检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2024年第12期54卷 1674-1682页

作者：李光琪田梅周毓宁马少寒马珊妮赵志军宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏银川750004 宁夏医学检验临床研究中心宁夏银川750004 宁夏医科大学第一临床医学院宁夏银川750004

为探讨弓形虫Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型ROP16对人肺上皮细胞凋亡及细胞周期的影响及分子机制,本研究构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16慢病毒载体并转染至人肺上皮细胞BEAS-2B细胞中,经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达3种不同基因型ROP16细胞株,培养细胞... 详细信息

为探讨弓形虫Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型ROP16对人肺上皮细胞凋亡及细胞周期的影响及分子机制,本研究构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16慢病毒载体并转染至人肺上皮细胞BEAS-2B细胞中,经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达3种不同基因型ROP16细胞株,培养细胞并提取全蛋白及总RNA,通过RT-qPCR及Western-blot检测Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型ROP16对细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase9(CAS9)、P53及细胞周期相关蛋白CDK6、P21、Cyclin D1在m RNA和蛋白水平表达量的影响,并进一步探究不同基因型ROP16对细胞STAT3磷酸化水平的影响。Western-blot及RT-qPCR检测结果显示,3种不同基因型慢病毒过表达载体转染BEAS-2B细胞后其ROP16 m RNA和蛋白均明显表达,提示细胞模型构建成功;针对细胞凋亡及细胞周期相关蛋白的检测结果显示,与空白对照组及阴性对照组相比3种基因型ROP16均可引起细胞凋亡相关蛋白BAX和BCL-2下调,Ⅰ型和Ⅲ型ROP16可以引起CAS9及P53表达水平降低,且有统计学差异;Western-blot结果显示,Ⅰ型和Ⅲ型ROP16均可引起细胞周期相关蛋白P21、Cyclin D1及CDK6表达下调,并有统计学差异;此外,Ⅰ型和Ⅲ型ROP16过表达组BEAS-2B细胞中STAT3表达下调,而在Ⅱ型ROP16的BEAS-2B细胞中P-STAT3表达下调,且均有统计学意义。综上所述,Ⅰ型和Ⅲ型弓形虫ROP16相比于Ⅱ型可更显著的调节BEAS-2B细胞凋亡和细胞周期相关因子的表达及细胞STAT3磷酸化程度。

关键词：刚地弓形虫 ROP16 肺上皮细胞细胞周期凋亡

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过表达碳青霉烯酶OXA-48对菌株耐药性、适应性及宿主细胞Toll样受体信号通路的影响

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中国生物制品学杂志 2023年第9期36卷 1032-1038页

作者：潘亚菲赵志军党甜甜康宇婷贾伟宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏病原微生物重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院医学科学研究院宁夏银川750004

目的探讨过表达OXA-48对菌株耐药性、适应性及宿主细胞Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路的影响。方法将重组质粒pET32a(+)-OXA-48转化至*** BL21(DE3)中,获得的重组菌pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)进行菌落PCR及测序鉴定。以A_(600)(0.3、0.5、0.7)、IPTG终浓度(0.4、0.6、0.8 mmol/L)及诱导时间(2、4、6 h)为变量,mRNA转录水平为响应值,设计3因素3水平正交试验,优化质粒的诱导表达条件。纸片扩散法检测重组菌pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)对亚胺培南(Imipenem,IPM)、美罗培南(Meropenem,MEM)、头孢曲松(Ceftriaxone,CRO)、头孢吡肟(Cefepime,FEP)的耐药性;通过生物膜形成试验和血清抵抗力试验检测重组菌pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)的适应性。将pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)、pET32a(+)-BL21(DE3)和*** BL21(DE3)菌株分别感染小鼠肺泡巨噬细胞MH-S,qRT-PCR法检测细胞中TLR2、TLR4和NF-кB(p65)基因mRNA转录水平,ELISA法检测细胞因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-10、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的表达情况。结果经菌落PCR及测序鉴定,重组菌pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)构建正确。最佳诱导条件:A_(600)为0.3,IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导时间为2 h。与pET32a(+)-BL21(DE3)菌株比较,重组菌pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)对IPM、MEM、CRO和FEP 4种抗生素的耐药性明显降低(t=7.14~22.32,P均<0.05),形成的生物膜明显增多(t=15.69,P<0.05),在血清中的存活率显著升高(P<0.05);pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)感染MH-S细胞24 h后,TLR2基因mRNA转录水平显著增加(t=5.77,P<0.05),感染12及24 h后,TLR4、NF-кB(p65)基因mRNA转录水平显著增加(t=3.71~10.06,P<0.05)。与正常细胞组相比较,pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)感染MH-S细胞6、12和24 h后,IL-6及TNF-α的表达水平显著升高(t分别为7.90~13.44及5.40~6.32,P均<0.01),IL-10表达水平显著下降(t=3.15~4.08,P均<0.05),TGF-β的表达水平差异无统计学意义(t=0.013~1.41,P均>0.05);感染12和24 h时,IL-6表达水平显著高于pET32a(+)-BL21(DE3)组(t分别为2.92和3.79,P均<0.05)。结论过表达OXA-48可降低细菌的耐药性,提高适应性及宿主细胞TLRs信号通路相关因子的转录水平,还可影响宿主细胞下游细胞因子的表达水平。

