检索结果-内蒙古大学图书馆

中国中药杂志 2019年第9期44卷 1799-1807页

作者：张声祥施圆圆王晨凯赵德蕊杨青山马克龙吴家文安徽中医药大学研究生院安徽合肥230012 安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 安徽道地中药材品质提升协同创新中心安徽合肥230012 安徽省中医药科学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012

查尔酮合成酶(CHS)和查尔酮异构酶(CHI)是黄酮类物质生物合成途径中的关键酶,该研究从中药异叶天南星(Arisaema heterophyllum Blume,Ah)转录组数据库中筛选出查尔酮合成酶基因(Ah CHS)和查尔酮异构酶基因(Ah CHI),利用RT-PCR技术克隆... 详细信息

查尔酮合成酶(CHS)和查尔酮异构酶(CHI)是黄酮类物质生物合成途径中的关键酶,该研究从中药异叶天南星(Arisaema heterophyllum Blume,Ah)转录组数据库中筛选出查尔酮合成酶基因(Ah CHS)和查尔酮异构酶基因(Ah CHI),利用RT-PCR技术克隆了它们的开放阅读框(ORF)部分,并对其编码蛋白Ah CHS和Ah CHI的理化性质、表达及结构特点进行分析。Ah CHS的ORF长度为1 176 bp,编码392个氨基酸的蛋白质;而Ah CHI的ORF长度为630 bp,编码蛋白含209个氨基酸。Ah CHS作为对称同二聚体,N端螺旋互相交换,每个单体由2个亚结构域组成,位于2个亚结构域之间交界处的4个保守的氨基酸残基构成了酶的活性中心; Ah CHI的三级结构采用了开放的β-三明治褶皱,1个大的β折叠片层(β4～β11)和1个α螺旋片层(α1～α7)组成其核心结构,其中β4,β5,α4和α6在不同物种间高度保守,部分疏水氨基酸形成了酶的活性位点。系统进化树分析发现Ah CHS与火鹤花CHS亲缘关系最近;而Ah CHI与紫牡丹CHI亲缘关系最近。表达分析表明编码Ah CHS的基因在根和块茎中的表达量明显比叶多,而编码Ah CHI的基因在块茎部位的表达量最高。该研究为Ah CHS和Ah CHI功能的进一步研究及植物黄酮类化合物生物合成途径的解析提供了基础。

关键词：异叶天南星基因克隆查尔酮合成酶查尔酮异构酶生物信息学分析

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艾灸督脉调控PI3K/Akt/mTOR信号通路增强APP/PS1双转基因AD小鼠自噬水平的研究

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中国针灸 2019年第12期39卷 1313-1319页

作者：张利达韩为朱才丰宋小鸽程卉杨坤秦晓凤张君宇桂林安徽中医药大学研究生院合肥230038 安徽中医药大学第二附属医院脑病科合肥230061 安徽中医药大学第二附属医院老年病科合肥230061 安徽中医药大学针灸经络研究所安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室

目的:基于上游磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路观察艾灸"百会""风府""大椎"... 详细信息

