5p明显高表达(P<0.001)。结论 circRNA BRAF_2可促进PE胎盘滋养细胞增殖并抑制其凋亡,作用机制可能与miR-7855-5p有关。

关键词：子痫前期 circRNA 细胞增殖细胞凋亡 miRNAs

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miR-491-5p对缺氧诱导的滋养细胞凋亡的促进作用及其机制

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解放军医学杂志 2023年第1期48卷 42-48页

作者：全尚琨张辉李昱霖胡舒彤盛思琪张晴刘达越姜怡邓李桂忠宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏银川750004 宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏银川750004

目的探讨microRNA-491-5p(miR-491-5p)在缺氧诱导的滋养细胞凋亡中的作用及其对子痫前期的影响。方法选取人绒毛膜滋养层细胞,分为4组:对照组、缺氧组、缺氧+miR-491-5p mimic组和缺氧+miR-491-5p inhibit组。采用细胞活力染色检测滋养... 详细信息

目的探讨microRNA-491-5p(miR-491-5p)在缺氧诱导的滋养细胞凋亡中的作用及其对子痫前期的影响。方法选取人绒毛膜滋养层细胞,分为4组:对照组、缺氧组、缺氧+miR-491-5p mimic组和缺氧+miR-491-5p inhibit组。采用细胞活力染色检测滋养细胞凋亡情况,qRT-PCR检测miR-491-5p的表达,TargetScan数据库预测miR-491-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-5p与B-细胞淋巴瘤因子2样蛋白2基因(BCL2L2)的靶向关系。miR-491-5pmimic和inhibitor分别转染滋养细胞后,qRT-PCR检测miR-491-5p的表达,Westernblotting检测BCL2L2蛋白的表达改变,细胞活力染色、Western blotting、流式细胞术检测滋养细胞凋亡情况。结果与对照组比较,缺氧组滋养细胞凋亡率明显增高(P<0.001),miR-491-5p表达明显增高(2.784±0.214 vs.1.000±0.000,P<0.01);生物信息学预测与双荧光素酶检测报告实验显示,miR-491-5p可与BCL2L2结合并调控其表达。与对照组比较,miR-491-5p mimic组miR-491-5p表达明显增高(7659.300±191.300 vs.5.467±0.503,P<0.01),而miR-491-5p inhibit组miR-491-5p表达明显降低(0.139±0.022vs.0.323±0.035,P<0.05)。与缺氧组比较,缺氧+miR-491-5pinhibit组滋养细胞凋亡率降低(11.56%±0.452%vs.16.67%±0.750%,P<0.01),BCL2L2和Bcl-2蛋白相对表达量增高(0.702±0.047vs.0.312±0.007,P<0.001;0.752±0.055vs.0.415±0.005,P<0.01),Bax蛋白表达降低(1.221±0.066vs.1.652±0.085,P<0.05);缺氧+miR-491-5pmimic组滋养细胞凋亡率增高(23.54%±1.233%vs.16.67%±0.750%,P<0.001),BCL2L2和Bcl-2蛋白相对表达量降低(0.211±0.013vs.0.312±0.007,P<0.01;0.203±0.011vs.0.415±0.005,P<0.001),Bax蛋白表达增高(2.362±0.284vs.1.652±0.085,P<0.01)。结论miR-491-5p可负向调控BCL2L2表达,促进缺氧诱导的滋养细胞凋亡,进而加速子痫前期的发展进程。

关键词：滋养细胞 miR-491-5p BCL2L2 细胞凋亡缺氧

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转录因子EB在衰老心肌细胞自噬中的作用机制研究

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天津医药 2023年第3期51卷 246-252页

作者：盛思琪谢琳姜怡邓熊建团杨安宁吴凯杨勇杨晓明宁夏医科大学基础医学院 750004 宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区人民医院

目的探讨转录因子EB(TFEB)在衰老心肌细胞自噬中的作用机制。方法动物实验:将20只老年Wistar大鼠采取随机数字表法分为假手术组(Sham组)和缺血再灌注组(I/R组)。细胞实验:(1)体外培养大鼠心肌细胞,采用8 g/L D-半乳糖孵育8 d后分为常氧(... 详细信息

