检索结果-内蒙古大学图书馆

国际检验医学杂志 2019年第21期40卷 2617-2620页

作者：哈瑞李刚师志云武涛赵志军贾伟宁夏医科大学宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院医学检验中心宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院预防保健科宁夏银川750004 宁夏病原微生物重点实验室宁夏银川750004

目的检测和研究耐亚胺培南铜绿假单胞菌的临床特征及耐药机制。方法对2016年1月至2017年9月该院临床分离的80株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的科室分布、标本类型及耐药性进行回顾性分析;运用PCR检测耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药基因bla IMP、... 详细信息

目的检测和研究耐亚胺培南铜绿假单胞菌的临床特征及耐药机制。方法对2016年1月至2017年9月该院临床分离的80株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的科室分布、标本类型及耐药性进行回顾性分析;运用PCR检测耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药基因bla IMP、bla VIM、bla NDM-1、bla SIM、bla SPM、bla GIM、bla OXA-10及膜孔蛋白OprD 2基因。结果该院以神经外科送检标本的耐亚胺培南铜绿假单胞菌检出(28.0%)最多,主要分离自呼吸道标本(86.0%)。80株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对阿米卡星的耐药率最低(7.5%),对复方磺胺甲噁唑的耐药率最高(97.5%)。耐药基因检测结果显示:bla VIM基因阳性1株(1.2%),bla OXA-10基因阳性4株(5.0%),其他耐药基因均未检出;膜孔蛋白OprD 2基因缺失67株(83.8%)。结论本研究中铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要机制是膜孔蛋白OprD 2基因的缺失。

关键词：铜绿假单胞菌亚胺培南耐药基因

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弓形虫感染对THP-1巨噬细胞极化影响的研究

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中国人兽共患病学报 2018年第10期34卷 902-907页

作者：刘学雷王云杰杨宁爱安童童康宇婷贾伟苏雅静赵志军宁夏医科大学临床医学院银川750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室银川750004

目的探讨弓形虫感染对体外诱导的人外周血单核细胞(Human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)极化特点的影响。方法用佛波酯(PMA)诱导THP-148h使之由悬浮的单核细胞诱导为贴壁的巨噬细胞,体外选择不同时间点感染弓形虫,用Diff... 详细信息

目的探讨弓形虫感染对体外诱导的人外周血单核细胞(Human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)极化特点的影响。方法用佛波酯(PMA)诱导THP-148h使之由悬浮的单核细胞诱导为贴壁的巨噬细胞,体外选择不同时间点感染弓形虫,用Diff染色分析弓形虫在细胞内的增殖情况。Western blot检测极化相关蛋白,Q-PCR检测mRNA的表达情况。结果成功诱导得到贴壁的巨噬细胞模型,感染弓形虫后,M1型巨噬细胞标志性蛋白iNOS及M2型巨噬细胞标志型蛋白Arg-1 36h表达量与对照组差异明显(t=10.23,P<0.05)。Q-PCR的结果显示不同的处理组IL-1、IL-12、iNOS和TNF-α逐渐减少,而IL-10、Arg-1呈逐渐增加,到36h达到顶峰(t=9.587,P<0.05)。结论弓形虫RH株感染THP-1巨噬细胞后可以在胞内生长增殖,THP-1细胞感染后向M2型巨噬细胞方向极化。

关键词： THP-1 弓形虫感染巨噬细胞极化

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利用CRISPR/Cas9技术构建AEG-1基因敲除U251细胞系并探讨其转移行为的特点

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中国生物工程杂志 2018年第10期38卷 38-47页

作者：盛玉瑞李斌王斌左娣马琳任晓璠郭乐刘昆梅宁夏医科大学临床医学院银川750004 宁夏医科大学宁夏颅脑疾病重点实验室银川750004 宁夏临床微生物重点实验室宁夏医科大学总医院银川750003

星形胶质细胞上调基因-1（astrocyte elevated gene-1,AEG-1）在多种肿瘤中过表达,参与肿瘤的形成、转移等过程。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除AEG-1基因并研究其在胶质瘤细胞转移过程中的作用。首先设计构建sgRNA/Cas9二合一表达载体... 详细信息