目的:基于上游磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路观察艾灸"百会""风府""大椎"穴对淀粉样前体蛋白/早老素1(amyloid precursor protein/presenili1,APP/PS1)双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠脑内β-淀粉样蛋白(amyloidβ-peptide,Aβ)清除作用的影响。方法:将60只APP/PS1双转基因AD小鼠随机分为模型组、艾灸组、雷帕霉素组、艾灸+抑制剂组,每组15只,15只同龄同背景C57BL/6J雄性小鼠作为对照组。艾灸组小鼠实按灸"百会"、温和灸"风府"和"大椎",每次20 min,每日1次,治疗2周;雷帕霉素组用雷帕霉素(rapamycin)腹腔注射给药,2 mg·kg^-1·d^-1,治疗2周;艾灸+抑制剂组在艾灸组治疗基础上同时予以3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)腹腔注射给药,1.5 mg·kg^-1·d^-1,治疗2周;对照组和模型组动物常规饲养2周,不进行任何干预。用免疫组化技术检测小鼠皮质和海马脑区Aβ1-42表达水平,透射电镜观察小鼠海马脑区自噬体的形成,免疫印迹法检测小鼠海马组织PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-m TOR的蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组皮质区和海马脑区Aβ1-42蛋白表达增多(P<0.01);与模型组比较,艾灸组、雷帕霉素组和艾灸+抑制剂组皮质区和海马脑区Aβ1-42蛋白表达减少(P<0.01);与艾灸组比较,雷帕霉素组皮质区和海马脑区Aβ1-42蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),艾灸+抑制剂组皮质区和海马脑区Aβ1-42蛋白表达增多(P<0.01);与雷帕霉素组比较,艾灸+抑制剂组皮质区和海马脑区Aβ1-42蛋白表达增多(P<0.01)。模型组神经细胞胞质内自噬泡和细胞器减少;艾灸组自噬泡较多,可见不规则变形、萎缩的细胞器;雷帕霉素组可看到较多自噬泡,尚有变形的细胞器;艾灸+抑制剂组偶可观察到少量的自噬泡,可见较多变形、萎缩的细胞器。与对照组比较,模型组PI3K、Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,艾灸组、雷帕霉素组和艾灸+抑制剂组小鼠PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达均明显下降(P<0.01);与艾灸组比较,雷帕霉素组小鼠PI3K、Akt、p-mTOR蛋白表达略有升高(P<0.01),艾灸+抑制剂组PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达显著升高(P<0.01);与雷帕霉素组比较,艾灸+抑制剂组小鼠PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:艾灸督脉可加速自噬清除APP/PS1双转基因AD小鼠脑内的Aβ1-42蛋白异常沉积,其作用机制可能与艾灸督脉抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路异常激活有关。

关键词：阿尔茨海默病艾灸督脉细胞自噬 β-淀粉样蛋白 PI3K/Akt/mTOR信号通路

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蕲蛇毒腺的转录组分析及蛇毒蛋白功能基因的挖掘

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中国中药杂志 2019年第22期44卷 4820-4829页

作者：张声祥施圆圆单春苗王涛汪振兴汪胜松吴家文安徽中医药大学安徽省中医药科学院安徽合肥230012 安徽祁门蛇伤研究所安徽黄山245600 安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽道地中药材品质提升协同创新中心安徽合肥230012

蕲蛇是一种传统名贵中药材,具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、镇痛等药理作用,临床主要用于治疗类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、干燥综合征和肿瘤等疾病。蕲蛇毒腺中分泌的蛇毒蛋白具有凝血、抗癌、抗栓、改善微循环和神经毒性等功能。为挖... 详细信息

蕲蛇是一种传统名贵中药材,具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、镇痛等药理作用,临床主要用于治疗类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、干燥综合征和肿瘤等疾病。蕲蛇毒腺中分泌的蛇毒蛋白具有凝血、抗癌、抗栓、改善微循环和神经毒性等功能。为挖掘蕲蛇中蛇毒蛋白功能基因,利用基因工程技术在体外实现大量蛇毒蛋白的表达和纯化,该研究利用高通量测序平台对蕲蛇毒腺进行了转录组测序,组装获得了32862条unigene,其中26589条被公共数据库成功注释,2695条被注释到62个转录因子家族中,并且预测出5920个SSR位点。对分泌性磷脂酶A2和C型凝集素进行序列分析和同源建模,结果显示分泌性磷脂酶A2是同源二聚体,每个单体中包含5个保守的氨基酸构成了酶的催化活性中心;C型凝集素则有一个保守的糖基化结合位点,可以特异结合N-乙酰-D-葡萄糖胺。该研究对蕲蛇毒腺进行转录组测序,为蕲蛇毒腺中蛇毒蛋白功能的研究奠定了基础,将促进蕲蛇基因资源的开发和利用。

