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中国组织工程研究 2023年第5期27卷 714-719页

作者：张晴高春兰于飞飞张正皓马芳高源李桂忠姜怡邓马胜超宁夏医科大学基础医学院宁夏回族自治区银川市750004 国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 银川第一人民眼科医院宁夏回族自治区银川市750004

背景:同型半胱氨酸水平增加会导致胰岛β细胞发生凋亡,但其具体机制尚不明确。目的:探讨胰岛β细胞中肝配蛋白A型受体2及其启动子区DNA高甲基化的具体机制。方法:体外培养小鼠胰岛β细胞株Min6,将其分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)和... 详细信息

背景:同型半胱氨酸水平增加会导致胰岛β细胞发生凋亡,但其具体机制尚不明确。目的:探讨胰岛β细胞中肝配蛋白A型受体2及其启动子区DNA高甲基化的具体机制。方法:体外培养小鼠胰岛β细胞株Min6,将其分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)和同型半胱氨酸组(120μmol/L同型半胱氨酸)。干预细胞48 h后,采用免疫荧光和Western blot法检测2组细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3表达情况;Western blot法检测DNA甲基化相关蛋白DNMT1、DNMT3a的表达水平;实时荧光定量PCR检测两组细胞中肝配蛋白A型受体2 mRNA水平;Western blot检测肝配蛋白A型受体2的蛋白表达情况;巢式甲基化特异性PCR检测EphA2启动子区DNA甲基化水平。结果与结论:①与对照组相比,同型半胱氨酸组胰岛β细胞中凋亡相关蛋白Bax和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3表达明显升高,Bcl-2表达明显下降;肝配蛋白A型受体2的mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05);②与对照组相比,同型半胱氨酸组肝配蛋白A型受体2 DNA甲基化水平明显升高(P<0.05),同型半胱氨酸组胰岛β细胞中DNMT1蛋白表达明显增高(P<0.05);③提示肝配蛋白A型受体2 DNA高甲基化在同型半胱氨酸致胰岛β细胞凋亡中的作用明显,而DNMT1可能参与其高甲基化过程。

关键词：胰岛β细胞同型半胱氨酸细胞凋亡肝配蛋白A型受体2 DNA甲基化

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miR-144-3p参与高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠的肝细胞自噬

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中国组织工程研究 2024年第8期28卷 1289-1294页

作者：盛思琪谢琳赵翔宇姜怡邓吴凯熊建团杨安宁郝银菊焦运宁夏医科大学基础医学院宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院宁夏回族自治区银川市750004

背景:高蛋氨酸饮食可导致Cbs^(+/-)小鼠发生肝损伤,高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关。微小RNA(miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程,具有重要意义。目... 详细信息

背景:高蛋氨酸饮食可导致Cbs^(+/-)小鼠发生肝损伤,高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关。微小RNA(miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程,具有重要意义。目的:探讨miR-144-3p在高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠肝细胞自噬中的关键作用。方法:①选取4周龄体质量相近的雄性胱硫醚β-合成酶基因正常(Cbs^(+/+))小鼠和单基因敲除(Cbs^(+/-))小鼠各10只,均饲以高蛋氨酸饮食,12周后处死,留取肝脏组织。②体外培养人源肝细胞(HL-7702),分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)、同型半胱氨酸组(100μmol/L同型半胱氨酸)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、mimic-NC+同型半胱氨酸组(转染mimic-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p mimic组(转染miR-144-3p mimic)、miR-144-3p mimic+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p mimic+100μmol/L同型半胱氨酸)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、inhibitor-NC+同型半胱氨酸组(转染inhibitor-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p inhibitor组(转染miR-144-3p inhibitor)、miR-144-3p inhibitor+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p inhibitor+100μmol/L同型半胱氨酸)。采用荧光定量PCR检测肝组织和肝细胞中miR-144-3p的表达水平;转染miR-144-3p模拟物或抑制剂后,采用荧光定量PCR和Western blot分别检测miR-144-3p的转染效率及其对LC3B和p62蛋白表达的影响;酶联免疫法检测肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的表达情况;Pearson相关性分析肝细胞miR-144-3p表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶含量的相关性。结果与结论:①与Cbs^(+/+)组比较,Cbs^(+/-)组小鼠肝组织和同型半胱氨酸组肝细胞中miR-144-3p的表达水平降低(P<0.01);②转染miR-144-3p模拟物后,与mimic-NC比较,miR-144-3p mimic组中LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平降低,p62蛋白的表达水平升高(P<0.01);转染miR-144-3p inhibitor后,得到相反的结果(P<0.01);③与mimic-NC组相比,miR-144-3p mimic组肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的含量降低(P<0.01);与inhibitor-NC组比较,得到相反的结果(P<0.01);④肝细胞中miR-144-3p的表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.8876)和门冬氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.8299)的含量呈负相关;⑤结果表明,同型半胱氨酸通过抑制miR-144-3p的表达促进肝细胞的自噬,进而加重肝损伤。