星形胶质细胞上调基因-1（astrocyte elevated gene-1,AEG-1）在多种肿瘤中过表达,参与肿瘤的形成、转移等过程。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除AEG-1基因并研究其在胶质瘤细胞转移过程中的作用。首先设计构建sgRNA/Cas9二合一表达载体并转染到人胶质瘤U251细胞中,通过TA克隆测序鉴定sgRNA的活性;然后筛选建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系,并利用Western blot实验检测AEG-1的敲除效率;最后利用Transwell小室、划痕实验评价AEG-1敲除后对肿瘤细胞迁移能力的影响。结果显示,成功构建靶向敲除AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体,所构建的载体与实验设计相一致,通过TA克隆测序鉴定sgRNA有活性;成功建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系,Western blot实验结果表明敲除效率高达98%; Transwell小室实验、划痕实验结果表明AEG-1敲除U251细胞系的转移能力明显降低。

关键词：星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1) CRISPR/Cas9 基因敲除 U251 细胞

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双酶切法构建CRISPR-Cas9载体系统的研究

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中国病原生物学杂志 2018年第9期13卷 949-952,957页

作者：杨勇乔霞刘晓明魏军宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750000 宁夏医科大学总医院宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏医科大学总院宁夏人类干细胞研究所

目的以pet41a质粒为载体骨架,通过酶切连接法构建crispr-cas9载体系统,建立一种简单有效的基因编辑载体,为研究细菌耐药基因的敲除提供方法。方法选择质粒pet41a、pwt-cas9和pgRNA,分析核酸序列,选择合适酶切位点。使用XhoI和BgiII两种... 详细信息

目的以pet41a质粒为载体骨架,通过酶切连接法构建crispr-cas9载体系统,建立一种简单有效的基因编辑载体,为研究细菌耐药基因的敲除提供方法。方法选择质粒pet41a、pwt-cas9和pgRNA,分析核酸序列,选择合适酶切位点。使用XhoI和BgiII两种限制性内切酶分别酶切pet41a和pwt-cas9,形成带有相同粘性末端的线性载体片段,回收并用T4DNA连接酶连接,连接产物转化DH5α感受态细胞,转化菌涂布含卡那霉素的固体LB培养基平板进行阳性单克隆筛选并测序,构建的质粒命名为pet41-cas9。使用BgiII和XbaI两种限制性内切酶分别酶切pet41-cas9和pgRNA,经回收纯化、连接和转化后筛选阳性单克隆菌落并测序,重组质粒命名为pet41a-cas9-gRNA。分别将重组质粒pet41-cas9和pet41a-cas9-gRNA转化BL-21(DE3),IPTG诱导后提取蛋白进行SDS-PAGE分析。结果测序证实质粒pet41-cas9、pet41a-cas9-gRNA连接正确,载体构建成功。重组质粒粒转染DE3后经IPTG诱导4h,表达相对分子质量为160×103的重组蛋白,与cas9蛋白理论分子质量相符。结论成功构建CRISPR-Cas9载体系统质粒pet41acas9-gRNA并表达重组cas9蛋白,为细菌基因的编辑研究奠定了实验基础。

关键词：基因编辑技术 crispr-cas9 载体构建限制性内切酶

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宁夏地区某医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌临床分布及耐药基因的分析

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中华医院感染学杂志 2018年第5期28卷 659-662页

作者：刘香花师志云李刚贾伟宁夏医科大学临床医学院医学检验学系银川宁夏750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心银川宁夏750004 宁夏临床病原微生物重点实验室银川宁夏750004

目的探讨医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的临床分布特点、耐药情况及耐药机制,以便指导临床医生合理使用抗菌药物。方法采用WHONET5.6软件统计医院2014年1月-2016年12月所有检出的CRE菌株,MIC法检测药敏结果,改良Hodge试验和EDTA协... 详细信息

目的探讨医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的临床分布特点、耐药情况及耐药机制,以便指导临床医生合理使用抗菌药物。方法采用WHONET5.6软件统计医院2014年1月-2016年12月所有检出的CRE菌株,MIC法检测药敏结果,改良Hodge试验和EDTA协同试验检测是否产碳青霉烯酶;用PCR技术检测碳青霉烯酶的耐药基因并进行测序。结果共分离CRE 70株,以阴沟肠杆菌28株和肺炎克雷伯菌23株为主;主要分布在肝胆外科;对青霉素类及头孢类抗菌药物的耐药率均>90%;改良Hodge试验和EDTA协同试验阳性率分别为77.1%和87.1%;NDM-1耐药基因阳性率最高,为75.7%,其余耐药基因KPC-2、IMP-4阳性率分别为17.1%与11.4%,其中3株同时携带两种耐药基因,未检出GES-4、VIM-2、OXA-48耐药基因。结论碳青霉烯酶耐药基因以NDM-1为主,医院需加强细菌的耐药监测,合理使用抗菌药物,防止感染的暴发性流行。

