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中国病理生理杂志 2021年第12期37卷 2113-2121页

作者：杨亚丽田荣袁茵王艳佳杨晓玲宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏银川750004 宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏银川750004

目的:研究Ras相关蛋白1A(Rap1A)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的ANA-1小鼠腹腔巨噬细胞增殖和M1极化的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养ANA-1细胞,建立高Hcy血症细胞模型,并将细胞分成对照(control)组、Hcy组、Hcy+Rap1A干扰腺病毒(Ad-s... 详细信息

目的:研究Ras相关蛋白1A(Rap1A)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的ANA-1小鼠腹腔巨噬细胞增殖和M1极化的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养ANA-1细胞,建立高Hcy血症细胞模型,并将细胞分成对照(control)组、Hcy组、Hcy+Rap1A干扰腺病毒(Ad-shRNA/Rap1A)组和Hcy+阴性对照腺病毒(Ad-shRNA/GFP)组。采用CCK-8法和EdU染色检测各组细胞的增殖能力;ELISA检测细胞培养液中炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度;RT-qPCR检测各组细胞Rap1A、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期抑制蛋白p27、M1极化标志物CD80和CD86及M2极化标志物CD163和CD200R的mRNA表达;Western blot检测Rap1A、PCNA和p27蛋白表达。结果:与control组相比,Hcy组细胞活力、EdU阳性细胞数目、细胞培养液中IL-6和TNF-α浓度、CD80和CD86的mRNA表达水平及Rap1A和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),而CD163和CD200R的mRNA表达水平及p27的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与Hcy+Ad-shRNA/GFP组相比,Hcy+AdshRNA/Rap1A组细胞活力、EdU阳性细胞数目、CD80和CD86的mRNA表达水平及Rap1A和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),CD163和CD200R的mRNA表达水平及p27的mRNA水平和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论:Hcy能够促进小鼠巨噬细胞增殖及M1极化,其机制与Hcy上调Rap1A表达有关。

关键词：同型半胱氨酸 Ras相关蛋白1A 巨噬细胞细胞增殖 M1极化

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miR-491-5p对缺氧诱导的滋养细胞凋亡的促进作用及其机制

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解放军医学杂志 2023年第1期48卷 42-48页

作者：全尚琨张辉李昱霖胡舒彤盛思琪张晴刘达越姜怡邓李桂忠宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏银川750004 宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏银川750004

目的探讨microRNA-491-5p(miR-491-5p)在缺氧诱导的滋养细胞凋亡中的作用及其对子痫前期的影响。方法选取人绒毛膜滋养层细胞,分为4组:对照组、缺氧组、缺氧+miR-491-5p mimic组和缺氧+miR-491-5p inhibit组。采用细胞活力染色检测滋养... 详细信息

目的探讨microRNA-491-5p(miR-491-5p)在缺氧诱导的滋养细胞凋亡中的作用及其对子痫前期的影响。方法选取人绒毛膜滋养层细胞,分为4组:对照组、缺氧组、缺氧+miR-491-5p mimic组和缺氧+miR-491-5p inhibit组。采用细胞活力染色检测滋养细胞凋亡情况,qRT-PCR检测miR-491-5p的表达,TargetScan数据库预测miR-491-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-5p与B-细胞淋巴瘤因子2样蛋白2基因(BCL2L2)的靶向关系。miR-491-5pmimic和inhibitor分别转染滋养细胞后,qRT-PCR检测miR-491-5p的表达,Westernblotting检测BCL2L2蛋白的表达改变,细胞活力染色、Western blotting、流式细胞术检测滋养细胞凋亡情况。结果与对照组比较,缺氧组滋养细胞凋亡率明显增高(P<0.001),miR-491-5p表达明显增高(2.784±0.214 vs.1.000±0.000,P<0.01);生物信息学预测与双荧光素酶检测报告实验显示,miR-491-5p可与BCL2L2结合并调控其表达。与对照组比较,miR-491-5p mimic组miR-491-5p表达明显增高(7659.300±191.300 vs.5.467±0.503,P<0.01),而miR-491-5p inhibit组miR-491-5p表达明显降低(0.139±0.022vs.0.323±0.035,P<0.05)。与缺氧组比较,缺氧+miR-491-5pinhibit组滋养细胞凋亡率降低(11.56%±0.452%vs.16.67%±0.750%,P<0.01),BCL2L2和Bcl-2蛋白相对表达量增高(0.702±0.047vs.0.312±0.007,P<0.001;0.752±0.055vs.0.415±0.005,P<0.01),Bax蛋白表达降低(1.221±0.066vs.1.652±0.085,P<0.05);缺氧+miR-491-5pmimic组滋养细胞凋亡率增高(23.54%±1.233%vs.16.67%±0.750%,P<0.001),BCL2L2和Bcl-2蛋白相对表达量降低(0.211±0.013vs.0.312±0.007,P<0.01;0.203±0.011vs.0.415±0.005,P<0.001),Bax蛋白表达增高(2.362±0.284vs.1.652±0.085,P<0.01)。结论miR-491-5p可负向调控BCL2L2表达,促进缺氧诱导的滋养细胞凋亡,进而加速子痫前期的发展进程。