关键词：微小RNA miR-144-3p 同型半胱氨酸细胞自噬肝损伤高蛋氨酸饮食

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转录因子EB在衰老心肌细胞自噬中的作用机制研究

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天津医药 2023年第3期51卷 246-252页

作者：盛思琪谢琳姜怡邓熊建团杨安宁吴凯杨勇杨晓明宁夏医科大学基础医学院 750004 宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区人民医院

目的探讨转录因子EB(TFEB)在衰老心肌细胞自噬中的作用机制。方法动物实验:将20只老年Wistar大鼠采取随机数字表法分为假手术组(Sham组)和缺血再灌注组(I/R组)。细胞实验:(1)体外培养大鼠心肌细胞,采用8 g/L D-半乳糖孵育8 d后分为常氧(... 详细信息

目的探讨转录因子EB(TFEB)在衰老心肌细胞自噬中的作用机制。方法动物实验:将20只老年Wistar大鼠采取随机数字表法分为假手术组(Sham组)和缺血再灌注组(I/R组)。细胞实验:(1)体外培养大鼠心肌细胞,采用8 g/L D-半乳糖孵育8 d后分为常氧(Normoxia)组和缺氧/复氧(H/R)组。(2)在衰老心肌细胞中分别转染过表达和干扰TFEB腺病毒分为过表达对照(Ad-GFP)组、过表达对照+缺氧/复氧(Ad-GFP+H/R)组、过表达TFEB(AdTFEB)组、过表达TFEB+缺氧/复氧(Ad-TFEB+H/R)组、干扰对照(sh-NC)组、干扰对照+缺氧/复氧(sh-NC+H/R)组、干扰TFEB(sh-TFEB)组、干扰TFEB+缺氧/复氧(sh-TFEB+H/R)组。(3)分别用DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的特异性抑制剂DC-05、TFD、NA处理缺氧/复氧后的衰老心肌细胞分为H/R组、DC-05组、TFD组、NA组。(4)在衰老心肌细胞中转染干扰DNMT3b腺病毒分为干扰对照(sh-NC)组、干扰对照缺氧/复氧(sh-NC+H/R)组、干扰DNMT3b(shDNMT3b)组、干扰DNMT3b缺氧/复氧(sh-DNMT3b+H/R)组。实时荧光定量PCR(qPCR)检测TFEB的mRNA表达水平;Western blot检测衰老心肌细胞中自噬相关蛋白TFEB、LC3B和p62的蛋白表达;巢式甲基化特异性PCR(nMSPCR)检测TFEB启动子区的DNA甲基化水平。结果与Sham组或Normoxia组比较,I/R组和H/R组中TFEB的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01);过表达TFEB后,与Ad-GFP组比较,Ad-TFEB组LC3B-Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平降低,p62的蛋白表达水平升高(P<0.01),而干扰TFEB后得到相反的结果(P<0.01)。与Sham组或Normoxia组比较,I/R组和H/R组中TFEB启动子区DNA甲基化水平升高(P<0.05)。与H/R组比较,NA组TFEB mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01);干扰DNMT3b后,与sh-NC组比较,sh-DNMT3b组TFEB mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论DNMT3b通过调控TFEB启动子区DNA甲基化抑制TFEB的表达,进而促进衰老心肌细胞自噬。