关键词：碳青霉烯酶肠杆菌科细菌 NDM-1 CRE

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CFTR基因与无精子症关系研究进展

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发育医学电子杂志 2019年第2期7卷 156-160页

作者：杨慧敏胡蓉裴秀英宁夏医科大学附属总医院生殖医学中心总医院临床学院微生物重点实验室教育部生育力保持重点实验室宁夏银川750004

囊性纤维跨膜传导调节因子(cystic fibers transmembrane regulators,CFTR)是完整的跨膜蛋白,也是腺苷-3',5'-环化一磷酸(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)激活的氯离子和碳酸氢根离子传导通道,介导上皮细胞中的跨上皮氯... 详细信息

囊性纤维跨膜传导调节因子(cystic fibers transmembrane regulators,CFTR)是完整的跨膜蛋白,也是腺苷-3',5'-环化一磷酸(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)激活的氯离子和碳酸氢根离子传导通道,介导上皮细胞中的跨上皮氯离子分泌。已知CFTR 突变可以导致囊性纤维化(cysticfibrosis,CF)。

关键词： CFTR基因无精子症囊性纤维化 cyclic 碳酸氢根离子跨膜蛋白上皮细胞调节因子

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诺卡菌感染的临床特点及耐药性分析

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中华医院感染学杂志 2018年第6期28卷 818-821页

作者：程振娜李刚殷国民周晓燕赵梅马红贾伟宁夏医科大学临床医学院医学检验学系宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏银川750004

目的了解诺卡菌感染的临床特点、标本类型及耐药性,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法回顾性分析医院2012年1月-2017年3月细菌培养分离的诺卡菌,分析其菌种分布、标本来源、临床特点及药敏结果,使用16SrRNA扩增测序鉴定菌种,体外药... 详细信息

目的了解诺卡菌感染的临床特点、标本类型及耐药性,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法回顾性分析医院2012年1月-2017年3月细菌培养分离的诺卡菌,分析其菌种分布、标本来源、临床特点及药敏结果,使用16SrRNA扩增测序鉴定菌种,体外药敏试验采用微量肉汤稀释法。结果共收集诺卡菌15株,包含三种诺卡菌,分别为盖尔森基兴诺卡菌、鼻疽诺卡菌、豚鼠耳炎诺卡菌,各占66.7%、20.0%、13.3%;标本来源以痰液为主,占46.5%,其次为静脉血,占20.0%;患者呼吸系统、皮肤、中枢神经系统均有受累,临床表现以肺部感染为主,主要表现为咳嗽、咳痰、发热;诺卡菌对环丙沙星耐药率最高,为80.0%,其次为庆大霉素,为26.7%;所有菌株对阿米卡星、克拉霉素、利奈唑胺、磺胺甲唑/甲氧苄啶100.0%敏感,对亚胺培南、米诺环素等均表现较高的敏感性。结论诺卡菌对利奈唑胺、大环内酯类及磺胺类药物均有较高的敏感性,但对喹诺酮类药物敏感性较低,应加强药物检测,为临床合理使用抗菌药物及医院感染的有效控制提供理论依据。

关键词：诺卡菌属细菌鉴定临床表现耐药性分析

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200例无精症患者染色体核型分析及Y染色体AZF基因微缺失情况观察

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山东医药 2018年第35期58卷 70-72页

作者：师志云陈源昊琪于辛酉马一婧王青贾伟宁夏医科大学总医院银川750001 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏医科大学

目的观察无精症患者染色体核型及Y染色体长臂上的无精子因子(azoospermia factor,AZF)基因微缺失情况。方法对200例无精症患者进行外周血染色体核型分析,采用多重PCR电泳技术和荧光定量PCR技术对Y染色体AZF的6个标签序列位点进行检测。... 详细信息

目的观察无精症患者染色体核型及Y染色体长臂上的无精子因子(azoospermia factor,AZF)基因微缺失情况。方法对200例无精症患者进行外周血染色体核型分析,采用多重PCR电泳技术和荧光定量PCR技术对Y染色体AZF的6个标签序列位点进行检测。结果 200例受检无精症患者中,染色体核型异常9例(其中性染色体异常8例、常染色体易位1例);Y染色体AZF基因微缺失18例(其中AZFb+c区缺失11例、AZFc区缺失5例、AZFb区缺失1例、AZFa区缺失1例),多重PCR电泳技术和荧光定量PCR技术对Y染色体AZF的6个标签序列位点的检测结果一致。结论无精症患者染色体核型异常及Y染色体AZF基因微缺失多见,可能是男性不育的重要原因;多重PCR电泳技术与荧光定量PCR技术检测对Y染色体AZF基因的检测结果一致,后者因省时省力,可作为Y染色体AZF基因微缺失的筛查方法。