目的探讨转录因子EB(TFEB)在衰老心肌细胞自噬中的作用机制。方法动物实验:将20只老年Wistar大鼠采取随机数字表法分为假手术组(Sham组)和缺血再灌注组(I/R组)。细胞实验:(1)体外培养大鼠心肌细胞,采用8 g/L D-半乳糖孵育8 d后分为常氧(Normoxia)组和缺氧/复氧(H/R)组。(2)在衰老心肌细胞中分别转染过表达和干扰TFEB腺病毒分为过表达对照(Ad-GFP)组、过表达对照+缺氧/复氧(Ad-GFP+H/R)组、过表达TFEB(AdTFEB)组、过表达TFEB+缺氧/复氧(Ad-TFEB+H/R)组、干扰对照(sh-NC)组、干扰对照+缺氧/复氧(sh-NC+H/R)组、干扰TFEB(sh-TFEB)组、干扰TFEB+缺氧/复氧(sh-TFEB+H/R)组。(3)分别用DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的特异性抑制剂DC-05、TFD、NA处理缺氧/复氧后的衰老心肌细胞分为H/R组、DC-05组、TFD组、NA组。(4)在衰老心肌细胞中转染干扰DNMT3b腺病毒分为干扰对照(sh-NC)组、干扰对照缺氧/复氧(sh-NC+H/R)组、干扰DNMT3b(shDNMT3b)组、干扰DNMT3b缺氧/复氧(sh-DNMT3b+H/R)组。实时荧光定量PCR(qPCR)检测TFEB的mRNA表达水平;Western blot检测衰老心肌细胞中自噬相关蛋白TFEB、LC3B和p62的蛋白表达;巢式甲基化特异性PCR(nMSPCR)检测TFEB启动子区的DNA甲基化水平。结果与Sham组或Normoxia组比较,I/R组和H/R组中TFEB的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01);过表达TFEB后,与Ad-GFP组比较,Ad-TFEB组LC3B-Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平降低,p62的蛋白表达水平升高(P<0.01),而干扰TFEB后得到相反的结果(P<0.01)。与Sham组或Normoxia组比较,I/R组和H/R组中TFEB启动子区DNA甲基化水平升高(P<0.05)。与H/R组比较,NA组TFEB mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01);干扰DNMT3b后,与sh-NC组比较,sh-DNMT3b组TFEB mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论DNMT3b通过调控TFEB启动子区DNA甲基化抑制TFEB的表达,进而促进衰老心肌细胞自噬。

关键词：肌细胞心脏细胞衰老转录因子EB 细胞自噬 DNA甲基化 DNMT3b

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环状RNA hsaBABAM11在子痫前期胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用

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中华高血压杂志 2023年第1期31卷 34-44页

作者：朱亚飞张玉月张辉高丽娜王艳华吴凯姜怡邓张慧萍宁夏医科大学护理学院宁夏银川750004 宁夏医科大学基础医学院国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏医科大学临床医学院宁夏医科大学总医院妇科湖南省妇幼保健院遗传科

目的探讨环状RNA(circRNA)hsa_BABAM1_1在子痫前期胎盘组织中的表达及对人胎盘滋养细胞株(HTR-8/SVneo)增殖、凋亡的作用。方法收集宁夏医科大学总医院妇产科2020年1―12月收治的正常产妇22例和子痫前期产妇22例的胎盘组织标本,采用实... 详细信息

