检索结果-内蒙古大学图书馆

华蟾素注射液对胃癌细胞MGC-803增殖、迁移和侵袭能力及上皮-间质转化的影响

安徽中医药大学学报 2023年第3期42卷 67-71页

作者：涂雅婷王萌程卉李庆林安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 安徽中医药大学科研技术中心安徽合肥230038 新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038

目的探究华蟾素(cinobufagin,CBG)注射液对人胃癌细胞MGC803增殖、迁移和侵袭能力以及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法 CCK-8检测CBG注射液对MGC-803存活率的影响;倒置显微镜下观察CBG注射液对MGC-... 详细信息

目的探究华蟾素(cinobufagin,CBG)注射液对人胃癌细胞MGC803增殖、迁移和侵袭能力以及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法 CCK-8检测CBG注射液对MGC-803存活率的影响;倒置显微镜下观察CBG注射液对MGC-803形态的影响;采用细胞划痕实验和Transwell小室检测CBG注射液对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测人胃癌细胞MGC-803中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达水平。结果华蟾素注射液能显著抑制MGC-803细胞的增殖、迁移与侵袭(P<0.05),且呈剂量依赖性。Western blot检测结果显示,CBG注射液能显著上调E-cadherin蛋白表达水平(P<0.05),显著下调N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达水平(P<0.05)。结论华蟾素注射液可以抑制胃癌细胞MGC-803的增殖、迁移侵袭及EMT。

关键词：华蟾素注射液胃癌细胞侵袭转移上皮-间质转化

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多花黄精果糖激酶和GDP-甘露糖焦磷酸化酶的基因克隆及酶结构性质

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生物学杂志 2022年第4期39卷 1-6页

作者：赵历强赵德蕊单春苗张声祥施圆圆吴家文安徽中医药大学研究生院合肥230012 安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室合肥230038 安徽道地中药材品质提升协同创新中心合肥230012 安徽省中医药科学院合肥230012

多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua,PC)果糖激酶(PCFRK)和GDP-甘露糖焦磷酸化酶(PCGMPP)是黄精多糖生物合成中重要的关键酶,为探究它们在黄精多糖生物合成途径中的作用,基于转录组测序数据分析,利用RT-PCR技术对这两种关键酶基因进行... 详细信息

多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua,PC)果糖激酶(PCFRK)和GDP-甘露糖焦磷酸化酶(PCGMPP)是黄精多糖生物合成中重要的关键酶,为探究它们在黄精多糖生物合成途径中的作用,基于转录组测序数据分析,利用RT-PCR技术对这两种关键酶基因进行克隆,并分析酶蛋白的理化性质及结构特点。PCFRK开放读码框(ORF)为1725 bp,编码574个氨基酸,具有两个磷酸果糖激酶B家族的特征保守基序;PCGMPP的ORF为1086 bp,编码361个氨基酸,具有焦磷酸化酶家族的保守位点和活性位点。系统进化树分析发现在已知数据库中PC FRK与深圳拟兰FRK亲缘关系最近;而PC GMPP与芦笋GMPP亲缘关系最近。基因表达分析说明PCFRK和PCGMPP在根状茎中的基因表达总量明显高于其他组织,这与多花黄精根茎中多糖含量高于其他组织是一致的。研究为PCFRK和PCGMPP两种关键酶功能的进一步研究及黄精多糖生物合成途径的解析奠定基础。

关键词：多花黄精基因克隆果糖激酶 GDP-甘露糖焦磷酸化酶生物信息学分析

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华蟾素注射液抑制小鼠黑色素瘤的作用及机制研究

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安徽中医药大学学报 2022年第6期41卷 65-70页

作者：刘霞霞陈馨王文君程卉吴欢安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 教育部新安医学重点实验室安徽合肥230038 安徽中医药大学科研技术中心安徽合肥230038

目的观察华蟾素注射液对小鼠黑色素瘤的抑制作用,并探究其作用机制。方法将黑色素瘤B16F10细胞移植至C57BL/6小鼠,将模型复制成功的40只黑色素瘤移植瘤小鼠随机分为对照组,华蟾素注射液低、中、高剂量组。苏木精-伊红染色后观察黑色素... 详细信息