关键词：染色体核型 Y染色体无精子因子无精子因子基因微缺失无精症男性不育症

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宁夏某医院HBV感染患者流行现状及临床特点分析

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吉林医学 2018年第8期39卷 1500-1502页

作者：师志云郭雅琪张玉英赵玥赵倩颖何学虎梁小燕董洁赵志军贾伟宁夏医科大学总医院银川宁夏750001 宁夏临床病原微生物重点实验室银川宁夏750001

目的:探讨宁夏某医院乙型肝炎患者HBV DNA感染现状及临床特点。方法:对就诊的疑似HBV感染患者24 952例进行回顾分析,用实时荧光定量PCR检测血浆HBV DNA。结果:HBV感染患者8 075例,总阳性率为32.36%,阳性标本的平均病毒载量1.60×107... 详细信息

目的:探讨宁夏某医院乙型肝炎患者HBV DNA感染现状及临床特点。方法:对就诊的疑似HBV感染患者24 952例进行回顾分析,用实时荧光定量PCR检测血浆HBV DNA。结果:HBV感染患者8 075例,总阳性率为32.36%,阳性标本的平均病毒载量1.60×107IU/ml,男性、女性阳性率分别为32.09%和32.77%,差异无统计学意义(P>0.05)。童年组阳性率(56.67%)最高,与其他年龄组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。夏秋季HBV-DNA阳性率较春冬季有上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。HBV DNA阳性患者病毒载量构成比以102为最高(35.53%),108为最低(4.19%)。阳性患者临床诊断及表现主要以病毒性肝炎为主(74.95%)。结论:HBV DNA检测有助于乙型肝炎的早期诊断、疗效观察和预后判断。

关键词：乙型肝炎病毒流行现状临床特点 HBV感染

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弓形虫Ⅰ、Ⅱ型虫株ROP16基因重组表达载体的构建及其对A549细胞STAT3/6磷酸化水平的影响

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中国病原生物学杂志 2018年第3期13卷 239-243页

作者：赵志军董辉苏雅静钟利王云杰汪涛宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学研究生学院宁夏银川750004 九江学院基础医学院病原生物学教研室江西九江332000

目的探索弓形虫Ⅰ、Ⅱ型虫株ROP16在A549细胞中的功能。方法提取弓形虫Ⅰ(RH)、Ⅱ(ME49)型虫株总RNA,PCR扩增ROP16基因全长序列后克隆至真核表达载体pEGFP-N1,转染A549细胞,采用Western blot方法检测细胞中STAT3/6磷酸水平,采用实时荧... 详细信息

目的探索弓形虫Ⅰ、Ⅱ型虫株ROP16在A549细胞中的功能。方法提取弓形虫Ⅰ(RH)、Ⅱ(ME49)型虫株总RNA,PCR扩增ROP16基因全长序列后克隆至真核表达载体pEGFP-N1,转染A549细胞,采用Western blot方法检测细胞中STAT3/6磷酸水平,采用实时荧光定量PCR检测IL-12、iNOS、ARG1mRNA表达水平。结果 PCR扩增Ⅰ、Ⅱ型虫株ROP16基因全长为2148bp。双酶切和测序验证重组载体构建正确,pEGFP-N1-RH ROP16和pEGFP-N1-ME49ROP16过表达载体转染A549细胞后ROP16mRNA表达水平较未转染组上调(P<0.05,F=824.184,270.904),pEGFP-N1-ME49ROP16转染A549细胞p-STAT3/6表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05,F=1.051,1.203),IL-12、iNOS mRNA与对照组表比呈高表达(P<0.01,F=157.705,173.623)。pEGFP-N1-RH ROP16转染组相比A549细胞对照组p-STAT3/6表达水平上调(P<0.05,F=121.227,68.324),IL-12mRNA表达下调(P<0.01,F=186.397),ARG1mRNA表达上调(P<0.01,F=126.236)。结论弓形虫Ⅰ型RH株ROP16蛋白具有激活p-STAT3/6作用,且能使ARG1 mRNA的表达上调,IL-12 mRNA的表达下调,而弓形虫Ⅱ型ME49虫株ROP16蛋白则无激活p-STAT3/6作用,但能使IL-12mRNA和iNOS mRNA的表达上调。

关键词：弓形虫 ROP16 A549人肺腺癌细胞重组质粒

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