检索结果-内蒙古大学图书馆

中国感染与化疗杂志 2022年第6期22卷 725-731页

作者：师志云马苗尹晓丽王良方侯晓慧张玉英李刚王文陶佳李莎莎贾伟宁夏医科大学总医院医学实验中心银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏医科大学临床医学院.

目的了解宁夏医科大学总医院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的分子流行病学及毒力特征。方法收集2015年1月—2019年12月分离的CRKP 103株,采用改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)联合EDTA改良碳青霉烯酶灭活试验(eCIM)检测产碳青霉烯酶表... 详细信息

目的了解宁夏医科大学总医院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的分子流行病学及毒力特征。方法收集2015年1月—2019年12月分离的CRKP 103株,采用改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)联合EDTA改良碳青霉烯酶灭活试验(eCIM)检测产碳青霉烯酶表型,PCR分子生物学技术检测碳青霉烯酶等耐药基因以及荚膜血清型、毒力基因,多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)对碳青霉烯类耐药高毒力肺炎克雷伯菌(CR-hvKP)进行同源性分析。结果103株CRKP对临床常见抗菌药物表现为不同程度的耐药,mCIM联合eCIM试验结果显示94株CRKP产碳青霉烯酶,其中67.0%产金属酶,33.0%产丝氨酸碳青霉烯酶。耐药基因检出率依次为blaNDM 50.5%(52/103)、bla_(KPC)33.0%(34/103)、bla_(OXA-48)22.3%(23/103)、bla_(IMP)10.7%(11/103)。18种ST型中以ST11型35.3%(36/102)及ST76型22.5%(23/102)为主。CR-hvKP 10株,其中仅4株为荚膜血清K1型、10株均为菌毛黏附基因fim-H和铁载体相关基因ent-B携带者。10株CRhvKP菌株PFGE同源性分析显示以D族群居多,亲缘性接近;未发现同一病区同一时间段的暴发流行。结论该院CRKP菌株以产NDM-5型碳青霉烯酶为主,ST11型为优势流行株。已发现9.7%的CRKP为CR-hvKP菌株,应当引起临床和院感相关部门的重视,防止暴发流行。

关键词：碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药机制多位点序列分型脉冲场凝胶电泳毒力特征

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含有bla_(OXA-48)基因BL21(DE3)菌株的转录组测序与分析

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中国病原生物学杂志 2023年第8期18卷 917-921,926页

作者：潘亚菲康宇婷刘文淼贾伟李刚宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏医学检验临床研究中心

目的了解含有bla_(OXA-48)基因的BL21(DE3)菌株其细菌转录谱的变化,探究bla_(OXA-48)基因的引入对BL21(DE3)菌株代谢及耐药性的影响。方法采用高通量转录组测序的RNA-seq技术对pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)与pET32a(+)-BL21(DE3)及OXA-48菌株进行检测,测序数据处理后获得表达差异基因,差异表达基因的筛选阈值为:|log2(FoldChange)|>1且qvalue<0.005。对差异表达基因进行聚类分析,利用GO数据库和KEGG数据库对表达差异基因进行注释与富集性分析,筛选部分差异表达关键基因进行分类整理。结果pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)与pET32a(+)-BL21(DE3)相比有1201个差异表达基因,其中上调592个,下调609个;GO分析表明,代谢过程、生物合成过程、分子功能、催化活性、离子结合等途径共同参与OXA-48菌株的生物过程。KEGG富集分析表明差异基因主要与碳代谢、不同环境中的微生物代谢、抗生素的生物合成、嘌呤代谢、次生代谢物的生物合成等有关。对差异表达关键基因进行整理分析,与耐药性、生物膜形成、及脂多糖合成代谢相关的差异基因有acrA、acrB、ompF、pedR、mcbR和LptD等。结论bla_(OXA-48)在BL21(DE3)菌株中的表达能调控多种与细菌耐药性及代谢相关基因的表达,这为研究耐药基因对于肠杆菌科细菌产生的影响奠定了基础,可为OXA-48菌株的流行病学监测及其感染的预防控制提供参考。

