检索结果-内蒙古大学图书馆

中华肝脏病杂志 2014年第5期22卷 354-357页

作者：李建芳丁世雄应丽萍胡爱荣胡耀仁梁晓岳宁波市第二医院肝二科 315010 宁波市肿瘤分子生物学重点实验室宁波市肝病研究所

目的研究小干扰RNA（siRNA）干扰Notch2对HepG2细胞增殖的影响。方法用siRNA干扰HepG2细胞中Notch2基因，用RT-PCR检测siRNA干扰后Notch2mRNA与下游靶基因HeslmRNA的表达水平，用Westernblot方法检测Notch2蛋白的改变情况，然后用CCK8法测定HepG2细胞增殖情况，用析因设计的方差分析和组间t检验进行统计学比较。结果肝细胞癌HepG2细胞中Notch2mRNA高表达，Notch2-siRNA干扰抑制后，HepG2细胞的Notch2mRNA和蛋白水平下调，下游Hesl的mRNA表达水平降低。HepG2细胞在Notch2-s识NA处理组12、24、48、72h和96h的增殖抑制率分别为2．640／0±16．20％、38．340／0±8．8%、70．05％±7．80％、70．78％±10．00％和74．22％±4．80％，对照组siRNA处理的细胞增殖抑制率分别为-0．21％±3．65％、11．61％±10．66％、22．11％±7．93％、7．64％±10．00％和4．18％±7．64％，两组比较，F=5．48，P〈0．01，差异有统计学意义。与对照组相比，24h后增殖差异均有统计学意义（t值分别为3．405、7．473、7．749和13．460，P值均〈0．05）。结论Notch2在体外培养的肝细胞癌HepG2细胞中高表达，下调Notch2可以减缓HepG2细胞的增殖，为Notch2的靶向干预作为肝细胞癌的治疗提供了有价值的实验依据。

关键词：癌肝细胞细胞增殖受体 Notch

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人绒毛膜促性腺激素β亚基在大肠杆菌中的表达

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中国免疫学杂志 2000年第8期16卷 415-417页

作者：张乐鸣刘东海董虹张顺宁波市第二医院肿瘤分子生物学实验室宁波315010

目的 :以该室克隆的PCRⅡ hCGβ载体为模板 ,亚克隆到表达载体PG5中使hCGβ基因在大肠杆菌中进行高效表达。方法 :改变部分hCGβ序列 ,得到重组PG5 hCGβ载体 ,经序列分析证明 ,再转化到表达菌BL2 1中表达 ,所得包涵体经过柱纯化 ,复... 详细信息

目的 :以该室克隆的PCRⅡ hCGβ载体为模板 ,亚克隆到表达载体PG5中使hCGβ基因在大肠杆菌中进行高效表达。方法 :改变部分hCGβ序列 ,得到重组PG5 hCGβ载体 ,经序列分析证明 ,再转化到表达菌BL2 1中表达 ,所得包涵体经过柱纯化 ,复性 ,免疫发光分析和动物试验测定其活性。结果 :经SDS PAGE电泳在 18kD左右有一条明显的新增蛋白带 ,与预期的分子量相符 ,并用Western印迹证实 ,rhCGβ约占菌体总蛋白的 10 % ,活性为 7.8U mg。结论 :重组hCGβ在大肠杆菌中获得了较高水平的表达。且经复性后有较高的免疫活性和生物活性。

关键词：人绒毛膜促性腺激素β亚基序列分析大肠杆菌

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人神经生长因子β亚基cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

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中国病理生理杂志 2002年第5期18卷 486-489页

作者：刘东海张更荣张乐鸣张顺董虹宁波市第二医院肿瘤分子生物学实验室浙江宁波315010

目的 :从海马组织提取中国人神经生长因子基因 (NGFβ) ,分析中国人NGFβ序列 ,再克隆成熟肽部分 ,使NGFβ在大肠杆菌中表达。方法 :提取组织总RNA进行逆转录 ,克隆到PCRⅡ载体 ,得 6 5 0bpDNA片段 ,以PCRⅡ /NGFβ载体为模板 ,扩增C... 详细信息

目的 :从海马组织提取中国人神经生长因子基因 (NGFβ) ,分析中国人NGFβ序列 ,再克隆成熟肽部分 ,使NGFβ在大肠杆菌中表达。方法 :提取组织总RNA进行逆转录 ,克隆到PCRⅡ载体 ,得 6 5 0bpDNA片段 ,以PCRⅡ /NGFβ载体为模板 ,扩增C端成熟肽部分 ,并克隆到PG5中 ,转化大肠杆菌BL2 1用异丙基 - β -D -半乳糖苷(IPTG)诱导培养。表达产物提纯、复性后 ,进行活性测定。结果 :NGFβcDNA全序列为 10 4 7bp ,所克隆的蛋白编码部分为 6 36bp ,由 2 12个氨基酸组成 ,序列分析结果与Genebank完全一致 ,成熟肽部分表达后 ,经SDS -PAGE电泳在 14kD左右有 1条明显的新增蛋白带 ,与预期的分子量相符 ,并Western印迹证实 ,rNGF约占菌体蛋白 10 %左右。结论 :通过序列分析证实 ,重组NGFβ在大肠杆菌中获得较高水平的表达。