关键词：肌细胞心脏细胞衰老转录因子EB 细胞自噬 DNA甲基化 DNMT3b

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同型半胱氨酸在心肌细胞凋亡和增殖中的作用及其机制

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解放军医学杂志 2022年第10期47卷 984-991页

作者：刘达越董小艳徐灵博张慧萍全尚琨马胜超白永生杨勇李桂忠宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室/宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院产前诊断中心宁夏银川750004 宁夏回族自治区人民医院神经内科宁夏银川750004 宁夏回族自治区人民医院核医学科宁夏银川750004

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠心肌细胞凋亡、增殖的作用及其可能机制。方法将大鼠心肌细胞分为对照组与Hcy组(用终浓度为3 mmol/L的Hcy刺激24 h),采用Western blotting检测TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、磷酸化的NF-κB(p-NF-... 详细信息

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠心肌细胞凋亡、增殖的作用及其可能机制。方法将大鼠心肌细胞分为对照组与Hcy组(用终浓度为3 mmol/L的Hcy刺激24 h),采用Western blotting检测TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、磷酸化的NF-κB(p-NF-κB),凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,EdU染色观察心肌细胞增殖情况。将TLR4干扰片段转染心肌细胞,采用Western blotting检测TLR4表达情况,对干扰片段进行筛选和验证。将心肌细胞分为干扰片段空载体组(si-NC+Hcy组)与干扰TLR4组(si-TLR4+Hcy组),并加入3 mmol/L的Hcy干预24 h,采用Western blotting检测心肌细胞MyD88、NF-κB、p-NF-κB,凋亡相关蛋白Bax、cleavedcaspase-3及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,EdU染色观察心肌细胞增殖情况。结果Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Hcy组TLR4、MyD88、p-NF-κB及凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3表达水平升高(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平降低(P<0.01);与si-NC+Hcy组比较,si-TLR4+Hcy组TLR4、MyD88、p-NF-κB及凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3的表达水平降低(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平升高(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,Hcy组细胞凋亡率明显增高(P<0.01);与si-NC+Hcy组比较,si-TLR4+Hcy组细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。EdU染色结果显示,与对照组比较,Hcy组EdU阳性细胞率明显降低(P<0.01);与si-NC+Hcy组比较,si-TLR4+Hcy组EdU阳性细胞率明显增高(P<0.01)。结论Hcy可诱导大鼠心肌细胞凋亡,抑制心肌细胞增殖,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。

关键词：同型半胱氨酸 TLR4/NF-κB信号通路心肌细胞细胞凋亡增殖

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高同型半胱氨酸血症诱导Cbs^+/-小鼠肾损伤的作用机制

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中国组织工程研究 2021年第11期25卷 1728-1732页

作者：吴凯刘昆谢琳卢冠军马胜超李桂忠曹军揭育祯姜怡邓郝银菊宁夏医科大学临床医学院宁夏回族自治区银川市750004 国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学基础医学院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院宁夏回族自治区银川市750004

背景:在慢性肾脏病中常常伴有同型半胱氨酸水平升高,导致足细胞凋亡,但是其具体机制还尚未清楚。目的:探讨高同型半胱氨酸血症诱导Cbs^+/-小鼠肾损伤的作用机制。方法:选取体质量相近的Cbs^+/+小鼠(对照组)和Cbs^+/-小鼠(模型组),每组10... 详细信息