关键词：蕲蛇毒腺转录组蛇毒蛋白功能基因分泌性磷脂酶A2 C型凝集素

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表儿茶素对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的干预作用

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安徽中医药大学学报 2020年第1期39卷 50-55页

作者：王玉涵展凡程卉郑凤谢忠稳李庆林安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽农业大学茶树生物资源与利用国家重点实验室安徽合肥230031

目的研究表儿茶素对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的保护作用。方法将80只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.1mg/kg)、表儿茶素高剂量组(100mg/kg)、表儿茶素低剂量组(25mg/kg)。除正常对照组腹腔注射橄榄油外,其余各组... 详细信息

目的研究表儿茶素对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的保护作用。方法将80只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.1mg/kg)、表儿茶素高剂量组(100mg/kg)、表儿茶素低剂量组(25mg/kg)。除正常对照组腹腔注射橄榄油外,其余各组均腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立肝纤维化模型。复制模型的同时开始给药,各给药组大鼠灌胃相应药物,正常对照组和模型组大鼠灌胃等容积生理盐水,每日1次,连续6周。末次给药后,称取肝湿质量,计算肝脏指数;采用微板法检测大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)水平;苏木精-伊红染色和Masson胶原染色观察肝脏病理学变化;Western blot法检测肝脏中平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,collα1)蛋白的表达水平。结果与模型组相比,表儿茶素能显著降低大鼠的肝脏指数和血清ALT、AST的含量;显著降低肝组织中α-SMA、collα1蛋白的表达;肝组织病理学指标明显改善。结论表儿茶素对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化有一定的保护作用,其机制可能与抑制α-SMA、collα1的表达有关。

关键词：表儿茶素肝纤维化平滑肌肌动蛋白 Ⅰ型胶原

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异叶天南星苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与蛋白结构分析

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植物科学学报 2019年第2期37卷 221-229页

作者：施圆圆张声祥赵德蕊王晨凯马克龙吴家文安徽中医药大学研究生院合肥230012 安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室合肥230038 安徽中医药大学中西医结合临床学院合肥230012 安徽省中医药科学院合肥230012 安徽道地中药材品质提升协同创新中心合肥230012

以异叶天南星(Arisaema heterophyllum Blume)为材料,采用逆转录PCR(RT-PCR)法扩增其苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase,PAL)基因Ah PAL,获得该基因的开放读码框(ORF),并通过系统的生物信息学软件分析Ah PAL的结构和理化性质。结果显示,Ah PAL的ORF全长为2184 bp,编码727个氨基酸;Ah PAL与郁金香(Tulipa fosteriana W. Irving) PAL的亲缘关系最近,序列相似性达88%。空间结构模型分析结果显示,Ah PAL为同型四聚体,每个单体由3个结构域组成,其中MIO结构域含有PAL酶家族的保守序列和Ala-Ser-Gly三肽活性中心,是Ah PAL酶活性的决定性结构域。利用荧光定量PCR方法检测3个Ah PAL Unigene在根、块茎和叶中的表达情况,发现它们在根中表达量均最高,而在叶和块茎中表达较低。

关键词：异叶天南星苯丙氨酸解氨酶基因克隆生物信息学分析

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异叶天南星凝集素基因的克隆及蛋白的结构性质分析

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生物学杂志 2019年第6期36卷 36-41页

作者：李晟赵德蕊张声祥施圆圆杨青山王晨凯单春苗吴家文安徽中医药大学药学院合肥230012 安徽中医药大学研究生院合肥230012 安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室合肥230038 安徽道地中药材品质提升协同创新中心合肥230012 安徽省中医药科学院合肥230012

克隆了中药材异叶天南星(Arisaema heterophyllum Blume)叶中凝集素(lectin)基因(Ahltn)的开放阅读框(ORF),并对其编码蛋白AhLTN的性质和结构进行了分析。首先从植物异叶天南星的新鲜叶片中提取总RNA,通过逆转录获取cDNA,经PCR扩增Ahlt... 详细信息