目的观察华蟾素注射液对小鼠黑色素瘤的抑制作用,并探究其作用机制。方法将黑色素瘤B16F10细胞移植至C57BL/6小鼠,将模型复制成功的40只黑色素瘤移植瘤小鼠随机分为对照组,华蟾素注射液低、中、高剂量组。苏木精-伊红染色后观察黑色素瘤移植瘤的病理变化;免疫组织化学法观察移植瘤组织基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、Vimentin、MMP-9、上皮钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)、神经钙黏蛋白(nervous cadherin,N-cadherin)和Ki-67蛋白的表达水平;Western blot法检测移植瘤组织Vimentin、MMP-9和N-cadherin蛋白的表达水平。结果与对照组比较,华蟾素注射液高、中、低剂量组小鼠移植瘤质量均明显降低(P<0.05),而小鼠体质量的差异无统计学意义(P>0.05);苏木精-伊红染色结果表明,华蟾素注射液高、中、低剂量组黑色素瘤细胞形成的巢均明显减少,细胞密度均明显降低,细胞体积均明显增大;免疫组织化学检测结果表明,华蟾素注射液中、高剂量组Ki-67蛋白的表达水平均明显下调(P<0.05);华蟾素注射液中、高剂量组黑色素瘤移植瘤中E-cadherin蛋白的表达水平明显上调(P<0.05);华蟾素注射液低、中、高剂量组N-cadherin、MMP-9蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);华蟾素注射液中、高剂量组MMP-2和Vimentin蛋白的表达水平显著下调(P<0.05);Western blot检测结果表明,华蟾素注射液可下调黑色素瘤移植瘤中MMP-9、Vimentin、N-cadherin蛋白的表达水平。结论华蟾素注射液具有抑制小鼠黑色素瘤的作用,其作用机制与抑制黑色素瘤上皮-间质转化的发生有关。

关键词：华蟾素注射液黑色素瘤移植瘤上皮-间质转化

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化痰化瘀通络法对糖尿病大鼠心肌微血管和细胞外间质的影响及机制研究

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中国中西医结合杂志 2020年第8期40卷 948-954页

作者：蔡正银储全根储俊轩云程捷安徽中医药大学中医学院合肥230038 安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室合肥230038 安徽中医药大学科研实验中心合肥230038

目的观察化痰化瘀通络法对糖尿病大鼠心肌微血管和细胞外间质的影响并探索部分机制。方法将糖尿病成功造模的40只清洁级SD大鼠随机分为:模型组(DCM组)、糖基化终末产物特异性蛋白交联抑制剂(ALT-711)组、化痰化瘀组(RPDBS组)、化痰组(RP... 详细信息

目的观察化痰化瘀通络法对糖尿病大鼠心肌微血管和细胞外间质的影响并探索部分机制。方法将糖尿病成功造模的40只清洁级SD大鼠随机分为:模型组(DCM组)、糖基化终末产物特异性蛋白交联抑制剂(ALT-711)组、化痰化瘀组(RPDBS组)、化痰组(RP组)、化瘀组(DBS组),每组8只,另选10只正常SD大鼠作对照组(NC组)。3周后各组开始灌胃相应药物8周,麻醉状态下取材。光镜观察心肌组织的形态变化和细胞外间质胶原的沉积情况,透射电镜观察心肌微血管的超微结构;免疫组织化学法检测心肌组织中Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)和基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)蛋白的表达。结果光镜显示,与DCM组比较,各治疗组心肌细胞变性坏死程度情况改善,心肌胶原纤维增生减少,排列基本均匀,RPDBS组治疗效果优于RP组和DBS组;透射电镜结果显示,与DCM组比较,各治疗组心肌微血管内皮细胞和基底膜的破坏程度均改善,且RPDBS组改善情况优于RP组和DBS组;免疫组织化学法显示,与NC组比较,DCM组ColⅠ、ColⅢ、MMP-1、TIMP-1蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05);与DCM组比较,各治疗组均下调了ColⅠ、ColⅢ和MMP-1、TIMP-1蛋白表达水平(P<0.01,P<0.05),其中RPDBS组较RP组和DBS组蛋白表达水平下调明显(P<0.01)。结论化痰化瘀通络法能够改善糖尿病大鼠心肌微血管及细胞外间质病变,其机制可能与下调心肌组织MMP-1、TIMP-1蛋白表达水平,调节MMP-1/TIMP-1平衡,改善心肌细胞外基质代谢有关。且化痰化瘀通络法合用疗效优于化痰法和化瘀法单独应用。