关键词：碳青霉烯类肠杆菌科细菌细菌耐药性转录组

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抗幽门螺杆菌UreB重组全人源化单域抗体的基因工程表达及分子改造

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中国药科大学学报 2024年第5期55卷 666-672页

作者：王雪芳赵阳刘竹青郭乐仲飞亮罗学刚天津科技大学生物工程学院工业发酵微生物教育部重点实验室暨天津市工业微生物重点实验室天津300457 生物工程国家级实验教学示范中心天津300457 宁夏医科大学检验学院宁夏临床病原微生物重点实验室银川750004

为了构建针对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)脲酶的单域抗体的基因工程表达系统。首先利用Pymol、ITASSER和ClussPro2等AI辅助工具分析比较了不同抗体与Hp脲酶亚单位B(UreB)之间的分子间作用力,确定了VL全人源化单域抗体UreBAb作... 详细信息

为了构建针对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)脲酶的单域抗体的基因工程表达系统。首先利用Pymol、ITASSER和ClussPro2等AI辅助工具分析比较了不同抗体与Hp脲酶亚单位B(UreB)之间的分子间作用力,确定了VL全人源化单域抗体UreBAb作为重点研究对象。根据大肠埃希菌密码子偏好性优化了UreBAb基因序列,并将其分别插入pET28a、pE-SUMO等表达载体,转化大肠埃希菌Rosetta(DE3)获得了重组表达菌株,通过IPTG诱导制备重组抗体蛋白,并利用提取的Hp脲酶作为抗原,分析验证了重组表达抗体的活性。SDS-PAGE检测结果显示UreBAb和SUMO-UreBAb均获得了正确的表达,纯化后的蛋白产率分别为0.34和0.41 mg/mL。单向免疫扩散实验结果证实这两种重组表达抗体均与Hp UreB抗原具有良好的亲和力,对脲酶的抑制率分别为51.27%和74.07%。进而,结合AlphaFold2、cluspro2、mCSM-AB、OSPREY和FoldX等人工智能工具,评估分析了影响抗原-抗体复合物稳定性的关键位点及其突变策略,随后进一步构建了9个UreBAb进化突变体表达菌株,活性分析结果显示,这些突变体与抗原的结合活性均得到了提高,其中以I107W突变体的活性提升最为显著,相较于野生型UreBAb,提高了24.95%。本研究为Hp全人源化单域抗体的开发奠定了良好的基础。

关键词：幽门螺杆菌脲酶全人源化单域抗体基因工程 AI辅助分子改造

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弓形虫ROP16蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期和凋亡的影响

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中国人兽共患病学报 2023年第1期39卷 38-43页

作者：马慧慧汪鹏涛刘春兰李佳铭王艺璇兰敏赵志军宁夏医科大学临床医学院银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室银川750004 宁夏医科大学总院医学实验中心银川750004

目的探讨弓形虫Ⅰ型(RH)ROP16蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期及凋亡方面的作用。方法以空载体(MCF-7-HBLV)和过表达ROP16蛋白的慢病毒(HBLV-RH ROP16)分别感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选出稳定表达ROP16的细胞株,Real time PCR、Wester... 详细信息

目的探讨弓形虫Ⅰ型(RH)ROP16蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期及凋亡方面的作用。方法以空载体(MCF-7-HBLV)和过表达ROP16蛋白的慢病毒(HBLV-RH ROP16)分别感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选出稳定表达ROP16的细胞株,Real time PCR、Western blot法检测MCF-7细胞中ROP16 mRNA和蛋白表达水平。CCK-8和流式细胞术检测细胞增殖、周期和凋亡。Western blot法检测细胞周期及凋亡相关蛋白表达。结果相比MCF-7-HBLV(空载体组)和MCF-7细胞组(对照组),MCF-7-RH ROP16细胞组中ROP16 mRNA和蛋白表达升高;细胞增殖率降低(P<0.01);S期细胞比例、细胞凋亡率升高(P<0.01)。促凋亡因子Bax、P53、Caspase-9、Caspase-3及细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子P21表达增高(P<0.01);抗凋亡蛋白Bcl-2及细胞周期蛋白A1(CyclinA1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的表达均下降(P<0.01)。结论弓形虫Ⅰ型(RH)ROP16蛋白可通过调节与凋亡、周期相关的细胞因子的表达,诱导MCF-7细胞凋亡,抑制其增殖并引起细胞周期阻滞。