关键词：碳青霉烯酶OXA-48 耐药性适应性 Toll样受体细胞因子

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弓形虫Ⅱ型ROP16蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞增殖凋亡迁移和侵袭的影响

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中国兽医科学 2023年第3期53卷 396-402页

作者：马慧慧汪鹏涛刘春兰李佳铭王艺璇兰敏赵志军宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学总院医学实验中心宁夏银川750004

为探讨弓形虫Ⅱ型(ME49)ROP16蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,利用Ⅱ型ROP16(MCF-7-ROP16Ⅱ)和空载体(MCF-7-HBLV)慢病毒载体分别感染MCF-7细胞,用实时荧光PCR、Western-blot验证ROP16蛋白在MCF-7细胞的表达,用CC... 详细信息

为探讨弓形虫Ⅱ型(ME49)ROP16蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,利用Ⅱ型ROP16(MCF-7-ROP16Ⅱ)和空载体(MCF-7-HBLV)慢病毒载体分别感染MCF-7细胞,用实时荧光PCR、Western-blot验证ROP16蛋白在MCF-7细胞的表达,用CCK-8和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,用细胞划痕试验和Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,用Western-blot检测凋亡相关因子Bax、p53、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3的表达。结果显示:相比MCF-7-HBLV(空载体组)和MCF-7细胞组(空白组),过表达组(MCF-7-ROP16Ⅱ)中ROP16 m RNA和蛋白表达显著升高;过表达组的细胞增殖率、侵袭率和迁移率显著降低(P<0.05);而细胞凋亡率显著升高(P<0.05);促凋亡因子Bax、p53、Caspase-3、Caspase-9高表达(P<0.05),而抗凋亡因子Bcl-2低表达(P<0.05)。结果表明,弓形虫Ⅱ型ROP16蛋白抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭,且诱导细胞凋亡。

关键词：乳腺癌 ROP16蛋白 MCF-7细胞增殖凋亡迁移侵袭

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中国地区家猫弓形虫流行病学特征及空间聚集性研究

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中国人兽共患病学报 2024年第10期40卷 913-921页

作者：苏雅静林雪张晨薛頔无宁夏医科大学总医院医学科学研究院宁夏临床病原微生物重点实验室银川750004 宁夏大学教育学院银川750021 宁夏回族自治区体检康复保健中心银川750002

目的了解我国家猫弓形虫感染状况和空间分布特征,以期为刚地弓形虫的预防和控制提供科学依据。方法本研究基于PubMed、中国知网CNKI、万方数据库及百度学术数据库选择性文献调查检索,检索截至2023年12月31日发表的关于中国地区家猫弓形... 详细信息