目的探讨环状RNA(circRNA)hsa_BABAM1_1在子痫前期胎盘组织中的表达及对人胎盘滋养细胞株(HTR-8/SVneo)增殖、凋亡的作用。方法收集宁夏医科大学总医院妇产科2020年1―12月收治的正常产妇22例和子痫前期产妇22例的胎盘组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测两组胎盘中circRNA hsa_BABAM1_1的表达。在缺氧条件下培养HTR-8/SVneo细胞,建立子痫前期细胞模型。采用qRT-PCR法检测常氧和缺氧条件下细胞中circRNA hsa_BABAM1_1的表达。采用RNase R酶消化实验和放线菌素D处理实验验证circRNA hsa_BABAM1_1的稳定性。采用荧光原位杂交(FISH)及核质分离法观察circRNA hsa_BABAM1_1在HTR-8/SVneo细胞中的定位。构建高表达circRNA hsa_BABAM1_1慢病毒和对照空载体慢病毒稳转株,给予细胞以下不同处理:对照、空载体、过表达circRNA hsa_BABAM1_1、缺氧、空载体+缺氧及过表达circRNA hsa_BABAM1_1+缺氧。采用细胞计数试剂(CCK-8)及5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)实验评估细胞增殖能力的变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用Western-blot法测定细胞凋亡相关蛋白的变化,qRT-PCR法检测miR-130b-5p在HTR-8/SVneo细胞和胎盘中的表达。采用Pearson相关分析circRNA hsa_BABAM1_1与miR-130b-5p的相关性。结果子痫前期胎盘和缺氧诱导的HTR-8/SVneo细胞中circRNA hsa_BABAM1_1表达水平低于对照(均P<0.05)。在HTR-8/SVneo细胞中,circRNA hsa_BABAM1_1主要定位和表达于细胞质中。与对照相比,缺氧细胞存活率[(61.17±1.50)%比(100.00±3.10)%,q=12.95,P<0.01]、EdU阳性细胞比例[(25.33±0.88)%比(37.33±0.89)%,q=9.62,P<0.01]下降,凋亡率[(11.01±0.29)%比(4.33±0.31)%,q=23.89,P<0.01]增加,凋亡相关蛋白激活态半胱天冬酶9(cleaved caspase-9)、cleaved caspase-3、cleaved caspase-7和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)表达水平升高,Bcl-2表达水平下降,miR-130b-5p的表达水平升高(均P<0.05)。与缺氧+空载体组相比,缺氧+过表达circRNA hsa_BABAM1_1组缺氧诱导的HTR-8/SVneo细胞存活率[(89.21±2.79)%比(61.23±2.13)%,q=9.71,P<0.01]、EdU阳性细胞比例[(36.67±0.88)%比(24.33±1.86)%,q=9.89,P<0.01]增加,凋亡率[(6.86±0.26)%比(11.74±0.12)%,q=17.67,P<0.01]下降,凋亡相关蛋白cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、cleaved caspase-7和Bax表达水平下降,Bcl-2表达水平升高,miR-130b-5p的表达水平下降(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,circRNA hsa_BABAM1_1和miR-130b-5p在胎盘组织中的表达呈负相关(r=-0.44,P<0.01)。结论circRNA hsa_BABAM1_1在子痫前期胎盘及缺氧诱导的HTR-8/SVneo细胞中低表达,主要定位和表达于胞质中,并具有高度稳定性。上调circRNA hsa_BABAM1_1的表达可促进缺氧诱导的HTR-8/SVneo细胞增殖、抑制其凋亡,其作用机制可能与调控miR-130b-5p的表达有关。

关键词：环状RNA hsa_BABAM1_1 子痫前期滋养细胞增殖凋亡

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miR-195-3p在同型半胱氨酸诱导的肝氧化应激损伤中的调控作用研究

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中国临床药理学杂志 2022年第17期38卷 2044-2048页

作者：张宏红谢琳盛思琪焦运姜怡邓杨安宁李桂忠宁夏医科大学基础医学院宁夏医科大学国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏医科大学总医院感染科

目的探讨miR-195-3p在同型半胱氨酸（Hcy）诱导的肝氧化应激损伤中的作用。方法小鼠分为CBS+/+组、CBS+/-组、Lv-miR-195-3p组(CBS+/-小鼠经尾静脉注射病毒滴度为2×10～7 TU·mL-1的miR-195-3p重组慢病毒)、Lv-GFP组(CBS+/-... 详细信息

目的探讨miR-195-3p在同型半胱氨酸（Hcy）诱导的肝氧化应激损伤中的作用。方法小鼠分为CBS+/+组、CBS+/-组、Lv-miR-195-3p组(CBS+/-小鼠经尾静脉注射病毒滴度为2×10～7 TU·mL-1的miR-195-3p重组慢病毒)、Lv-GFP组(CBS+/-小鼠经尾静脉注射等体积病毒滴度为1×10～8 TU·mL-1的绿色荧光蛋白慢病毒)和PBS组(CBS+/-小鼠经尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液),每组10只。体外培养人源肝细胞（HL-7702）,分为对照组(0μmol·L-1Hcy)、Hcy组(100μmol·L-1Hcy)、mimic-NC组（转染模拟物对照组）、mimic-NC+Hcy组(转染模拟物对照组+100μmol·L-1Hcy)、miR-195-3p-mimic组（转染miR-195-3p模拟物）、miR-195-3p-mimic+Hcy组(转染miR-195-3p模拟物+100μmol·L-1Hcy)、inhibitor-NC组（转染抑制物对照组）、inhibitor-NC+Hcy组(转染抑制物对照组+100μmol·L-1Hcy)、miR-195-3p-inhibitor组（转染miR-195-3p抑制物）、miR-195-3p-inhibitor+Hcy组(转染miR-195-3p抑制物+100μmol·L-1Hcy)。用实时荧光定量聚合酶链反应检测肝组织和肝细胞中miR-195-3p的表达水平，用试剂盒检测肝组织及肝细胞中丙二醛（MDA）含量和总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性。结果 Lv-miR-195-3p组、Lv-GFP组和PBS组肝组织中miR-195-3p相对表达量分别为2.29±0.67,0.73±0.09和0.57±0.27,MDA含量分别为（1.82±0.19）,（0.99±0.13）和（1.19±0.18）nmol·mg-1prot, T-SOD活性分别为（229.64±63.62）,（377.08±75.58）和（336.19±71.49）U·mg-1prot, Lv-miR-195-3p组的上述指标与Lv-GFP组或PBS组比较，差异均有统计学意义（均P<0.05）。对照组和Hcy组的miR-195-3p相对表达量分别为2.88±0.41和6.51±2.21,差异有统计学意义（P<0.05）。mimic-NC+Hcy组、miR-195-3p-mimic+Hcy组、inhibitor-NC+Hcy组和miR-195-3p-inhibitor+Hcy组的MDA含量分别为（1.18±0.17）,（2.58±0.24）,（1.92±0.11）和（0.97±0.10）nmol·mg-1prot, T-SOD活性分别为（50.37±5.61）,（31.74±2.50）,（32.45±2.30）和（41.18±2.55）U·mg-1prot, miR-195-3p-mimic+Hcy组的上述指标与mimic-NC+Hcy组，miR-195-3p-inhibitor+Hcy组的上述指标与inhibitor-NC+Hcy比较，差异均有统计学意义（均P<0.01）。结论 miR-195-3p通过促进Hcy诱导的肝氧化应激，从而加重肝损伤。