背景:在慢性肾脏病中常常伴有同型半胱氨酸水平升高,导致足细胞凋亡,但是其具体机制还尚未清楚。目的:探讨高同型半胱氨酸血症诱导Cbs^+/-小鼠肾损伤的作用机制。方法:选取体质量相近的Cbs^+/+小鼠(对照组)和Cbs^+/-小鼠(模型组),每组10只,两组小鼠均饲以高蛋氨酸饮食,8周后处死,分离血清,留取肾脏组织。采用全自动生化分析仪检测血清同型半胱氨酸、尿素氮、肌酐水平;糖原染色法及透射电镜观察肾脏损伤情况;TUNEL染色观察肾小球中细胞凋亡情况;Western blot检测Bax、Bcl-2和caspase12的蛋白表达水平。结果与结论:①与Cbs^+/+小鼠比较,Cbs^+/-小鼠血清同型半胱氨酸、尿素氮及肌酐水平均明显升高(P<0.01);②糖原染色结果显示,Cbs^+/+小鼠肾小球基底膜清楚,粗细均匀,而Cbs^+/-小鼠肾小球基底膜则呈现不同程度的粗细不均,膜区增宽、基质增厚;③透射电镜显示,Cbs^+/+小鼠肾小球基底膜清晰,足突规则,而Cbs^+/-小鼠肾小球基底膜局灶性增厚,足突不规则融合;④TUNEL染色结果显示,与Cbs^+/+小鼠比较,Cbs^+/-小鼠肾小球内凋亡细胞数量明显增加;⑤Western blot检测结果显示,Bax/Bcl-2和caspase12的蛋白水平均升高(P<0.05);⑥结果表明:足细胞凋亡在高同型半胱氨酸血症诱导Cbs^+/-小鼠肾损伤中发挥着重要的作用。

关键词：肾损伤高同型半胱氨酸血症凋亡足细胞同型半胱氨酸尿素氮肌酐小鼠

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PSMD10在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制研究

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中国药理学通报 2021年第4期37卷 535-541页

作者：吴欣妍焦运王青青徐龙张辉郭伟杨安宁郝银菊姜怡邓宁夏医科大学基础医学院宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院感染科宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学药学院宁夏回族自治区宁夏银川750004

目的探讨26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基10(PSMD10)在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制。方法选取cbs^(+/+)和cbs^(+/-)小鼠各8只,2%高蛋氨酸饮食饲养8周。全自动生化仪检测血清中AST和ALT水平;Western blot检测肝脏LC3... 详细信息

目的探讨26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基10(PSMD10)在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制。方法选取cbs^(+/+)和cbs^(+/-)小鼠各8只,2%高蛋氨酸饮食饲养8周。全自动生化仪检测血清中AST和ALT水平;Western blot检测肝脏LC3B、p62和PSMD10蛋白表达;qRT-PCR检测PSMD10 mRNA表达;100μmol Hcy干预肝细胞(HL-7702);ELISA检测培养液上清中AST和ALT水平;Western blot检测LC3B、p62和PSMD10蛋白表达;qRT-PCR检测PSMD10 mRNA的表达;转染PSMD10 siRNA或过表达腺病毒,Western blot检测LC3B和p62的表达;ELISA检测AST和ALT水平。结果与cbs^(+/+)组比较,cbs^(+/-)组血清AST和ALT的水平增加(P<0.01),自噬水平增加(P<0.01),PSMD10表达水平增加(P<0.05);细胞水平与动物水平结果一致;与Hcy+siNC组相比,LC3Ⅱ/Ⅰ的比值降低(P<0.01),p62的蛋白表达增加(P<0.01),AST和ALT的浓度降低(P<0.01);与ad-GFP组相比,ad-PSMD10组LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(P<0.01),p62的蛋白表达降低(P<0.01),AST和ALT的浓度增加(P<0.01)。结论Hcy通过上调PSMD10的表达导致肝细胞过度自噬,造成肝脏损伤。

关键词： PSMD10 同型半胱氨酸肝细胞自噬肝损伤 AST ALT

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脂肪酸结合蛋白4在同型半胱氨酸致大鼠心肌细胞焦亡中的作用

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解放军医学杂志 2022年第1期47卷 33-38页

作者：董小艳刘达越徐灵博顾铃毓马胜超杨安宁杨勇刘云姜怡邓宁夏医科大学基础医学院银川750004 国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室银川750004 宁夏血管损伤与修复研究重点实验室银川750004 宁夏医科大学临床医学院银川750004 宁夏回族自治区人民医院核医学科银川750004 宁夏医科大学总医院放射科银川750004

目的探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法培养大鼠心肌细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy)与Hcy组(3 mmol/L Hcy),采用Western blotting检测各组FABP4、焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)... 详细信息