关键词：化痰化瘀通络心肌微血管细胞外间质机制

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UPLC-ESI-QTOF/MS^E结合UNIFI快速分析华蟾素注射液化学成分

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天然产物研究与开发 2020年第3期32卷 498-506页

作者：吴欢唐卯星陶欣怡占翔仇静文高波李庆林安徽中医药大学科研实验中心合肥230038 四川大学化学学院成都610065 新安医学教育部重点实验室合肥230038 安徽华润金蟾药业股份有限公司淮北235000

采用超高效液相色谱-电喷雾离子源-四级杆飞行时间质谱(UPLC-ESI-QTOF/MS)结合UNIFI天然产物信息平台快速分析华蟾素注射液化学成分。利用QTOF/MS非信息依赖扫描的MS^E模式采集复杂组分质谱信息,将采集的质谱数据文件和自建化学成分库导... 详细信息

采用超高效液相色谱-电喷雾离子源-四级杆飞行时间质谱(UPLC-ESI-QTOF/MS)结合UNIFI天然产物信息平台快速分析华蟾素注射液化学成分。利用QTOF/MS非信息依赖扫描的MS^E模式采集复杂组分质谱信息,将采集的质谱数据文件和自建化学成分库导入UNIFI,进行智能匹配,随后使用MassLynx工作站逐个核对。本实验共辨识76个化学成分,其中蟾蜍二烯羟酸内酯类36个、生物碱类12个(包括1种新成分)、小分子肽类13个、有机酸类7个、酰胺类4个、甾醇类2个、其他类2个。本方法能快速分离、分析华蟾素注射液复杂组分,为该制剂的毒-效成分及质量控制研究奠定了基础。

关键词：华蟾素注射液 UPLC-ESI-QTOF/MS UNIFI 化学成分

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多花黄精甾体皂苷生物合成途径分析及关键酶基因研究

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中国中药杂志 2020年第12期45卷 2847-2857页

作者：单春苗王晨凯施圆圆张声祥赵历强吴家文安徽中医药大学研究生院安徽合肥230012 安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽省中医药科学院安徽合肥230012 安徽道地中药材品质提升协同创新中心安徽合肥230012

甾体皂苷是黄精属植物的特征性成分及主要活性成分,黄精属甾体皂苷具有调节血糖、防治心脑血管疾病及抗肿瘤等多种药理活性。为解析黄精甾体皂苷生物合成途径,探究其关键酶基因,该研究使用BGISEQ-500平台对多花黄精的花、叶、根和根茎... 详细信息

甾体皂苷是黄精属植物的特征性成分及主要活性成分,黄精属甾体皂苷具有调节血糖、防治心脑血管疾病及抗肿瘤等多种药理活性。为解析黄精甾体皂苷生物合成途径,探究其关键酶基因,该研究使用BGISEQ-500平台对多花黄精的花、叶、根和根茎进行转录组测序,获得129989条unigenes,88958条unigenes被七大数据库注释,其中22813条unigenes可归类于53个GO功能分类中,64877条unigenes涉及136条KEGG代谢通路。502条unigenes涉及多花黄精甾体皂苷生物合成途径,其中97条unigenes编码甾体皂苷生物合成途径12个关键酶。对甾醇生物合成过程中的第一个关键酶环阿屯醇合酶进行序列分析和同源建模发现其具有保守的催化结构域和底物结合结构域。将多花黄精根茎与花、叶、根的基因表达水平比较,有2437条unigenes在根茎中特异性高表达且被KEGG注释,其中35条与甾体皂苷生物合成途径相关。该研究极大地丰富了黄精属植物的转录组数据,为植物甾体皂苷生物合成途径的解析提供了线索,为进一步研究甾体皂苷生物合成途径关键酶的功能及调控机制奠定了基础。