关键词：滋养细胞 miR-491-5p BCL2L2 细胞凋亡缺氧

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miR-144-3p参与高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠的肝细胞自噬

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中国组织工程研究 2024年第8期28卷 1289-1294页

作者：盛思琪谢琳赵翔宇姜怡邓吴凯熊建团杨安宁郝银菊焦运宁夏医科大学基础医学院宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院宁夏回族自治区银川市750004

背景:高蛋氨酸饮食可导致Cbs^(+/-)小鼠发生肝损伤,高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关。微小RNA(miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程,具有重要意义。目... 详细信息

背景:高蛋氨酸饮食可导致Cbs^(+/-)小鼠发生肝损伤,高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关。微小RNA(miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程,具有重要意义。目的:探讨miR-144-3p在高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠肝细胞自噬中的关键作用。方法:①选取4周龄体质量相近的雄性胱硫醚β-合成酶基因正常(Cbs^(+/+))小鼠和单基因敲除(Cbs^(+/-))小鼠各10只,均饲以高蛋氨酸饮食,12周后处死,留取肝脏组织。②体外培养人源肝细胞(HL-7702),分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)、同型半胱氨酸组(100μmol/L同型半胱氨酸)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、mimic-NC+同型半胱氨酸组(转染mimic-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p mimic组(转染miR-144-3p mimic)、miR-144-3p mimic+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p mimic+100μmol/L同型半胱氨酸)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、inhibitor-NC+同型半胱氨酸组(转染inhibitor-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p inhibitor组(转染miR-144-3p inhibitor)、miR-144-3p inhibitor+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p inhibitor+100μmol/L同型半胱氨酸)。采用荧光定量PCR检测肝组织和肝细胞中miR-144-3p的表达水平;转染miR-144-3p模拟物或抑制剂后,采用荧光定量PCR和Western blot分别检测miR-144-3p的转染效率及其对LC3B和p62蛋白表达的影响;酶联免疫法检测肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的表达情况;Pearson相关性分析肝细胞miR-144-3p表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶含量的相关性。结果与结论:①与Cbs^(+/+)组比较,Cbs^(+/-)组小鼠肝组织和同型半胱氨酸组肝细胞中miR-144-3p的表达水平降低(P<0.01);②转染miR-144-3p模拟物后,与mimic-NC比较,miR-144-3p mimic组中LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平降低,p62蛋白的表达水平升高(P<0.01);转染miR-144-3p inhibitor后,得到相反的结果(P<0.01);③与mimic-NC组相比,miR-144-3p mimic组肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的含量降低(P<0.01);与inhibitor-NC组比较,得到相反的结果(P<0.01);④肝细胞中miR-144-3p的表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.8876)和门冬氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.8299)的含量呈负相关;⑤结果表明,同型半胱氨酸通过抑制miR-144-3p的表达促进肝细胞的自噬,进而加重肝损伤。

