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新藤黄酸通过Ras/Raf/Erk信号通路诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

中药新药与临床药理 2016年第2期27卷 189-193页

作者：彭程孙美灵苏婧婧李庆林安徽中医药大学安徽合肥230012 中国科学院成都生物研究所四川成都610041 安徽中医药大学科研实验中心安徽合肥230012 新安医学教育部重点实验室安徽合肥230012

目的研究新藤黄酸(Gambogenic acid,GNA)诱导A549细胞凋亡的作用,并探讨其可能的分子机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测0.5,1.0,2.0,4.0,8.0μmol·L^(-1)的GNA作用于A549细胞24 h后细胞的增殖情况;采用Hoechst 33342和Annexin V-FITC/PI染色法,于荧光显微镜下观察1.25,2.5,5.0μmol·L^(-1)的GNA作用细胞24 h后的凋亡形态;流式细胞仪检测1.25,2.5,5.0μmol·L^(-1)的GNA作用细胞24 h后的凋亡率;Western Blot法检测1.25,2.5,5.0μmol·L^(-1)的GNA处理细胞24 h后,Ras、Raf、Erk和p-Erk的表达。结果GNA能够显著降低A549细胞的活力,并呈浓度依赖性抑制细胞增殖,24 h的IC50为2.507μmol·L^(-1);Hoechst33342和AV/PI染色后,于荧光显微镜下观察发现,细胞显示明显的凋亡特征;流式细胞仪检测结果表明,随着GNA浓度的升高,细胞的凋亡比率逐渐上升;Western Blot法检测显示GNA能够抑制Ras、Raf、p-Erk1/2蛋白的表达。结论 GNA能够诱导A549细胞凋亡,其作用可能与通过调控Ras/Raf/Erk信号通路有关。

关键词：新藤黄酸 A549细胞凋亡 Ras/Raf/Erk信号通路肺癌

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蛇床子三螺旋转录因子基因的克隆与表达分析

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生物学杂志 2016年第3期33卷 24-29页

作者：王希强尹登科储俊吴家文安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室合肥230038 安徽中医药大学药学院合肥230038

研究的目的是克隆中药蛇床子[Cnidium monnieri(L.)Cuss.]三螺旋转录因子(Trihelix transcription factor,ttf)基因,诱导、鉴定其蛋白体外表达,并利用生物信息学方法分析该蛋白的结构和性质。主要采用RT-PCR方法扩增目的基因,连接到p MD... 详细信息

研究的目的是克隆中药蛇床子[Cnidium monnieri(L.)Cuss.]三螺旋转录因子(Trihelix transcription factor,ttf)基因,诱导、鉴定其蛋白体外表达,并利用生物信息学方法分析该蛋白的结构和性质。主要采用RT-PCR方法扩增目的基因,连接到p MDTM19(Simple)-T克隆载体中,核酸序列鉴定正确后再将目的基因克隆到p ET-22b(+)表达载体上,将获得的重组质粒转化到大肠杆菌*** BL21细胞中,以不同浓度的诱导剂诱导其表达,进一步利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹方法检测目的蛋白的表达情况,并利用各种生物学软件对目的蛋白进行生物信息学分析。结果获得了ttf,构建了该基因的克隆和表达重组质粒,该基因在大肠杆菌BL21中能够被诱导表达,Western Blot结果表明,在预计的分子质量21 ku位置得到了目的蛋白;生物信息学分析表明,目的蛋白为可溶性蛋白,可能定位于细胞核和线粒体中;部分区域极有可能形成卷曲螺旋。研究首次成功体外克隆并在原核生物中表达了蛇床子三螺旋转录因子,并对其进行了系统的生物信息学分析,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。

关键词：蛇床子三螺旋转录因子基因克隆蛋白质表达生物信息学

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气相色谱-质谱联用法分析3种方法提取的三七挥发性成分

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安徽中医药大学学报 2016年第2期35卷 83-88页

作者：谢林伯戴卫国孙毅程刚胡容峰王斌安徽中医药大学科研实验中心安徽合肥230038 安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽省中药研究与开发重点实验室安徽合肥230038

目的运用气相色谱-质谱联用法对不同方法提取的三七挥发性成分进行比较分析。方法分别采用回流提取法、超声提取法、静态顶空法提取三七挥发油,运用气相色谱-质谱联用技术,运用NIST11.0质谱数据库和峰面积归一化法对已分离的化合物进行... 详细信息