关键词：乳腺癌 ROP16蛋白 MCF-7细胞增殖周期凋亡

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刚地弓形虫ROP16蛋白对MH-S细胞极化和凋亡的影响及其相关机制

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第5期40卷 579-586页

作者：李佳铭王艺璇杨宁爱马慧慧兰敏刘春兰赵志军宁夏医科大学临床医学院银川750004 宁夏病原微生物重点实验室银川750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心银川750004

目的探究刚地弓形虫棒状体蛋白16 (ROP16)在小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S细胞)中的表达及其对细胞极化和凋亡的影响和相关机制。方法利用携带绿色荧光标签的ROP16过表达慢病毒转染MH-S细胞,构建稳定表达ROP16的ROP16-MH-S细胞株(过表达组),... 详细信息

目的探究刚地弓形虫棒状体蛋白16 (ROP16)在小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S细胞)中的表达及其对细胞极化和凋亡的影响和相关机制。方法利用携带绿色荧光标签的ROP16过表达慢病毒转染MH-S细胞,构建稳定表达ROP16的ROP16-MH-S细胞株(过表达组),同时设空载体慢病毒转染对照组(空载体组)和无转染对照组(对照组)。转染72 h后免疫荧光法检测ROP16-MH-S中ROP16的表达及其在细胞中的定位。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因的转录水平为内参照,RT-qPCR检测ROP16-MH-S细胞中促炎(M1)因子白细胞介素-1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、 IL-18、 IL-6、 IL-12和抗炎(M2)因子IL-10、转化生长因子-β(TGF-β),以及抑凋亡基因B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl-2)和促凋亡基因Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3 (Caspase 3)、 Caspase 9等mRNA的相对转录水平;Western blotting检测ROP16-MH-S细胞中极化蛋白精氨酸酶1 (Arg-1)、信号转导和转录激活因子3 (STAT3)、 705位点磷酸化(pTyr705)-STAT3、 STAT6、 pTyr641-STAT6和凋亡蛋白Caspase 9、 Caspase 3、 Bcl-2、 Bax蛋白的相对表达水平;流式细胞术检测ROP16-MH-S细胞的凋亡情况。组间比较采用单因素方差分析。结果转染后72 h,空载体组和过表达组90%以上的细胞可见较强的绿色荧光,过表达组细胞中可见明显红色荧光聚集在ROP16-MH-S细胞核及其周围。RT-qPCR结果显示,过表达组ROP16 mRNA的相对转录水平为8 023.459±39.325,高于空载体组(5.540±0.001)(F=83 188, P <0.01);Western blotting检测结果显示,过表达组ROP16蛋白的相对表达水平为16.349±0.746,高于空载体组(1.291±0.333)(F=831.7, P <0.01)。RT-qPCR结果显示,过表达组促炎(M1)因子IL-1β、 TNF-α、 IL-18、IL-6、 IL-12 m RNA的相对转录水平分别为0.495±0.002、 0.337±0.007、 0.378±0.014、 0.474±0.035和0.730±0.021,均低于空载体组(0.994±0.043、 1.165±0.034、 0.943±0.005、 1.153±0.028、 0.926±0.031)(F=261.7、 536.5、 1 682.0、 225.0、 78.5, P <0.01);抗炎(M2)因子IL-10、 TGF-β mRNA的相对转录水平分别为7.013±0.032和1.608±0.024,均高于空载体组(0.790±0.031、 1.091±0.027)(F=23 835.0、 200.1, P <0.01)。Western blotting检测结果显示,过表达组Arg-1、 pTyr705-STAT3、 pTyr641-STAT6蛋白相对表达水平分别为2.337±0.089、 3.471±0.046、 3.905±0.045,均高于空载体组(0.871±0.014、 1.482±0.071、 1.514±0.050)(F=640.8、 1 608.0、 3 528.0, P <0.01)。流式细胞术检测结果显示,过表达组细胞凋亡率为(2.990±0.042)%,低于对照组(6.480±0.071)%和空载体组(5.655±0.290)%(F=219.7, P <0.01)。Western blotting检测结果显示,过表达组促凋亡蛋白Bax、 Caspase 3、 Caspase 9的相对表达水平分别为0.558±0.005、 0.640±0.011、0.593±0.026, Bax/Bcl-2为0.453±0.011,均低于空载体组(0.991±0.010、 0.926±0.006、 0.963±0.012、0.834±0.008)(F=2 850.0、 1 200.0、 359.3、 2 337.0, P <0.01)。RT-qPCR检测结果显示,过表达组促凋亡基因Bax、 Caspase 3、 Caspase 9 mRNA的相对转录水平分别为0.588±0.086、 0.563±0.025和0.403±0.014, Bax/Bcl-2为0.158±0.008,均低于空载体组(0.924±0.016、 0.937±0.041、 0.807±0.032、 0.779±0.014)(F=24.7、 78.6、 154.9、 26