关键词：微小RNA miR-144-3p 同型半胱氨酸细胞自噬肝损伤高蛋氨酸饮食

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基质金属蛋白酶2 DNA甲基化在同型半胱氨酸诱导肝细胞凋亡中的作用

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中国临床药理学杂志 2022年第1期38卷 14-17页

作者：刘圆张辉焦运李桂忠马胜超杨安宁张慧萍姜怡邓宁夏医科大学基础医学院国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏医科大学总医院感染科

目的探讨基质金属蛋白酶2（MMP-2）及其DNA甲基化在同型半胱氨酸（Hcy）诱导肝细胞凋亡中的作用。方法将人源肝细胞分为3组，对照组用正常含血清培养液处理细胞，实验组用100μmol·L-1Hcy的含药血清处理细胞，干预组用含100μmol... 详细信息

目的探讨基质金属蛋白酶2（MMP-2）及其DNA甲基化在同型半胱氨酸（Hcy）诱导肝细胞凋亡中的作用。方法将人源肝细胞分为3组，对照组用正常含血清培养液处理细胞，实验组用100μmol·L-1Hcy的含药血清处理细胞，干预组用含100μmol·L-1Hcy和10μmol·L-15-氮杂胞苷的含药血清处理细胞，均培养48 h。用细胞活力染色实验检测肝细胞活力，用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-RCR）检测MMP-2 mRNA的表达水平，用巢式降落式甲基化特异性PCR检测MMP-2启动子区DNA甲基化水平改变。结果实验组的凋亡细胞数（红色细胞数）增加。实验组和对照组的MMP-2 mRNA表达分别为1.07±0.05和0.90±0.02,实验组与对照组相比，差异均有统计学意义（P<0.05）。实验组、对照组和干预组的MMP-2 DNA甲基化水平分别为0.46±0.01,0.53±0.01和0.40±0.02,实验组与对照组的上述指标和干预组相比，差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 MMP-2 DNA甲基化能够抑制同型半胱氨酸诱导的肝细胞凋亡。

关键词：基质金属蛋白酶2 DNA甲基化同型半胱氨酸细胞凋亡

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PSMD10在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制研究

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中国药理学通报 2021年第4期37卷 535-541页

作者：吴欣妍焦运王青青徐龙张辉郭伟杨安宁郝银菊姜怡邓宁夏医科大学基础医学院宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院感染科宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学药学院宁夏回族自治区宁夏银川750004

目的探讨26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基10(PSMD10)在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制。方法选取cbs^(+/+)和cbs^(+/-)小鼠各8只,2%高蛋氨酸饮食饲养8周。全自动生化仪检测血清中AST和ALT水平;Western blot检测肝脏LC3... 详细信息

目的探讨26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基10(PSMD10)在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制。方法选取cbs^(+/+)和cbs^(+/-)小鼠各8只,2%高蛋氨酸饮食饲养8周。全自动生化仪检测血清中AST和ALT水平;Western blot检测肝脏LC3B、p62和PSMD10蛋白表达;qRT-PCR检测PSMD10 mRNA表达;100μmol Hcy干预肝细胞(HL-7702);ELISA检测培养液上清中AST和ALT水平;Western blot检测LC3B、p62和PSMD10蛋白表达;qRT-PCR检测PSMD10 mRNA的表达;转染PSMD10 siRNA或过表达腺病毒,Western blot检测LC3B和p62的表达;ELISA检测AST和ALT水平。结果与cbs^(+/+)组比较,cbs^(+/-)组血清AST和ALT的水平增加(P<0.01),自噬水平增加(P<0.01),PSMD10表达水平增加(P<0.05);细胞水平与动物水平结果一致;与Hcy+siNC组相比,LC3Ⅱ/Ⅰ的比值降低(P<0.01),p62的蛋白表达增加(P<0.01),AST和ALT的浓度降低(P<0.01);与ad-GFP组相比,ad-PSMD10组LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(P<0.01),p62的蛋白表达降低(P<0.01),AST和ALT的浓度增加(P<0.01)。结论Hcy通过上调PSMD10的表达导致肝细胞过度自噬,造成肝脏损伤。