关键词：多花黄精转录组测序甾体皂苷环阿屯醇合酶差异表达基因

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基于转录组测序的细风轮花青素合成途径及关键酶基因分析

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植物研究 2020年第6期40卷 886-896页

作者：赵历强单春苗张声祥施圆圆马克龙吴家文安徽中医药大学研究生院合肥230012 安徽中医药大学科研实验中心、新安医学教育部重点实验室合肥230038 安徽中医药大学中西医结合学院合肥230012 安徽道地中药材品质提升协同创新中心合肥230012 安徽省中医药科学院合肥230012

为进一步理解细风轮花青素合成途径,本研究利用华大基因BGISEQ-500平台对细风轮中的根、茎、叶、花4个组织进行了转录组测序,从头组装后得到128856个Unigene。KEGG通路表明有40个Unigene编码了细风轮的花青素生物合成途径中6个关键酶。... 详细信息

为进一步理解细风轮花青素合成途径,本研究利用华大基因BGISEQ-500平台对细风轮中的根、茎、叶、花4个组织进行了转录组测序,从头组装后得到128856个Unigene。KEGG通路表明有40个Unigene编码了细风轮的花青素生物合成途径中6个关键酶。我们对其中的关键酶DFR(二氢黄酮醇还原酶)进行同源比对和空间结构模拟,结果显示DFR序列和结构均具有良好的保守性,且具有高度保守的NAD+结合位点,其二级结构主要由α螺旋和β折叠组成,在空间上α螺旋包裹着β折叠,形成“夹心饼干”样结构。

关键词：细风轮花青素转录组单基因二氢黄酮醇还原酶

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基于转录组测序的牛蒡木质素类物质生物合成途径及关键酶基因分析

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中草药 2020年第16期51卷 4300-4307页

作者：魏俊雯张声祥施圆圆单春苗马克龙吴家文安徽中医药大学中西医结合临床学院安徽合肥230012 安徽中医药大学科研实验中心、新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽道地中药材品质提升协同创新中心安徽合肥230012 安徽中医药大学研究生院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院安徽合肥230012

目的获得牛蒡Arctiumlappa根功能基因数据库,分析其木质素类化合物生物合成途径及关键酶基因。方法以牛蒡根为研究对象,利用华大基因BGISEQ-500测序平台进行转录组测序,通过从头组装获得Unigene,利用各种已有的核酸和蛋白质数据库对Unig... 详细信息

目的获得牛蒡Arctiumlappa根功能基因数据库,分析其木质素类化合物生物合成途径及关键酶基因。方法以牛蒡根为研究对象,利用华大基因BGISEQ-500测序平台进行转录组测序,通过从头组装获得Unigene,利用各种已有的核酸和蛋白质数据库对Unigene进行注释和分类,利用KEGG代谢途径分析木质素生物合成途径及其关键酶基因,利用三维同源建模分析苯丙氨酸解氨酶(AlPAL)的结构特点。结果通过转录组测序共获得54 215个Unigene,其中42 003个Unigene被任一数据库注释,1 668个Unigene被注释到54个转录因子家族中;KEGG途径分析鉴定了423个Unigene参与了木质素的生物合成。AlPAL空间结构模型显示其为同型四聚体,每个单体由3个结构域组成,包括4-甲基-咪唑-5-酮(MIO)结构域、核心结构域和屏蔽结构域,其中MIO结构域包含保守的三肽ASG,构成AlPAL酶的催化活性中心。结论对牛蒡根转录组进行分析,为牛蒡功能基因鉴定、次生代谢途径解析及其调控机制研究奠定了实验基础。

关键词：牛蒡转录组测序木质素功能基因苯丙氨酸解氨酶

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新藤黄酸抑制人肝癌细胞BEL-7402自噬作用研究

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安徽中医药大学学报 2020年第3期39卷 46-50页

