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中国微生态学杂志 2025年第04期 380-391+401页

作者：王纪娇杨谨华刘洋魏云巍杭州医学院基础医学与法医学院宁波市第二医院胆胰肠外科宁波市肠道微生态与人类重大疾病重点实验室

目的探讨酸适应后的具核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum）转录组变化以及其对结直肠癌（colorectal cancer,CRC）细胞增殖、侵袭和迁移的作用。方法将F. nucleatum ATCC 25586置于模拟酸性肿瘤微环境（乳酸调节）中适应性进化，获... 详细信息

目的探讨酸适应后的具核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum）转录组变化以及其对结直肠癌（colorectal cancer,CRC）细胞增殖、侵袭和迁移的作用。方法将F. nucleatum ATCC 25586置于模拟酸性肿瘤微环境（乳酸调节）中适应性进化，获得酸适应菌株LA60；利用转录组测序分析相关差异表达基因，初步解析LA60促进CRC细胞增殖、侵袭和迁移的相关代谢通路。使用原始菌株和酸适应菌株LA60感染人CRC细胞HCT116和HT29，建立感染模型；应用CCK-8法检测细胞增殖能力，划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力；采用免疫印迹法和免疫组化检测上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关指标表达水平，体内实验验证LA60对裸鼠皮下成瘤的促进作用。结果与F. nucleatum ATCC 25586比较，LA60在酸性环境下生长性能优越，NADP+/NADPH表达增加（t=4.758,P=0.018）。转录组结果提示二者存在837个差异表达基因（上调435个，下调402个）；与F. nucleatum ATCC 25586比较，LA60促进HCT116细胞增殖（t=2.884,P=0.013）和HT29细胞增殖（t=3.050,P=0.016）能力增强，促进HCT116细胞侵袭（t=6.342, P=0.011）和迁移（t=4.887, P=0.026）、 HT29细胞侵袭（t=5.908, P=0.014）和迁移（t=3.028,P=0.039）能力增强，差异均具有统计学意义。在蛋白水平上检测细胞的EMT指标，与F. nucleatum ATCC25586比较，LA60使HCT116细胞E-cadherin表达降低（t=-5.724, P=0.005）, N-cadherin(t=4.445, P=0.011)和MMP-9(t=2.766,P=0.050)表达增高；LA60使HT29细胞E-cadherin表达降低（t=-19.889,P<0.001）,Ncadherin(t=6.813,P=0.002)和MMP-9(t=17.236,P<0.001)表达增高。体内实验表明，与F. nucleatum ATCC25586相比，LA60促CRC细胞成瘤（t=3.073,P=0.050）能力增强。通过免疫组化检测肿瘤组织切片的EMT指标，结果显示，与F. nucleatum ATCC 25586比较，LA60使肿瘤组织E-cadherin表达降低（t=-5.218,P=0.006）,N-cadherin(t=4.088,P=0.015)和MMP-9(t=8.358,P=0.001)表达增高，差异均具有统计学意义。结论酸性肿瘤微环境诱导LA60促进CRC细胞增殖、侵袭迁移能力增强，为探究肿瘤微环境酸化赋予瘤内菌强致病性进而促CRC侵袭转移提供了新的策略和理论依据。

关键词：结直肠癌具核梭杆菌酸适应侵袭迁移

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具核梭杆菌通过E-cadherin/β-catenin信号上调结直肠癌ABCG2表达诱导奥沙利铂耐药

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中华肿瘤杂志 2025年第04期

作者：许芳琪李博文刘洋魏云巍温州医科大学慈溪生物医药研究院宁波宁波市第二医院胆胰肠外科宁波宁波市肠道微生态与人类重大疾病重点实验室宁波

目的探讨肠道致病菌具核梭杆菌(***)是否通过调控 ABC亚家族G亚型2(ABCG2)从而影响结直肠癌化疗耐药。方法利用奥沙利铂干预结直肠癌细胞并与***共培养建立微生物感染的化疗诱导模型, Calcein AM/PI活/死细胞染色、锥虫蓝染色、细胞计... 详细信息

目的探讨肠道致病菌具核梭杆菌(***)是否通过调控 ABC亚家族G亚型2(ABCG2)从而影响结直肠癌化疗耐药。方法利用奥沙利铂干预结直肠癌细胞并与***共培养建立微生物感染的化疗诱导模型, Calcein AM/PI活/死细胞染色、锥虫蓝染色、细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活性, 实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测结直肠癌细胞中ABCG2 mRNA和蛋白表达水平。通过构建shRNA质粒进行目的基因敲减。构建HCT-116细胞***感染模型并进行转录组测序和差异基因京都基因与基因组百科全书和基因本体论分析。利用金雀异黄酮作为E-cadherin阻断剂, 三氯苯达唑亚砜(TCBZSO)作为ABCG2阻断剂, 免疫荧光检测E-cadherin和β-catenin蛋白表达及细胞内定位水平。构建裸鼠皮下移植瘤模型, 免疫组化染色检测肿瘤组织中ABCG2蛋白表达水平。结果 CCK-8结果显示, ***+奥沙利铂组细胞相对存活率[HT-29:(92.26±1.66)%;HCT-116:(82.13±1.84)%]高于奥沙利铂组[HT-29:(79.64±3.72)%;HCT-116:(67.56±2.96)%, 均P<0.001];奥沙利铂和***与敲低ABCG2的HCT-116细胞共培养组细胞相对存活率[(61.44±1.48)%]低于与***和奥沙利铂共培养组[(69.29±4.45)%, P=0.015]。富集分析提示, 与***共培养后的HCT-116细胞β-catenin结合、钙黏蛋白结合、Wnt信号通路的调控显著富集。***+金雀异黄酮组ABCG2 mRNA相对表达水平较***组降低(P<0.001)。体内实验结果显示, F.n+L-OHP+TCBZSO组裸鼠肿瘤重量[(0.12±0.02)g]低于F.n+L-OHP组[(0.33±0.05)g, P<0.001]。免疫组化提示, TCBZSO干预后阻断了***对ABCG2蛋白表达的促进作用。结论 ***通过E-cadherin/β-catenin 信号通路上调ABCG2的表达诱导结直肠癌对奥沙利铂耐药。

关键词：结直肠肿瘤具核梭杆菌 ABC亚家族G亚型2 奥沙利铂耐药

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