目的了解我国家猫弓形虫感染状况和空间分布特征,以期为刚地弓形虫的预防和控制提供科学依据。方法本研究基于PubMed、中国知网CNKI、万方数据库及百度学术数据库选择性文献调查检索,检索截至2023年12月31日发表的关于中国地区家猫弓形虫血清流行率的调查研究。应用地理信息系统(Geographical information systems,GIS)对中国地区家猫弓形虫感染状况进行空间定位与表达。采用SPSS 26.0软件统计分析。结果本研究共纳入1984年至2023年间发表的86项符合条件的研究,涵盖28个省级行政区,涉及20722只猫。ArcGIS分级统计结果显示,我国家猫弓形虫血清抗体总阳性率为14.78%(3080/20836,95%CI:14.07%~15.03%)。西藏自治区、天津市、海南省、香港特别行政区、澳门特别行政区和台湾省至今尚未见猫弓形虫流行病学调查研究。猫弓形虫血清抗体阳性率最高的地区是山西省(60%,54/90,95%CI:49.82%~70.18%),其次是河北省(57.33%,43/75,95%CI:46.07%~68.59%)、河南省(45.53%,173/380,95%CI:40.52%~50.54%)和云南省(43.64%,24/55,95%CI:30.49%~56.79%),而弓形虫血清抗体阳性率最低的地区是江西省(2.47%,2/81,95%CI:-0.90%~5.90%)。我国北方地区的猫弓形虫血清抗体阳性率为14.12%(2044/14481,95%CI:12.34%~15.90%),而南方地区的阳性率为16.30%(1036/6355,95%CI:15.40%~17.20%),两者间有统计学差异(χ^(2)=16.60,P<0.05)。此外,时间分布结果显示,1984-2023年我国猫弓形虫血清抗体阳性率总体呈下降趋势。结论弓形虫在我国家猫中广泛传播,流行周期稳定且不同地区之间差异很大。由于宠物猫在我国日益流行,以及这些猫与人类之间的亲密关系可能会带来重大的暴露风险。因此,养猫与人类弓形虫感染之间的联系,以及如何减少人类通过猫接触弓形虫和猫弓形虫卵囊污染环境,需要进一步研究。

关键词：弓形虫猫流行病学中国 GIS技术

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鲍曼不动杆菌abaI基因的克隆表达分析、同源建模及分子对接分析

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化学研究与应用 2022年第12期34卷 2886-2893页

作者：乔霞苏雅静康宇婷汪澎涛贾伟宁夏医科大学总医院宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004

高丝氨酸内脂合成酶(homoserine lactone synthase,abaI)是导致鲍曼不动杆菌生物被膜形成的关键酶之一,对其结构功能的研究有助于我们对抑制生物被膜形成有很大帮助。本研究通过Genebank查找abaI(A1S_0109)蛋白序列,运用分子技术对其进... 详细信息

高丝氨酸内脂合成酶(homoserine lactone synthase,abaI)是导致鲍曼不动杆菌生物被膜形成的关键酶之一,对其结构功能的研究有助于我们对抑制生物被膜形成有很大帮助。本研究通过Genebank查找abaI(A1S_0109)蛋白序列,运用分子技术对其进行表达分析,应用生物分析软件ExPASy、ESPript、MEG5.0、SWISS-MODEL等对其进行结构分析,使用分子对接软件分析抑制剂的关键结合位点。结果显示,在含有pET28a-abaI重组质粒BL21菌株与野生BL21菌株相比生物被膜形成能力以及运动性显著增高。从生成生物膜被膜的定义上,BL21从不产生物被膜菌株,变成了产膜菌株。预测其结构蛋白与TofI蛋白高度相似,通过分子对接首次揭示abaI蛋白抑制剂与abaI蛋白相互作用关系。研究结果显示abaI在BL21中能够促使生物被膜的形成和增强细菌的运动,分子对接揭示了abaI蛋白的相互作用位点,为进一步研究其活性以及抑制剂提供了重要的参考信息。

关键词：鲍曼不动杆菌 abaI 生物被膜克隆与表达分子对接

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耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌分子流行病学特征及耐药性

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中国感染控制杂志 2022年第11期21卷 1053-1059页

作者：兰敏赵志军康宇婷王艺璇李佳铭刘春兰马慧慧贾伟宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏病原微生物重点实验室宁夏银川750004

目的探讨耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的分子流行病学特征,研究CRE耐药特点及同源性。方法收集宁夏某医院2018年1月—2021年5月临床分离的158株非重复CRE,采用聚合酶链式反应(PCR)检测耐药基因,应用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合EDT... 详细信息