关键词：人神经生长因子β亚基 cDNA 克隆大肠杆菌重组序列分析基因表达

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慢病毒载体介导RNA干扰抑制大肠癌细胞HT29的酪氨酸激酶受体RON基因的表达

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上海医学 2012年第11期35卷 935-939,I0003页

作者：毛联钢李克强卓文莹戴晓宇余永明乐东海冯伟云宁波市第二医院肿瘤分子生物学重点实验室浙江宁波315000 宁波市第二医院肛肠外科浙江宁波315000

目的研究慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)对大肠癌细胞RON基因的干扰效率,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株。方法应用实时聚合酶链反应(PCR)检测大肠癌细胞DLD-1、HCT116、LOVO、RKO、SW480、HT29的RONmRNA表达情况,筛选出表达丰度能满足R... 详细信息

目的研究慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)对大肠癌细胞RON基因的干扰效率,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株。方法应用实时聚合酶链反应(PCR)检测大肠癌细胞DLD-1、HCT116、LOVO、RKO、SW480、HT29的RONmRNA表达情况,筛选出表达丰度能满足RNAi的大肠癌靶细胞HT29。根据人RON基因序列,构建4种慢病毒载体质粒pGCSIL/RON-短发夹RNA(shRNA),转染包装细胞293T,获得4种重组慢病毒pGCSIL/RON-shRNA,分别感染HT29细胞。应用实时PCR检测各组HT29细胞RONmRNA表达情况,筛选出RON干扰效率最高的一种shRNA慢病毒载体质粒,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株HT29/RON-shRNA。结果 DLD-1、HCT116、RKO、SW480、HT29细胞RON表达丰度能满足RNAi的需要,选择HT29细胞作为RNAi的靶细胞。阴性对照病毒感染的细胞样品相对正常未感染病毒的细胞目的基因的相对表达水平为(94±5)%,RONshRNA-1靶点病毒感染的细胞为(86±5)%,RONshRNA-2靶点病毒感染的细胞为(67±6)%,RONshRNA-3靶点病毒感染的细胞为(63±6)%,RONshRNA-4靶点病毒感染的细胞为(30±8)%,RONshRNA-4靶点病毒感染的细胞的表达水平显著低于其他细胞(P值均<0.01),其对目的基因的沉默效果达到(70±8)%。结论慢病毒介导RNAi能显著抑制大肠癌细胞HT29的RON基因的表达,慢病毒载体介导的RNAi是一种高效的"基因沉默"的手段。

关键词： RON HT29细胞 RNA干扰慢病毒载体

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RNAi沉默RON基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和耐药性的抑制作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2012年第5期19卷 502-507页

作者：毛联钢李克强卓文莹戴晓宇余永明冯伟云乐东海宁波市第二医院肿瘤分子生物学实验室浙江宁波315010 宁波市第二医院肛肠科浙江宁波315010

目的:探讨RNAi沉默酪氨酸激酶受体RON(recepteur d’origine nantais)基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和对抗肿瘤药物敏感性的影响。方法:构建RON基因的RNAi慢病毒载体Lv-RON-siRNA。Real-time PCR和Western blotting检测RON基因的沉默效率及RON蛋白表达水平;Transwell侵袭实验和ATP-TCA(ATP-tumor chemosensitivity assay)检测RON基因对HT-29细胞侵袭和对药物敏感性的影响。结果:慢病毒载体Lv-RON-siRNA感染HT-29细胞对RON基因的沉默效果达到70%。Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞侵袭力较对照组明显降低(0.97±0.072 vs 1.29±0.076,P<0.05)。Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouraci,5-FU)的IC90值和IC50值分别为(14.28±1.34)、(8.93±1.20)μg/ml,顺铂(cisplatin,DDP)的IC90值和IC50值分别为(1.91±0.22)、(0.64±0.07)μg/ml,均明显低于对照组(P<0.01)。结论:沉默RON基因表达能抑制HT-29细胞的侵袭力,提高细胞对5-FU和DDP的敏感性。

关键词： RON基因 HT-29细胞 RNAi 侵袭耐药

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环状RNA与人类疾病

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中国生物化学与分子生物学报 2015年第8期31卷 771-778页

作者：付丽云胡耀仁郭俊明宁波大学医学院生物化学与分子生物学研究所浙江省病理生理学技术研究重点实验室宁波315211 宁波市第二医院肝病科宁波315020

环状RNA(circular RNAs,circRNAs)是一类广泛存在于各种生物细胞中具有调控基因表达功能的非编码RNA,具有结构稳定和组织特异性表达等特征.有些circRNA分子富含微小RNA结合位点,可通过充当竞争性内源RNA的角色来发挥作用,如CDR1as对miR-... 详细信息

环状RNA(circular RNAs,circRNAs)是一类广泛存在于各种生物细胞中具有调控基因表达功能的非编码RNA,具有结构稳定和组织特异性表达等特征.有些circRNA分子富含微小RNA结合位点,可通过充当竞争性内源RNA的角色来发挥作用,如CDR1as对miR-7的海绵作用与肺癌、乳腺癌、胶质瘤及肌萎缩性脊髓侧索硬化等疾病发生相关.c ANRIL可通过影响多梳家族参与动脉粥样硬化的发生.大量circRNA的发现及其结构和功能的阐明不仅可以使我们更加深入地了解疾病的发生机制,而且为相关疾病的预防、诊断和治疗提供了新的方向.