关键词： PSMD10 同型半胱氨酸肝细胞自噬肝损伤 AST ALT

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长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)促进同型半胱氨酸致肝细胞自噬作用

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第3期37卷 240-245页

作者：顾铃毓徐灵博杨安宁焦运张慧萍姜怡邓宁夏医科大学临床医学院国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏医科大学基础医学院宁夏医科大学总医院感染科宁夏医科大学总医院产前诊断中心宁夏银川750000

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)在同型半胱氨酸(Hcy)致肝细胞自噬中的作用。方法体外培养HL7702人肝细胞,分为对照组和Hcy组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的表达水平,转染携... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)在同型半胱氨酸(Hcy)致肝细胞自噬中的作用。方法体外培养HL7702人肝细胞,分为对照组和Hcy组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的表达水平,转染携带双荧光蛋白和LC3(mRFP-GFP-LC3)基因的腺病毒,激光扫描共聚焦显微镜技术观察细胞内自噬流水平变化,实时荧光定量PCR检测lncGAS5的表达水平。转染lncGAS5小干涉RNA(si-lncGAS5)及阴性对照小干涉RNA(si-NC),并用Hcy处理,再次检测LC3B和P62及自噬体的变化。结果与对照组比较,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值增加,P62蛋白表达降低,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量增加,lncGAS5表达升高。敲低lncGAS5后,LC3BⅡ/LC3BⅠ比值减小,P62蛋白表达升高,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量减少。结论 lncGAS5促进Hcy致肝细胞自噬。

关键词：长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5) 同型半胱氨酸(Hcy) 肝细胞自噬

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环状RNA circ＿BRAF＿2在子痫前期胎盘滋养细胞自噬中的作用

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中国临床药理学杂志 2022年第23期38卷 2860-2864页

作者：朱亚飞张玉月谢琳殷荷王艳华吴凯姜怡邓张慧萍宁夏医科大学护理学院宁夏医科大学基础医学院宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏医科大学临床医学院宁夏医科大学总医院妇科湖南省妇幼保健院医学遗传科

目的研究子痫前期（PE）患者胎盘组织中环状RNA circ＿BRAF＿2的表达及其对胎盘滋养细胞自噬的影响。方法选取妊娠对照组与PE组胎盘组织各22例；将HTR-8/SVneo细胞分为对照组（常规培养）、pLV-NC组（转染空载体）、pLV-circ＿BRAF＿... 详细信息