目的探讨耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的分子流行病学特征,研究CRE耐药特点及同源性。方法收集宁夏某医院2018年1月—2021年5月临床分离的158株非重复CRE,采用聚合酶链式反应(PCR)检测耐药基因,应用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)进行表型确证,采用质粒接合试验分析bla_(NDM)水平转移情况,运用多位点序列分型(MLST)进行同源性分析。结果158株CRE主要为肺炎克雷伯菌(61株,38.61%),其次是阴沟肠杆菌(37株,23.42%)和大肠埃希菌(23株,14.56%),检出CRE最多的科室为ICU和烧伤整形科,CRE标本来源排名前四的分别是痰、脓性分泌物、引流液和无菌中段尿,检出耐药基因以新德里金属-β-内酰胺酶(NDM)为主。23株大肠埃希菌mCIM联合eCIM试验阳性率达95.65%,质粒接合试验成功将20株大肠埃希菌中15株菌株的bla_(NDM)基因转移到大肠埃希菌J53AZ^(R),接合子菌株对亚胺培南、美罗培南和头孢菌素类抗生素的耐药性较受体菌增强。MLST结果显示,23株大肠埃希菌中检出14种ST型,以ST10和ST410为主。结论该院CRE多来源于ICU,以携带bla_(NDM)基因为主,对临床常用抗菌药物具较高耐药性,医院应当加大抗菌药物使用监管力度,指导临床合理用药。该地区NDM酶亚型逐渐变化,应持续监测以及时发现新亚型。

关键词：耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌分布耐药性大肠埃希菌新德里金属β-内酰胺酶质粒接合

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蛋白激酶D在人类冠状病毒229E复制中的作用及机制研究

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中国人兽共患病学报 2023年第11期39卷 1044-1052页

作者：韩慧娟刘欢赵志军宁夏医科大学临床医学院银川750001 宁夏医科大学总医院临床病原微生物重点实验室银川750001 罗彻斯特大学医学系心血管研究所罗彻斯特市14642

目的探究蛋白激酶D(PKD)在人类冠状病毒229E(HCoV-229E)复制中的作用及潜在分子机制。方法以MRC-5细胞作为模型,采用qPCR和Western blot检测PKD家族基因和蛋白的表达水平;通过siRNA敲除Prkd3及PKD抑制剂(CRT0066101)抑制PKD活性,检测HCo... 详细信息

目的探究蛋白激酶D(PKD)在人类冠状病毒229E(HCoV-229E)复制中的作用及潜在分子机制。方法以MRC-5细胞作为模型,采用qPCR和Western blot检测PKD家族基因和蛋白的表达水平;通过siRNA敲除Prkd3及PKD抑制剂(CRT0066101)抑制PKD活性,检测HCoV-229E感染细胞后的复制水平;通过CCK8检测细胞活性,TCID_(50)测定病毒滴度,免疫荧光染色检测HCoV-229E的表达和反式高尔基体网络(TGN)的结构;通过检测磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PI(4,5)P2)的水平反映磷脂酰肌醇4-激酶IIIβ(PI4KIIIβ)活性;采用PI4KIIIβ抑制剂(BQR695)抑制PI4KIIIβ活性,检测HCoV-229E感染细胞后的TGN的结构变化和HCoV-229E复制水平;采用CRT0066101抑制Vero-E6细胞的PKD活性,检测HCoV-229E感染后的的复制水平。结果PKD家族基因和蛋白表达水平在HCoV-229E感染过程中明显增加,包括Prkd1、Prkd2和Prkd3;与对照组相比,敲低PKD3显著抑制HCoV-229E的mRNA水平和滴度(t=8.999,P<0.001;t=6.920,P<0.001),过表达PKD3则增加了HCoV-229E的mRNA水平和滴度(t=6.630,P<0.001;t=5.794,P<0.001);CRT0066101也显著抑制HCoV-229E的mRNA水平和滴度(t=6.931,P<0.001;t=4.055,P<0.01),免疫荧光染色结果表明,CRT0066101抑制HCoV-229E感染导致的TGN裂变;抑制PI4KIIIβ活性显著降低PI(4,5)P2水平,且BQR695挽救了PKD过表达导致的PI(4,5)P2水平升高(t=6.671,P<0.01),BQR695降低了HCoV-229E感染细胞的TGN裂变,HCoV-229E mRNA水平和滴度(t=5.151,P<0.001;t=7.744,P<0.001);CRT0066101抑制HCoV-229E在Vero-E6细胞中的mRNA水平和滴度(t=7.480,P<0.001;t=7.228,P<0.01)。结论本研究揭示了PKD通过调控PI4KIIIβ影响TGN的裂变参与HCoV-229E复制,并证明PKD抑制剂和PI4KIIIβ抑制剂对降低HCoV-229E的复制具有显著作用,这些发现为今后研究冠状病毒感染的治疗提供重要的参考依据。