克隆了中药材异叶天南星(Arisaema heterophyllum Blume)叶中凝集素(lectin)基因(Ahltn)的开放阅读框(ORF),并对其编码蛋白AhLTN的性质和结构进行了分析。首先从植物异叶天南星的新鲜叶片中提取总RNA,通过逆转录获取cDNA,经PCR扩增Ahltn后与pMD19-T载体连接构成重组质粒,然后转化到大肠杆菌感受态细胞中培养,经菌液PCR鉴定后再进行测序验证,确定目的基因被成功克隆,进一步运用各种生物信息学软件对AhLTN的理化性质、进化关系和空间结构进行分析。结果显示,克隆获得了Ahltn的ORF,此基因片段长度为561 bp,编码186个氨基酸的蛋白质,经生物信息学分析AhLTN属于稳定蛋白,AhLTN与铁皮石斛的凝集素亲缘关系最近,四级结构显示其为二聚体,且两个单体的C末端发生了交换,每个单体中含有11个β折叠,呈“三棱镜”型,3个面均有保守的甘露糖结合区域。为天南星植物凝集素基因和蛋白功能的进一步研究和开发利用奠定了基础。

关键词：异叶天南星凝集素基因克隆生物信息学分析

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新藤黄酸诱导脑胶质瘤细胞U87自噬的研究

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安徽中医药大学学报 2019年第2期38卷 72-76页

作者：王巧雪程卉李庆林安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室

目的观察不同浓度新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对脑胶质瘤细胞U87增殖及自噬的影响。方法倒置显微镜下观察细胞形态变化,采用噻唑蓝法检测细胞的存活率,单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色法检测自噬泡的形成,吖啶橙(acridin... 详细信息

目的观察不同浓度新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对脑胶质瘤细胞U87增殖及自噬的影响。方法倒置显微镜下观察细胞形态变化,采用噻唑蓝法检测细胞的存活率,单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色法检测自噬泡的形成,吖啶橙(acridine orange,AO)染色流式细胞仪观察酸性囊泡细胞器的数量变化,Westernblot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ以及Beclin-1的表达变化。结果 GNA在1~32 μmol/L浓度范围抑制U87细胞的增殖;MDC染色表明GNA促进U87细胞内自噬泡的形成;AO染色表明GNA增加U87细胞内酸性囊泡细胞器的数量;Western blot结果显示,GNA作用U87细胞后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增大,Beclin-1的表达增加,提示细胞内自噬活性增强。结论 GNA在一定剂量和时间范围内抑制脑胶质瘤细胞U87细胞的增殖可能与诱导U87细胞自噬的发生有关。

关键词：新藤黄酸胶质瘤 U87细胞自噬

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苦参双功能核酸酶1的体外表达及结构性质分析

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生物学杂志 2019年第2期36卷 17-21页

作者：赵德蕊廖怡刘苗苗杨青山吴家文安徽中医药大学研究生院合肥230012 安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室科研实验中心合肥230038 安徽中医药大学药学院合肥230012 安徽道地中药材品质提升协同创新中心合肥230038 安徽省中医药科学院合肥230038

植物双功能核酸酶1影响植株生长、发育及衰老,且研究表明其具有抗肿瘤活性。基于苦参转录组数据克隆了苦参(Sophora flavescens Ait.)中双功能核酸酶1基因的开放读码框(SfBFN1),分析其编码蛋白的理化性质和结构特点。采用RT-PCR方法扩增... 详细信息