关键词：微小RNA miR-195-3p 同型半胱氨酸氧化应激肝损伤

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基质金属蛋白酶2 DNA甲基化在同型半胱氨酸诱导肝细胞凋亡中的作用

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中国临床药理学杂志 2022年第1期38卷 14-17页

作者：刘圆张辉焦运李桂忠马胜超杨安宁张慧萍姜怡邓宁夏医科大学基础医学院国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏医科大学总医院感染科

目的探讨基质金属蛋白酶2（MMP-2）及其DNA甲基化在同型半胱氨酸（Hcy）诱导肝细胞凋亡中的作用。方法将人源肝细胞分为3组，对照组用正常含血清培养液处理细胞，实验组用100μmol·L-1Hcy的含药血清处理细胞，干预组用含100μmol... 详细信息

目的探讨基质金属蛋白酶2（MMP-2）及其DNA甲基化在同型半胱氨酸（Hcy）诱导肝细胞凋亡中的作用。方法将人源肝细胞分为3组，对照组用正常含血清培养液处理细胞，实验组用100μmol·L-1Hcy的含药血清处理细胞，干预组用含100μmol·L-1Hcy和10μmol·L-15-氮杂胞苷的含药血清处理细胞，均培养48 h。用细胞活力染色实验检测肝细胞活力，用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-RCR）检测MMP-2 mRNA的表达水平，用巢式降落式甲基化特异性PCR检测MMP-2启动子区DNA甲基化水平改变。结果实验组的凋亡细胞数（红色细胞数）增加。实验组和对照组的MMP-2 mRNA表达分别为1.07±0.05和0.90±0.02,实验组与对照组相比，差异均有统计学意义（P<0.05）。实验组、对照组和干预组的MMP-2 DNA甲基化水平分别为0.46±0.01,0.53±0.01和0.40±0.02,实验组与对照组的上述指标和干预组相比，差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 MMP-2 DNA甲基化能够抑制同型半胱氨酸诱导的肝细胞凋亡。

关键词：基质金属蛋白酶2 DNA甲基化同型半胱氨酸细胞凋亡

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环状RNA circ＿BRAF＿2在子痫前期胎盘滋养细胞自噬中的作用

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中国临床药理学杂志 2022年第23期38卷 2860-2864页

作者：朱亚飞张玉月谢琳殷荷王艳华吴凯姜怡邓张慧萍宁夏医科大学护理学院宁夏医科大学基础医学院宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏医科大学临床医学院宁夏医科大学总医院妇科湖南省妇幼保健院医学遗传科

目的研究子痫前期（PE）患者胎盘组织中环状RNA circ＿BRAF＿2的表达及其对胎盘滋养细胞自噬的影响。方法选取妊娠对照组与PE组胎盘组织各22例；将HTR-8/SVneo细胞分为对照组（常规培养）、pLV-NC组（转染空载体）、pLV-circ＿BRAF＿... 详细信息