目的探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法培养大鼠心肌细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy)与Hcy组(3 mmol/L Hcy),采用Western blotting检测各组FABP4、焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达情况;采用qRT-PCR检测FABP4 mRNA表达变化;采用免疫荧光染色法检测焦亡相关蛋白的表达变化;用FABP4抑制剂(BMS-309403)处理心肌细胞,然后将细胞分为对照组(0 mmol/L Hcy)、Hcy组(3 mmol/L Hcy)及Hcy+BMS-309403组(3 mmol/L Hcy和50μmol/L BMS-309403),再次检测焦亡相关蛋白的表达水平。结果 Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Hcy组FABP4、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达水平明显升高(P<0.05);qRT-PCR结果显示,与对照组比较,Hcy组FABP4表达水平明显升高(P<0.05);免疫荧光染色结果显示,与对照组比较,Hcy组NLRP3、caspase-1、IL-1β荧光强度明显增强。加入FABP4抑制剂(BMS-309403)同时给予Hcy干预后,与Hcy组比较,Hcy+BMS-309403组FABP4、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论 FABP4可能对Hcy诱导的大鼠心肌细胞焦亡有促进作用。

关键词：心肌细胞焦亡同型半胱氨酸脂肪酸结合蛋白4

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miR-5088-5p在同型半胱氨酸致肝细胞焦亡中的保护作用研究

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中国药理学通报 2021年第11期37卷 1565-1570页

作者：董小艳刘达越徐灵博顾铃毓姜怡邓杨安宁焦运李桂忠宁夏医科大学基础医学院宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学临床医学院宁夏回族自治区宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院感染科宁夏回族自治区宁夏银川750004

目的探讨miR-5088-5p在同型半胱氨酸诱导肝细胞焦亡中的作用。方法培养正常肝细胞,分为Control组、Hcy组、转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic后给予Hcy干预组,采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、caspase 1、IL-1β的表达水平... 详细信息

目的探讨miR-5088-5p在同型半胱氨酸诱导肝细胞焦亡中的作用。方法培养正常肝细胞,分为Control组、Hcy组、转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic后给予Hcy干预组,采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、caspase 1、IL-1β的表达水平;采用qRT-PCR检测miR-5088-5p的表达水平;将CBS^(+/-)小鼠和CBS^(+/+)小鼠给予高蛋氨酸饮食12周,采用全自动生化仪检测小鼠血清中Hcy水平;采用免疫荧光检测小鼠肝组织中焦亡相关蛋白的表达水平。结果与Control组相比,Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达水平增加(P<0.01);miR-5088-5p表达水平降低(P<0.01);转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic并给予Hcy干预后,与Hcy组相比,miR-5088-5p NC+Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达无差异,与miR-5088-5p NC+Hcy组相比,miR-5088-5p mimic+Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达水平明显下降(P<0.05);与CBS^(+/+)小鼠相比,全自动生化分析仪结果显示CBS^(+/-)小鼠血清Hcy水平明显升高(P<0.01),免疫荧光染色结果显示CBS^(+/-)组小鼠肝脏中NLRP3、caspase 1、IL-1β荧光强度增高(P<0.01)。结论miR-5088-5p对同型半胱氨酸诱导的肝细胞焦亡具有保护作用。

关键词： CBS小鼠肝细胞高同型半胱氨酸血症 miRNA miR-5088-5p 焦亡

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同型半胱氨酸致足细胞凋亡中FoxO1 DNA甲基化水平增高

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中国组织工程研究 2021年第2期25卷 269-273页

作者：刘昆谢琳曹军丁宁徐灵博马胜超李桂忠姜怡邓卢冠军宁夏医科大学临床医学院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学基础医学院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院宁夏回族自治区银川市750004

背景:同型半胱氨酸增多会引起肾损伤并导致足细胞凋亡,但是其具体机制还尚不清楚。目的:探讨叉头框转录因子O1(forkhead box O,FoxO1)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸致足细胞凋亡中的作用。方法:体外培养小鼠肾脏足细胞(MPC-5),将其分为... 详细信息