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白16 小鼠肺泡巨噬细胞凋亡信号转导和转录激活因子3/6

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一株杀白细胞素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子分型及肠毒素检测

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中国病原生物学杂志 2022年第6期17卷 649-653,659页

作者：苏雅静乔霞康宇婷汪澎涛杨宁爱贾伟赵志军宁夏医科大学总医院宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心

目的对宁夏某医院临床分离的1株杀白细胞素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(PVL^(+) MRSA)菌株进行分子分型和肠毒素检测分析,以了解该菌株的遗传学特征。方法按AxyPrep质粒小量制备试剂盒说明书提取细菌DNA,利用葡萄球菌染色体基因... 详细信息

目的对宁夏某医院临床分离的1株杀白细胞素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(PVL^(+) MRSA)菌株进行分子分型和肠毒素检测分析,以了解该菌株的遗传学特征。方法按AxyPrep质粒小量制备试剂盒说明书提取细菌DNA,利用葡萄球菌染色体基因盒mec(staphylococcal cassette chromosome mec,SCCmec)分型、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)以及金黄色葡萄球菌表面蛋白A基因多态性分型(staphylococcus protein A,Spa)技术对PVL^(+) MRSA分离株进行分子分型。采用PCR法检测金黄色葡萄球菌7个管家基因(arcC,aroE,tpi,pta,glpF,gmk和yqiL),将测序结果与MLST数据库进行比对。采用微孔板酶联免疫法(ELISA)检测PVL^(+) MRSA分离株中5种传统肠毒素(staphylococcal enterotoxins A-E,SEA-SEE)的表达情况。结果对PVL^(+) MRSA分离株进行SCCmec基因的多重PCR扩增,扩增产物经测序比对分析,确定该菌株为SCCmecⅣa型。PCR扩增金黄色葡萄球菌7个管家基因后测序比对,获得PVL^(+) MRSA分离株的序列型(sequence types,STs)为ST 3191。PCR扩增spa基因并测序,测序结果与Spa Serve数据库比对,未检出PVL^(+) MRSA分离株的Spa型别(non-typeable,NT)。ELISA检测PVL^(+) MRSA分离株产B和C混合型葡萄球菌肠毒素。结论 PVL^(+) MRSA分离株的分子型为ST 3191-MRSA-SCCmecⅣa型,且产B和C混合型葡萄球菌肠毒素,属于社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子分型 PCR 肠毒素

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2015-2021年宁夏某三甲医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性变迁

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中华医院感染学杂志 2023年第10期33卷 1468-1472页

作者：王良方李刚侯晓慧尹晓丽王文李莎莎陶佳赵梅胡瑞贾伟师志云宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750004

目的了解某医院7年间肺炎克雷伯菌(KP)及耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的临床分布和抗菌药物耐药性的变化和趋势,为临床医生和决策部门对抗菌药物的合理使用提供支持。方法收集2015-2021年某医院临床分离的KP及CRKP菌株,采用WHONET 5.... 详细信息