目的研究子痫前期（PE）患者胎盘组织中环状RNA circ＿BRAF＿2的表达及其对胎盘滋养细胞自噬的影响。方法选取妊娠对照组与PE组胎盘组织各22例；将HTR-8/SVneo细胞分为对照组（常规培养）、pLV-NC组（转染空载体）、pLV-circ＿BRAF＿2组（转染circ＿BRAF＿2）、缺氧组（缺氧处理）、pLV-NC+缺氧组（转染空载并进行缺氧处理）、pLV-circ＿BRAF＿2+缺氧组（转染circ＿BRAF＿2并进行缺氧处理）。用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胎盘组织及HTR-8/SVneo细胞中circ＿BRAF＿2的表达，用PCR及Sanger测序对HTR-8/SVneo细胞中circ＿BRAF＿2进行鉴定，用核质分离法检测circ＿BRAF＿2在HTR-8/SVneo细胞胞质和细胞核中的表达，用透射电镜观察细胞自噬体的形成，用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）、P62的表达。用qRT-PCR检测miR-15a-5p的表达水平。结果妊娠对照组、PE组、对照组及缺氧组circ＿BRAF＿2的相对表达水平分别为0.89±0.05,0.32±0.03,0.04±0.05×10-1和0.02±0.03×10-1,PE组与妊娠对照组相比，缺氧组与对照组相比，差异均有统计学意义（均P<0.01）;通过外扩型引物只能在cDNA中扩增出circ＿BRAF＿2,而采用内扩型引物能同时在cDNA和gDNA中扩增出其线性转录本BRAF;circ＿BRAF＿2在HTR-8/SVneo细胞胞质中的表达(0.02±0.02×10-1)显著高于在胞核中的表达(0.02×10-2±0.03×10-3,P<0.01);对照组、pLV-NC组、pLV-circ＿BRAF＿2组、缺氧组、pLV-NC+缺氧组、pLV-circ＿BRAF＿2+缺氧组LC3-Ⅱ蛋白相对表达水平分别为0.75±0.25,0.73±0.23,0.75±0.23,1.17±0.30,1.19±0.32和0.42±0.06,P62蛋白相对表达水平分别为0.72±0.07,0.75±0.09,0.72±0.08,0.45±0.11,0.44±0.10和0.62±0.07,缺氧组的上述指标与对照组相比，pLV-circ＿BRAF＿2+缺氧组的上述指标与pLV-NC+缺氧组相比，差异均有统计学意义（P<0.01,P<0.05）;这6组的单个细胞内自噬体数量变化及miR-15a-5p的相对表达水平变化与LC3-Ⅱ蛋白表达变化水平相同。结论过表达circ＿BRAF＿2可抑制缺氧诱导的HTR-8/Svneo细胞自噬，其作用可能与竞争性结合miR-15a-5p有关。

关键词：子痫前期环状RNA circ_BRAF_2 滋养细胞微小RNA-15a-5p 自噬

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脂肪酸结合蛋白4在同型半胱氨酸致大鼠心肌细胞焦亡中的作用

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解放军医学杂志 2022年第1期47卷 33-38页

作者：董小艳刘达越徐灵博顾铃毓马胜超杨安宁杨勇刘云姜怡邓宁夏医科大学基础医学院银川750004 国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室银川750004 宁夏血管损伤与修复研究重点实验室银川750004 宁夏医科大学临床医学院银川750004 宁夏回族自治区人民医院核医学科银川750004 宁夏医科大学总医院放射科银川750004

目的探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法培养大鼠心肌细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy)与Hcy组(3 mmol/L Hcy),采用Western blotting检测各组FABP4、焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)... 详细信息

目的探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法培养大鼠心肌细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy)与Hcy组(3 mmol/L Hcy),采用Western blotting检测各组FABP4、焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达情况;采用qRT-PCR检测FABP4 mRNA表达变化;采用免疫荧光染色法检测焦亡相关蛋白的表达变化;用FABP4抑制剂(BMS-309403)处理心肌细胞,然后将细胞分为对照组(0 mmol/L Hcy)、Hcy组(3 mmol/L Hcy)及Hcy+BMS-309403组(3 mmol/L Hcy和50μmol/L BMS-309403),再次检测焦亡相关蛋白的表达水平。结果 Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Hcy组FABP4、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达水平明显升高(P<0.05);qRT-PCR结果显示,与对照组比较,Hcy组FABP4表达水平明显升高(P<0.05);免疫荧光染色结果显示,与对照组比较,Hcy组NLRP3、caspase-1、IL-1β荧光强度明显增强。加入FABP4抑制剂(BMS-309403)同时给予Hcy干预后,与Hcy组比较,Hcy+BMS-309403组FABP4、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论 FABP4可能对Hcy诱导的大鼠心肌细胞焦亡有促进作用。

关键词：心肌细胞焦亡同型半胱氨酸脂肪酸结合蛋白4

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circRNA CPSF6核内转移促进同型半胱氨酸诱导的滋养细胞凋亡

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第2期38卷 146-152页

作者：高丽娜吴琪瑞殷荷刘林英吴玉珠张玉月王艳华吴凯张慧萍宁夏医科大学临床医学院妇产科宁夏医科大学总医院妇产科宁夏医科大学基础医学院组胚学教研室国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏银川750004