植物双功能核酸酶1影响植株生长、发育及衰老,且研究表明其具有抗肿瘤活性。基于苦参转录组数据克隆了苦参(Sophora flavescens Ait.)中双功能核酸酶1基因的开放读码框(SfBFN1),分析其编码蛋白的理化性质和结构特点。采用RT-PCR方法扩增SfBFN1基因片段,纯化后与pET22b (+)载体连接并转化到大肠杆菌感受态细胞BL21,并以不同的诱导条件,筛选其体外表达的最适宜条件。结果获得了SfBFN1的开放读码框片段,长度为984 bp,编码327个氨基酸,SfBFN1蛋白分子质量约为36.2 ku;利用PHYRE2在线软件预测SfBFN1蛋白的部分三级结构,其富含α螺旋与β折叠,5个α螺旋包裹着7个β折叠,构成了蛋白质立体结构的框架。研究为SfBFN1蛋白开发成为抗癌蛋白质药物制剂奠定了实验基础。

关键词：苦参双功能核酸酶1 基因克隆生物信息学分析

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独活药材香豆素类成分的高效液相色谱指纹图谱研究

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安徽中医药大学学报 2019年第1期38卷 87-92页

作者：王斌周安杨沫刘先华韩燕全安徽中医药大学科研实验中心安徽合肥230038 安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽中医药大学第一附属医院安徽合肥230031

目的建立独活中香豆素类成分的高效液相色谱指纹图谱分析方法,为独活药材的质量控制提供依据。方法采用C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以水-甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速1.2mL/min,柱温25℃,检测波长330nm。结果建立了独活药材香... 详细信息

目的建立独活中香豆素类成分的高效液相色谱指纹图谱分析方法,为独活药材的质量控制提供依据。方法采用C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以水-甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速1.2mL/min,柱温25℃,检测波长330nm。结果建立了独活药材香豆素类成分的高效液相色谱特征指纹图,标定了15个共有色谱峰,采用相似度评价、聚类分析、主成分分析对所收集的15批样品进行指纹图谱模式识别研究,对6个共有峰借助对照品进行了指认,采用高效液相色谱-电喷雾离子源-质谱技术并结合文献报道对其余9个共有峰进行了初步归属。15批独活药材的相似度结果为0.797～0.979。运用聚类分析,15批独活药材可大致聚成5类。结论该法所建立的独活药材香豆素类成分指纹图谱特征性强,为该药材的质量控制提供了实验依据。

关键词：独活香豆素高效液相色谱指纹图谱主成分分析聚类分析

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新藤黄酸诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用研究

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安徽中医药大学学报 2019年第1期38卷 58-62页

作者：程卉李庆林侯梅苏婧婧安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038

目的研究新藤黄酸对卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法采用MTT检测新藤黄酸对卵巢癌A2780细胞存活率的影响,采用fluo-3AM染色荧光显微镜观察新藤黄酸对A2780细胞钙离子水平的影响,采用Hoechst 33342染色荧光显微镜观察细胞... 详细信息

目的研究新藤黄酸对卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法采用MTT检测新藤黄酸对卵巢癌A2780细胞存活率的影响,采用fluo-3AM染色荧光显微镜观察新藤黄酸对A2780细胞钙离子水平的影响,采用Hoechst 33342染色荧光显微镜观察细胞的凋亡率,采用PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞周期的影响,采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞凋亡率的影响,采用Western blot检测凋亡相关蛋白表达的影响。结果 MTT检测结果表明,新藤黄酸对卵巢癌细胞A2780的增殖具有抑制作用,且抑制作用具有明显的剂量依赖性;fluo-3AM染色荧光显微镜下观察,可见各浓度新藤黄酸均能升高A2780细胞内钙离子水平,且呈现浓度依赖关系;PI染色流式细胞仪检测结果表明,新藤黄酸能阻滞A2780细胞于G0/G1期;Hoechst 33342染色和AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞仪检测结果表明,随着新藤黄酸浓度的增加,A2780细胞凋亡率呈现增高的趋势;Western blot检测结果表明,新藤黄酸可以促进凋亡相关蛋白p53、细胞色素C以及Caspase-9表达水平升高。结论新藤黄酸具有抑制卵巢癌A2780细胞增殖和诱导肿瘤细胞发生线粒体凋亡的作用。

关键词：新藤黄酸卵巢癌细胞A2780 线粒体凋亡

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