目的研究子痫前期（PE）患者胎盘组织中环状RNA circ＿BRAF＿2的表达及其对胎盘滋养细胞自噬的影响。方法选取妊娠对照组与PE组胎盘组织各22例；将HTR-8/SVneo细胞分为对照组（常规培养）、pLV-NC组（转染空载体）、pLV-circ＿BRAF＿2组（转染circ＿BRAF＿2）、缺氧组（缺氧处理）、pLV-NC+缺氧组（转染空载并进行缺氧处理）、pLV-circ＿BRAF＿2+缺氧组（转染circ＿BRAF＿2并进行缺氧处理）。用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胎盘组织及HTR-8/SVneo细胞中circ＿BRAF＿2的表达，用PCR及Sanger测序对HTR-8/SVneo细胞中circ＿BRAF＿2进行鉴定，用核质分离法检测circ＿BRAF＿2在HTR-8/SVneo细胞胞质和细胞核中的表达，用透射电镜观察细胞自噬体的形成，用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）、P62的表达。用qRT-PCR检测miR-15a-5p的表达水平。结果妊娠对照组、PE组、对照组及缺氧组circ＿BRAF＿2的相对表达水平分别为0.89±0.05,0.32±0.03,0.04±0.05×10-1和0.02±0.03×10-1,PE组与妊娠对照组相比，缺氧组与对照组相比，差异均有统计学意义（均P<0.01）;通过外扩型引物只能在cDNA中扩增出circ＿BRAF＿2,而采用内扩型引物能同时在cDNA和gDNA中扩增出其线性转录本BRAF;circ＿BRAF＿2在HTR-8/SVneo细胞胞质中的表达(0.02±0.02×10-1)显著高于在胞核中的表达(0.02×10-2±0.03×10-3,P<0.01);对照组、pLV-NC组、pLV-circ＿BRAF＿2组、缺氧组、pLV-NC+缺氧组、pLV-circ＿BRAF＿2+缺氧组LC3-Ⅱ蛋白相对表达水平分别为0.75±0.25,0.73±0.23,0.75±0.23,1.17±0.30,1.19±0.32和0.42±0.06,P62蛋白相对表达水平分别为0.72±0.07,0.75±0.09,0.72±0.08,0.45±0.11,0.44±0.10和0.62±0.07,缺氧组的上述指标与对照组相比，pLV-circ＿BRAF＿2+缺氧组的上述指标与pLV-NC+缺氧组相比，差异均有统计学意义（P<0.01,P<0.05）;这6组的单个细胞内自噬体数量变化及miR-15a-5p的相对表达水平变化与LC3-Ⅱ蛋白表达变化水平相同。结论过表达circ＿BRAF＿2可抑制缺氧诱导的HTR-8/Svneo细胞自噬，其作用可能与竞争性结合miR-15a-5p有关。

关键词：子痫前期环状RNA circ＿BRAF＿2 滋养细胞微小RNA-15a-5p 自噬

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脂肪酸结合蛋白4在同型半胱氨酸致大鼠心肌细胞焦亡中的作用

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解放军医学杂志 2022年第1期47卷 33-38页

作者：董小艳刘达越徐灵博顾铃毓马胜超杨安宁杨勇刘云姜怡邓宁夏医科大学基础医学院银川750004 国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室银川750004 宁夏血管损伤与修复研究重点实验室银川750004 宁夏医科大学临床医学院银川750004 宁夏回族自治区人民医院核医学科银川750004 宁夏医科大学总医院放射科银川750004

目的探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法培养大鼠心肌细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy)与Hcy组(3 mmol/L Hcy),采用Western blotting检测各组FABP4、焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)... 详细信息

目的探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法培养大鼠心肌细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy)与Hcy组(3 mmol/L Hcy),采用Western blotting检测各组FABP4、焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达情况;采用qRT-PCR检测FABP4 mRNA表达变化;采用免疫荧光染色法检测焦亡相关蛋白的表达变化;用FABP4抑制剂(BMS-309403)处理心肌细胞,然后将细胞分为对照组(0 mmol/L Hcy)、Hcy组(3 mmol/L Hcy)及Hcy+BMS-309403组(3 mmol/L Hcy和50μmol/L BMS-309403),再次检测焦亡相关蛋白的表达水平。结果 Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Hcy组FABP4、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达水平明显升高(P<0.05);qRT-PCR结果显示,与对照组比较,Hcy组FABP4表达水平明显升高(P<0.05);免疫荧光染色结果显示,与对照组比较,Hcy组NLRP3、caspase-1、IL-1β荧光强度明显增强。加入FABP4抑制剂(BMS-309403)同时给予Hcy干预后,与Hcy组比较,Hcy+BMS-309403组FABP4、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论 FABP4可能对Hcy诱导的大鼠心肌细胞焦亡有促进作用。

关键词：心肌细胞焦亡同型半胱氨酸脂肪酸结合蛋白4

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