目的运用气相色谱-质谱联用法对不同方法提取的三七挥发性成分进行比较分析。方法分别采用回流提取法、超声提取法、静态顶空法提取三七挥发油,运用气相色谱-质谱联用技术,运用NIST11.0质谱数据库和峰面积归一化法对已分离的化合物进行鉴定并计算各成分的相对含量。结果从回流提取、超声提取、静态顶空法提取的三七挥发油中分别鉴定出60、50、24个挥发性成分。在静态顶空法中相对质量分数最高的是香桧烯,占挥发性成分的24.97%;在回流提取法和超声提取法中相对质量分数最高的都是聚炔类物质环氧十三烷-4,11-二炔,分别占挥发性成分的9.97%和14.75%。首次从三七挥发性成分中鉴定出3个聚炔类化合物和2个甾体类化合物。结论三七中挥发性成分主要为烷烃类、烯烃类、醛类、酸类、酯类、萜类、聚炔类、甾体类和杂环类物质。3种方法的补充利用可较全面地提取出三七中的挥发性物质。

关键词：三七挥发性成分气相色谱-质谱联用法

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白梅花化学成分及其药理作用研究进展

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广州化工 2017年第24期45卷 40-42,72页

作者：王灿灿张伟吴德玲金传山许凤清俞年军乔金为黄琪安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 新安医学教育部重点实验室安徽合肥230012 安徽省高校科研创新平台团队(中药饮片产地加工与炮制一体化关键技术研究创新团队) 安徽合肥230012 安徽道地中药材品质提升协同创新中心安徽合肥230012

查阅白梅花的化学成分、药理作用、临床应用和质量控制等方面的文献,从白梅花的化学成分、药理作用、临床应用和质量控制等方面研究进行分析总结。研究发现白梅花的化学成分包括挥发油类、黄酮类、酯苷类、酚苷类等,主要有抗氧化、抗血... 详细信息

查阅白梅花的化学成分、药理作用、临床应用和质量控制等方面的文献,从白梅花的化学成分、药理作用、临床应用和质量控制等方面研究进行分析总结。研究发现白梅花的化学成分包括挥发油类、黄酮类、酯苷类、酚苷类等,主要有抗氧化、抗血小板凝集等药理作用,临床上主要用于治疗肝胃气痛、郁闷心烦等多种疾病。白梅花的现代药理作用与化学成分的研究与其传统中医临床疗效相对应,为进一步开发利用白梅花提供参考。

关键词：白梅花化学成分药理作用研究进展

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新藤黄酸联合阿霉素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

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安徽中医药大学学报 2015年第1期34卷 51-55页

作者：谢晨烨张凤程卉苏婧婧李庆林安徽中医药大学科研实验中心省部共建教育部新安医学重点实验室安徽合肥230038

目的研究新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）与阿霉素（adriamycin,ADM）联合作用对人乳腺癌细胞MCF-7的影响。方法体外培养人乳腺癌细胞MCF-7细胞株,采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）检测细胞存活率,倒置显微镜... 详细信息

目的研究新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）与阿霉素（adriamycin,ADM）联合作用对人乳腺癌细胞MCF-7的影响。方法体外培养人乳腺癌细胞MCF-7细胞株,采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态变化;4′,6-二脒基-2-苯基吲哚（4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI）细胞核染色实验观察GNA与ADM单独与联合作用对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响;膜联蛋白Ⅴ（annexinⅤ,AV）-异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染流式细胞仪检测给药后乳腺癌细胞MCF-7凋亡率。结果 MTT检测结果显示,在GNA浓度为0.125～4μmol/L和ADM浓度在0.5～16μmol/L范围内,人乳腺癌细胞MCF-7的细胞存活率随GNA和ADM剂量增加而降低,且联合用药组细胞存活率低于单独用药组。倒置显微镜和荧光显微镜下,与对照组比较,细胞明显缩圆变小,染色细胞核破碎,呈现凋亡状态,而联合用药组凋亡细胞数量明显高于单独用药组。AV-FITC/PI双染经流式细胞仪检测发现,GNA与ADM单独和联合作用均诱导MCF-7细胞凋亡,与单独用药组比较,联合用药组细胞凋亡率显著增加（P〈0.01）。结论 GNA与ADM单独和联合作用均能诱导人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡,且两者联合作用可产生协同效应,其作用机制可能与诱导细胞凋亡相关。