背景:同型半胱氨酸增多会引起肾损伤并导致足细胞凋亡,但是其具体机制还尚不清楚。目的:探讨叉头框转录因子O1(forkhead box O,FoxO1)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸致足细胞凋亡中的作用。方法:体外培养小鼠肾脏足细胞(MPC-5),将其分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)和同型半胱氨酸组(80μmol/L同型半胱氨酸)。干预细胞48 h后,采用免疫荧光技术检验足细胞凋亡相关蛋白Bax、caspase12和Bcl-2的表达情况;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测FoxO1 mRNA水平;采用Western blot检测FoxO1和DNMT1蛋白表达水平;采用巢式降落式特异性PCR(nMS-PCR)测验FoxO1的DNA甲基化水平。结果与结论:①与对照组相比,同型半胱氨酸组足细胞中Bax和caspase12表达明显增高,Bcl-2表达明显降低;②FoxO1的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01);③与对照组相比,同型半胱氨酸组FoxO1 DNA甲基化水平明显升高(P<0.01),同型半胱氨酸组足细胞中DNMT1蛋白表达明显增高(P<0.01);④结果表明:FoxO1 DNA高甲基化在同型半胱氨酸致足细胞凋亡中作用显著,而DNMT1参与同型半胱氨酸诱导的足细胞凋亡过程。

关键词：肾肾小球肾损伤同型半胱氨酸足细胞凋亡因子甲基化

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亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1参与血管平滑肌细胞钙化

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中国组织工程研究 2025年第32期29卷 6836-6842页

作者：王凯茹付士哲李家辉燕茹马玉茹师波冶从燕闫瑞丛广志贾绍斌宁夏医科大学总医院医学科学研究院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学第一临床医学院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学血管损伤与修复研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院心内科宁夏回族自治区银川市750004

背景:多胺在组织钙化中发挥重要作用。亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1作为调控细胞内多胺代谢的关键限速酶,其异常表达与多种病理过程相关,但在血管钙化中的作用尚未明确。目的:探讨亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1在大鼠血管平滑肌细胞钙化中的... 详细信息

背景:多胺在组织钙化中发挥重要作用。亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1作为调控细胞内多胺代谢的关键限速酶,其异常表达与多种病理过程相关,但在血管钙化中的作用尚未明确。目的:探讨亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1在大鼠血管平滑肌细胞钙化中的作用。方法:①生物信息学分析:通过GEO数据集分析亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1在人颈动脉粥样硬化斑块及其周围健康颈动脉组织中的表达差异;通过PanglaoDB公共基因表达数据库单细胞测序观察亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1细胞群的表达丰度和定位。②将大鼠血管平滑肌细胞分为3组,对照组用DMEM培养基培养,钙化组用含10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠和3 mmol/L氯化钙的DMEM培养基诱导细胞钙化,50,100μmol/L二乙酰胺三氮脒组在钙化培养基的基础上,用50,100μmol/L亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1抑制剂二乙酰胺三氮脒处理细胞。培养7-10 d,进行茜素红S染色以及细胞钙含量和碱性磷酸酶活性检测,Western blot检测Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2、α-平滑肌肌动蛋白和亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1的蛋白表达,免疫荧光染色检测Runt相关转录因子2和亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1的表达。结果与结论:①生物信息学分析显示,与健康颈动脉组织相比,颈动脉粥样硬化斑块中亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1和Runt相关转录因子2的表达显著上调(P<0.05);单细胞测序数据库分析证实了亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1在血管平滑肌细胞中表达;②与对照组比较,钙化组Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2、亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1、钙含量和碱性磷酸酶活性明显增加,而α-平滑肌肌动蛋白表达明显减少(均P<0.05);与钙化组比较,50,100μmol/L二乙酰胺三氮脒组Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2、钙含量和碱性磷酸酶活性明显降低,而α-平滑肌肌动蛋白表达明显增加(均P<0.05);③免疫荧光实验显示,与钙化组比较,50,100μmol/L二乙酰胺三氮脒组Runt相关转录因子2的表达强度明显降低。结果证实,亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1可能通过上调Runt相关转录因子2的表达,促进血管平滑肌细胞钙化。

关键词：大鼠血管平滑肌细胞亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1(SAT1) Runt相关转录因子2 血管钙化生物信息学平滑肌肌动蛋白

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