关键词：环状RNA 竞争性内源RNA 微小RNA海绵基因表达调控

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人神经生长因子β亚基cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

人神经生长因子β亚基cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

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中国科协首届学术年会

作者：刘东海张更荣张乐鸣张顺董虹宁波市第二医院肿瘤分子生物学实验室

人神经生长因子(hNGF)是一类促进神经生长的多肽,不仅对正常神经细胞有营养作用,而且对损伤神经元的再生、退行性疾病的防治、神经母细胞分化等有重要的临床应用价值。我们用海马组织提取总RNA,通过逆转录扩增克

关键词：人神经生长因子大肠杆菌 β亚基

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自杀基因ePNP的克隆及在人肝癌细胞HepG_2的表达

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现代实用医学 2010年第6期22卷 659-660,F0003页

作者：戴晓宇李克强乐东海毛联钢冯伟云宁波市第二医院浙江宁波315010 宁波市肿瘤分子生物学重点实验室浙江宁波315010

目的构建含大肠杆菌的嘌呤核苷酸磷酸化酶(ePNP)DNA的重组逆转录病毒载体,观察ePNP基因在人肝癌细胞株HepG2的表达。方法用PCR法获得ePNP亚克隆,构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP,鉴定测序。脂质体法将逆转录病毒载体pDsRed-ePNP转染A... 详细信息

目的构建含大肠杆菌的嘌呤核苷酸磷酸化酶(ePNP)DNA的重组逆转录病毒载体,观察ePNP基因在人肝癌细胞株HepG2的表达。方法用PCR法获得ePNP亚克隆,构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP,鉴定测序。脂质体法将逆转录病毒载体pDsRed-ePNP转染AmphoPackTM-293包装细胞,获得高滴度病毒并感染HepG2细胞。流式细胞术和荧光显微镜检测红色荧光蛋白(RFP)的表达。RT-PCR法检测ePNPmRNA的表达。ATP-生物荧光体外检测实验(ATP-TCA法)检测不同浓度Fludarabine对HepG2、HepG2/pDsRed和HepG2/ePNP细胞的杀伤作用。结果克隆的ePNP基因与文献报道一致,成功构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP。病毒包装后滴度为5E+4TU/mL。表达RFP的HepG2/ePNP阳性细胞率为97.1%。HepG2/ePNP细胞稳定表达ePNP。低浓度Fludarabine对HepG2/ePNP细胞毒效应明显。结论成功构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP,并且获得稳定表达ePNP基因的HepG2/ePNP人肝癌细胞株。

关键词：肝肿瘤人肝癌细胞株HepG2 自杀基因逆转录病毒载体

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环状RNA在原发性肝癌发生中的作用及其潜在价值

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中华肝脏病杂志 2019年第2期27卷 157-160页

作者：蒋镇洛沈丽丽胡耀仁郭俊明付丽云宁波大学医学院生物化学与分子生物学研究所浙江省病理生理学技术研究重点实验室 315211 宁波市第二医院肝病科 315020 浙江省消化系统肿瘤诊治及研究重点实验室宁波315020

环状RNA是一类非编码RNA,其首尾两端共价闭合呈环状,表现出与线性RNA不同的特点。大量研究结果显示,环状RNA在原发性肝癌的发生、发展中发挥了重要的作用。现结合国内外在该领域的最新研究进展,概述环状RNA在肝癌中的异常表达情况及其... 详细信息

环状RNA是一类非编码RNA,其首尾两端共价闭合呈环状,表现出与线性RNA不同的特点。大量研究结果显示,环状RNA在原发性肝癌的发生、发展中发挥了重要的作用。现结合国内外在该领域的最新研究进展,概述环状RNA在肝癌中的异常表达情况及其调控肝癌发生、发展中的机制,分析其作为肝癌分子标志物的重要依据,分析环状RNA在肝癌诊治中的潜在价值。

关键词：癌,肝细胞环状RNA 微小RNA 标志物

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胃肠道肿瘤及其边缘组织端粒酶活性表达的临床研究

胃肠道肿瘤及其边缘组织端粒酶活性表达的临床研究

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中国科协首届学术年会

作者：张乐鸣刘东海董虹张顺毛国庆宁波市第二医院肿瘤组织分子生物学实验室

端粒酶(telomerase)是一种核糖核酸蛋白酶,能特异性地将端粒DNA重复序列加到染色体末端。正常体细胞多无端粒酶活性,而绝大多数癌组织中存在端粒酶活性。我们用TRAP方法对15例胃癌、10例直肠癌手术切除标本

关键词：胃肠道肿瘤端粒酶活性分子切缘临床研究

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