作者：展凡王玉涵王萌郑凤苏婧婧程卉李庆林安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038

目的观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对人肝癌细胞BEL-7402自噬的影响,为GNA抗肿瘤研究提供理论依据。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞株,采用MTT法检测GNA对人肝癌细胞BEL-7402存活率的影响;倒置显微镜观察给药前后细胞形态变化;单... 详细信息

目的观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对人肝癌细胞BEL-7402自噬的影响,为GNA抗肿瘤研究提供理论依据。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞株,采用MTT法检测GNA对人肝癌细胞BEL-7402存活率的影响;倒置显微镜观察给药前后细胞形态变化;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色,荧光显微镜观察细胞自噬小体;透射电子显微镜进一步观察自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1light chain 3,LC3)和p62、Beclin1的表达水平及加入自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)和自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)后自噬相关蛋白的表达情况。结果 GNA能显著抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖并呈时效及量效关系;倒置显微镜观察结果显示GNA组细胞随药物浓度增大,细胞悬浮增多,高浓度给药组细胞出现碎片化;荧光显微镜下观察结果显示,随药物浓度的增加,荧光点状聚集增多;透射电子显微镜观察发现,随GNA浓度的增加,细胞内自噬空泡数量增多,与对照组比较,加入自噬诱导剂Rap后,自噬空泡数量显著增多;Western blot法检测结果显示,随GNA浓度的增加,Beclin1、p62、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均增加(P<0.05),LC3-Ⅰ无明显变化,表明BEL-7402细胞自噬前期被激活,后期进程被抑制。结论 GNA能抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖,其机制可能部分是通过抑制自噬后期自噬体与溶酶体的融合,抑制人肝癌BEL-7402细胞的保护性自噬。

关键词：新藤黄酸肝癌 BEL-7402细胞细胞自噬

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吡拉格雷钠对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能的改善作用及机制研究

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中国药房 2019年第7期30卷 889-895页

作者：孙翔李庆林安徽中医药大学科研实验中心/新安医学教育部重点实验室合肥230038

目的:研究吡拉格雷钠对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能的改善作用及相关机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(地佐环平0.8 mg/kg)和吡拉格雷钠低、中、高剂量组(20、30、45 mg/kg),每组12只。除假手术组大... 详细信息

目的:研究吡拉格雷钠对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能的改善作用及相关机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(地佐环平0.8 mg/kg)和吡拉格雷钠低、中、高剂量组(20、30、45 mg/kg),每组12只。除假手术组大鼠行假手术外,其余各组大鼠均采用大脑中动脉结扎诱导脑缺血再灌注损伤模型。术后2 h尾静脉注射相应药物,假手术组和模型组大鼠注射等量生理盐水,连续给药6 d,给药间隔均为24 h。再灌注24 h和末次给药后,评估大鼠的神经功能缺陷评分和姿势反射评分,采用微正电子发射断层扫描评估脑损伤情况(包括全脑、岛状皮层、壳核、纹状体、体细胞皮层、杏仁核、运动皮层)。然后处死大鼠,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色后观察脑梗死情况并计算脑梗死体积,酶联免疫吸附试验检测其脑组织中Na^+-K^+-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶活性和谷氨酸(Glu)含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠缺血再灌注后24 h和末次给药后的神经功能缺陷评分、姿势反射评分均明显升高(P<0.05或P<0.01),脑缺血再灌注24 h与末次给药后脑组织的SUV、全脑及各不同脑区的右左脑SUV比值均明显降低(P<0.01);末次给药后脑梗死体积百分数明显升高(P<0.01),脑组织中Na^+-K^+-ATP酶和Ca^(2+)-ATP酶活性明显降低(P<0.01),Glu含量明显升高(P<0.01)。与模型组比较,吡拉格雷钠低、中、高剂量组和阳性对照组大鼠上述指标均明显改善(P<0.05或P<0.01)。结论:吡拉格雷钠对大鼠脑缺血再灌注损伤和神经功能有改善作用,这可能与上调脑组织中Na^+-K^+-ATP酶和Ca^(2+)-ATP酶活性和下调Glu含量有关。

关键词：吡拉格雷钠脑缺血再灌注损伤神经功能大鼠机制

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