关键词：人类冠状病毒229E(HCoV-229E) 冠状病毒蛋白激酶D 反式高尔基体网络 CRT0066101

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弓形虫ROP16蛋白在人白血病细胞THP-1表达及对其细胞增殖与凋亡的影响

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中国人兽共患病学报 2022年第4期38卷 277-284页

作者：陈梅贾伟党甜甜潘亚菲杨宁爱苏雅静赵志军宁夏医科大学临床医学院银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室银川750004 宁夏医科大学总院医学实验中心银川750004

目的探讨弓形虫Ⅱ型(Me49)ROP16蛋白在急性单核细胞白血病细胞株THP-1中的表达及其对THP-1细胞增殖与凋亡的影响。方法构建过表达ROP16(overExp-ROP16)和空载体(overExp-NC)慢病毒,通过转染THP-1细胞,72 h后观察荧光表达情况,采用PCR与W... 详细信息

目的探讨弓形虫Ⅱ型(Me49)ROP16蛋白在急性单核细胞白血病细胞株THP-1中的表达及其对THP-1细胞增殖与凋亡的影响。方法构建过表达ROP16(overExp-ROP16)和空载体(overExp-NC)慢病毒,通过转染THP-1细胞,72 h后观察荧光表达情况,采用PCR与Western blot验证ROP16在THP-1细胞中的表达。免疫荧光技术检测ROP16蛋白在THP-1细胞中的定位。CCK-8与流式细胞术检测细胞增殖及凋亡。采用qRT-PCR检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA相对表达水平。Western blot检测Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3和Cleaved-Caspase-3蛋白的表达变化。结果构建的过表达ROP16重组慢病毒转染到THP-1细胞后,可观察强荧光信号,ROP16蛋白在THP-1细胞中成功表达。免疫荧光结果表明ROP16蛋白定位于THP-1细胞核。CCK-8与流式细胞术证实ROP16蛋白抑制THP-1细胞的增殖并促进其凋亡(均P<0.05)。与对照组相比,过表达组促凋亡因子Bax、Caspase-3 mRNA高表达(P<0.05),抗凋亡因子Bcl-2 mRNA低表达(P<0.01),Bax与Cleaved-Caspase-3蛋白水平上调(P<0.01),Bcl-2与Pro-Caspase-3蛋白水平下调(P<0.01)。结论构建的慢病毒表达质粒overExp-ROP16可在急性单核细胞白血病细胞株THP-1中表达且通过入核调节凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3而抑制THP-1细胞增殖,促进其凋亡。

关键词：刚地弓形虫 ROP16 THP-1细胞增殖凋亡

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肠杆菌科细菌对氨基糖苷类的耐药性及 16S rRNA 甲基化酶基因的检测研究

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中国感染与化疗杂志 2021年第5期21卷 593-598页

作者：王文王亮陶佳李刚贾伟宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏临床病原微生物重点实验室银川750004

目的了解氨基糖苷类耐药肠杆菌科细菌的分布、耐药情况,及16S rRNA甲基化酶基因型的分布,为临床用药提供参考依据。方法收集宁夏医科大学总医院2017年临床分离的非重复肠杆菌科细菌142株,细菌鉴定采用VITEK-2 Compact系统,药敏试验采用... 详细信息