目的探讨环状RNA剪切及多聚腺苷酸化特异因子6(circRNA CPSF6)在同型半胱氨酸(Hcy)致滋养细胞凋亡中的作用及机制。方法体外培养HTR-8/SVneo人绒毛膜滋养层细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy处理)与1 mmol/L Hcy处理组。采用免疫荧光细胞化... 详细信息

目的探讨环状RNA剪切及多聚腺苷酸化特异因子6(circRNA CPSF6)在同型半胱氨酸(Hcy)致滋养细胞凋亡中的作用及机制。方法体外培养HTR-8/SVneo人绒毛膜滋养层细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy处理)与1 mmol/L Hcy处理组。采用免疫荧光细胞化学染色检测滋养细胞胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达,Western blot法检测caspase-3蛋白水平;实时定量PCR检测circRNA CPSF6的mRNA表达水平;同时,运用小干涉RNA(siRNA)技术敲低滋养细胞circRNA CPSF6表达,Western blot法检测细胞caspase-3、caspase-9、B细胞淋巴瘤分子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)表达;实时定量PCR检测circRNA CPSF6在Hcy处理前后滋养细胞胞质/胞核中的表达水平。结果与对照组相比,Hcy处理组caspase-3表达明显增加,circRNA CPSF6 mRNA表达上调;敲低circRNA CPSF6后,caspase-3表达降低,线粒体凋亡途径被抑制;正常培养的滋养细胞中circRNA CPSF6在胞质大量表达,而给予Hcy处理后,circRNA CPSF6主要在胞核表达。结论通过circRNA CPSF6核内转移激活线粒体凋亡途径促进Hcy诱导的滋养细胞凋亡。

关键词：环状RNA剪切及多聚腺苷酸化特异因子6(circRNA CPSF6) 滋养细胞同型半胱氨酸(Hcy) 细胞凋亡

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miR-5088-5p在同型半胱氨酸致肝细胞焦亡中的保护作用研究

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中国药理学通报 2021年第11期37卷 1565-1570页

作者：董小艳刘达越徐灵博顾铃毓姜怡邓杨安宁焦运李桂忠宁夏医科大学基础医学院宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学临床医学院宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院感染科宁夏回族自治区宁夏银川750004

目的探讨miR-5088-5p在同型半胱氨酸诱导肝细胞焦亡中的作用。方法培养正常肝细胞,分为Control组、Hcy组、转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic后给予Hcy干预组,采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、caspase 1、IL-1β的表达水平... 详细信息

目的探讨miR-5088-5p在同型半胱氨酸诱导肝细胞焦亡中的作用。方法培养正常肝细胞,分为Control组、Hcy组、转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic后给予Hcy干预组,采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、caspase 1、IL-1β的表达水平;采用qRT-PCR检测miR-5088-5p的表达水平;将CBS^(+/-)小鼠和CBS^(+/+)小鼠给予高蛋氨酸饮食12周,采用全自动生化仪检测小鼠血清中Hcy水平;采用免疫荧光检测小鼠肝组织中焦亡相关蛋白的表达水平。结果与Control组相比,Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达水平增加(P<0.01);miR-5088-5p表达水平降低(P<0.01);转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic并给予Hcy干预后,与Hcy组相比,miR-5088-5p NC+Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达无差异,与miR-5088-5p NC+Hcy组相比,miR-5088-5p mimic+Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达水平明显下降(P<0.05);与CBS^(+/+)小鼠相比,全自动生化分析仪结果显示CBS^(+/-)小鼠血清Hcy水平明显升高(P<0.01),免疫荧光染色结果显示CBS^(+/-)组小鼠肝脏中NLRP3、caspase 1、IL-1β荧光强度增高(P<0.01)。结论miR-5088-5p对同型半胱氨酸诱导的肝细胞焦亡具有保护作用。

关键词： CBS小鼠肝细胞高同型半胱氨酸血症 miRNA miR-5088-5p 焦亡

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