目的了解某医院7年间肺炎克雷伯菌(KP)及耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的临床分布和抗菌药物耐药性的变化和趋势,为临床医生和决策部门对抗菌药物的合理使用提供支持。方法收集2015-2021年某医院临床分离的KP及CRKP菌株,采用WHONET 5.6和SPSS 26.0软件对标本来源、科室来源、药敏试验结果及常用抗菌药物的耐药性变迁进行回顾性分析。结果2015-2021年共分离非重复KP 8181株,急诊科检出率最高(15.69%);主要分离自痰液(51.83%)。KP对头孢唑林、亚胺培南和阿米卡星的平均耐药率分别为64.36%、3.97%和3.31%。2015-2018年肺炎克雷伯菌对常见抗菌药物的耐药性有明显上升,从2018年开始,近两年肺炎克雷伯菌对常见抗菌药物及亚胺培南、美罗培南等碳青霉烯类抗菌药物的耐药性出现下降。2015-2021年共分离CRKP 327株,检出率呈上升趋势,近两年检出率有所下降。CRKP对头孢菌素类等临床常用抗菌药物均表现为高度耐药,对庆大霉素、左氧氟沙星等抗菌药物耐药性出现下降,对多黏菌素B、替加环素敏感。结论2015-2021年间该医院临床分离KP和CRKP菌株对多数抗菌药物的耐药率总体呈先上升后下降的趋势。耐药率总体趋势呈上升趋势,定期进行细菌耐药性监测有助于了解细菌耐药性变化,预防和控制CRKP的产生和传播。

关键词：耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌临床分布耐药变迁耐药性

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IGF2BP1表达水平对肺腺癌顺铂耐药性影响的研究

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药物生物技术 2024年第3期31卷 232-240页

作者：张乐乐王学全丁嘉佩王微皮文虎杨海华郭乐宁夏医科大学检验学院临床病原微生物重点实验室宁夏银川750004 浙江省台州医院放疗科台州市放射肿瘤学重点实验室浙江临海317000

作者先前的研究揭示胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白(IGF2BP1)在肺腺癌(LUAD)中高表达预示不良预后并影响免疫微环境,为了探讨其对LUAD顺铂耐药的影响,利用CTR-DB数据库揭示了IGF2BP1在肺癌和间皮瘤等肿瘤中与卡铂联合紫杉醇、顺铂联合... 详细信息

作者先前的研究揭示胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白(IGF2BP1)在肺腺癌(LUAD)中高表达预示不良预后并影响免疫微环境,为了探讨其对LUAD顺铂耐药的影响,利用CTR-DB数据库揭示了IGF2BP1在肺癌和间皮瘤等肿瘤中与卡铂联合紫杉醇、顺铂联合培美曲塞等药物抵抗相关;TCGA-LUAD转录组数据挖掘显示顺铂耐药组对奥沙利铂也呈现显著耐药。结果显示IGF2BP1表达与顺铂和奥沙利铂敏感性显著负相关,顺铂耐药组和敏感组的差异基因对甘油三酯代谢、氨基酸跨膜运输、加单氧酶活性和脂肪酸反应等生物功能有显著影响。IGF2BP1与46个顺铂耐药差异表达基因显著共表达,预后分析揭示他们中有32个基因影响LUAD患者总体生存率,且28个基因是预后不良因素。体外实验表明敲除IGF2BP1的LUAD细胞对顺铂敏感性上升,进一步抑制肿瘤细胞生长和克隆形成。综上所述,LUAD IGF2BP1表达水平与患者顺铂敏感性显著相关,IGF2BP1共表达基因显著影响患者预后,通过敲除IGF2BP1能显著提高LUAD细胞对顺铂的敏感性,本项研究可能会为LUAD的耐药带来一个新的研究方向。

关键词：胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白顺铂预后肺腺癌化疗耐药生物标记物 m6A修饰

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慢性阻塞性肺疾病患者肠道微生物组成及基因功能分析

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中国微生态学杂志 2022年第10期34卷 1122-1128页

作者：康宇婷苏雅静乔霞汪澎涛杨宁爱赵志军贾伟宁夏医科大学总医院宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏银川750000 宁夏医科大学总医院医学实验中心

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肠道微生物组成、丰度及差异基因功能变化。方法收集我院呼吸科10例确诊COPD患者(COPD组)和10例对照受试者(对照组)粪便样品进行宏基因组高通量测序分析。结果PCA分析组间比较发现2组研究对象粪便样... 详细信息