目的了解氨基糖苷类耐药肠杆菌科细菌的分布、耐药情况,及16S rRNA甲基化酶基因型的分布,为临床用药提供参考依据。方法收集宁夏医科大学总医院2017年临床分离的非重复肠杆菌科细菌142株,细菌鉴定采用VITEK-2 Compact系统,药敏试验采用肉汤微量稀释法,PCR扩增16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE、rmtF、rmtG、rmtH、npmA)。结果142株肠杆菌科细菌中72株对氨基糖苷类耐药。这72株菌对头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨曲南的耐药率均≥77.1%,对酶抑制剂复合制剂头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦的耐药率≥51.4%,对头孢他啶-阿维巴坦、替加环素的耐药率<10%,对碳青霉烯类耐药率≤40.0%。氨基糖苷类敏感株对多数抗菌药物的耐药率低于氨基糖苷类耐药株。氨基糖苷类耐药株中有71株检出16S rRNA甲基化酶基因,总阳性率为50.0%(71/142),在氨基糖苷类耐药株中的阳性率为98.6%(71/72)。71株中rmtB 54株,占76.1%;armA 14株,占19.7%;rmtA 2株,占2.8%;rmtB+armA 1株,占1.4%。未检出rmtC、rmtD、rmtE、rmtF、rmtG、rmtH和npmA基因。结论rmtB和armA 16S rRNA甲基化酶是该院临床分离肠杆菌科细菌对氨基糖苷类耐药的主要机制。

关键词：氨基糖苷类耐药肠杆菌科细菌耐药基因 16S rRNA甲基化酶

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弓形虫毒力相关效应分子ROP16Ⅲ诱导人肺腺癌A549细胞的基因表达谱

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2021年第4期39卷 473-479,486页

作者：苏雅静乔霞汪澎涛康宇婷杨宁爱贾伟赵志军宁夏医科大学总医院宁夏临床病原微生物重点实验室银川750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心银川750004

目的利用生物信息学方法分析刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白16Ⅲ(ROP16Ⅲ)重组表达载体转染人肺腺癌A549细胞后的基因表达谱,筛选致病候选基因。方法构建真核表达载体pEGFP-N1-ROP16Ⅲ。将A549细胞分为未转染组、pEGFP-N1组、... 详细信息

目的利用生物信息学方法分析刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白16Ⅲ(ROP16Ⅲ)重组表达载体转染人肺腺癌A549细胞后的基因表达谱,筛选致病候选基因。方法构建真核表达载体pEGFP-N1-ROP16Ⅲ。将A549细胞分为未转染组、pEGFP-N1组、pEGFP-N1-ROP16Ⅲ组,后两组分别用pEGFP-N1、pEGFP-N1-ROP16Ⅲ质粒进行瞬时转染,48 h后收集各组细胞,提取总RNA,纯化后进行芯片杂交分析,筛选差异表达基因(DEG)。将DEG进行基因本体(GO)功能富集分类和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。利用ToppGene从DEG中筛选弓形虫ROP16Ⅲ致病候选基因。利用STRING在线分析软件对候选基因所编码的蛋白质进行蛋白间相互作用(PPI)网络分析。结果pEGFP-N1-ROP16Ⅲ转染A549细胞后共有566个基因表达差异显著,其中382个基因上调,184个基因下调。对DEG进行生物信息学分析,共获得997条GO注释和50条KEGG信号通路。这些DEG参与了多种生物学过程,包括防御反应、I型干扰素信号通路、先天免疫应答、对外界生物刺激的反应等;参与的信号通路主要集中在抗原处理及呈递,细胞质DNA传感通路,Toll样受体信号通路,NOD样受体信号通路等。ToppGene筛选共获得14个弓形虫ROP16Ⅲ致病候选基因,其中C-X-C基序趋化因子配体11(CXCL11)、Toll样受体3(TLR3)、C-C基序趋化因子26(CCL26)、人类白细胞抗原-E(HLA-E)、早幼粒白血病基因(PML)及信号转导子与转录激活因子2(STAT2)等6个基因在弓形虫方面的研究尚未见报道。PPI网络构建分析发现,DEG编码的蛋白质PPI网络由376个节点(蛋白质)和1152条边(相互作用关系)组成,STAT2、HLA-E和PML位于PPI网络的中心节点处,删除这些关键节点后PPI网络结构涣散。通路富集分析结果显示,CXCL11等6个基因共涉及12条信号通路,主要与趋化因子信号通路、Toll样受体信号通路、程序性坏死、内吞作用及细胞因子-细胞因子受体相互作用等相关,这些生物信号通路可能参与弓形虫ROP16Ⅲ的致病过程。结论本研究筛选发现CXCL11、TLR3、CCL26、HLA-E、PML和STAT2致病候选基因,为进一步探索刚地弓形虫病的致病机制提供了理论依据。

关键词：弓形虫ROP16Ⅲ 表达谱生物信息学蛋白互作网络

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