关键词：新藤黄酸阿霉素人乳腺癌细胞凋亡

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伴侣自吞噬在MPP^+损伤的SH-SY5Y细胞中的影响及葛根素的干预作用

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中国中药杂志 2014年第1期39卷 106-112页

作者：王训翠王秀李庆林安徽中医药大学省部共建新安医学教育部重点实验室科研实验中心安徽合肥230038

目的:研究葛根素通过分子伴侣自吞噬途径保护MPP+损伤的SH-SY5Y细胞。方法:以1 mmol·L-1MPP+损伤SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型。采用CCK-8染色检测不同浓度的葛根素对MPP+损伤的SH-SY5Y细胞存活率的影响;透射电镜、AO染色观察... 详细信息

目的:研究葛根素通过分子伴侣自吞噬途径保护MPP+损伤的SH-SY5Y细胞。方法:以1 mmol·L-1MPP+损伤SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型。采用CCK-8染色检测不同浓度的葛根素对MPP+损伤的SH-SY5Y细胞存活率的影响;透射电镜、AO染色观察自噬体的形成及检测溶酶体活性的变化;RT-PCR检测Lamp2a,Hsc70 mRNA表达的变化,Western blotting法检测细胞内Lamp2a,Hsc70,α-synuclein蛋白的表达。结果:在12.5~50.0μmol·L-1,预先30 min加入葛根素可以保护SH-SY5Y细胞抵抗MPP+诱导的损伤,并呈一定的量效关系;AO染色和电子显微镜检测25.0,50.0μmol·L-1葛根素作用于1 mmol·L-1MPP+损伤的SH-SY5Y细胞,细胞内出现自噬体,并且随着葛根素剂量的增加,胞质中形成的自噬体增多;流式细胞术检测结果显示50.0μmol·L-1葛根素可以拮抗1 mmol·L-1MPP+诱导的SH-SY5Y细胞内ROS水平的增加,阻止氧化损伤的发生;RT-PCR和Western blotting结果表明在12.5~50.0μmol·L-1葛根素通过上调细胞内Hsc70,Lamp2a mRNA和蛋白水平保护MPP+造成的SH-SY5Y细胞损伤并抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞α-synuclein蛋白的积聚。结论:葛根素可以拮抗MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤,其保护机制可能与干预分子伴侣自吞噬途径有关。

关键词：葛根素伴侣自吞噬 MPP+ SH—SY5Y细胞 ROS

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黄芩苷pH敏感眼用原位凝胶的制备与评价

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辽宁中医药大学学报 2015年第12期17卷 39-42页

作者：徐亚静胡容峰安徽中医药大学安徽合肥230038 安徽省中药研究与开发重点实验室安徽合肥230038 省部共建新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽中医药大学科研实验中心安徽合肥230038 安徽省"115"现代中药研发创新团队安徽合肥230038

目的:研制黄芩苷pH敏感眼用原位凝胶。方法:以Carbopol 980NF和HPMC为pH敏感材料,通过星点设计-效应面法优化处方,并以黏度作为判断标准筛选最佳配方。采用家兔自身对照法考查凝胶的刺激性和在眼内滞留时间。结果:优化处方为在室温条件... 详细信息

目的:研制黄芩苷pH敏感眼用原位凝胶。方法:以Carbopol 980NF和HPMC为pH敏感材料,通过星点设计-效应面法优化处方,并以黏度作为判断标准筛选最佳配方。采用家兔自身对照法考查凝胶的刺激性和在眼内滞留时间。结果:优化处方为在室温条件下是自由流动的液体,在生理条件下发生胶凝形成凝胶。原位凝胶单次、多次给药后对家兔的眼睛均无刺激作用且延长了药物在眼内的滞留时间。结论:所研制的黄芩苷眼用pH敏感原位凝胶符合眼部应用要求,体现出良好的眼部应用前景。

关键词：黄芩苷 pH敏感原位凝胶制备评价

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新藤黄酸通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的研究

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中国中药杂志 2014年第9期39卷 1666-1669页

作者：程卉张璇苏婧婧李庆林省部共建新安医学教育部重点实验室安徽中医药大学科研实验中心安徽合肥230038

目的:探讨新藤黄酸诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的机制。方法:MTT试验检测新藤黄酸对B16细胞增殖抑制的作用;采用Hochest 33258荧光染色观察新藤黄酸对B16细胞的影响;透射电镜观察新藤黄酸对B16细胞的超微结构的改变;Western blot法检测PI3K... 详细信息