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肠道微生物组成、丰度及差异基因功能变化。方法收集我院呼吸科10例确诊COPD患者(COPD组)和10例对照受试者(对照组)粪便样品进行宏基因组高通量测序分析。结果PCA分析组间比较发现2组研究对象粪便样品微生物群落差异大,具有可比性。物种组成分析显示:对照组粪便样品中高度富集的菌科主要包括毛螺菌科、理研菌科、韦荣球菌科、优杆菌科、臭杆菌科、氨基酸球菌科、乳杆菌科等,属层面富集的主要包括罗斯菌属、胃瘤球菌属、小杆菌属、真杆菌属、拟杆菌属、粪球菌属、双歧杆菌属等;COPD组粪便样品富集菌群主要包括紫单胞菌科、Selenomonadaceae、巨单胞菌属和韦荣球菌属。物种多样性分析与对照组相比,COPD组多样性更低,差异有统计学意义(W=87,P=0.0039)。物种相关性网络图分析显示与其他门类菌群相比,拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门与其他物种的关联性最强(size=52.07、18.87、14.01)。组间差异基因进行GO功能显著性富集分析,差异基因均富集在如细胞学过程、刺激应答、生物学黏附及调节、代谢过程及信号通路等。KEGG功能显著性富集分析显示差异基因主要富集途径包括代谢途径、次生代谢物合成、淀粉和蔗糖的合成、抗生素的合成等。结论COPD患者肠道内存在菌群及基因功能失调。

关键词：肠道微生物组慢性阻塞性肺疾病宏基因组测序

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不同基因型弓形虫ROP16对人肺上皮细胞凋亡及细胞周期的影响

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中国兽医科学 2024年第12期54卷 1674-1682页

作者：李光琪田梅周毓宁马少寒马珊妮赵志军宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏银川750004 宁夏医学检验临床研究中心宁夏银川750004 宁夏医科大学第一临床医学院宁夏银川750004

为探讨弓形虫Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型ROP16对人肺上皮细胞凋亡及细胞周期的影响及分子机制,本研究构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16慢病毒载体并转染至人肺上皮细胞BEAS-2B细胞中,经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达3种不同基因型ROP16细胞株,培养细胞... 详细信息

为探讨弓形虫Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型ROP16对人肺上皮细胞凋亡及细胞周期的影响及分子机制,本研究构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16慢病毒载体并转染至人肺上皮细胞BEAS-2B细胞中,经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达3种不同基因型ROP16细胞株,培养细胞并提取全蛋白及总RNA,通过RT-qPCR及Western-blot检测Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型ROP16对细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase9(CAS9)、P53及细胞周期相关蛋白CDK6、P21、Cyclin D1在m RNA和蛋白水平表达量的影响,并进一步探究不同基因型ROP16对细胞STAT3磷酸化水平的影响。Western-blot及RT-qPCR检测结果显示,3种不同基因型慢病毒过表达载体转染BEAS-2B细胞后其ROP16 m RNA和蛋白均明显表达,提示细胞模型构建成功;针对细胞凋亡及细胞周期相关蛋白的检测结果显示,与空白对照组及阴性对照组相比3种基因型ROP16均可引起细胞凋亡相关蛋白BAX和BCL-2下调,Ⅰ型和Ⅲ型ROP16可以引起CAS9及P53表达水平降低,且有统计学差异;Western-blot结果显示,Ⅰ型和Ⅲ型ROP16均可引起细胞周期相关蛋白P21、Cyclin D1及CDK6表达下调,并有统计学差异;此外,Ⅰ型和Ⅲ型ROP16过表达组BEAS-2B细胞中STAT3表达下调,而在Ⅱ型ROP16的BEAS-2B细胞中P-STAT3表达下调,且均有统计学意义。综上所述,Ⅰ型和Ⅲ型弓形虫ROP16相比于Ⅱ型可更显著的调节BEAS-2B细胞凋亡和细胞周期相关因子的表达及细胞STAT3磷酸化程度。

关键词：刚地弓形虫 ROP16 肺上皮细胞细胞周期凋亡

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