目的:探讨新藤黄酸诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的机制。方法:MTT试验检测新藤黄酸对B16细胞增殖抑制的作用;采用Hochest 33258荧光染色观察新藤黄酸对B16细胞的影响;透射电镜观察新藤黄酸对B16细胞的超微结构的改变;Western blot法检测PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt,p-mTOR,PTEN蛋白的变化以探讨新藤黄酸诱导B16细胞凋亡的分子机制。结果:新藤黄酸对黑色素瘤细胞B16生长和增殖有明显地抑制作用,并随着新藤黄酸浓度的增加和作用时间的延长细胞活力明显下降;Hochest 33258染色结果显示,新藤黄酸处理的细胞中呈现明显的凋亡特征;透射电镜观察发现新藤黄酸作用B16细胞后,细胞发生明显凋亡的形态学变化;Western blot检测表明p-PI3K蛋白表达呈时间依赖性下降;p-Akt蛋白表达呈时间依赖性下降,而PI3K,Akt蛋白表达量基本不变,p-mTOR蛋白的表达随着时间的延长有所下降,PTEN蛋白的表达呈时间依赖性增加。结论:新藤黄酸在一定的时间和浓度范围内能够抑制黑色素瘤B16细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

关键词：新藤黄酸细胞凋亡 B16 分子机制

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新藤黄酸诱导人胃癌MGC-803细胞线粒体途径凋亡的实验研究

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中药材 2014年第1期37卷 95-99页

作者：王训翠朱国旗程卉李庆林安徽中医药大学省部共建新安医学教育部重点实验室/科研实验中心安徽合肥230038

目的：研究新藤黄酸（Gambogenic acid,GNA）对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响,并探讨其抗肿瘤的作用机制。方法：MTT法检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术（FCM）检测MGC-803细胞凋亡率;H2DCFDA探针法流式细胞术检测细胞内... 详细信息

目的：研究新藤黄酸（Gambogenic acid,GNA）对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响,并探讨其抗肿瘤的作用机制。方法：MTT法检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术（FCM）检测MGC-803细胞凋亡率;H2DCFDA探针法流式细胞术检测细胞内活性氧的含量;罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位（△Ψm）的改变;Western blot法检测细胞内P53蛋白的表达变化。结果：新藤黄酸在1.0~12.0μmol/L浓度范围内可抑制人胃癌细胞MGC-803细胞的增殖;增加细胞内活性氧的含量;降低线粒体膜电位;诱导细胞发生凋亡并呈浓度依赖性;Western blotting结果显示,新藤黄酸明显升高MGC-803细胞凋亡诱导基因P53的表达。结论：新藤黄酸可诱导人胃癌MGC-803细胞的凋亡,其机制可能与促进P53介导的线粒体途径依赖的细胞凋亡相关。

关键词：新藤黄酸 MGC-803细胞线粒体途径细胞凋亡

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新藤黄酸通过内质网应激诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的研究

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安徽中医药大学学报 2014年第1期33卷 63-66页

作者：戴婷婷程卉苏婧婧李庆林省部共建新安医学教育部重点实验室安徽中医药大学科研实验中心安徽合肥230038

目的研究新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的机制。方法采用不同浓度的GNA作用细胞24h,对照组是相同浓度GNA加内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)共同作用HCT116细胞24h。采用甲基噻唑基... 详细信息

目的研究新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的机制。方法采用不同浓度的GNA作用细胞24h,对照组是相同浓度GNA加内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)共同作用HCT116细胞24h。采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)染色测定两组细胞增殖抑制率的差异,采用吖啶橙(acridine orange,AO)和溴化乙锭(ethidium bromide,EB)染色观察细胞的形态学变化,采用膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ,AV)-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙碇(propidium iodide,PI)双重染色检测细胞凋亡率。结果内质网应激抑制剂4-PBA可以缓解GNA对HCT116细胞增殖的抑制作用;AO/EB染色后荧光显微镜观察发现GNA作用的细胞具有凋亡特征;流式细胞仪检测显示4-PBA可降低HCT116细胞的凋亡率。结论 GNA能抑制人结肠癌细胞HCT116增殖,诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的作用可能与内质网应激途径有关。

关键词：新藤黄酸人结肠癌细胞HCT116 细胞凋亡内质网应激

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